Biofertilizantes microbianos

Las bacterias edficas beneficiosas y de vida libre se conocen como rizobacterias

promotoras del crecimiento de las plantas o por su acrnimo PGPR (Plant Growth Promoting
Rhizobacteria).Tambin son denominadas bacterias que aumentan el rendimiento o por su
acrnimo YIB (Yield Increasing Bacteria); sin embargo, el trmino PGPR debera actualizarse,
debido a que muchas de las bacterias que ejercen efectos beneficiosos en las plantas pueden
desarrollarse fuera del sistema rizosfrico y por lo tanto este trmino es restrictivo, adems que no
slo existen bacterias sino tambin hongos promotores del crecimiento vegetal.

El trmino PGPR se acepta para describir a las bacterias que colonizan el sistema radicular y
promueven el crecimiento vegetal o que habitan en la rizsfera y que tienen un efecto positivo
sobre los cultivos. Este trmino se estableci en 1978 cuando este campo de investigacin estaba
an poco desarrollado y, actualmente se propone la separacin en dos grupos, las PGPB (Plant
Growth promoting Bacterias) o bacterias promotoras del crecimiento de las plantas), que afectan
estrictamente el crecimiento vegetal, y las biocontrol-PGPB, cuando se refiere a bacterias que
controlan fitopatgenos, ya sea produciendo sustancias inhibitorias o incrementando la resistencia
natural de las plantas. Entre las PGPR se encuentran especies de los gneros Azospirillum,
Azotobacter, Pseudomonas, Bacillus, Azotobacter, Burkholderia, Enterobacter, Erwinia, Serratia y
Arthrobacter.

RIZOBACTERIAS PROMOTORAS DEL CRECIMIENTO DE PLANTAS, PGPR

En la rizsfera de las plantas se consideran tres componentes: el suelo rizosfrico, el

