Universidad de Quintana

Roo
Divisin de Ciencias de la
Salud

Bacteriologia.

Dagoberto Canul.

Alumna:
Mara Jose Manrique Perez
13-16110

Trabajo de investigacin; Tema:

Bacterias anaerobias.
 Chetumal, Quintana Roo a 06 de abril de 2017.
Bacterias anaerobias.

Introduccin

La presencia de una atmsfera terrestre rica en oxgeno permiti a los seres vivos
evolucionar desarrollando un metabolismo aerbico, el cual se caracteriza por ser una
forma muy eficiente de obtencin de energa. Las bacterias anaerobias precedieron
largamente a las aerbicas y sin duda, predominaron largamente en un mundo vivo que
comenzaba a desarrollarse.

Las bacterias anaerobias obligadas son aquellas que crecen en ausencia de oxgeno libre
pero que no se multiplican en presencia de oxgeno en la superficie de los medios slidos
nutricionalmente adecuados incubados en la atmsfera ambiente o en una estufa de
incubacin con CO2 (que contiene 5-10% de CO2 en aire).

La cantidad de O2 en una estufa con CO, o en una jarra de anaerobiosis por extincin con
vela, es considerable (alrededor del 18-19%).

En el mundo microbiano existen especies capaces de alternar con sistemas metablicos

diferentes para crecer y multiplicarse en muy diferentes condiciones de aerobiosis, total,
reducida o ausente. Son grmenes facultativos. Otros solamente subsisten en rangos
estrictos de gases tales como el O2 y el CO2 (microaerfilos). Los anaerobios son
poseedores de sistemas enzimticos que solamente funcionan en ausencia de O2 por
tanto son estrictos en cuanto a sus exigencias de Medio Ambiente.

Si bien se considera bacteria anaerobia aquel germen que puede crecer slo en ausencia
de oxgeno, la sensibilidad frente al oxgeno vara ampliamente de una especie a otra. As,
distinguimos bacterias microaerfilas, aerotolerantes y anaerobios estrictos u obligados.
Las bacterias microaerfilas resultan daadas por niveles altos de oxgeno como el
atmosfrico (21%) y requieren niveles bajos de O2 para crecer, en el rango de 2 a 10%.
Anaerobios aerotolerantes son aquellos microorganismos que toleran exposiciones breves
al oxgeno atmosfrico desarrollando ptimamente en condiciones anaerobias. Los
anaerobios estrictos no toleran el oxgeno y mueren en su presencia, por tanto slo
desarrollan en condiciones anaerobias.
Historia.

El reconocimiento de la naturaleza anaerobia de determinados microorganismos se

acredita a Pasteur, quien en 1863 observ que la motilidad de ciertas bacterias
desapareca con la exposicin al aire.

Desarrollo.

El metabolismo de los anaerobios.

Tolerancia al oxgeno.

Algunos de los anaerobios obligados ms estrictos (p. ej., Clostridium haemolyticum) se

mueren cuando se exponen al oxgeno atmosfrico en la mesada de laboratorio durante
10 minutos o ms. Por otro lado, la mayora de los anaerobios obligados moderados
encontrados en infecciones humanas toleran la exposicin al oxgeno por perodos ms
prolongados. Las razones por las que los anaerobios varan en su tolerancia al oxgeno
son mltiples, pero una idea es que la tolerancia al oxgeno de muchos anaerobios
obligados moderados depende de su produccin de superxido dismutasa, catalasas y,
posiblemente, enzimas peroxidasas, que son protectoras contra los productos txicos de
la reduccin del oxgeno.

Una opinin popular es que la exposicin al O2 atmosfrico provoca diversas reacciones

dentro de las clulas bacterianas, posibles reacciones mediadas por flavoprotenas, que
derivan en la produccin del radical superxido (O-) con carga negativa, el perxido de
hidrgeno (H2O2) y otros productos txicos de la reduccin del oxgeno. El anin
superxido y el H2O2 pueden reaccionar juntos para producir radicales hidroxilo libres
(OH), los oxidantes biolgicos ms poderosos conocidos, y tambin puede ser la
produccin de oxgeno singulete txico CO2) mediante la reaccin de los aniones
superxido con los radicales hidroxilo libres. La superxido dismutasa cataliza la
conversin de los radicales superxido a perxido de hidrgeno y oxgeno molecular
menos txicos. La catalasa cataliza la conversin de perxido de hidrgeno para formar
agua y oxgeno. Se demostr que varias especies de anaerobios obligados moderados
tolerantes al oxgeno producen superxido dismutasa (SOD) y el nivel de SOD se
relaciona con el nivel de tolerancia al oxgeno y la virulencia del microorganismo.
Potencial de oxidorreduccin.

