Tecnol.
Tecnol.Ciencia
Bioproduccin de cido lctico a partir de residuos de
cscara de naranja: Procesos de separacin y purificacin
Lactic acid bioproduction from orange rind:
Separation and purification processes
Ricardo Heliodoro Gil-Horn*1, Rosa Mara Domnguez-Espinosa2, Juan Daniel Pacho-Carrillo2
1UNAM, Facultad de Qumica, 2Consultores independientes
Correo-e (e-mail): gilhoran@gmail.com
RESUMEN
El inters social por la conservacin del medio ambiente ha resultado
en el endurecimiento de legislaciones ambientales y cambios de poltica
fiscal que buscan impulsar a la industria qumica y reducir su impacto
ambiental. Por tal motivo, la utilizacin de residuos agroindustriales
como materia prima de bajo costo, para la obtencin de productos
qumicos finos por biotransformacin est ganando inters. Esta opcin
de transformar desechos en nuevas materias primas se perfila como
una opcin atractiva para reducir la dependencia del petrleo y, al
mismo tiempo, obtener compuestos que son econmica o tcnicamente
inviables de obtener por sntesis qumica tradicional. El sureste de
Mxico es una de las principales regiones productoras de ctricos del
pas, donde se genera un gran volumen de desechos slidos de ctricos
(cscara y bagazo). Este desecho proviene de la obtencin de jugo de
naranja dulce y, normalmente, se manda a tiraderos a suelo abierto, por
lo que generan un problema serio de contaminacin. Esta situacin hace
deseable su aprovechamiento para la generacin de productos de alto
valor agregado como es el cido L(+) lctico, el cual es utilizado en la
industria alimentaria, farmacutica y cosmtica y como materia prima
para la sntesis orgnica o la produccin de plsticos biodegradables.
En esta investigacin se propone un proceso para la obtencin de
cido lctico a partir de la biotransformacin de cscara y bagazo
de naranja en fase slida con Rhizopus oryzae. Como producto se obtiene
un concentrado que cumple con el estndar del Cdigo Qumico de
Alimentos (FCC, Food Chemical Codex) en grado alimenticio. Se
evaluaron tres tcnicas de separacin slido-lquido (prensado mecnico,
centrifugacin y filtracin al vaco), al mismo tiempo que se determin la
mxima cantidad necesaria de agua para llevar a cabo la extraccin del
cido lctico presente en el slido biotransformado. Posteriormente, se
evalu la viabilidad tcnica de utilizar operaciones de intercambio inico
como pasos intermedios para la reduccin de impurezas. Asimismo, se
evaluaron y compararon dos procesos: (a) Esterificacin del cido lctico
con 1-butanol y (b) Cristalizacin evaporativa de sales de sulfato de
calcio, como posibles rutas de separacin secundaria y concentracin.
Los resultados experimentales permitieron generar una hoja de proceso
para llevar a cabo balances de materia y energa tericos usando el
programa SuperPro Designer 6.0, apoyndose con los paquetes Aspen
Plus y Aspen Split 11.1 para la estimacin de propiedades fsicas
y termodinmicas, as como del equilibrio de fases en las diferentes
unidades del proceso. Dicha simulacin permiti identificar que una
planta con capacidad de procesamiento de 400 ton/ao de cscara de
naranja con 12% p/p de humedad puede transformar los desechos de
una planta de jugo de tamao medio con una produccin de 5.5 ton/ao
de solucin de cido lctico al 36% en masa.
*Autor a quien debe enviarse la correspondencia
(Recibido: Octubre 8, 2008, Aceptado: Diciembre 3, 2008)
Ciencia
Tecnol.
Ed.
Ed.
Ciencia
(IMIQ)
(IMIQ)Ed.
vol.
vol.14
(IMIQ)
23 nms.1-2,1999
nm.
23(2):
2, 2008 79
79
79-90, 2008
ABSTRACT
The social awareness of the process industry environmental impact
has resulted in tougher regulations and new fiscal policies that aim to
encourage the chemical industry to adopt new production practices to
reduce its environmental impact. For this reason, the use of agricultural
waste as low cost raw materials for fine chemicals production through
biotransformation has attracted much interest. This option of transforming
waste into raw materials appears as an attractive development path. It
helps to reduce dependency on oil as raw material and also offers a way
to obtain compounds that are uneconomical to produce by traditional
chemical synthesis. Mexico South East area is a main citric production
zone where a large volume of solid waste in the form of peel and bagasse
is generated. This waste comes from orange juice factories and it is
normally sent to landfills or open air dumps where they represent an
important pollution source. This waste can be used to produce high added
value chemicals such as L(+) lactic acid. This product is demanded in the
food, pharmaceutical, and personal care industries or for the production
of biodegradable plastics and organic synthesis. This research deals
with a process for the production of lactic acid through solid phase
bioconversion of orange peel and bagasse using Rhizopus oryzae. The
product complies with the Food Chemical Codex (FCC) regulations.
Three different techniques were evaluated for the separation of liquids
and solids (mechanical pressing, centrifugation and vacuum filtration),
determining the maximum water contents to carry out the lactic acid
extraction from the biotransformed solid. The feasibility of using ion
exchange to remove impurities was also evaluated. For the recovery of
lactic acid, two processes were tested as possible routes for secondary
separation and concentration: (a) Esterification with 1-butanol, and
(b) Evaporative crystallization of calcium sulfate salts. Based on the
experimental results, a flow sheet was created to carry out theoretical mass
and energy balances using the computer program SuperPro Designer
6.0, supported which the packages Aspen Plus and Aspen Split 11.1,
to estimate physical and thermodynamic properties and to carry out
detailed phase equilibrium calculations in process units. Based on the
simulation, a processing plant with capacity of 400 ton/year of orange
peel and bagasse with 12% w/w moisture was identified as suitable for
the transformation of the wastea from a medium size juice factory into
a production plant for 5.5 ton/year of 14% w/w lactic acid.
Palabras clave: cido lctico, biotransformacin slida,
Rhizopus oryzae, diseo conceptual, simulacin
emprica
Key words: Lactic acid, solid biotransformation,
Rhizopus oryzae, conceptual design, empiric
80 Tecnol. Ciencia Ed. (IMIQ) vol. 23 nm. 2, 2008