rizoplano y la raz misma. El suelo rizosfrico es la zona del suelo influenciada por las
races a travs de la liberacin de exudados que afectan la actividad microbiana. El
rizoplano es la superficie de la raz, incluyendo las partculas fuertemente adheridas a la
raz. La raz misma tambin es parte de la rizsfera, porque determinados
microorganismos son capaces de colonizar los tejidos internos (Nihorimbere et al., 2011).
Kloepper & Shroth (1978) mencionados por Bhattacharyya & Jha (2012)
propusieron el trmino rizobacterias para las bacterias del suelo que competitivamente
colonizaban las races, estimulaban el crecimiento de las plantas y a la vez reducan la
incidencia de las enfermedades. En 1981, estos mismos investigadores denominaron a
estas bacterias como rizobacterias promotoras del crecimiento de las plantas (plant growth
promoting rhizobacteria, PGPR). En actualidad, este concepto se usa para las bacterias
que cumplen con dos de los tres criterios establecidos como son colonizacin agresiva,
estimulacin del crecimiento vegetal y biocontrol.
Las PGPR benefician a los cultivos agrcolas a travs de mecanismos directos e
indirectos. Los directos se evidencian en ausencia de otros microorganismos en estudio,
mientras que los mecanismos indirectos se pueden observar en la interaccin del
microorganismo de inters con un fitopatgeno, mediante la cual se reducen los efectos
dainos en el cultivo. Los mecanismos directos incluyen la sntesis de reguladores del
crecimiento (auxinas, giberelinas, citoquininas), solubilizacin de minerales como los
fosfatos, fijacin de nitrgeno atmosfrico, produccin de siderforos y estimulacin del
sistema de absorcin de iones como los nitratos. Entre los mecanismos indirectos o de
biocontrol se encuentran la competencia por un nicho ecolgico o por nutrientes, la
interaccin directa con el patgeno (parasitismo y lisis enzimtica), antibiosis, produccin
de siderforos e induccin de resistencia sistmica en las plantas (Hernndez et al., 2006;
Martinez et al., 2010; Hayat et al., 2010; Nihorimbere et al., 2011; Bhattacharyya & Jha,
2012).
Bacterias como Azospirillum, Herbaspirillium, Enterobacter y Azotobacter
promueven el crecimiento de las plantas, mayoritariamente a travs de mecanismos
directos, as como Pseudomonas, Bacillus y Streptomyces lo hacen a travs de
mecanismos indirectos; no obstante, todas las PGPR presentan un mayor o menor grado
de efectividad en ambos mecanismos (Doumbou et al., 2002; Kloepper, 2003; Idriss et al.,
2004; Guillen et al., 2006; Franco, 2009; Karnwal, 2009; Martinez et al., 2010;
Salaheddin et al., 2010;). Al respecto, Bashan et al. (1996) atribuyen el efecto de las
PGPR a los que ellos denominan hiptesis aditiva, segn la cual ms de un mecanismo
estn involucrados en la asociacin planta-rizobacteria, los mismos que operan
simultneamente o en asociacin. La suma de los diferentes mecanismos refleja los
cambios observados en el crecimiento de las plantas, cuando son cultivadas bajo
condiciones ambientales propicias.
Reguladores del crecimiento vegetal
Las sustancias reguladoras del crecimiento vegetal activan varias respuestas en la
clula vegetal, a nivel bioqumico, fisiolgico y morfolgico. Se consideran cinco grupos
principales: auxinas, giberelinas, citoquininas, etileno y cido abscsico. Cuando estos
metabolitos son producidos en forma endgena por las plantas se les denominan
hormonas vegetales o fitohormonas. A su vez, el trmino reguladores del crecimiento de
las plantas es usado por la industria de agroqumicos para nombrar a los compuestos
sintticos que tienen propiedades para regular el crecimiento de las plantas. En general
este trmino se utiliza cuando las hormonas vegetales son producidas por los
microorganismos de la rizsfera (Loredo et al., 2004).
Las auxinas son reguladores esenciales del crecimiento y desarrollo vegetal. La ms
estudiada es el cido indol actico con accin en la formacin de dominios apicales,
diferenciacin vascular y en el desarrollo de los rganos. La sntesis de AIA en las
rizobacterias est ligada principalmente a tres rutas metablicas, cuyo precursor es el
triptfano. La primera ruta es la del cido indol-3-pirvico (IPyA) presente en plantas y
en bacterias como Azospirillum sp. y Pseudomonas sp. En la segunda ruta (TAM), la
formacin de la triptamina a partir del triptfano se presenta como una alternativa para la
produccin de AIA. A su vez, en la tercera ruta la sntesis del AIA es va indol-3-
acetamida (IAM) y est presente en las bacterias fitopatgenas Pseudomonas syringae,
Agrobacterium tumefaciens y Erwinia herbcola, pero tambin en bacterias simbiticas
como Rhizobium spp. Por su parte, tambin se menciona una cuarta ruta metablica, del
indol-3-acetonitrilo (IAN), caracterizada en plantas y bacterias y en la que participan
activamente enzimas como las nitrilasas, encargadas de generar AIA a partir del indol-3-
acetonitrilo (Aguilar at al., 2008; Carmelo et al., 2011).
 Las giberelinas son molculas complejas de di-terpenos tetracarboxlicos
producidos por las plantas y en caso muy puntuales por bacterias como A. brasilense,
A. lipoferum, Acetobacter diazotrophicus, Herbaspirillum seropedicae y Bacillus sp. Estas
fitohormonas incrementan el crecimiento de los tallos e interrumpen el perodo de
latencia de las semillas para la germinacin. Tambin inducen la brotacin de yemas y
promueven el desarrollo de frutos Por su parte, las citocininas o citoquininas son
derivados de las amino purinas capaces de regular la citoquinesis de las clulas vegetales.
Pueden ser estructuralmente clasificadas en dos familias, las adenin citocininas y las
difenilurea citocininas. Se considera que el principal sitio de sntesis en las plantas es el
tejido radicular y entre las bacterias las del gnero Bacillus producen citocininas
biolgicamente activas, cuantificndose hasta 10 pg de la fitohormona purificada
(Carmelo et al., 2011).
El etileno inhibe el crecimiento vegetativo de las races, induce la maduracin,
senescencia y cada de los rganos de la planta, estimula la formacin de flores en algunas
especies y participa en la dormancia. Su sntesis es inducida por la presencia de altas
concentraciones de auxinas, giberelinas o citocininas en los tejidos. Se han descrito dos
rutas de biosntesis de etileno en las bacterias. En la primera ruta una metionina amino
transferasa convierte la metionina en cido 2-oxo-4 metilbiotrico, el cual es oxidado
hasta etileno por accin de la NADH-Fe (III) oxido reductasa. En la segunda ruta se
involucra la enzima dioxigenasa dependiente del 2-oxo-glutarato, capaz de oxidar este
compuesto en presencia de arginina (Carmelo et al., 2011).
El efecto positivo de las PGPR siempre est relacionado con el incremento de
longitud de las races laterales, as como el nmero y longitud de los pelos radiculares,
cambios que finalmente se asocian con la sntesis de auxinas, citoquininas y giberelinas.
En el modelo hipottico de las relaciones entre las PGPR, el AIA sintetizado por una
bacteria que est adherida a la superficie de la semilla, o bien a la raz en desarrollo, es
tomado por la planta y junto con el AIA endgeno (de la planta) puede estimular la
divisin y alargamiento de las clulas o bien promover la sntesis de cido 1-amino-
ciclopropano-1-carboxlico (ACC), con la activacin de la enzima ACC sintasa. Por tanto,
aumenta la sntesis del ACC, que normalmente es un compuesto precursor inmediato del
etileno en las plantas superiores y que a su vez inhibe la elongacin de las races en las
plntulas. Una parte significativa del ACC puede ser exudado por las races o las semillas,
siendo tomado activamente por las bacterias para ser hidrolizado por la enzima amino
ciclopropano carboxilasa desaminasa (ACC desaminasa), transformndolo en alfa-
cetobutirato y amonio. Las bacterias inducen a la planta a sintetizar ms ACC de lo que
necesita para que stas tengan una fuente de nitrgeno disponible. Una consecuencia
directa de la disminucin del ACC en la planta (endgeno y estimulado) es la reduccin
del etileno, entonces se modifica la raz, con incremento significativo en la formacin de
pelos radiculares (Loredo et al., 2011).
