Documentos de Académico
Documentos de Profesional
Documentos de Cultura
Tesis - Determinacion de La Capacidad Protectora de Antocianinas de Un Extracto de Uva en Aortas de Rata Con Estres Oxidativo
Tesis - Determinacion de La Capacidad Protectora de Antocianinas de Un Extracto de Uva en Aortas de Rata Con Estres Oxidativo
Facultad de Medicina
Escuela de Kinesiologa
DETERMINACIN DE LA CAPACIDAD
PROTECTORA DE ANTOCIANINAS DE UN
EXTRACTO DE VITIS vinifera EN AORTAS DE RATA
SOMETIDAS A ESTRS OXIDATIVO
AUTORES:
Isabel Margarita Muoz Muoz
Vctor Emanuel Soto Rojas
2005
DETERMINACIN DE LA CAPACIDAD PROTECTORA DE
ANTOCIANINAS DE UN EXTRACTO DE VITIS vinifera EN
AORTAS DE RATA SOMETIDAS A ESTRS OXIDATIVO
Tesis entregada a la
UNIVERSIDAD DE CHILE
en cumplimiento parcial de los requisitos
para optar al grado de
LICENCIADO EN KINESIOLOGIA
FACULTAD DE MEDICINA
Por
2005
INFORME DE APROBACIN
TESIS DE LICENCIATURA
DIRECTOR DE TESIS
NOMBRE FIRMA
Isabel Margarita
A Perro
Probeta
INDICE
RESUMEN ....................................................................................................... i
SUMMARY ...................................................................................................... ii
ABREVIATURAS.............................................................................................iii
INTRODUCCIN ............................................................................................ 1
MARCO TERICO.......................................................................................... 3
Msculo liso.......................................................................................... 3
Especies reactivas de oxgeno ............................................................. 4
Estrs oxidativo .................................................................................... 5
Sistema antioxidante ............................................................................ 6
Polifenoles ............................................................................................ 7
Antocianinas ......................................................................................... 8
Vitis vinifera .......................................................................................... 8
OBJETIVOS .................................................................................................. 10
Generales ........................................................................................... 10
Especficos ......................................................................................... 10
HIPTESIS ................................................................................................... 11
VARIABLES .................................................................................................. 11
MATERIALES Y MTODO............................................................................ 12
Diseo de investigacin...................................................................... 12
Tipo de estudio ................................................................................... 12
Criterios de inclusin/exclusin .......................................................... 12
Animales............................................................................................. 12
Obtencin y preparacin de segmentos de aorta ............................... 12
Estabilizacin del aparato contrctil de la aorta.................................. 13
Contraccin inducida por Fenilefrina (FE) .......................................... 13
Generacin de especies reactivas del oxgeno (EROs)
mediante electrlisis ........................................................................... 14
Grupos experimentales....................................................................... 14
Reactivos y soluciones ....................................................................... 15
Anlisis estadstico ............................................................................. 15
RESULTADOS .............................................................................................. 16
Contraccin inducida por Fenilefrina pre electrlisis .......................... 16
Contraccin inducida por Fenilefrina post electrlisis ......................... 16
Contraccin inducida por electrlisis .................................................. 17
DISCUSIN .................................................................................................. 18
CONCLUSIONES.......................................................................................... 21
PROYECCCIONES....................................................................................... 22
BIBLIOGRAFA ............................................................................................. 23
ANEXOS ....................................................................................................... 27
Anexo 1 Estructura qumica de las antocianinas ............................ 27
Anexo 2 Metabolismo del oxgeno .................................................... 28
Anexo 3 Generacin de radical hidroxilo ......................................... 29
Anexo 4 Generacin de radical superxido ..................................... 30
Anexo 5 Mecanismo de estabilizacin de EROs de
de los flavonoides ............................................................... 31
Anexo 6 Montaje del bao de rganos ............................................ 32
APENDICE .................................................................................................... 33
Tabla 1................................................................................................ 33
Figura 1 .............................................................................................. 34
Tabla 2................................................................................................ 35
Figura 2 .............................................................................................. 36
Figura 3 .............................................................................................. 37
RESUMEN
i
SUMMARY
ii
ABREVIATURAS
iii
INTRODUCCIN
1
EROs. Sin embargo, los altos costos del proceso de extraccin de las
proantocianinas no las convierte en alternativas atractivas para su uso
fitofarmacutico. Las antocianinas, en cambio, de estructura ms simple que las
anteriores, poseen un proceso de extraccin de menor complejidad y menor costo,
lo que hara ms atractivo del punto de vista farmacotcnico la fabricacin de un
fitofrmaco a partir de antocianinas, siempre y cuando, su eficacia farmacolgica
fuese al menos igual al perfil demostrado por las proantocianinas.