INTRODUCCIN En cuanto a las reacciones de condensacin, las ms

importantes, por los altos rendimientos de producto,

A ctualmente, la utilizacin de residuos

agroindustriales, como materia prima de bajo
costo, en procesos biotecnolgicos para la obtencin de
productos qumicos finos, se perfila como una opcin
atractiva para reducir la dependencia del petrleo y, al
mismo tiempo, obtener nuevos compuestos que son
econmica o tcnicamente inviables de obtener por
sntesis qumica. El sureste de Mxico es una de las
principales regiones productoras de ctricos del pas
y ah se genera un gran volumen de desechos slidos
(cscara y bagazo), producto de la obtencin de jugo de
naranja dulce, siendo deseable su aprovechamiento para
la produccin de productos de alto valor agregado y la
eliminacin de una fuente de contaminacin importante.
Actualmente, existen varios estudios encaminados al
aprovechamiento de la fraccin slida de la naranja,
como substrato de biorreaccin en fase slida para
la produccin a bajo costo de cidos orgnicos,
particularmente cido L(+) lctico.
son: Esterificacin, deshidratacin y aminlisis (Kirk-
Othmer, 2001).
El cido lctico puede producirse por biotransformacin
(biorreaccin) o sntesis qumica. Normalmente,
la sntesis qumica requiere de caros y complejos
procedimientos de obtencin y separacin para lograr
la pureza deseada del producto final, as como costos
significativos asociados con la disposicin de los
desechos (Yin y col., 1997). La produccin de cido
lctico se ha incrementado en pocas recientes, llegando
a alcanzar en el ao 2002 una produccin mundial de
100,000 ton/ao en los sectores farmacutico, cosmtico
y qumico (Purac, 2002). Esta demanda ha venido
aumentando con un incremento del 5 al 8% anual,
especialmente debido al desarrollo de los polilactatos
(PLA), por lo que hoy en da solamente el cido L(+)
lctico es el de mayor importancia comercial.
Produccin por sntesis qumica

cido lctico La sntesis qumica comercial (Figura 1) se lleva a cabo

con la reaccin en fase lquida y a presin atmosfrica de
El cido lctico es el hidroxicido ms sencillo que cianuro de hidrgeno y acetaldehdo, catalizada por una
existe. Su molcula contiene un tomo de carbono base, para formar lactonitrilo, el cual es recuperado por
asimtrico. Presenta isomera ptica: L(+) o D(-), destilacin e hidrolizado a cido lctico utilizando HCl
aunque es ms comn encontrarlo como mezcla o H2SO4 concentrado para producir cido lctico crudo
racmica. Est presente en alimentos como yogurt, y sal de amonio. El cido lctico crudo es esterificado
suero de leche, panes, queso y muchos otros alimentos con metanol, produciendo lactato de metilo, para luego
fermentados (Menndez-Gonzlez, 1999) y es uno ser recuperado y purificado por destilacin e hidrolizado
de los principales intermediarios metablicos en la con agua bajo un catalizador cido para producir cido
mayora de los organismos vivos, desde procariotas lctico puro y reciclar el metanol. Este producto es un
anaerobios hasta humanos. El cido lctico es
ampliamente utilizado en las industrias alimentaria,
mdica, farmacutica y cosmtica, como materia
prima para sntesis orgnica, como purgante en
forma de lactato de calcio o lactato de magnesio,
como removedor de sales de calcio, en el curtido de
pieles, en la produccin de plsticos biodegradables,
agroqumicos, etc. En soluciones acuosas, el cido
lctico no ionizado existe en equilibrio con los aniones
lactato y los iones hidrgeno (Kulprathipanja y Oroskar,
1991). Es fuertemente higroscpico y la presencia de
dos grupos funcionales en su estructura (-OH, -COOH)
lo hace formar, espontneamente, dmeros y polmeros
de cido lctico (Bello-Gil, 2007). Es soluble en ter,
miscible con agua y alcohol e insoluble en cloroformo,
ter del petrleo y disulfuro de carbono. Sus dos grupos
funcionales permiten llevar a cabo diferentes reacciones
qumicas de oxidacin, reduccin, condensacin y
Figura 1. Secuencia de produccin de cido lctico
substitucin del grupo alcohol (Vaidya y col., 2005).
por sntesis qumica