El cido indol actico es un metabolito derivado del triptfano, aunque tambin
puede ser sintetizado por una va independiente, principalmente en las plantas. En las
bacterias se proponen las vas dependientes del triptfano denominadas del cido indol-
3pirvico (IPyA), del indol-3acetonitrilo (IAN), de la triptamina (TAM) y de la indol-3-
acetamida (IAM). Esta ltima ha sido estudiada con detalle en A. tumefaciens y P.
syringae pv. savastanoi y en ambas la sntesis de AIA est relacionada con la formacin
de tumores (Aguilar et al,. 2008).
Solubilizacin de fosfatos
Los suelos agrcolas contienen reservas de fsforo; sin embargo, su disponibilidad
para la planta es escasa debido a los procesos qumicos que fijan el fsforo soluble en
formas insolubles no aptas para la nutricin vegetal. Desde un punto de vista funcional y
de nutricin de los cultivos, se consideran tres fracciones de fsforo en el suelo: P en
solucin, P lbil y P no lbil. Cuando se aplica un fertilizante qumico al suelo, el P
soluble puede o no llegar a la fraccin de P en solucin. En el primer caso, el P en
solucin se incrementa, promoviendo el flujo hacia la fraccin de P lbil, en la cual
prcticamente queda adsorbido todo el P incorporado. Paralelamente se produce una
gradiente de concentracin con la fraccin de P no lbil, comenzando un flujo lento de
difusin va intrapartcula vinculado a procesos de adsorcin. Asimismo, dependiendo del
pH y de la concentracin de iones en la solucin suelo, otra parte de P aplicado se
precipita (con el calcio, fierro o el aluminio). Finalmente, una tercera parte del fsforo es
inmovilizado al pasar a la materia orgnica como mecanismo propio de los
microorganismos. De este modo, los procesos de transferencia y disponibilidad de
fsforo ocurren mediante tres mecanismos: adsorcin - desorcin; precipitacin -
solubilizacin e inmovilizacin-mineralizacin (Vsquez et al., 2000; Carreo et al.,
2010).
|La solubilizacin de los fosfatos precipitados consiste en la liberacin de fosfato
inorgnico soluble a partir de fosfatos insoluble y las PGPR responsables del proceso se
denominan solubilizadoras del fsforo. El principal mecanismo para la solubilizacin de
los fosfatos, es la produccin de cidos orgnicos, aunque tambin se consideran los
cidos inorgnicos como sulfhdrico, ntrico y carbnico, la excrecin de protones
acompaada de la asimilacin del ion amonio y la accin de mecanismos reductores de
los cationes. Por su parte, en el proceso mineralizacin del fsforo, las PGPR pueden
movilizar el fsforo de la materia orgnica no soluble del suelo y convertirlo en fsforo
inorgnico soluble, mediante la excrecin de enzimas hidrolticas como fosfatasas,
fitasas y fosfonatasas (Carreo, 2009; Tejera et al., 2011).
Fijacin de nitrgeno
Los PGPR pueden fijar nitrgeno; sin embargo, no proveen a las plantas de grandes
cantidades de este elemento, pero si tienen un gran impacto en la nutricin nitrogenada,
directamente por la estimulacin de los sistemas de absorcin de iones como el nitrato e
indirectamente por la proliferacin radicular. En laboratorio se ha demostrado que el
nitrgeno incrementa su propia tasa de absorcin e induce ramificacin radicular, es decir,
en presencia de nitratos se observa la expresin de los genes relacionados con su
transporte y tambin elongacin de las races laterales, por incremento de la actividad
meristemtica de sus pices. El incremento de la superficie de las races y por lo tanto del
volumen del suelo al que tienen acceso, as como la estimulacin de los sistemas de
absorcin permite a su vez, aumento en la absorcin de nutrientes, especialmente
nitrgeno, que conlleva a la acumulacin de biomasa area (Mantelin & Touraine, 2004).
Todas las bacterias fijadoras de nitrgeno convierten el nitrgeno molecular en
amonio, gracias al complejo enzimtico nitrogenasa, constituido por dos metaloprotenas:
la molibdo-ferroprotena (I) y la ferroprotena (II). A su vez, se requieren las protenas
ferrodoxina y flavodoxina como donadores de electrones y reductores naturales de la
nitrogenasa. En el proceso, los electrones son llevados por la ferrodoxina hacia la
ferroprotena (reduccin de la ferroprotena), que a su vez activa a la molibdeno-
ferroprotena (transferencia de electrones) y se produce la reduccin del nitrgeno, siendo
luego fijado a compuestos aminados. Los gneros de bacterias diaztrofas son:
Azospirillum, Azotobacter, Beijerinckia, Dexia, Enterobacter, Klebsiella, Pseudomonas y
Clostridum, los cuales fijan entre 3-100 kg/ha/ao; sin embargo, esta cantidad es mnima
si se compara con la asociacin Rhizobium-leguminosa, que puede fijar hasta
700/kg/ha/ao (Lara et al., 2007).
Alteraciones en el potencial de membrana
Otro efecto de las rizobacterias es la capacidad de inducir alteraciones en el
potencial de la membrana en las clulas de las races de las plantas y promover la
liberacin de protones de stas hacia la rizsfera. El estudio microscpico de la
interaccin entre A. brasilense y clulas de la raz de trigo demostr que la pared celular
previene el contacto fsico directo entre la bacteria y la membrana plasmtica causante del
flujo de protones. Cuando las plantas no son inoculadas, presentan dos perodos de
liberacin de protones y dos perodos de liberacin de componentes alcalinos, con una
distribucin bimodal. Despus de inocular trigo con diversas bacterias rizosfricas, se
observ que Azospirillum elimin la fluctuacin, manteniendo slo la liberacin de
protones. Una vez que se alcanz un pH de 3,1; ste se mantuvo durante las 200 horas de
observacin. Al respecto, se ha propuesto que para alterar la actividad de la membrana, las
rizobacterias liberan una seal que tiene la capacidad de atravesar la pared celular de la
planta y que es reconocida por la membrana, reduciendo el potencial en toda la raz, con
un efecto mayor en la zona de elongacin (Loredo et al., 2004).
Control biolgico
Los mecanismos indirectos o control biolgico, involucran aquellos que reducen la
poblacin y actividades de los fitopatgenos o microbiota rizosfrica deletrea. Algunos
de stos son la antibiosis, competencia, produccin de siderforos, interaccin directa con
el patgeno e induccin de resistencia. La produccin de compuestos antimicrobianos es
muy comn entre las bacterias y los hongos. Estos compuestos son sintetizados y
excretados con el objetivo de eliminar la competencia que puede existir en su habitad
natural. El gnero Bacillus como B. subtilis produce una amplia variedad de estos
compuestos, entre los que se encuentra la fengicina, con elevado potencial de aplicacin
en la industria biofarmacetica. A su vez, B. cereus produce zwitermicina, un antibitico
que no solo suprime el crecimiento de hongos fitopatgenos, sino que tambin potencia la
accin insecticida de las toxinas proteicas producidas por B. thuringiensis (Tejera et al.,
2011).
La intensidad de la asociacin planta-bacteria revela la capacidad de estos
organismos para adaptarse selectivamente al nicho ecolgico especfico determinado por
la planta y su entorno. Esta capacidad determina que las PGPR puedan ocupar algunas
veces y desplazar por competencia a otros organismos patgenos o generar una respuesta
de inmunidad y resistencia que aumente las defensas de la plantas hacia la invasin de los
patgenos (Pedraza et al., 2010). La competencia puede ser definida como el
comportamiento desigual de dos o ms organismos ante un mismo requerimiento, siempre
y cuando la utilizacin del mismo por uno de los organismos reduzca la cantidad
disponible para los dems. Un factor esencial para que exista competencia es la escasez o
limitacin de un elemento. La competencia puede ser por nutrimentos, oxgeno o por
espacio. La competencia por carbono es la ms importante para el control de hongos
(Fernndez & Vega, 2001).
Todos los microorganismos, excepto Lactobacillus requieren de hierro para
satisfacer sus necesidades vitales, pues ste participa en el transporte de oxgeno, sntesis
de cido desoxirribonucleico, fijacin de nitrgeno, fotosntesis y respiracin. En estos
procesos el hierro participa como cofactor de muchas enzimas y protenas reguladoras, al
existir en dos estados de oxidacin, ferroso (Fe 2+) y frrico (Fe 3+); sin embargo, este