A diferencia de los frmacos alopticos, cuyos rangos teraputicos son muy
estrechos, los fitofrmacos tienen rangos muy amplios, por lo cual se hace menos
probable alcanzar la concentracin mnima txica, adems de poseer escasos
efectos secundarios.
La posible limitacin de la presente tesis est impuesta por el modelo
experimental, ya que ste se circunscribe a la evaluacin de la capacidad de
proteccin de EVvA ante la accin deletrea de O2.- y OH en un modelo funcional
in vitro. Por otra parte, no permite que los resultados obtenidos puedan ser
extrapolados directamente a modelos in vivo.
2
MARCO TERICO
Msculo Liso
El msculo liso est formado por fibras musculares lisas que corresponden
a clulas uninucleadas, delgadas y aguzadas en los extremos, cuya longitud vara
entre 20 y 500 m. Existen distintos tipos de msculo liso: multiunitario y unitario,
siendo este ltimo el que se encuentra en las paredes vasculares (Guyton, 2001).
En la variedad unitaria de msculo liso, las fibras se encuentran asociadas en
capas o haces, gracias a lo cual pueden actuar como una sola, transmitiendo las
fuerzas generadas. Las uniones estrechas que presentan entre sus membranas
celulares permiten el paso de iones, mediante los cuales se propaga el potencial
de accin.
El aparato contrctil del msculo liso no posee una estructura fibrilar
definida como el msculo estriado (Berne, 1999). Si bien carece de troponina, hay
abundantes miofilamentos finos de actina que forman parte del citoesqueleto,
anclados a los cuerpos densos y reas densas de membrana. Estos miofilamentos
estn solapados alrededor de una proporcin menor de miofilamentos gruesos de
miosina, alineados aproximadamente a lo largo del eje celular en el sentido de
generacin de la fuerza. Este sistema puede atravesar las membranas
plasmticas de las clulas musculares (Guyton, 2001).
El proceso de contraccin del msculo liso est regulado por Ca+2 (Guyton,
2001; Berne, 1999; Karaki y cols., 1997). Existen cuatro mecanismos reguladores
del flujo de Ca+2 intracelular:
Activacin de canales de Ca+2 por receptores del sarcolema dependientes
de ligando que estimulan la liberacin de Ca+2 desde el retculo
sarcoplsmico.
Intercambio Na+/ Ca+2 .
Activacin de canales catinicos inespecficos.
Activacin de canales de Ca+2 voltaje dependientes (tipo L), ya sea por
potencial de accin, por depolarizacin inducida o por canales de calcio
3
dependiente de ligando, siendo sta la va ms importante (Berne, 1999;
Karaki y cols., 1997).
La accin de los agonistas adrenrgicos como norepinefrina est medida
por todos estos mecanismos anteriormente mencionados para la movilizacin de
Ca+2, adems de sensibilizar los elementos contrctiles del msculo que son
sensibles a Ca+2, aumentando as la fuerza de contraccin a determinadas
concentraciones de Ca+2 intracelular (Karaki y cols., 1997).
La contraccin del msculo liso tiene dos fases: una rpida o transiente,
dependiente del Ca+2 liberado del retculo sarcoplsmico que induce la fase lenta o
de meseta dependiente de la entrada de Ca+2 extracelular. El aumento de Ca+2
intracelular permite la contraccin, porque al unirse a calmodulina se genera un
complejo que va a activar a la miosina quinasa de cadena ligera. La miosina
quinasa de cadena ligera, a su vez, fosforila a la miosina, permitiendo el
deslizamiento sobre la miosina y con esto se genera la contraccin muscular
(Karaki y cols., 1997).
Las EROs son especies reactivas derivadas del oxgeno que incluyen
molculas qumicas radicalarias y no radicalarias, siendo estas ltimas, agentes
oxidantes que fcilmente pueden ser convertidas a radicales (Finkel y cols., 2000).