lquido incoloro, estable al calor. La principal desventaja
que presenta este mtodo es la obtencin de mezclas
racmicas de cido D(-) y L(+) lctico (Kirk-Othmer,
2001; Yin y col., 1997).
Produccin por biotransformacin1
Otras de las vas para producir cido lctico es
mediante la biotransformacin de substratos carbonosos
complejos. La forma ms rentable de obtener el ismero
L (+) es por medio de la gluclisis (transformacin
de carbohidratos o hidratos de carbono a cidos). La
estereo-especificidad deseada del producto depende del
uso previsto; sin embargo, el ismero L(+) del cido
lctico es utilizado para la mayora de las aplicaciones
(Skory, 2000; Vaidya y col., 2005). Las reacciones
estequiomtricas 1 a 4 son algunas de las involucradas
en la biorreaccin (Figura 2).
Durante estas reacciones el pH disminuye
bruscamente, por lo que para mantenerlo cercano a
la neutralidad se adicionan lcalis como: Hidrxidos,
carbonatos y bicarbonatos, lo cual aumenta el contenido
inico en el medio biolgico. Esto es necesario porque
a valores de pH cidos disminuye la viabilidad y el
desarrollo de la mayora de los microorganismos y, por
tanto, disminuye el rendimiento de cido lctico. La
Biorreaccin
Dextrosa o
glucosa
Biorreaccin
Maltosa
Biorreaccin
Lactosa
Biorreaccin
Sacarosa
Figura 2. Algunas de las reacciones estequiomtricas involucradas en la biorreaccin de produccin de L(+)
cido lctico
1
El trmino fermentacin fue acuado por Louis Pasteur y se refera exclusivamente a la reaccin anaerobia de la glucosa para formar etanol y CO2,
empleando levaduras del gnero Saccharomyces. Con el advenimiento de la biotecnologa, los investigadores empezaron a llamar fermentacin a
cualquier reaccin bioqumica. Sin embargo, desde la dcada de los 80 del siglo XX se ha tratado de modificar ese uso y emplear el trmino biorreaccin
o biotransformacin en lugar de fermentacin (Nota de los editores)
Tecnol. Ciencia Ed. (IMIQ) vol. 23 nm. 2, 2008 81
mayora de los procesos utilizan carbonato de calcio para
mantener el pH entre 5.5 y 6.5 mediante la formacin de
una sal de lactato. Despus de la biorreaccin, el medio
(el cual contiene sales de lactato) se filtra para remover
la biomasa, se trata con carbn activado, se evapora y,
finalmente, se acidifica con H2SO4 para convertir la sal
en cido lctico y sulfato de calcio insoluble, el cual es
removido por filtracin.
El cido lctico reconstituido se pasa entonces a
travs de columnas de carbn activado y de intercambio
inico y se evapora para producir los grados deseados
de pureza y concentracin. Como hasta este punto el
cido lctico no es estable al calor, se esterifica con
metanol o etanol, para luego recuperar por destilacin el
ster formado, rehidrolizarlo con agua en medio cido y
llevar a cabo nuevamente una etapa de evaporacin para
obtener la concentracin deseada, pudiendo reciclar el
alcohol empleado (Figura 3). Este proceso de separacin
produce un producto altamente puro, el cual es similar
al producto obtenido por sntesis qumica (Kirk-Othmer,
2001; Yin y col., 1997).
Con base en estos antecedentes, en esta investigacin
se dise un proceso para la obtencin de cido lctico
a partir de la biorreaccin en fase slida de cscara y
bagazo de naranja, con Rhizopus oryzae.
(1)
(2)
(3)
(4)
82 Tecnol. Ciencia Ed. (IMIQ) vol. 23 nm. 2, 2008
Remocin
de slidos
Carbn
Evaporacin
Acidificacin
y biomasa
activado con H2SO4
Esterificacin
Evaporacin
Intercambio
Filtracin
con alcohol inico
Evaporacin y/o Concentracin
Hidrlisis
destilacin por evaporacin
Figura 3. Secuencia de separacin y concentracin
de cido lctico luego de la biorreaccin
MATERIALES Y MTODOS
La cepa utilizada fue Rhizopus oryzae (NRRL-1710),
que ha sido usada para producir cido L(+)-lctico
de manera estereoespecfica en algunos procesos
comerciales debido a que no requiere nitrgeno orgnico
y es ms fcil su separacin del cultivo en el proceso de
recuperacin y purificacin (Miura y col., 2003; Saito y
col., 2003; Soccol y col., 1994; Yin y col., 1997; Zacchi
y Akerberg, 2000).
La biotransformacin en estado slido (BES) de
cscara y bagazo de naranja con Rhizopus orizae para
la produccin de cido lctico, se llev a cabo en un
biorreactor horizontal de capacidad de 1000cc siguiendo
la metodologa descrita en la literatura (Gil-Horn,
2007; Pacho-Carrillo y Domnguez-Espinosa, 2005).
Los residuos slidos de naranja dulce obtenidos de una
fbrica local de jugo fueron cortados de manera gruesa
y secados a 50C hasta alcanzar una humedad de 12%
(base seca). Posteriormente, la cscara seca fue molida
en un molino de platos dentados y luego tamizada para
obtener dimetros de partcula entre 1.18-2.36 mm.
Lotes de 400 g de harina de naranja fueron adicionados
con (NH4)2SO4 como fuente de nitrgeno y CaCO3
como regulador de pH para ajustar el pH inicial a 5. Se
inocularon con una solucin de esporas de Rhizopus
oryzae correspondiente a 107 esporas/mL (1mL/10g),
para luego ser incubados durante 192 horas (8 das) a
30C de acuerdo con la literatura (Ramachandran y col.,
2004). La actividad de agua, aW, del medio fue ajustada a
0.9. Una vez listo el medio e inoculada la cepa, la cscara
fue homogeneizada nuevamente mediante mezclado. La
biorreaccin se llev a cabo en un reactor horizontal
de vidrio con 4 paletas internas de acero inoxidable
de construccin propia con aireacin constante (1 v/v)
con aire estril saturado y bajo mezclado intermitente
de 10 minutos con intervalos de espera de 60 minutos
entre cada periodo de mezclado, a 20C. Por otro lado,
las etapas de evaporacin al vaco se llevaron a cabo a
65 C y 285 mbar abs. (Gil-Horn, 2007).
La determinacin del cido lctico se realiz por
medio de cromatografa lquida de alta presin CLAR
(HPLC, en ingls) usando un cromatgrafo Agilent 110
con integrador automtico y una columna Zorbax SB-
Aq, 4.6 x 150 mm, 5 m de fase reversa, de acuerdo
con el instructivo del fabricante.
Para la extraccin del cido de la materia slida
biotransformada, se evaluaron tres tcnicas para la
separacin de las fases lquida y slida del producto de
la biorreaccin (prensado mecnico, centrifugacin y
filtracin al vaco). Al mismo tiempo, se determin la
mxima cantidad de agua que puede ser aadida para
llevar a cabo la extraccin del cido lctico presente
en la fase slida. Los azcares residuales se midieron
siguiendo las metodologas sealadas en la literatura
(Gil-Horn, 2007).
Posteriormente, se evalu la viabilidad tcnica
de utilizar operaciones de intercambio inico
(zeolita catinica cida y/o carbn activado) como
pasos intermedios para la reduccin de impurezas.
Asimismo, se evaluaron y compararon dos procesos:
(a) Esterificacin del cido lctico con 1-butanol
(Figura 4A) y (b) Cristalizacin evaporativa de sales de
sulfato de calcio (Figura 4B), como posibles rutas de
separacin secundaria y concentracin. La descripcin
de los procesos de separacin y sus condiciones de
operacin se encuentran descritos de manera prolija
en la literatura (Gil-Horn, 2007). Los resultados
experimentales permitieron plantear una secuencia
de produccin, separacin, reduccin de impurezas y
concentracin de cido lctico, la cual se integr en
una hoja de simulacin en SuperPro Designer 6.0,
apoyndose con los paquetes Aspen Plus y Aspen
Split 11.1 para la estimacin de propiedades fsicas
y termodinmicas, as como del equilibrio de fases en
las diferentes unidades del proceso.
RESULTADOS Y DISCUSIN
Etapa experimental
Luego de la biorreaccin, se obtuvo cido lctico
en forma de lactato de calcio. El producto obtenido
present un pH de 3.4 con alto grado de hidrlisis.
El rendimiento msico obtenido de cido lctico en
la biotransformacin fue de 8.2 mg/g equivalente al
0.82%. La duracin de la biorreaccin de 192h puede ser
extendida para lograr una mayor hidrlisis del material
biotransformable; sin embargo, para el propsito de
 Tecnol. Ciencia Ed. (IMIQ) vol. 23 nm. 2, 2008 83

