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Cuantificacion de Fenoles Totales PDF
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TALLER
MULTIDISCIPLINARIO PRACTICA 4. EVALUACIN DE CAPACIDAD
DE PROCESOS
ANTIOXIDANTE Y DETERMINACIN DE
TECNOLGICOS DE
FRUTOS Y FENOLES TOTALES PARA FRUTOS
HORTALIZAS
OBJETIVO
ANTECEDENTES
El oxgeno est asociado a las condiciones de vida aerobia, representa la fuerza motriz
para el mantenimiento del metabolismo y viabilidad celular al mismo tiempo que
involucra un peligro potencial debido a las caractersticas paramagnticas de este gas,
responsable de la formacin de intermediarios parcialmente reducidos y dotados de una
reactividad alta conocidas como especies reactivas de oxgeno (ROS, por sus siglas en
ingls) (Martnez, 2007).
Las ROS son radicales libres (RL) o precursores de radicales. En los orbitales, los electrones
giran en pares con un espn particular, esto se conoce como mxima estabilidad natural;
por tanto, si hay electrones desapareados en un orbital, se generan especie moleculares
altamente reactivas que tienden a robar un electrn de cualquier otro tomo para
compensar su deficiencia electrnica. El oxgeno, es el principal radical libre, ya que l
tiene dos electrones desapareados (Martnez, 2007).
Las ROS tienen un origen tanto endgeno, como exgeno. Entre las fuentes endgenas
destacan:
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2. Sobre los glicsidos, actan alterando las funciones celulares tales como las
asociadas a la actividad de las interleucinas y la formacin de prostaglandinas, hormonas y
neurotransmisores.
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ayudando as a reducir el dao oxidativo en el cuerpo humano. Hay dos tipos principales
de antioxidantes, el "primario" (ruptura de la reaccin en cadena, secuestradores de
radicales libres) y el "secundario" o "preventivo". Los mecanismos antioxidantes
"secundarios" pueden incluir la desactivacin de metales, inhibicin de los hidroperxidos
lipdicos interrumpiendo la produccin de voltiles indeseables, la regeneracin de
antioxidantes "primarios", eliminar el oxgeno singulete, etc. (Martnez, 2007).
Antioxidantes en alimentos
Compuestos Fenlicos
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(Leighton, 2001)
EQUIPO:
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MATERIAL:
Tabla para picar
Cuchillo
Vasos de precipitado de 100 y 200 mL
Probetas graduadas de 50 y 10 mL
Matraces aforados de 5, 10, 100 y 250mL
Puntas para micro pipetas
Esptulas
Agitadores magnticos
Celdas para espectrofotmetro
3 Vidrios de Reloj
6 Micro tubos para centrifuga
3 Mortero
Toallas de papel.
Klennex
Marcador indeleble.
MUESTRAS Y SOLUCIONES:
Una o dos muestras del producto por equipo, todas las actividades se realizaran por
triplicado
Metanol al 100 %
Nota: Verificar que el pH se encuentre en 5.25, en caso contrario corregir el pH con las soluciones A y B
segn sea el caso.
DMPD 100mM 5 mL
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PROCEDIMIENTO:
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Figura 1. Centrifuga
Curva Patrn
Agua Agua Agitar y
No. de c. Glico c. Glico Folin- Na2CO3 Leer en
destilada destilada dejar
tubo (mg/mL) (L) Ciocalte (L) (L) espectro
(L) (L) reposar
Bco 0 0 200
1 0.02 40 160
2 0.04 80 120
1500 100 200 30 min 765 nm
3 0.06 120 80
4 0.08 160 40
5 1.0 200 0
Clculos
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2. Las lecturas de cada punto de la curva se realizaran por triplicado y por cada uno se
realizara un blanco, el cual solo contendr metanol al 80%.
3. Tambin se registrar la lectura como A0 (blanco o seal no inhibida).
4. Las muestras se sometern al mismo proceso que la curva, esto a partir de los
extractos obtenidos.
Nota: en caso de que el contenido de antioxidantes dentro de la muestra sea mucho mayor al cuantificable
por el mtodo, realizar diluciones para lograr la lectura, y tomarlas en cuenta en el clculo.
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TECELDA = (%inhibicin-b)/m
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Solucin
Solucin Agitar y
No. de Concentracin de Metanol Tomar de Leer en
madre dejar
tubo Trolox M 80% (L) (L) DMPD espectro
Trolox (L) reposar
(L)
1 1200 150 350 100
2 1000 125 375 100
3 800 100 400 100 1 900 10 min 505 nm
4 600 75 425 100
5 400 50 450 100
6 200 25 475 100
5. Las lecturas de cada punto de la curva se realizaran por triplicado y por cada uno se
realizara un blanco, el cual solo contendr metanol al 80%.
6. Tambin se registrar la lectura como A0 (blanco o seal no inhibida).
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7. Las muestras se sometern al mismo proceso que la curva, esto a partir de los
extractos obtenidos.
Nota: en caso de que el contenido de antioxidantes dentro de la muestra sea mucho mayor al cuantificable
por el mtodo, realizar diluciones para lograr la lectura, y tomarlas en cuenta en el clculo.
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CUESTIONARIO:
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REFERENCIAS
1. Shetty, K., Paliyath, G., Pometto, A. y Levin, R., (2007). Funtional Foods and
Biotechnology. Advisory Board, Massachusetts, EUA.
2. Leighton, F, Urquiaga, I. y Diez, M., (1997) Propiedades Antioxidantes del Vino y Sus
Componentes. Facultad de Ciencias Biolgicas, Pontificia Universidad Catlica de Chile,
Revista Cubana Plantas Medicinales Scielo,13:4.
3. Leighton, F. y Urquiaga I., (2001) Polifenoles del vino y Salud Humana, Antioxidantes y
Calidad de Vida, Revista antioxidantes y calidad de vida online, Pontificia Universidad
Catlica de Chile, Febrero, Disponible en <www.antioxidantes.com.ar/Home2.htm>
El presente material fue elaborado con apoyo del proyecto PAPIME: Elaboracin de materiales
educativos para fortalecer la enseanza en el taller multidisciplinario de ingeniera en alimentos-
procesos tecnolgicos de frutas y hortaliza de la carrera de ingeniera en alimentos (PE 202610).
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