Las especies radicalarias se caracterizan por que su estructura atmica presenta
un electrn desapareado en su orbital externo, lo que le da una configuracin
espacial altamente inestable, como el anin superxido (O2.-) y el radical hidroxilo
(OH). Entre las especies no radicalarias mencionamos el perxido de hidrgeno
(H2O2), y el oxgeno singlete (102) (Halliwell y cols., 1999). Las especies
radicalarias del oxgeno tienen vida media corta debido a su gran reactividad por
su o sus electrones desapareados, los cuales interactan con molculas o
elementos que generalmente poseen electrones apareados, producindose una
oxidacin de las molculas estructurales de las clulas causando dao irreversible
(Pietta, 2000).
4
Las reacciones univalentes que llevan a la formacin de las EROs se deben
a la reduccin sucesiva del oxgeno a anin superxido al incorporar un electrn, a
perxido de hidrgeno al aceptar 2 electrones y a radical hidroxilo al aceptar 3
electrones (Anexo 2) (Guyton, 2001).
Las EROs tienen diferentes funciones en los seres vivos, de los cuales son
elementos constitutivos (Peters y cols., 1999). Las funciones favorables son la
produccin de energa, fagocitosis, regulacin de crecimiento celular, seales
intercelulares y sntesis de importantes compuestos biolgicos. Dentro de las
reacciones deletreas estn las que afectan a lpidos de membrana
(lipoperoxidacin), dao oxidativo a protenas de tejidos y enzimas, por medio de
la modificacin de algunos amino cidos que son ms susceptibles; carbohidratos
y cidos nucleicos (Pietta, 2000; Cheeseman y cols., 1993).
En los seres vivos, las EROs pueden provenir de distintas fuentes. Durante
el metabolismo aerbico las clulas generan energa reduciendo al oxgeno
molecular hasta la formacin de agua. Esta reaccin, que ocurre en la mitocondria,
es catalizada por la citocromo c oxidasa, involucra la transferencia de cuatro
electrones al oxgeno sin formacin de intermediarios. Pero una pequea
proporcin del oxgeno, de 2 a 4%, puede aceptar un menor nmero de electrones
(Rodrigo y cols., 2003), donde en vez de la produccin de agua se forman como el
OH y el O2.- (Rodrguez y cols., 2001). En el plasma sanguneo se est generando
H2O2 continuamente a partir de la oxidacin del GSH y del ascorbato (Halliwell y
cols., 1999). Los macrfagos y neutrfilos activados liberan EROs para destruir
organismos patgenos dentro del proceso de fagocitosis (Market y cols., 1984).
Los peroxisomas y la enzima xantina oxidasa, que degradan estas sustancias,
EROs contenidas en alimentos de consumo habitual como caf, t, chocolate y
bebidas de cola (Pietta, 2000).
Estrs Oxidativo
Cuando el equilibrio entre radicales libres y antioxidantes se pierde en favor
de los primeros, se desencadenan procesos dainos que se asocian al desarrollo
de numerosas enfermedades, lo que se denomina estrs oxidativo (Finkel y cols.,
5
2000). Esto puede deberse a una disminucin de los sistemas antioxidantes, un
aumento de las especies prooxidantes o ambas (Sies, 1993).
A nivel molecular, se ha comprobado, en msculo liso, que las EROs
interfieren con la apertura de canales de Ca+2 voltaje dependientes de gran
conductancia unitaria, tanto en el nmero de canales como en su probabilidad de
apertura (Soto y cols., 2002), lo que alterara la integridad vasomotora y afectara
la maquinaria contrctil de los vasos.
Sistema antioxidante
A la permanente produccin de EROs que daan estructuras
biolgicas, el organismo atena estos efectos deletreos por medio de la accin
de sistemas antioxidantes.
Los antioxidantes son sustancias que se encuentran en pequeas
concentraciones en comparacin a un sustrato oxidable, que retrasa o inhibe
significativamente la oxidacin del sustrato, y tambin estabiliza las EROS
mediante la cesin de un H+ y las convierte en compuestos no radicalarios. Otras
definiciones hablan de antioxidante como cualquier sustancia que, al estar
presente en bajas concentraciones comparada a las de un sustrato oxidable,
previene o retarda la oxidacin de dicho sustrato y que protege a los sistemas
biolgicos frente a efectos potencialmente perjudiciales tanto de procesos como
reacciones que causan excesivas oxidaciones (Halliwell y cols., 1999).