esta investigacin, que no era el de optimizar esta En las pruebas de separacin slido-lquido result
fase del proceso, el tiempo de biorreaccin definido que el mejor mtodo para la recuperacin de la fase
fue adecuado para producir cantidades adecuadas del lquida del producto de biorreaccin fue el prensado
producto. Naturalmente, se tuvo la desventaja de la mecnico (Figura 5A). Adicionalmente, se obtuvo que
presencia de los productos no deseados de la hidrlisis la mxima cantidad de agua que puede ser utilizada
del material biotransformable como azcares, protenas, para la homogeneizacin del producto slido para la
cidos orgnicos secundarios, cationes Ca+2 y NH4+1 y posterior recuperacin de la fase lquida es de 8 mL
aniones CO3-2 y SO4-2. As mismo, el producto slido por cada gramo de slido en base seca (Figura 5B),
obtenido present un exceso de azcares no consumidos obteniendo as una recuperacin mxima en el prensado
por el Rhizopus oryzae (13,722.95 ppm p/v), el cual mecnico del 85% del cido lctico producido en la
tambin debe tomarse en cuenta para una segunda biotransformacin.
etapa de optimizacin de la biotransformacin a nivel
de laboratorio.

1-Butanol o on nt a o

a n
t a n

ol t l a o a n al
o a
1-Butanol tal a n

o on nt a o
al ul ato
lt a n
a a

a n
a a n a ta n

ol t l a o a n al
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lt a n al ul ato tal n a
ta o

1-Butanol al ul ato
lt a n
ol t l a o a n al
o a ta o

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a o a n al a o
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-

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al o ul at -
lt a n
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lt a n
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u a nt a o n o
nt a o n o ol ula
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olo
olo

a o a n al
o a a o a n al a o o l t o
t a a 1-Butano
l o l t o

Figura 4. Metodologa de separacin secundaria y concentracin del cido lctico. A) Ruta 1: Proceso de
esterificacin con 1-butanol. B) Ruta 2: Proceso de cristalizacin evaporativa de sales de sulfato
de calcio. Las operaciones de intercambio inico corresponden a una etapa de intercambio con
zeolita catinica seguida de blanqueado con carbn activado
84 Tecnol. Ciencia Ed. (IMIQ) vol. 23 nm. 2, 2008
(A)
Figura 5. Recuperacin de cido lctico obtenido en la separacin de la fase lquida: A) Por prensado
mecnico, centrifugacin y filtracin al vaco. B) En funcin de la relacin de dilucin utilizada
para la homogeneizacin del producto slido
En la reduccin de impurezas con carbn activado
y zeolita catinica fue posible observar que ambos son
capaces de retener un alto porcentaje de impurezas
(Tabla 1). As mismo, se hizo evidente que para poder
utilizar el intercambio con zeolita catinica es necesario
aplicar previamente un tratamiento de blanqueado con
carbn activado, con el fin de reducir primeramente el
contenido de azcares y protenas y eliminar el color
del lquido.
Tabla 1
Retencin de impurezas y prdida de cido lctico en
tratamientos con carbn activado y zeolita catinica
cida
Operacin Principales impurezas retenidas
Carbn activado Azcares, steres, protenas, Ca+2,
(CA) color, cidos orgnicos secundarios
Zeolita catinica NH+1 y Ca+2, protenas, cidos orgnicos
(ZC) secundarios
CA + ZC Todas las anteriores
Respecto de los cidos orgnicos secundarios, tanto
la zeolita catinica como el carbn activado demostraron
excelente retencin (resultando mejor el carbn
activado), tal y como se observa en los cromatogramas
de la Figura 6, obtenidos por cromatografa de lquidos
(HPLC, por sus siglas en ingls).
Relacin Agua-Slidos (mL/g)
(B)
Sin embargo, ambos mtodos de intercambio
provocaron una prdida de cido lctico por retencin en
la zeolita catinica y el carbn activado, lo cual redujo el
rendimiento de recuperacin. Por otro lado, no es posible
prescindir de la operacin de blanqueado con carbn
activado, puesto que sin sta no sera posible obtener
un producto incoloro, al mismo tiempo que es el carbn
activado el que retiene las principales impurezas.
En las etapas de evaporacin al vaco se obtuvo
degradacin y precipitacin de protenas, as como
coloracin del lquido por concentracin y degradacin
de los azcares remanentes en la solucin. Por otro lado