elemento no siempre est disponible para ser empleado por las bacterias, porque en el
ambiente el oxgeno atmosfrico oxida el Fe 2+ a Fe 3+, el cual precipita como hidrxido
frrico, no accesible para los microorganismos debido a su constante de solubilidad de
10 17, a pH 7 (Hernndez et al., 2006; Rico, 2009; Martn, 2011).
Los siderforos son paquetes extracelulares fluorescentes o no, de bajo peso
molecular (500 1000 Da) y solubles en soluciones acuosas a pH neutro, que muestran
una coloracin caracterstica segn su estructura qumica y su gran afinidad por el Fe 3+
(K Fe > 10 30). Casi todos los siderforos identificados contienen como grupos enlazadores
de hierro: cido hidroxmico, catecol y cido hidroxcarboxilico. Segn el grupo se
clasifican en hidroxamatos y catecoles. En condiciones de escasez de hierro, las bacterias
producen y excretan los siderforos al medio. Una vez secuestrado el hierro por los
siderforos, el complejo siderforo-hierro es reconocido por receptores de membrana
especficos y una vez dentro de la clula es depositado en un sitio especifico por un
proceso que involucra un intercambio de ligandos y que puede estar precedido o no por la
reduccin de hierro III o por la hidrlisis del siderforo. Se postula que las rizobacterias
convierten el Fe 3+ en un factor limitante, mediante su secuestro, inhibiendo el crecimiento
de fitopatgenos. Cuando el siderforo se acopla con el hierro, ste se hace inaccesible
para los microorganismos que no poseen los receptores proteicos especficos y que
adems no tienen mecanismos efectivos en la adquisicin de hierro. Por su parte, las
plantas colonizadas por rizobacterias no son afectadas porque pueden incorporar el hierro
solubilizado por los siderforos. Adems, han desarrollado estrategias para incluir el Fe
3+
en su nutricin, como la liberacin de protones, excrecin de agentes reductores y
produccin de fitosiderforos o aminocidos no proteicos que solubilizan los iones Fe 3+
formando un complejo Fe fitosiderfos (Hernndez et al., 2006; Carmelo et al., 2011;
Martin, 2011; Tejera et al., 2011).
Las especies de Pseudomonas producen siderforos del tipo hidroxamato como el
ferribactin y el pseudobactin y el pioverdin del tipo catecol (Loredo et al., 2004).
Enterobacter sp. produce siderforos del tipo catecol, denominados enteroquinelinas o
trmeros cclicos compuestos por 2,3- dihydroxy-N-benzoylserine (Bharucha et al., 2011).
En B. subtilis se ha investigado la produccin de los siderforos bacilibactina, cido itoico
y cido 2,3-dihidroxibenzoico. En Azospirillum lipoferum se han encontrado siderforos
del tipo fenolato.
La produccin de siderforos puede ser detectada por diversos mtodos como el
Cromo Azurol S (CAS), desarrollado por Schwyn & Neilands; el ensayo de Arnow para
la deteccin de catecoles y el ensayo de Atkin paral deteccin de hidroxamatos. El ensayo
CAS se basa en la gran capacidad que tienen los siderforos de secuestrar el hierro, en
este caso acomplejado debilmente con un agente colorante, que permite observar la
produccin de siferforos a simple vista. Los otros dos mtodos mencionados son
colorimtricos y necesitan un tiempo de incubacin determinado, as como de la lectura
en un espectrofotmetro para la cuantificacin (Rives et al., 2007).
En la interaccin directa entre el antagonista y el patgeno se mencionan el
parasitismo y la predacin. El parasitismo est mediado bsicamente por la lisis
enzimtica, que degrada las estructuras fngicas, para su utilizacin como fuente de
factores nutricionales. Destacan las enzimas lticas quitinasas, celulasas, proteasas y B-1,3
glucanasas, responsables de la exolisis. Entre las PGPR, Streptomyces, Bacillus y
Serratia, producen quitinasas e hidrolizan la quitina presente en la pared celular de los
fitopatgenos. El complejo quitinasa comprenden tres enzimas: exoquitinasa,
endoquitinasa y quitobiasa. La primera de stas libera dmeros solubles de bajo peso
molecular, la segunda libera multidmeros de N- acetilglucosamina y la tercera hidroliza
quitobiosas de N- acetilglucosamina (Layton et al., 2011; Martin, 2011; Tejera et al.,
2011).
Las enzimas sintetizadas por las PGPR pueden ser lticas y detoxificadoras, tal que
la detoxificacin de factores de virulencia de los patgenos constituye otro mecanismo de
control biolgico, que puede incluir la produccin de una protena que se une
reversiblemente a la toxina, la detoxificacin irreversible mediada por una esterasa y la
hidrlisis. La colonizacin de las rizobacterias y su mantenimiento en la rizsfera se debe
fundamentalmente a la produccin de siderforos, antibiticos y compuestos voltiles
biocidas, enzimas lticas y al proceso de la detoxificacin. Por su parte, tambin se
considera la capacidad de activar resistencia sistmica (ISR, Induced Systemic
Resistance) contra diferentes patgenos y su induccin no causa sntomas visibles a la
planta hospedadora. Se han propuesto varias caractersticas bacterianas (flagelos,
lipopolisacridos) como inductores de ISR, aunque no hay evidencia de una seal global
para todas las rizobacterias (Hernndez et al., 2006; Chaves, 2007).
La resistencia sistmica inducida (induced systemic resistance, ISR) es una
respuesta de defensa de la planta ante la presencia y actividad de un agente biolgico no
patognico especfico, que reduce la severidad o la incidencia de la enfermedad o dao
causado por un patgeno no relacionado con el agente inductor. La resistencia sistmica
tambin puede ser inducida por sustancias qumicas o por la presencia de patgenos,
denominndose entonces resistencia sistmica adquirida (systemic acquired resistance,
SAR). Las diferencias entre ISR y SAR son el agente inductor y los signos que presenta la
planta. ISR es un fenmeno independiente del cido saliclico, etileno y cido jasmnico y
no produce la acumulacin de protenas relacionadas con la patogenicidad (PR). stas
protenas son acumuladas en la SAR inducida por patgenos o qumicos (Chaves, 2007).
La respuesta SAR es expresada a un nivel mximo cuando el organismo que la induce
produce necrosis, mientras que la ISR de las rizobacterias tpicas no causa necrosis en la
planta hospedera (Hernndez et al., 2006).
Segn los mecanismos de las PGPR involucrados en la promocin del crecimiento
de las plantas, se consideran biofertilizadores, fitoestimuladores y biopesticidas o agentes
de control biolgico. Los biofertilizantes son aquellos que contienen microorganismos
vivos, que aplicados en la semilla, superficie de la planta o en el suelo, colonizan la
rizsfera o el interior de la planta y promueven el crecimiento, por el incremento de la
disponibilidad de nutrientes primarios, a travs de mecanismos, como la fijacin biolgica
de nitrgeno y la utilizacin de formas insolubles de fsforo. Los fitoestimuladores o
bioestimuladores son microorganismos que producen cambios en la concentracin de los
reguladores del crecimiento, a travs de mecanismos como la produccin de cido
indolactico, giberlico, citoquininas y la disminucin de la concentracin de etileno en el
interior de la planta. Por su parte, los biopesticidas o bioprotectores son microorganismos
que promueven el crecimiento de las plantas, a travs del control de fitopatgenos,
principalmente por la produccin de antibiticos, siderforos, cianuro de hidrgeno,
HCH, enzimas que degradan la pared celular de los hongos, exclusin por competencia y
resistencia sistmica adquirida e inducida. No obstante, se debe tomar en cuenta que
muchas PGPR tienen doble e incluso triple rol (Martnez et al., 2010; Bhattachayya &
Jha, 2012).
Las PGPR tambin pueden ser clasificadas en dos grupos: PGPB y Biocontrol
PGPB. El trmino PGPB es aplicable a las bacterias que influyen directamente en el
metabolismo de las plantas, promoviendo el aumento de la toma de agua y nutrientes, el
desarrollo del sistema radical y la estimulacin de otros microorganismos benficos
presentes en la rizsfera. A su vez, el trmino Biocontrol PGPB es utilizado por las
bacterias que, adems, tienen la capacidad de controlar a fitopatgenos por la produccin
de metabolitos inhibitorios o por la induccin de resistencia en la planta (Acebo et al.,
2011).
 Bacterias rizosfricas y endfitas fijadoras de nitrgeno