Existen diferentes sistemas de defensa antioxidante en el organismo. Uno
de ellos est conformado por sistemas enzimticos como la superxido dismutasa,
catalasa y glutatin peroxidasa, siendo stas la primera defensa contra los
radicales libres que actan neutralizando a estas especies altamente reactivas en
molculas menos dainas para la clula. Otros sistemas, no enzimticos, estn
conformado por compuestos como caroteniodes, glutatin reducido y las vitaminas
C y E que estabilizan las EROs o tambin que provocan la quelacin de iones
metlicos de elementos de transicin como hierro y cobre, que al estar en estado
reducido potencian su autoxidacin y generacin de anin superxido (Anexo 4)
(Sies, 1993).
6
Los antioxidantes aportados por la dieta disminuyen los efectos de las
EROs. Son variados los alimentos que estn constituidos por estas sustancia y
cada vez ms utilizados por las personas tanto por medio del consumo directo de
vegetales y frutas que los incluyen, como tambin por medio del uso de frmacos.
Entre los antioxidantes ingeridos por la dieta se destacan las vitaminas E y C, los
betacarotenos, procianidinas y polifenoles.
Polifenoles
Compuestos orgnicos que estructuralmente presentan un grupo -OH unido
a un anillo aromtico, que se conocen como compuestos fenlicos y aquellos en
que se repite este radical son conocidos como polifenoles.
Los compuestos de esta familia presentan variados efectos beneficiosos
para la salud: prevencin contra cncer (Hou, 2003), propiedades antiinflamatorias
(Youdim y cols., 2002), antialrgicas (Middleton y cols., 1992), antitumorales
(Bingham S., 1990), antimicrobianas (Nishino y cols., 1987), vasorelajantes
(Bustamante y cols., 2003) y antioxidantes (Youdim y cols., 2000; Serraino y cols.,
2003; Aldini y cols., 2003). Entre sus acciones antioxidantes encontramos la
inhibicin de la formacin de EROs por medio de la inhibicin de enzimas
productoras de EROs como la xantino oxidasa, o la quelacin de los elementos
traza involucrados en la produccin de EROs; el atrapamiento directo de EROs y
el up-regulation de los sistemas antioxidantes endgenos (Pietta, 2000).
Los polifenoles estabilizan las EROs al capturarlas formando el radical
aroxilo (FI-O), para luego reaccionar con un segundo radical, con lo cual
adquieren una estructura quinona estable (Anexo 6)(Pietta, 2000).
Los polifenoles ms estudiados provenientes de extracto seco
estandarizado de Vitis vinifera son antocianinas, procianidinas y proantocianidinas,
entre otros, los cuales son sustancias bioactivas. Estos actan atrapando los
radicales libres para luego tranformarlo en especies no radicalarias, por inhibicin
de la accin enzimtica de elastasa e hialuronidasa (Bustamante y cols., 2003).
Estudios clnicos demuestran que el uso teraputico de los polifenoles
provenientes de la Vitis vinifera, reducen la incidencia de enfermedades
cardiovasculares; disminuye el riesgo de insuficiencia cardiaca; alivio de sntomas
7
en pacientes con insuficiencia venosa (German y cols., 2000; Bustamante y cols.,
2003).
Antocianinas
Las antocianinas (del Griego anthos significa flores y kyanos azul) es el
pigmento ms importante de las plantas, visible al ojo humano.
Dentro de este grupo encontramos a las antocianinas, que se diferencian de
otros polifenoles por poseer azcares dentro de sus grupos funcionales y, en su
mayora, presentar varios grupos OH (Muoz y cols., 2003). Las diferencias
individuales entre los antocianinas dependen del nmero de grupos hidroxilo, la
naturaleza y nmero de azcares que estn unidos a la molcula, a la posicin de
esa unin y la naturaleza y nmero de cidos aromticos unidos al azcar en la
molcula (Kong y cols., 2003).
Las antocianinas poseen conocidas propiedades farmacolgicas utilizadas
para la terapia de un amplio espectro de enfermedades. Las investigaciones
realizadas con extractos de Vitis vinifera ricos en antocianinas, han mostrado que
disminuyen la fragilidad y permeabilidad capilar; tambin efectos antiinflamatorios
y actividad antiedema (Wagner, 1985).
El estudio de la capacidad antioxidante de las antocianinas provenientes de
vino tinto, muestran que son efectivos en el secuestro de EROs y tambin en la
inhibicin de la lipoperoxidacin (Ghiselli y cols., 1998; Jankowski y cols., 2000).