en estas etapas no hubo prdida apreciable de cido
lctico por polimerizacin o volatilizacin. Realizando
una comparacin entre los dos procesos de separacin
% de prdida de
secundaria y concentracin aqu evaluados, fue posible
cido lctico observar que la esterificacin del cido lctico realmente
33.12
brinda un mayor rendimiento global del proceso.
Sin embargo, se requiere de un mayor nmero de
58.16 operaciones. En los datos comparativos presentados en
62.66
la Tabla 2 se muestra que el proceso de esterificacin con
1-butanol permiti un mayor porcentaje de recuperacin
de cido lctico que el proceso de cristalizacin
evaporativa de sales de sulfato de calcio, pudindose
alcanzar hasta 82% de recuperacin al prescindir de la
etapa de intercambio con zeolita catinica. La principal
razn de esto y por la cual la esterificacin toma ventaja
sobre el segundo proceso, es por la baja afinidad que el
carbn activado present hacia el lactato en su forma
de ster de lactato de 1-butilo.

Figura 6. Cromatogramas de la solucin acuosa
extrada del producto slido, obtenidos
por CLAR (HPLC) en fase reversa.
Columna Zorbax SB-Aq 4.6 x 150 mm,
5 m. (A) Producto de la separacin
slido-lquido por prensado mecnico.
(B) Lquido tratado slo con zeolita
catinica. (C) Lquido tratado slo con
carbn activado
A pesar de haberse alcanzado una mayor concentracin
de cido lctico en el proceso de cristalizacin
evaporativa de sales de sulfato, la alta concentracin de
iones sulfato al final de su secuencia de operaciones fue
el principal factor que evit que el producto obtenido
por este mtodo cumpliera con las especificaciones del
Cdigo Qumico de Alimentos (FCC, Food Chemical
Codex), a diferencia del producto obtenido en el proceso
de esterificacin con 1-butanol, el cual s logr cumplir
con las especificaciones de dicha norma (Tabla 2). Por
ello, este ltimo fue considerado como el mejor de los
procesos probados.
Tecnol. Ciencia Ed. (IMIQ) vol. 23 nm. 2, 2008 85
Tabla 2
Datos comparativos de concentracin y eficiencia de
recuperacin en los procesos de (a) Esterificacin
del cido lctico con 1-butanol y (b) Cristalizacin
evaporativa de sales de sulfato de calcio
Conc. cido lctico % eficiencia de Cumple
Evaluacin recuperacin de con el
(mg/L)
cido lctico FCC*
Esterificacin + Zeolita 2112.72 53.6% S
Esterificacin sin zeolita 3208.10 81.56% S
Crist. evaporativa + Zeolita 2722.52 42.78% No
Crist. evaporativa sin zeolita 3626.67 57.31% No
*Cdigo Qumico de Alimentos (FCC, Food Chemical Codex)
Diseo conceptual y simulacin en SuperPro
Designer 6.0 del proceso propuesto
Con base en los resultados experimentales y las
observaciones derivadas de ellos, se plante una
secuencia de separacin, reduccin de impurezas
y concentracin de cido lctico a partir de la
biotransformacin slida de cscara y bagazo de
naranja, utilizando la esterificacin con 1-butanol y
posterior hidrlisis del cido lctico (Figura 7).
El proceso se inicia al homogeneizar el slido
obtenido por biotransformacin mediante mezclado
utilizando una relacin de agua-slido en base seca de
8:1, el cual se hace pasar por una etapa de prensado
mecnico para separar las fases lquida y slida. El
lquido obtenido se filtra para remover partculas
suspendidas y se evapora al vaco a 65C. El licor
concentrado se acidifica con H2SO4, precipitando as
sulfato de calcio insoluble (Reaccin 6, Figura 8). El
lquido acidificado se evapora nuevamente al vaco a
65C en un equipo de evaporacin-cristalizacin, con
formacin simultnea de cristales insolubles de sulfato
de calcio y agentes degradados y precipitados por efecto
del pH (en su mayora protenas). Posteriormente, el
producto se filtra removiendo los cristales junto con los
agentes insolubles y partculas suspendidas. Los slidos
retenidos son lavados con agua, la cual es recirculada. El
licor concentrado se evapora al vaco a 67.5C y luego
se esterifica con 1-butanol (Reaccin 7, Figura 8), con
lo cual precipitan azcares insolubles, los cuales son
removidos por filtracin.
A continuacin, la mezcla heterognea se decanta,
separando la fase rica en 1-butanol de la fase rica en
agua. La fase ligera correspondiente al alcohol se
recircula a la etapa de esterificacin.
 Slidos Slidos finos
y biomasa y clulas suspendidas H2SO4