El potencial de oxidorreduccin (abreviado potencial redox o Eh) de un medio de cultivo,

expresado en voltios o milivoltios, puede ser medido mediante un electrodo de platino,
junto con un electrodo de referencia conectado a un pHmetro. El Eh est afectado por el
pH (o concentracin de iones hidrgeno); as, el potencial redox se expresa comnmente
a pH neutro (pH 7) como Eh. Los agentes reductores, como tioglicolato y L-cistena se
pueden agregar al medio de transporte anaerobio y a ciertos medios de cultivo para
ayudar a mantener condiciones reductoras (o de bajo Eh) en el medio. Un potencial de
oxidorreduccin positivo (p. ej., como el que se reconoce en algunos medios por el color
rosado del indicador resazurina o en otros medios por el color azul del indicador azul de
metileno) significa que el medio est oxidado. En la naturaleza, el lmite superior de Eh es
+820 mV, que puede encontrarse en algunos ambientes que tienen una oxigenacin
considerable. Las condiciones oxidantes prevalecen en el tejido humano sano que est
bien oxigenado y tiene un suministro de sangre continuo (p. ej., el Eh es casi + 150 mV).
Por el contrario, el lmite inferior de Eh en la naturaleza es cerca de - 420 mV. Un
medioambiente anaerobio (p. ej., un absceso, un tejido necrtico) o un medio de cultivo
rico en hidrgeno puede tener un Eh bajo. El intestino grueso humano, que contiene gran
nmero de anaerobios obligados estrictos, tiene un Eh de alrededor de -250 mV. Cul es
la importancia relativa del potencial de oxidorreduccin frente al oxgeno atmosfrico en
relacin con la supervivencia y el desarrollo de las bacterias anaerobias? Como lo
advirtieron hace varios aos Hentges y Maier, existen antiguos informes que indican que
ciertos anaerobios no podran proliferar por encima de un cierto nivel de Eh bajo y que
algunos anaerobios obligados podan desarrollarse en el aire ambiente si el Eh del medio
se mantena suficientemente bajo.
Mtodos de cultivo.

Luego de sembrar la muestra en un medio de cultivo adecuado, la incubacin en

anaerobiosis se consigue por medio de alguno de los siguientes sistemas: jarras
anaerbicas, bolsas de anaerobiosis y la cmara de anaerobiosis o cmara de guantes.
El ltimo mtodo es muy caro, requiere equipamiento complejo, es lento y se usa para
estudios de flora normal y en laboratorios altamente especializados. Desde el punto de
vista prctico las jarras y los sobres o bolsas son equiparables en rendimiento a los
sistemas ms sofisticados y son aceptables para el aislamiento de bacterias anaerobias
en el laboratorio clnico. Con estos sistemas son posibles los cultivos en medios slidos
para la obtencin de aislamientos que permitan la identificacin bacteriana.
Transporte de muestras.

Otro factor crucial para el xito en el aislamiento de anaerobios es el transporte adecuado

de la muestra. Se debe proteger a los microorganismos de los efectos nocivos del
oxgeno atmosfrico durante el tiempo que transcurre entre la extraccin y la siembra
anaerbica de la muestra. La primera y ms efectiva medida es correr ya que en
ninguna otra ocasin como est el envo inmediato al laboratorio es tan fundamental. Las
muestras deben ser colocadas en un sistema de transporte que asegure la anaerobiosis.
Existen tubos, comercialmente disponibles en los que se ha sustituido el aire por otro gas,
como CO2 o N2, denominados tubos gaseados y que contienen un indicador de
anaerobiosis. Dichos tubos sirven para el transporte de muestras lquidas que se inyectan
a travs de un tapn de goma luego de eliminar todo el aire de la jeringa y aguja. Un
sistema similar sirve para transportar hisopos. Si la muestra es un tejido o una biopsia,
esta puede mantenerse en un tubo o recipiente con suero fisiolgico y ste a su vez en
una bolsa o sobre de anaerobiosis, que describiremos ms adelante. En casos de
extraccin de material con aguja y jeringa, si la demora no supera los 30 minutos puede
enviarse el material en la misma jeringa expulsando el aire residual y obturando la aguja
con un tapn de goma. Las muestras deben conservarse a temperatura ambiente hasta
ser procesadas en el laboratorio ya que la refrigeracin puede oxigenar la muestra.
Recoleccin de muestras.

Teniendo en cuenta que los anaerobios estn presentes en gran nmero en prcticamente
toda la superficie cutaneomucosa, es difcil muchas veces evitar la contaminacin de la
muestras con estos microorganismos. Es por esto que las siguientes muestras son
inaceptables para cultivar en anaerobiosis:

Exudado farngeo, nasofarngeo o bucal.

Expectoracin.

Secreciones obtenidas por aspiracin oro o nasotraqueal.

Cepillado o lavado bronquial (salvo el obtenido por catter de doble luz).

Contenido gstrico e intestinal (salvo excepciones).

Materias fecales (salvo para la bsqueda de C. difficile)

Exudado rectal.

Orina obtenida por sonda o espontneamente.

Exudados vaginales y cervicales.

Exudado uretral.