La capacidad antioxidante se relaciona con el nmero de grupos OH que
presenten y el lugar de la sustitucin (Wang y cols., 1997). A su vez las
antocianinas son compuestos muy sensibles a cambios de pH y temperatura
debido a la deficiencia del electrn en su estructura (Satu-Gracia y cols., 1997).
Vitis vinifera
Las antocianinas que forman parte del EVvA utilizado en este estudio
provienen de la Vitis vinifera, que es un arbusto trepador originario de la zona
mediterrnea y de Asia Menor, actualmente cultivada en casi todo el mundo. Se
caracteriza por su altura variable y sus ramas cilndricas. Sus hojas son de forma
8
variable, pero siempre lobuladas y ligeramente dentadas; su color vara en
tonalidad de verde, dependiendo de la variedad. Las flores, pequeas y poco
aparentes, son de color verdoso. El fruto (la uva) es una baya ovalada o redonda y
pulposa, puede ser de color verde, rojo-pardo y negro dependiente de la variedad.
En su interior encontramos las semillas. Son de las semillas y del orujo de la uva,
como del proceso de fermentacin del vino, en tinajas de roble, de donde se
extraen los compuestos bioactivos, entre las que hayamos antocianinas (Muoz y
cols., 2003).
9
OBJETIVOS
Objetivo General
Objetivos Especficos
10
HIPTESIS
VARIABLES
Variables Desconcertantes
1. Estado fisiopatolgico de las ratas previo al ensayo experimental.
2. Proceso de extraccin y manipulacin de las aortas durante el desarrollo
de los ensayos experimentales.
3. Diferencias intra e intermanipulador.
4. Aplicacin correcta del protocolo experimental.
11
MATERIALES Y MTODOS
Diseo de Investigacin
Experimental in vitro (Hernndez Sampieri, 2001).
Tipo de Estudio
Correlacional (Hernndez Sampieri, 2001).
Criterios de Inclusin/Exclusin.
Inclusin:
1. Peso de la rata de 350 g. 50 g.
2. Contraccin de anillos articos inducidas por FE, mayores a 500 mg. posterior
a la fase de estabilizacin.
Exclusin:
1. Los anillos articos que no cumplan con los criterios de inclusin.
Animales
Se utilizaron ratas machos Sprague-Dawley, de 350 g. 50 g. de peso
corporal, obtenidas del Bioterio Central de la Facultad de Medicina, Universidad de
Chile, mantenidas de acuerdo a las normas internacionales dadas por el National
Institute of Health (publicacin 85-23, revisin 1985) con agua y alimento
(Champion Nutricion Animal, Santiago, Chile) proporcionados ad libitum.
12
Glucosa 11,5. La solucin se prepar en agua destilada y se ajust a un pH de
7,40 con HCl (10% v/v) NaOH (0,1 N).
El segmento de aorta se limpi del tejido conectivo y graso que lo rodea,
cuidando de no daar el endotelio. Del segmento inmediatamente inferior al arco
artico se cortaron cuatro anillos de una longitud aproximada de 2 a 3 mm. Dos
ganchos de acero inoxidable, atados cada uno a un hilo de seda de 15 cm de
longitud, fueron introducidos a travs del lumen de cada anillo artico, y stos
fueron llevados al interior de baos de vidrio de doble pared, termorregulados a
37C + 0,5C (Lauda Thermo-Temp). Cada lado del anillo artico fue fijado
mediante el hilo de sus ganchos, uno al fondo del bao y el otro a un transductor
de fuerza Grass FT-03 conectados a polgrafos Grass (modelos 7D y 5D) para la
determinacin de la contraccin isomtrica. La solucin KHm fue
permanentemente burbujeada con CO2-bioxide (95% O2 y 5%CO2, AGA Gases
Especiales, Santiago) (Apndice, Fig. 4).
13
de contraccin y relajacin se repiti de tres a cuatro veces, dejando un tiempo de
recuperacin de 20 minutos entre cada ciclo.
Grupos Experimentales
Las ratas fueron asignadas aleatoriamente a cada uno de los grupos
experimentales y sometidas al protocolo de contraccin inducida por FE 1M
descrito anteriormente, como tambin a los procedimientos particulares indicados
para cada grupo.
Grupo 1: Control.
Estabilizacin, CIF, KHm por 50 minutos, CIF, KHm (N=5).
14
Grupo 5: Tratamiento con DMSO.