Evaporacin Evaporacin
Vol=25% Acidificacin
Prensado al vaco al vaco y
Biotransformacin Homogeneizado Filtracin 65 C
mecnico 65 C cristalizacin
285 mbar 1 atm 65 C y 285 mbar

Agua Columna de Columna de

Vol=25%

iintercambio c
carbn
catinico activado Agua y Voltiles

Agua
Filtracin
1-Butanol
CaCO3
1-Butanol
86 Tecnol. Ciencia Ed. (IMIQ) vol. 23 nm. 2, 2008

Vol=25% Evaporacin
Filtracin Desacidificacin Decantacin Filtracin Esterificacin al vaco
25 C 65 C 65 C 67.5 C
pH 3.5 1 atm 1 atm 285 mbar
Enfriado
25 C CaSO4
Protenas
CaSO4 Azcares i insolubles
insolubles
Agua

Agua Carbn activado HCI Agua Agua

Evaporacin Vol=20% Evaporacin

Blanqueado Filtracin al vaco Filtracin Blanqueado Hidrlisis al vaco
Filtracin
25 C 67.5 C 25 C 25 C 67.5 C
285 mbar 285 mbar
Carbn Enfriado
activado 25 C Vol=25%
CaSO4
Carbn activado Ac. lctico
Carbn
activado

Figura 7. Diagrama de bloques del proceso propuesto para la produccin y purificacin de cido lctico a partir de la biorreaccin en fase
slida de cscara y bagazo de naranja

Por otro lado, la fase rica en agua se enfra hasta
temperatura ambiente y se pasa a una etapa de
desacidificacin en la que el pH es llevado hasta un
mnimo de 3.5 con CaCO3 en polvo, para nuevamente
formar sulfato de calcio insoluble (Reaccin 8, Figura
8) y reducir el exceso de aniones sulfato, los cuales se
remueven por filtracin junto con partculas suspendidas.
Los slidos recuperados se lavan con agua, recirculando
esa agua al proceso. El lquido desacidificado se mezcla
con carbn activado para ser blanqueado. La mezcla se
filtra para recuperar el carbn activado y la fase lquida
se enva a una nueva etapa de evaporacin al vaco a
67.5C. Debido al grado de saturacin alcanzado, es
posible la formacin de cristales de sulfato de calcio
que no se hayan logrado eliminar en etapas previas, por
lo que la mezcla se enfra hasta temperatura ambiente
para aumentar la saturacin y, posteriormente, se filtra.
Debido a la formacin de color en la solucin, sta
es nuevamente mezclada con carbn activado en una
segunda etapa de blanqueado y filtracin, recuperando
el carbn activado, el cual es reutilizado en la primera
etapa de blanqueado. La fase lquida recuperada de la
segunda etapa de blanqueado se mezcla con agua y HCl
al 35% v/v para catalizar la hidrlisis del lactato de 1-
Figura 8. Reacciones que ocurren en la secuencia de separacin, reduccin de impurezas y concentracin de
cido lctico a partir de la biotransformacin slida de cscara y bagazo de naranja, utilizando la
esterificacin con 1-butanol y posterior hidrlisis del cido lctico
Tecnol. Ciencia Ed. (IMIQ) vol. 23 nm. 2, 2008 87
butilo (Reaccin 9, Figura 8). Posteriormente, el lquido
hidrolizado se evapora al vaco a 67.5C reduciendo el
volumen a 25% del inicial. La fraccin evaporada se
recircula al proceso y el producto de fondos obtenido
es cido lctico concentrado cuya pureza cumple el
estndar del FCC.
Posteriormente, se construy un modelo de
simulacin del proceso utilizando el simulador
SuperPro Designer 6.0 (Figura 9). Para el balance de
materia se consider una capacidad de procesamiento
por lote (batch) de 10 toneladas de cscara de
naranja con una humedad msica del 12% y un
rendimiento de produccin de cido lctico durante la
biotransformacin de 8.2 mg por cada gramo de cscara
de naranja en base seca.
Los datos fsicos y termodinmicos del lactato de
butilo fueron estimados con el mdulo Aspen Plus User
Interface 11.1, obtenindose correlaciones de capacidad
calorfica a presin constante para las fases lquido y
vapor, y de densidad para la fase lquida, ambas en
funcin de la temperatura, as como las constantes de
Antoine para el clculo de presin de vapor en funcin
de la temperatura, cuyos parmetros fueron luego
ingresados en el SuperPro Designer 6.0.
(5)
(6)
(7)
(8)
(9)
 Bagazo y Aire Venteo-1 Venteo-3
cscara de naranja Biomasa-1 H2SO4
Venteo-2
Venteo-4