El nitrgeno es el constituyente esencial de las molculas fundamentales en todos los

seres vivos y es el macronutriente ms limitante en el crecimiento de las plantas, porque en
el suelo, el 98% est como formas orgnicas no disponibles para la nutricin vegetal y solo
1-3% es mineralizado en 1 ao, por los procesos de amonificacin y nitrificacin (Frioni,
2011). Para satisfacer los requerimientos de nitrgeno, los cultivos agrcolas necesitan la
aplicacin de fertilizante qumico nitrogenado (Menezes, 2009); sin embargo, solo el 50%
es absorbido (SAGARPA, 2010). El resto es inmovilizado temporalmente por los
microorganismos, se volatiliza como amoniaco o como xidos ntrico y nitroso durante la
desnitrificacin, as como tambin se lixivia en forma de nitratos o aniones que se escurren,
porque no son retenidos por el suelo (Menezes, 2009; Pedraza et al., 2010; Salhia, 2010).
El nitrgeno molecular (N2) es la nica reserva accesible en la biosfera. El 78% de la
atmsfera est constituida por N2; sin embargo, a pesar que tericamente la reduccin del
N2 a nitrato es favorable, no ocurre fcilmente, porque el triple enlace entre los dos tomos
de nitrgeno es estable y romperlo requiere mucha energa, como la proveniente de la
radiacin ultravioleta y combustibles fsiles (Baca et al., 2000). En este contexto, el
nitrgeno atmosfrico puede ser incorporado al ecosistema a travs de la fijacin biolgica
de nitrgeno, diazotrofia o reduccin a iones amonio, que son utilizados por los seres vivos
para la sntesis de compuestos nitrogenados (Menezes, 2009; Perez et al., 2010).
Las bacterias fijadoras de nitrgeno o diazotrficas pueden ser de vida libre,
asociativas y simbiticas. Las de vida libre son hetertrofas y requieren un ecosistema
capaz de brindar una fuente de carbono para la fijacin del nitrgeno. Las representantes de
este grupo son Beijerinckia y Azotobacter. Un segundo grupo de bacterias, se asocia con las
gramneas, pudiendo ser endfitas facultativas y obligadas. Las endfitas facultativas
colonizan tanto el suelo rizosfrico como el interior de la raz, siendo el gnero
Azospirillum representante de este grupo. A su vez, las diazotrficas endfitas obligadas,
colonizan el interior de las races, mencionndose especies de Gluconacetobacter,
Herbaspirillum, Klebsiella y Burkholderia. Por su parte, el tercer grupo de bacterias
diazotrficas son las simbiticas, que fijan el nitrgeno en el interior de ndulos,
diferenciados principalmente en las leguminosas, incluyendo la familia Rhizobiaceae:
Azorhizobium, Bradyrhizobium, Rhizobium, Sinorhizobium, Mesorhizobium y
Allorhizobium (Garrido, 2007).
Segn su localizacin las bacterias diazotrficas son rizosfricas y endfitas. Las
bacterias rizosfricas son de vida libre y ejercen su efecto de del crecimiento desde afuera
de la planta, habitando ya sea la superficie de las races o el suelo rizosfrico; aunque bajo
ciertas circunstancias, pueden ocupar espacios intercelulares superficiales de las plantas. A
su vez, las bacterias endfitas deben encontrase dentro del tejido vegetal, es decir, traspasar
la barrera epidrmica y no causar dao aparente a las plantas (Aguado, 2012). El trmino
endfitas hace referencia a los microorganismos que viven dentro de los tejidos de las
plantas. En Agronoma, este concepto involucra todos los microorganismos que pueden ser
aislados de plantas, cuyos tejidos fueron esterilizados superficialmente y que no causan una
enfermedad visible en su planta hospedadora (Loaces, 2011). Segn su estrategia de vida,
las bacterias endfitas pueden ser obligadas y facultativas. Las obligadas dependen del
hospedero para su crecimiento, sobrevivencia y dispersin, mientras que las facultativas
cumplen una etapa de su ciclo fuera del hospedero, generalmente en el suelo (Beracochea,
2011).
Los endfitos pueden ser pasajeros, oportunistas y competentes. En el primer caso,
pueden llegar a ser endfitos por casualidad, por ejemplo, a travs de la colonizacin de
heridas o despus de la invasin de las races por nemtodos. Con frecuencia se limitan al
tejido cortical de la raz. Losa endfitos oportunistas, muestran caractersticas particulares
en la colonizacin de la raz, por ejemplo, una respuesta quimiotctica, que les permite
colonizar el rizoplano y despus invadir los tejidos vegetales, a travs de grietas formadas
en los lugares de emergencia de las races laterales y puntas de las races; sin embargo, al
igual que las endfitas pasajeras se limitan al cortex radicular. Por su parte, los endfitos
competentes, poseen todas las propiedades de los endfitos oportunistas y adems la
maquinaria clave gentica necesaria para colonizar, por lo que invaden los tejidos vegetales
especficos, como tejidos vasculares, extendindose por toda la planta y mediante la
manipulacin del metabolismo de la planta, mantienen un equilibrio armonioso con el
hospedero, incluso cuando estn presentes en alta densidad (Loaces, 2011).
En el suelo rizosfrico se encuentra la mayor fuente de bacterias endfitas y
generalmente es donde comienza el proceso de colonizacin. Es posible que sea pasiva,
cuando las bacterias se encuentran en las semillas y stas constituyan su medio de
dispersin. En las plantas que se propagan vegetativamente, pasan de un lugar a otro con
las yemas. La transmisin de las bacterias endfitas obligadas es en forma vertical o va
vectores (Beracochea, 2011).
La colonizacin activa involucra tres pasos. El primero es el acercamiento espacial de
la bacteria a la superficie de la raz, a travs del movimiento por quimiotaxis (cidos
orgnicos, carbohidratos y aminocidos excretados por la raz), Luego que la bacteria entra
en contacto con la raz, se adhiere y se ancla en la superficie, multiplicndose y formando
microcolonias. Desde este lugar comienza el segundo paso o invasin de los tejidos
internos, penetrando por las aberturas naturales o por liberacin de enzimas hidrolticas.
Una vez dentro, en el tercer paso, los endfitos se multiplican, colonizando los espacios
intercelulares y pueden permanecer en un determinado sitio o realizar una colonizacin
sistemtica por el sistema vascular o el apoplasto (Beracochea, 2011). En gramneas se han
aislado bacterias rizosfricas diazotrficas de los gneros Bacillus, Clostridium, Klebsiella,
Desulfovibrio, Acetobacter, Azoarcus, Azorhizobium, Azospirillum, Azotobacter.
Burkholderia, Citrobacter, Enterobacter, Gluconacetobacter, Herbaspirillum, Beijerinckia,
Spirillum y rizobios. A su vez las bacterias endfitas diazotrficas incluyen
Gluconacetobacter, Azoarcus, Azospirillum, Enterobacter, Herbaspirillum, Klebsiella,
Burkholderia, Bacillus, Rhizobium, Agrobacterium, Pantoea y Rhanella.
La fijacin de nitrgeno es catalizada por una asociacin enzimtica llamada
nitrogenasa. Se trata de un complejo enzimtico estrictamente procaritico, compuesto por
dos protenas solubles: la protena del hierro (dinitrogenasa reductasa o Componente II) y la
protena del MoFe (dinitrogenasa, o Componente I). El MoFe (molibdeno-hierro) es un
cofactor esencial en la dinitrogenasa. Algunos fijadores de nitrgeno tienen una
dinitrogenasa alternativa que contiene vanadio, en lugar de molibdeno; no obstante, esta
clase de dinitrogenasa slo es sintetizada en ausencia de molibdeno disponible. Las dos
enzimas del complejo funcionan conjuntamente: la dinitrogenasa reductasa reduce la
dinitrogenasa, mientras que sta ltima reduce el nitrgeno (Coyne, 2000).
La ecuacin para la fijacin del nitrgeno es:
N2 + 6e- +6H+ + 12ATP + Mg 2+ 2NH3 + 12ADP + 12 Pi + Mg 2+
Los electrones circulan a travs de diversos portadores de electrones y reducen
finalmente el nitrgeno: e- Ferredoxina Flavodoxina Protena del hierro
Protena del MoFe N2. Cada electrn transferido requiere dos ATP; sin embargo, la
nitrogenasa no es del todo efectiva, y tambin reduce otros compuestos como el H +, N20, N3