La expectoracin no debe cultivarse en anaerobiosis porque el esputo se contamina con

la flora anaerobia normal de la faringe y la boca en su pasaje al exterior; igualmente pasa
con el esputo obtenido por fibroscopa o los aspirados nasotraqueales ya que el tubo
arrastra en su introduccin flora normal en su extremo distal. La orina emitida
espontneamente o con sonda se contamina por la colonizacin natural de la porcin
distal de la uretra y el meato, o por la colonizacin de la sonda. Si existen catteres
suprapbicos o renales pueden utilizarse para tomar la muestra con resultados
aceptables. Una recoleccin de muestra adecuada debe evitar siempre la ms mnima
contaminacin con flora normal.

Las muestras ms adecuadas para el cultivo de anaerobios son las siguientes:

Bilis.

Sangre.
 Mdula sea.

Lquido cefalorraqudeo.

Otros fluidos de sitios normalmente estriles (por ej: lquido articular).

Lquido de ascitis.

Orina obtenida por puncin suprapbica.

Tejidos obtenidos por biopsia o autopsia.

Lquido pleural obtenido por toracocentesis.

Lavado bronquial obtenido con cepillo protegido.

Aspirado transtraqueal.

Puncin pulmonar transparietal (PPTP).

Aspiracin con aguja de abscesos cerrados.

Contenido uterino colectado con cepillo protegido.

Pruebas complementaras para identificacin.

La mayora de los Laboratorios deben conformarse con la realizacin de los Tests de

Identificacin preliminares. La identificacin final queda reservada para los laboratorios de
Referencia y comprende:

Estudios de fermentacin de azcares y estudio de los productos finales del metabolismo

los cuales pueden agruparse en:

cidos grasos voltiles y alcoholes.

La CGL se usa para identificar cidos grasos de cadena corta que son solubles en ter.
Los cidos detectados con este procedimiento son: el actico, propinico, isobutrico,
butrico isovalrico, valrico, isocaproico y caproico. Los cidos grasos voltiles se
pueden identificar por comparacin de los tiempos de elusin de los productos en los
extractos con los de una mezcla de cidos conocidos (estndar de cidos grasos
voltiles) cromatografiados en las mismas condiciones el mismo da.

Metabolitos no voltiles.
Los cidos pirvico, lctico, fumrico, succnico, hidrocinmico y fenilactico no se
detectan con el procedimiento de extraccin con ter para cidos grasos voltiles. Estos
cidos no voltiles se identifican despus de la preparacin de derivados metilados. Se
realiza el anlisis de los extractos clorofrmicos usando las mismas condiciones
cromatogrficas que para los cidos voltiles. Se identifican los cidos metilados o no
voltiles por comparacin de los tiempos de elusin en los extractos con los de los cidos
grasos conocidos cromatografiados el mismo da.

cido frmico.
Produccin de Hidrgeno.
Estos estudios se realizan utilizando la Cromatografa Gas-lquida.

Las soluciones estndares que contienen 1 mEq/100 mL de cada cido voltil y no voltil
deben ser analizadas al mismo tiempo que se prueban las soluciones desconocidas. El
estndar de cidos voltiles debe contener al menos los siguientes cidos: actico,
propinico, isobutrico, butrico, isovalrico, valrico, isocaproico y caproico. El estndar
de cidos no vol tiles debe contener al menos los cidos pirvico, lctico, fum rico,
succnico, hidrocinmico y fenilactico. Se debe analizar un tubo con medio sin inocular
de la misma forma, porque varios lotes de caldo PYG pueden contener cantidades
significativas de estos cidos. Lombard y cois, encontraron que varios medios lquidos
tanto como el caldo PYG pueden usarse para el anlisis de productos metablicos cidos.
Estos medios son: caldo de tioglicolato enriquecido, glucosa y carne picada, caldo con
glucosa de Lombard-Dowell y caldo de Schaedler (BD Microbiology Systems). Sin
embargo, cuando crecen en esos medios de caldo, los resultados de un microorganismo
dado pueden diferir de los logrados en PYG. As, se debe tener cuidado en la
interpretacin de los productos de diferentes medios cuando los cuadros de identificacin
han sido preparados a partir de una base de datos PYG. Se garantiza una nota adicional
de cuidado; la cantidad de cido actico, lctico y otros cidos presentes en ciertos
medios lquidos, como caldo con glucosa y carne picada pueden hacer difcil o a veces
imposible determinar si el pico de cido actico o lctico fue producido por el aislamiento
desconocido o simplemente por el medio sin inocular.
Bibliografia.

1. http://higiene.edu.uy/cefa/Libro2002/Cap%2026.pdf
2. http://www.higiene.edu.uy/cefa/2008/BacteriasAnaerobias.pdf
3. https://books.google.com.mx/books?
id=jyVQueKro88C&printsec=frontcover&dq=koneman&hl=es&sa=X&ved=0ah
UKEwi81s2rv5HTAhVF7iYKHetPA78Q6AEIIzAA#v=onepage&q=koneman&f=fa
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