Bioproducto
CaCO3 al 50% CaSO4+Protena
Agua-1 S-102
S-103
(NH4)2SO4
CaCO3 _1 S-101 S-105 S-112
Inculo P-3/NFD-101
P1/V-101 Venteo-5 Filtracin y prensado P-4/V-103 S-104
Agua-2 P-2/V-102 P-5/V-104
Biorreactor Homogeneizador Evaporacin intermitente Evaporador-Cristalizador
P-6/NFD-102
S-111 Filtracin tipo
S-110 S-109 S-107
S-108 S-106 Nutsche

P-10/MX-101
Mezclado P-9/INX-101
P-11/V-106 Columna de P-8/GAC-101
Tanque de agua Columna de carbn P-7/V-105
Intercambio inico Almacenamiento
activado S-114
S-113

Butanol S-116
S-123
C_activado_salida S-119
Carbn activado Venteo-6
88 Tecnol. Ciencia Ed. (IMIQ) vol. 23 nm. 2, 2008

CaSO4 Venteo-7 CaCO3_2 S-118 Azcares

S-115
P-15/V-109
Tanque de butanol
S-122 Esterificado
S-124 S-117
S-121 P-12/V-107
P-19/PFF-103 P-13/PFF-101
Filtracin P&F P-17/PFF-102 S-120 Evaporador-Esterificador
P-18/V-111 P-16/V-110 P-14/V-108 Filtracin P&F
Primer blanqueado Filtracin P&F Decantador
Desacidificador

C-activado-2 HCI

Venteo-8 Agua-3
S-125 Venteo-9
C-activado-1
CaSO4_2
S-127
S-132
S-131
S-128
S-126 S-130 P-24/PFF-105
P-21/HX-101 S-129
Filtracin P&F cido lctico
P-20/V-112 Enfriamiento P-22/PFF-104 P-23/V-113 P-25/V-114
Evaporacin Intermitente Filtracin P&F Segundo blanqueado Evaporacin intermitente

Figura 9. Diagrama de simulacin en SuperPro Designer 6.0 del proceso propuesto para la produccin de cido lctico, a partir de la
biorreaccin en fase slida de cscara y bagazo de naranja

Anlisis de equilibrio lquido-lquido para la etapa
de decantacin
Dado que luego de la esterificacin se obtiene una
mezcla heterognea, se incluy una etapa de decantacin
con la finalidad de evitar evaporar el butanol excedente
y disminuir as el consumo energtico del proceso.
Para ello se evalu la distribucin del cido lctico
y del lactato de butilo en las dos fases lquidas, con la
intencin de conocer la composicin msica normalizada
de las mezclas lactato de butilo - 1, butanol agua
y cido lctico - 1, butanol agua, de forma que
estos datos puedieran ser ingresados en el SuperPro
Designer 6.0 y con ello realizar el balance de materia
en la etapa de decantacin. Para esto se obtuvieron los
diagramas de equilibrio lquido-lquido correspondientes
a estas mezclas a 25 y 65C (Figura 10) utilizando el
mdulo Aspen Split 11.1 y el modelo termodinmico
NRTL-RK (Non Random Two-Liquid [Renon]/Redlich-
Kuong con ley de Henry). Esta evaluacin mostr que a
65C se obtiene una mejor recuperacin del lactato de
butilo y del cido lctico, en la etapa de decantacin,
que a temperatura ambiente, por lo que no es necesario
enfriar luego de la etapa de esterificacin.
Rendimiento de produccin y eficiencia de
recuperacin
En la etapa de biotransformacin, se estim que
por cada 10 Ton de cscara de naranja al 12% de
Agua - Butanol - Lactato de butilo
ilo
but
1-B
de
uta
ato
no
ct
La
Agua
(A)
Figura 10. Diagramas de equilibrio lquido-lquido (fracciones masa) para las fases heterogneas formadas
por las mezclas: A) Agua-1,butanol-lactato de butilo y B) Agua-1,butanol-cido lctico. Evaluacin
a las temperaturas de 25 y 65C
Tecnol. Ciencia Ed. (IMIQ) vol. 23 nm. 2, 2008 89
humedad msica, es posible producir 72 (72.16) kg
de cido lctico, de los cuales, al final del proceso, es
posible recuperar 51 (50.95) kg como cido lctico
y 1 (1.07) kg como lactato de 1-butilo. Con base en
esto, el rendimiento msico global de produccin fue
de 6 (5.79) g de cido lctico por cada kg de cscara
y bagazo de naranja en base seca. Por otro lado, la
eficiencia global de recuperacin de cido lctico del
proceso de separacin y purificacin, result ser de 70
(70.61)%. Esto es debido a que tan slo en la etapa de
filtracin y prensado del slido producido se pierde
aproximadamente el 15% del cido lctico generado
en la biorreaccin debido a la retencin de lquido en
la cscara hidrolizada. El factor de concentracin de
lactato alcanzado al final del proceso fue de 46.75 veces
respecto a la concentracin a la salida de la etapa de
filtracin y prensado mecnico. Con un solo biorreactor,
el proceso completo tendra una duracin de 284
(283.87) h/lote, pudindose realizar un total de 39 lotes
al ao. Esta cantidad podra incrementarse con el uso de
dos o ms biorreactores operados secuencialmente, lo
cual aumentara la produccin y reducira los tiempos
de espera.
Mediante la simulacin se estim que, para una
capacidad de procesamiento de 10 Ton por lote de
cscara de naranja (400 Ton/ao) y un solo biorreactor,
es posible producir 5.5 toneladas (5498kg) al ao
de solucin de cido lctico al 36% masa (Tabla 3),
equivalente a 45 m3 (44564 litros) a una concentracin
de 45 (44.6) g cido/L.
Agua - Butanol - cido lctico
1-B
tic
lc
uta
no
ido
l
c
l
Agua
(B)
90 Tecnol. Ciencia Ed. (IMIQ) vol. 23 nm. 2, 2008