y el CN-. Por tanto, La ecuacin general para la fijacin de nitrgeno, catalizada por la
nitrogenasa es:
N2 + 8e- +8H+ + 16ATP + Mg 2+ 2NH3 + H2 + 16ADP + 16 Pi + Mg 2+
La nitrogenasa tambin cataliza la transformacin de sustratos como el acetileno:
2 e- + C2H2 C2H4
6e- + N2 2NH3

Uno de los grandes avances en la investigacin de la fijacin del nitrgeno tuvo lugar
cuando Hardy y sus colaboradores en 1968 introdujeron el ensayo de reduccin de
acetileno. Anteriormente para probar que un microorganismo fijaba nitrgeno se deba
incubar con 15N2 y observar la acumulacin de los productos reducidos marcados con 15N,
proceso que resultaba caro, debido al costo del 15N y al espectrmetro de masas utilizado en
su medicin. La prueba de reduccin del acetileno (C 2H2) a etileno (C2H4) no slo es ms
barata y ms rpida, puesto que se puede usar un cromatgrafo de gases, sino que tambin
se puede realizar con una sensibilidad mucho mayor.
El procedimiento del ensayo de reduccin de acetileno es sencillo y mide
indirectamente la fijacin de nitrgeno. La muestra: suelo, races o cultivo celular, es
colocada en un contenedor sellado. A continuacin, se introduce el acetileno a una
concentracin suficiente para saturar la nitrogenasa. Por lo general basta 10% de espacio
dentro del contenedor para la introduccin del gas y se mide peridicamente el etileno
generado, extrayendo una muestra de gas del contenedor sellado e inyectndola en un
cromatgrafo de gases equipado con un detector y una columna de nitrgeno. El factor de
conversin utilizado para transformar los moles de etileno producido (equivalente a los
moles de etileno reducido) en los moles de nitrgeno fijado es aproximadamente 3 - 4 :1;
sin embargo, vara de 1,5 a 25, por lo que para obtener un valor ms exacto se debe recurrir
a utilizar 15N u otro istopo del nitrgeno (Coyne, 2000).
Otro mtodo para la medicin indirecta del nitrgeno fijado in vitro es el mtodo
indirecto de valoracin del in amonio, empleando la tcnica colorimtrica de Berthelot o
del fenolhipoclorito. Est basado en la formacin de un color azul intenso de indofenol,
que resulta de la reaccin del in amonio (NH 4) con los compuestos fenlicos en presencia
de un agente oxidante el cual puede ser hipoclorito de sodio u o-fenol y la presencia de un
catalizador, principalmente nitroprusiato de sodio o de potasio. El mecanismo de la
reaccin depende de la luz presente, la temperatura ambiente, catalizadores y pH alcalino
(Lara et al., 2007). Cuando se utiliza fenol o hipoclorito de sodio, la reaccin puede ser
representada de la siguiente manera:
NH3 + 2C6H60-+ 3ClO- O = C6H4= N-C6H4-O + 2H2O + OH- + 3Cl-
Compuestos fosfatados

En el suelo no existe fsforo libre sino combinado en forma de iones fosfatos, los cuales a su vez
pueden estar como formas aninicas o formando combinaciones.Las formas aninicas o solubles
pueden estar libres en la solucin del suelo (fsforo soluble) o fijadas a partculas capaces de
retenerlas (fsforo adsorbido, fijado o lbil ).Las combinaciones no solubles pueden ser orgnicas
(fsforo orgnico no soluble), minerales (fsforo inorgnico precipitado no soluble ) o polifosfatos
(fsforo inorgnico no soluble).

Iones fosfato

Aninicas Combinaciones

(solubles) (no solubles)

Libre Fijo Minerale Polifosfat Orgnico

s os s

a. Formas aninicas
 Las formas aninicas suelen estar libres en la solucin del suelo fijas a diversas
partculas del suelo capaces de retenerlas. Al conjunto de ambos grupos de iones se le designa
pool de iones autodifusibles y iones isotpicamente cambiables.

La expresin pool de iones autodifusibles fue utilizada para designar el conjunto de iones
de la solucin del suelo y los que se encuentran en movimiento constante alrededor y sobre la
superficie de los coloides del suelo. Cada uno de estos iones tiene, por tanto, la facultad de escapar
en todo momento de la atraccin superficial del combinador y pasar a la solucin del suelo.
Teniendo en cuenta, a su vez que la nutricin fosfatada de la planta se hace a partir de las formas
inicas stas reciben tambin los nombres de reserva asimilable y pool alimentario.

a.1 Formas aninicas libres (Fsforo soluble)

Se encuentran en la solucin del suelo. Pueden aparecer en sus distintos grados de

ionizacin (PO4H-2, PO4H2-, PO3-4) y su concentracin depende de la reaccin del suelo.En suelos
cidos predominan los iones monovalentes (PO 4H-2) mientras que en suelos neutros la proporcin
es del orden del 50% entre mono y divalentes (PO 4H-2, PO4H2-). A medida que se eleva el pH
desaparecen las formas divalentes dejando paso a las trivalentes (PO 3-4). A pH prximo a 12
existira un equilibrio del 50% entre di y trivalentes. Un pH superior a 12 supone la presencia casi
exclusiva de formas trivalentes.

a.2 Formas aninicas fijas (fsforo adsorbido, fsforo fijado, lbil o fcilmente
movilizable)

Los iones se encuentran fijos fundamentalmente sobre el complejo arcillo-hmico, sobre los bordes
o grietas de la red cristalina de las arcillas, adsorbidos sobre partculas muy finas de caliza y fijados
por coloides electropositivos.