Estabilizacin, CIF, KHm + 100L DMSO (100 mM, 15 min), Electrlisis (30 mA,
90 s), KHm (15 min), CIF, KHm (N=4).
Reactivos y Soluciones
El extracto seco de Vitis vinifera, variedad Cabernet Sauvignon,
estandarizado al 0.02% p/p de antocianinas referido a malvidina 3-glicsido, fue
obtenido del Laboratorio de Productos Naturales de la Facultad de Ciencias,
Universidad de Chile, mediante procedimientos estndares de extraccin de
flavanoles (Muoz, 2003). FE hidrocloruro, HCl, NaOH y todas las sales
necesarias para la preparacin de la solucin KHm fueron obtenidas del proveedor
local de Sigma-Aldrich Chemical (MO, EEUU). Las soluciones fueron preparadas
frescas el da de ensayo experimental en agua destilada. Se utiliz como vehculo
solucin KHm a 37C.
El DMSO (FLUKA, Alemania) se utiliz como estndar de capacidad de
captacin de EROs, segn lo descrito en la literatura (Peters y cols., 2000).
Anlisis Estadstico
Los resultados fueron expresados como el promedio de las
contracciones la desviacin estndar del promedio. Las diferencias entre de los
grupos experimentales, antes y despus del tratamiento, fueron determinadas con
la prueba de anlisis de varianza ANOVA seguido de la prueba a posteriori de
Bonferroni. Las diferencias dentro de los grupos experimentales, antes y despus
de la electrlisis, fueron determinadas con la prueba t de Student. La significancia
se estableci en p<0,05.
15
RESULTADOS
16
En el grupo 5, la CIF post electrlisis no present diferencias
estadsticamente significativas (p>0,05) con respecto de la CIF pre electrlisis,
mostrando valores promedio de 8,52 mN 1,93 mN, lo que representa un
98,88% 6,26 % de la CIF pre electrlisis.
17
DISCUSIN
18
estn contenidas en el extracto y que esperbamos seran los responsables de los
posibles efectos, si poseen actividad antioxidante. Ms an, se observa una
tendencia pro-oxidante del EVvA, reflejada en el aumento de la CIE a medida que
se aumenta la concentracin de EVvA empleada en los grupos experimentales.
Sin embargo, nuestros datos no arrojaron diferencias estadsticamente
significativas que permitan corroborar esta tendencia.
La presentacin en polvo del EVvA, sumada a la baja concentracin de
antocianinas del extracto, dificult la disolucin del EVvA para la obtencin de las
concentraciones requeridas en el bao de rganos. Debido a lo anterior, se
dificult la obtencin de concentraciones ms elevadas de antocianinas en el bao
de los anillos articos, pudiendo ser que a las concentraciones empleadas en los
grupos experimentales no fueron suficientes para que el efecto antioxidante se
expresara. Esto no implica que las concentraciones elegidas fueran inadecuadas,
ya que este ensayo fue la primera prueba que se realiz con el EVvA, y las
concentraciones de los grupos de tratamiento fueron seleccionadas tomando en
cuenta rangos de concentraciones en los cuales, segn la literatura las
antocianinas exhiben actividad antioxidante en una variedad de modelos in vitro
(Morazzoni y cols, 1991).
El desconocimiento de la composicin del EVvA proporcionado por la
Facultad de Ciencias dificulta la comparacin con extractos utilizados en otros
trabajos. El conocimiento de la composicin total de antocianinas y otros
compuestos polifenlicos presentes en el EVvA ayudaran a orientar a priori los
resultados, segn la cantidad en que estn presentes, y en base a ellos, afinar la
determinacin de las concentraciones adecuadas para alcanzar los efectos
esperados. Diversos trabajos muestran que las propiedades antioxidantes de
extractos o jugos de diferentes frutas dependen de las diferentes cantidades de
compuestos polifenlicos presentes en ellos y as tambin de las posibles
interacciones que se generen entre stos (Frankel y cols., 1995; Burns y cols.,
2000; Arnous y cols., 2001). Las antocianinas no escapan a este hecho;
pudindose sugerir que la capacidad antioxidante de una antocianina depende de
su estructura qumica (Wang y cols., 1997; Khknen y cols., 2003). La presencia
19
de una antocianina nica o una cantidad reducida, con baja capacidad
antioxidante, podra determinar la aparicin de efecto protector a concentraciones
demasiado elevadas de EVvA, que no pudieron ser alcanzadas por las razones
expuestas en el prrafo anterior.