Tabla 3 cscara de naranja, y que, al mismo tiempo, permitan

Composicin y concentracin de la corriente de ofrecer un mayor rendimiento de produccin de cido
producto final del proceso lctico durante su desarrollo. Asimismo, la optimizacin
Composicin base Composicin base Concentracin
global del proceso debe llevarse a cabo, en particular,
Componente
hmeda (% masa) seca (% masa) (g/L) atendiendo al entorno econmico actual que ofrece
Amonio 0.83 1.84 1.02 incentivos econmicos claros para el establecimiento
1-Butanol 1.33 2.97 1.64 de biorrefineras.
Lactato de butilo 0.76 1.69 0.94
CaCO3 0.02 0.04 0.02
Azcares (expresados 4.03 8.96 4.97 BIBLIOGRAFA
como glucosa)
HCl 0.26 0.58 0.32 Bello-Gil, D. 2007. Plsticos biodegradables, una alternativa verde.
Lactato de calcio 0.27 0.60 0.33 Departamento de Bioqumica. Subdireccin de Biotecnologa.
cido lctico 36.14 80.40 44.59
Instituto Cubano de Investigaciones de los Derivados de la Caa
Protenas 0.16 0.35 0.20
de Azcar. ECO-SITIO. 03/10/2005. [Fecha de consulta: 25 de
cido sulfrico 0.23 0.50 0.28
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que es indispensable el uso de carbn activado como strain Rhizopus sp. MK-96-1196 in airlift bioreactors. J. Biosci.
Bioeng. 96(1):85-69.
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Por otro lado, aunque la zeolita catinica demostr economy: Utilization of waste to enhance industrial viability in
ser adecuada para la remocin de impurezas, no se tropical regions. Presentado en 7th World Congress of Chemical
recomienda su uso debido al alto grado de prdida de Engineering, Glasgow, Escocia.
cido lctico que provoca. El proceso de esterificacin Ramachandran, S., Roopesh, K., Nampoothiri, K., Szakacs, G., Pandey,
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y pureza de cido lctico. Es indispensable que el acido 38:99-104.
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in the lactic acid fermentation of potato pulp by Rhizopus oryzae. J.
El diseo de separacin y purificacin propuesto Ind. Microbiol. Biotechnol. 30:440-444.
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estndar del Cdigo Qumico de Alimentos (FCC) para acid by Rhizopus species. World J. Microbiol. Biotechnol.10:433-
cido lctico grado alimenticio, demostrndose que el 435.
proceso es tcnicamente viable. El modelo de simulacin Vaidya, A. N., Pandey, R. A., Mudliar, S., Suresh Kumar, M., Chakrabarti,
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obtenido permiti llevar a cabo estudios de escalamiento polylactide. An overview. Crit. Rev. Environ. Sci. Technol. 35:429-
de produccin y estudios de caso de operatividad y es 467.
una base indispensable para el mejoramiento del proceso Yin, P.M., Nishina, N., Kosakai, Y., Yahiro, K., Park, Y., Okabe, M. 1997.
con base a parmetros econmicos. Enhanced production of L(+)-lactic acid from corn starch in a culture
Se recomienda llevar a cabo estudios ms detallados of Rhizopus oryzae using an air-lift biorreactor. J. Ferment. Bioeng.
84:249253.
encaminados a obtener mejores condiciones de Zacchi, G., Akerberg, C. 2000. An economic evaluation of the fermentative
biorreaccin que lleven al Rhizopus oryzae a consumir production of lactic acid from wheat flour. Biores. Technol. 75:119-
los azcares degradados durante la hidrlisis de la 125.