- Sobre el complejo arcillo- hmico mediante puentes de calcio: Esta unin es ms

energtica cuanto mayor es el pH. Algunas formas aninicas fijas son:

Complejo Ca PO4H2

Ca

Complejo PO4H

Ca

Ca

Complejo Ca PO4

Ca
 Se trata de enlaces dbiles que permiten una desorcin rpida, por lo que esta reserva
tiene un potencial alimentario elevado.

- Sobre los bordes o grietas de la red cristalina de las arcillas: Existe la posibilidad de prdida
de grupos OH-, que son sustitudos por fosfatos. Esta fijacin es bastante estable y
corresponde a una desorcin lenta.

R1 R1

Al OH Al PO4H2

R2 R2

- Adsorbidos sobre partculas muy finas de caliza: Partculas de caliza de 100 um de dimetro
estn dotados de capacidad de adsorcin para los fosfatos similar a la de las arcillas, aunque
con menor capacidad de cambio.

- Fijados por coloides electropositivos: Los hidrxidos de hierro y de aluminio de naturaleza

coloidal ejercen sobre los aniones fosfato un poder fijador muy elevado. En suelos cidos
sta es la nica forma de fijacin de fsforo mineral.

OH OH

Fe OH Fe OH

OH H2O4P

OH OH

Al OH Al OH

OH H2O4P
 a. Fosfatos precipitados en combinaciones minerales (fsforo precipitado no
soluble, no lbil o fosfato mineral)
Representan una retrogradacin del fsforo del suelo que impide su utilizacin por la planta
especialmente a pH extremos y en presencia de cationes libres.
En suelos con pH elevado y con importantes cantidades de calcio activo se produce la
retrogradacin clcica mediante la transformacin de fosfatos mono y biclcicos en triclcicos. En
suelos con pH elevado pero con menor contenido de calcio activo ( suelos salinos o alcalinos ) el
problema es menos importante debido a la mayor solubilidad de los fosfatos sdicos y magnsicos.

La fosforita es fosfato triclcico (PO4) 2Ca3 pero suele aparecer impurificada por aniones
respondiendo a la frmula (PO 4) 3 x Ca3. Los fosfatos minerales ms abundantes son las sales del
cido fosfrico con calcio que forman yacimientos de origen sedimentario impurificadas con cloro,
flor, carbonatos, grupos OH- y se muestran a continuacin:

Fosfato triclcico Ca3 (PO4) 2

Fosfato biclcico CaHPO4

Fosfato monoclcico Ca(H2PO4) 2

Cloroapatita Ca3(PO4) 2 Ca Cl2

Hidroxiapatita Ca3(PO4) 2 Ca(OH) 2

Oxiapatita Ca3(PO4) 2 CaO

Fluoroapatita Ca3(PO4) 2 CaF2

Carbonatoapatita Ca3(PO4) 2 CaCO3

En suelos netamente cidos (pH inferior a 4,5) se presenta el problema de precipitacin frrica y
alumnica, debido a la solubilizacin y consiguiente paso del fierro y aluminio (Fe 3+ y Al3+) a las
soluciones del suelo .

Vivianita Fe3(PO4) 2 . 8H2O

Fosfatos Fe Estregnita FePO4 . 2H2O

Difenita
 Variscita AlPO4 . 2H2O

Fosfatos Al

Wavelita

Los fosfatos precipitados pueden ser solubilizados aunque muy lentamente, por los agentes fsico-
qumicos y adems por va microbiana.

b. Polifosfatos
En muchos microorganismos y bajo condiciones ambientales determinadas se almacenan
sustancias intracelulares que constituyen materiales de almacenamiento o de reserva: polifosfatos,
polisacridos, grasas, azufre. Este material se almacena cuando las sustancias de partida se
encuentran en el medio de cultivo pero el crecimiento est limitado o interrumpido por la falta de
determinados nutrientes o por la presencia de inhibidores. Los polifosfatos son polmeros lineales
de ortofosfato con cadenas de longitudes variables, unidas por enlaces ster.

Muchas bacterias y clorofceas pueden almacenar cido fosfrico en forma de grnulos de

polifosfato. Debido a que la primera descripcin se realiz en Spirillum volutans y al cambio de
color caracterstico (efecto metacromtico, esto es aparecen de color rojo o de una gama diferente al
azul cuando se tien con azul de metileno o azul de toluidina) se les llama tambin grnulos de
volutina o metacromticos.

O
O O

P O P O
P O
HO
OH

OH
OH
n

POLIFOSFATO

c. Fosfatos orgnicos (Fsforo orgnico insoluble)

 Forman parte de molculas orgnicas o estn combinados con los cidos hmicos del suelo
(humofosfatos). Los compuestos orgnicos de fsforo ms abundantes son la fitina, lecitina,
cefalina, cido fosfatdico, cidos nucleicos (todas son combinaciones del cido ortofosfrico con
diversos compuestos orgnicos).

6.7 Transformaciones microbianas del fsforo

a) Mineralizacin: Fsforo insoluble a fsforo soluble.
b) Inmovilizacin: Fsforo soluble a fsforo insoluble.
c) Solubilizacin: Fsforo inorgnico insoluble a fsforo inorgnico soluble.
d) Oxidacin-reduccin de compuestos inorgnicos de fsforo.

6.7.1 Mineralizacin
Durante la degradacin de la materia orgnica, los microorganismos transforman el fsforo
orgnico insoluble en formas inorgnicas solubles a travs de enzimas como fosfatasas y fitasas.
Bacillus y Serratia son los ms activos, aunque alrededor de 70 a 80% de la poblacin microbiana
interviene en la mineralizacin del fsforo orgnico.

La gran cantidad de vegetacin que se descompone en el suelo es la principal fuente de

compuestos orgnicos de fsforo. Los cultivos agrcolas tienen entre 0,05 a 0,50% de fsforo en sus
tejidos. En las plantas este elemento se encuentra como fosfatos de inositol, (por ejemplo fitina);
fosfolpidos, cidos nucleicos, azcares fosforilados y coenzimas. Los fosfatos de inositol
pueden tener uno a seis tomos de fsforo por unidad de inositol. La fitina es la sal de calcio -
magnesio del hexafosfato de inositol cido fitdico.

En los fosfolpidos el fosfato est combinado con un lpido. Los fosftidos, son una clase de
fosfolpidos formados por glicerina esterificada con dos cidos grasos y una molcula de cido
fosfrico. En la lecitina y cefalina el cido fosfrico se esterifica con colina y etanolamina
respectivamente. A su vez, los cidos nucleicos estn constituidos por bases pricas, pirimdicas,
una pentosa y fosfato.