20
CONCLUSIONES
21
PROYECCIONES
22
BIBLIOGRAFA
23
11. Finkel T., Holbrook N.J., 2000. Oxidants, oxidative stress and the biology of
ageing. Nature 408, 239247.
12. Frankel E., Waterhouse A., Teissedre P., 1995. Principal Phenolic
Phytochemicals in Selected California Wines and Their Antioxidant Activity
in Inhibiting Oxidation of Human Low-Density Lipoproteins. J. Agric. Food
Chem. 43, 890-894.
13. Fridovich I., 1998. Oxygen toxicity: a radical explanation. J Exp Biol 201,
1203-1209.
14. Galvano F., La Fauci L., Lazzarino G., Vicenzo F., Ritieni A., Ciappellano S.,
Battistini N., Tavazzi B., Galvano G., 2004. Cyanidins: metabolism and
biological properties. J Nutritional Biochemistry 15, 2-11.
15. German J., Walzem R., 2000. The health benefits of wine. Annu Rev Nutr
20, 561-593.
16. Ghiselli A., Nardini M., Baldi A., Scaccini C., 1998. Antioxidant activity of
different phenolic fractions separated from Italian red wine. Journal of
Agricultural and Food Chemistry 46 (2), 361-367.
17. Guyton A., Hall J., 2001. Tratado de fisiologa mdica. Editorial McGraw-Hill
Interamericana, Dcima Edicin, Mxico.
18. Halliwell B., Gutteridge JMC., 1999. Free radicals in biology and medicine.
3 Edicin. Oxford University Press.
19. Hernndez R., Fernndez C., Baptista P., 2001. Metodologa de la
investigacin. Editorial McGraw-Hill, Mxico.
20. Hou D., 2003. Potential mechanisms of cancer chemoprevention by
anthocyanins. Current Molecular Medicine 3, 149-159.
21. Jankowski A. Jankowska B., Niedworok J., 2000a. The influence of aronia
melanocapra in experimental pancreatitis. Polish Merkuriusz Lek 8 (48),
395-398.
22. Khknen M., Heinonen M., 2003. Antioxidant Activity Of Anthocyanins And
Their Aglycons. J Agric Food Chem 51, 628-633.
24
23. Karaki R., Osaki H., Hori M y Cols., 1997. Calcium movement distribution
and function in smooth muscle. Am Soc Pharmacol And Exp Ther 49 (2),
157-230.
24. Kong J., Chia L.., Goh N., Chia T., Brouillard R., 2003. Analysis and
biological activities of antocyanins. Phytochemistry 64, 923-933.
25. Li J., Li W., Liu W., Altura B.T., Altura B.M., 2004. Mechanisms of hydroxyl
radical-induced contraction of rat aorta. European Journal of Pharmacology
499, 171 178.
26. Market M., Andrew P., Babiar B., 1984. Measurement of superoxide
production by human neutrophils. Methods Enzimol 105, 358-65.
27. Morazzoni P., Livio S., Scilingo A., Malandrino S., 1991. Vaccinium myrtillus
Anthocyanosides Pharmacokinetics in Rats. Arzneim.- Forsch/ Durg Res.
41 (1), 2.
28. Middleton E., Kandaswami C., 1992. Effects of flavonoids on inmune and
inflammatory cell functions. Biochem Pharmacol 43, 1167-1179.
29. Muoz O., Schwartz M., Loyola E., 2003. Antocianos, colorantes naturales
de aplicacin industrial. Revista de Fitoterapia 3 (2), 147-152.
30. Muoz O., 2003. Antoncianos y betalainas: colorantes de aplicacin
industrial. Editorial CYTED-CONICYT, Santiago.
31. Nishino C., Enoki N., Tanaka S., Mori, A., Kabayashi, K., Fukushima, M.,
1987. Antibacterial activity of flavonoids against Staphylococcus
epidermidis, a skin bacteria. Agric Biol Chem 51, 139-143.
32. Pietta G., 2000. Flavonoids as antioxidants. J Nat Prod 63, 1035-1042.
33. 1er. Tte. Jos Miguel Rodrguez Pern, Tte. Cor. Jos Rogelio Menndez
Lpez, 1er. Tte. Yoel Trujillo Lpez, 2001. Radicales libres en la
biomedicina y estrs oxidativo. Rev Cubana Med Milit 30 (1), 36-44.
34. Peters S., Mathy M., Pfaffendorf M., Van Zwieten P., 2000. Reactive oxygen
species-induced aortic vasoconstriction and deterioration of functional
integrity. Arch Pharmacol 361, 127-133.
25
35. Rodrigo R., Rivera G., 2003. Papel del estrs oxidativo y de los
antioxidantes en la prevencin de las enfermedades crnicas no
transmisibles. Monografa. Universidad de Chile.
36. Satue-Gracia M., Heinonen M., Frankel E., 1997. Anthocyanins as
Antioxidants on Human Low-Density Lipoprotein and Lecithin-Liposome
Systems. J Agric Food Chem 45, 3362-3367.
37. Serraino I., Dugo L., Dugo P., Mondello L., Masona E., Dugo G., Caputi A.,
Cuzzocrea S., 2003. Protective effects of cyanidin-3-O-glucoside from
blackberry extract against peroxynitrite-induced endothelial dysfunction and
vascular failure. Life Science 73, 1097-1114.
38. Sies H., 1993. Strategies of antioxidant defense. Eur J Biochem 215, 213-
219.
39. Simon A., Castro A., Kaski J., 2001. Avance en el conocimiento de la
disfuncin endotelial y su aplicacin en la prctica clnica. Rev. Cubana
Med 40 (3), 212-222.
40. Soto M., Gonzlez C., Lissi E., Vergara C., Latorre R., 2002. Ca+2- activated
K+ channel inhibition by reactive oxygen species. Am J Physiol Cell Physiol
282, C461C471.
41. Wang H., Cao G, Prior R., 1997. Oxygen radical absorbing capacity of
anthicyanins. J Agric Food Chem 45, 304-309.
42. Wagner H., 1985. Annual Proceedings of Phytochemical Society of Europe
25, 409.
43. Youdim K., McDonald J., Kalt W., Joseph J., 2002. Potential role of dietary
flavonoids in reducing microvascular endothelium vulnerability to oxidative
and inflamatory insults. Journal of Nutritional Biochemistry 13, 282-288.
44. Youdim K., Martin A., Joseph J., 2000. Incorporation of the elderberry
anthocyanins by endothelial cells increases protection against oxidative
stress. Free Radical Biology and Medicine 29 (1), 51-60.
26
ANEXOS
Anexo 1
Estructura qumica de las Antocianinas
Azcar
27
Anexo 2
Metabolismo del oxgeno
28
Anexo 3
Generacin de radical hidroxlo
Reaccin de Fenton
Reaccin de Haber-Weiss
Fe2+ Fe3+
O2- + H2O2 -OH + OH + O2
(Guyton, 2001)
29
Anexo 4
Generacin de radical superxido
Fe2+ + O2 Fe3+ + O2.-
Cu+ + O2 Cu2+ + O2.-
(Guyton, 2001)
30
Anexo 5
Mecanismo de estabilizacin de EROs de los flavonoides
ERO
Radical
Flavonoide Aroxilo
(Pietta, 2000)
31
Anexo 6
Esquema del montaje del bao de rganos
32
APNDICE
Tabla 1.
Tensin desarrollada por los anillos articos de rata, producida por
Fenilefrina, pre y post a la generacin de EROs inducida por electrlisis.
* = p<0,01
** = p< 0,001
33
Contraccin pre electrlisis
Contraccin post electrlisis
34
Tabla 2.
* = p<0,05
35
Figura 2. Tensiones absolutas de las contracciones inducidas por electrlisis, en
anillos articos de rata de los grupos experimentales. Grupo 1: control (n=4) no
graficado por presentar valor = 0 mN, grupo 2: tratamiento con 0 ng/mL de EVvA
(n=4), grupo 3: tratamiento con 250 ng/mL de EVvA (n=5), grupo 4: tratamiento
con 500 ng/mL de EVvA (n=5), grupo 5: tratamiento con DMSO 100 mM (n=5). Los
valores representan el promedio su desviacin estndar.
* = Diferencia significativa de la contraccin inducida por electrlisis con respecto
al grupo 2 (p<0,05).
36
CIF pre Electrlisis CIE CIF post Electrlisis
6
2
5
1 * 4
Las contracciones fueron inducidas por fenilefrina 1 M, antes y despus de electrolisis (90 s., 30 mA).
FE = fenilefrina; Lavado = lavado con solucin KHm.
37