La descomposicin de la materia orgnica fosfatada se efecta por desfosforilaciones

enzimticas con liberacin de fosfatos. Las enzimas que catalizan las reacciones son excretadas por
los microorganismos y se requieren de condiciones particulares de regulacin:

La descomposicin es favorecida por temperaturas elevadas, siendo el rango

termoflico ms favorable que el mesoflico.
La mineralizacin es generalmente ms rpida en suelos vrgenes que en
cultivados.
 La velocidad de mineralizacin aumenta al ajustar el pH a valores que conducen
a un metabolismo microbiano general y un cambio de la acidez a la neutralidad
incrementa la liberacin de fosfato.
La tasa de mineralizacin est relacionada directamente con la cantidad de
sustrato, siendo los suelos ricos en fsforo orgnico los ms activos.
Se admite que sustratos con una relacin carbono-fsforo prxima a 200
presentan un equilibrio adecuado.
Segn la naturaleza del sustrato, los cidos nucleicos son ms lbiles que los
fosfolpidos y a su vez stos ms que la fitina.
6.7.2 Inmovilizacin
Significa que para su crecimiento los microorganismos (al igual que las plantas) absorben y
asimilan el fsforo inorgnico soluble (principalmente como orto fosfato monovalente H 2PO- 4) y lo
transforman en fsforo orgnico insoluble (fosfolpidos, steres de fosfato, cidos nucleicos) en
fsforo inorgnico insoluble (polifosfatos), hacindolo inaccesible para el resto de la comunidad
biolgica.

Los microorganismos asimilan el fsforo inorgnico soluble originando fsforo orgnico

insoluble que se encuentra como:

Grupos fosfato hidroflicos de los fosfolpidos o componentes esenciales de la

membrana celular.
Esteres de fosfato que forman las uniones en las molculas de los cidos nucleicos
(ARN y ADN).
Forma esencial en el metabolismo energtico debido a su presencia en las molculas de
ATP, ADP, AMP y pirofosfato.

Comnmente el fsforo representa 0,5 a 1% de los micelios fngicos y 1 a 3% del peso

seco de las bacterias. La mayor parte del fsforo en la clula bacteriana est en el ARN (30 a 50%).
Aproximadamente 15 a 25% del contenido total de fsforo se encuentra en el protoplasma como
compuestos solubles en cido, tanto orgnicos como inorgnicos. Aqu se incluye orto y meta
fosfatos, azcares fosfatados, coenzimas y fosfatos de adenosina. Los fosfolpidos generalmente
representan menos del 10% del fsforo celular y el ADN constituye del 2 al 10% del contenido total
de fsforo.

Los microorganismos pueden acumular grnulos de polifosfatos o fosfato inorgnico,

llamado tambin volutina o grnulos metacromticos cuando se presenta la carencia de casi
cualquier nutriente celular que no sea fosfato. Por ejemplo, la carencia de sulfato es particularmente
efectiva y determina una rpida y masiva formacin de polifosfatos. Cuando a las clulas que han
acumulado el polmero se les suministra sulfato adicional, el polifosfato desaparece rpidamente.
Los experimentos realizados con fsforo demuestran que el fosfato se incorpora a los cidos
nucleicos. Por consiguiente, la volutina parece tener como funcin primaria la de constituir la
reserva intracelular de fosfato formada en diversas situaciones cuando se impide la sntesis de
cidos nucleicos. La formacin de polifosfato se produce por adicin secuencial de restos de fosfato
al pirofosfato actuando como donador el ATP.

6.7.3 Solubilizacin
El fsforo inorgnico precipitado insoluble es solubilizado por accin de
microorganismos solubilizadores de fsforo. Se han descrito varios mecanismos en la solubilizacin
de los fosfatos; sin embargo, el principal es la produccin de cidos orgnicos, aunque tambin de
cidos inorgnicos como sulfhdrico, ntrico y carbnico. Tambin se ha postulado que la excrecin
de protones acompaada de la asimilacin del ion amonio es la explicacin ms probable para la
solubilizacin microbiana del fsforo en ausencia de produccin de cidos, as como tambin la
accin de mecanismos reductores de los cationes.

Los cidos orgnicos producidos por los microorganismos disminuyen el pH del

medio o bien forman quelatos con lo cual se libera el fsforo de sus fuentes no disponibles. La
relacin entre disminucin del pH y solubilizacin de fosfato se demuestra en medios lquidos
donde en su mayora el incremento de la concentracin fsforo solubilizado est asociado a una
disminucin de pH y viceversa. La quelacin de cationes es el mecanismo ms importante para la
solubilizacin de P cuando la estructura del cido orgnico es favorable. Es as como la quelacin
tendr mayor relevancia en aquellos casos en que la estructura de los cidos orgnicos permita
generar quelatos complejos estables con iones metlicos. La extensin en la cual un cido orgnico
es capaz de quelar cationes es influenciada mayormente por su estructura molecular, por sus grupos
hidroxilos y carboxilos, de tal manera que los cidos tricarboxlicos formarn quelatos ms fuertes
que los dicarboxlicos y monobsicos. Ejemplo, Los quelatos del cido ctrico con el calcio son
fuertes, con el cido mlico y tartrico son menos fuertes y con el cido lctico son dbiles.
Asimismo se ha demostrado que los cidos orgnicos solubilizan ms fsforo que los cidos
inorgnicos al mismo pH con la diferencia presumida principalmente debida a la quelacin.

El anlisis cromatogrfico de gases de medios de cultivo una vez libres de clulas

bacterianas solubilizadoras de fsforo, demostr la presencia de once cidos orgnicos voltiles y
no voltiles. Los cidos ms comnmente producidos fueron lctico, succnico, isovalrico,
isobutirico y actico, observndose as mismo que la mayora de las especies bacterianas producen
ms de un cido orgnico.

Las bacterias que realizan la solubilizacin del fosforo incluyen gneros como
Pseudomonas, Bacillus, Paenibacillus, Vibrio, Xanthobacter, Enterobacter, Kluyvera,
Micrococcus, Achromobacter, Aerobacter, Flavobacterium, Burkholderia, Xanthomonas,
Chromobacterium, Serratia, Azotobacter, Acinetobacter, Pantoea y Erwinia. Entre los hongos
solubilizadores de fsforo predominan Aspergillus, Penicillium, Paecilomyces, Rhizopus, Fusarium
y Sclerotium.En laboratorio los microorganismos solubilizadores de fsforo pueden ser detectados
utilizando medios de cultivos lquidos o slidos que contengan fosfato insoluble en solucin. En
medios lquidos la positividad est dada por el aclaramiento del medio y en medios slidos, por la
formacin de una zona clara alrededor de la colonia.

Diferentes bacterias solubilizadoras de fsforo han sido aisladas de la rizsfera de

plantas y han demostrado su efecto benfico en cultivos como hortalizas, gramneas, leguminosas y
frutales. En Triticum vulgare trigo se determin el efecto de la inoculacin de Pseudomonas sp.
solubilizadora de fsforo. Los tratamientos fueron tres (TO, testigo sin inoculacin; T1,
Pseudomonas sp 250 mL/50 kg de semilla; T2, Pseudomonas sp. 500 mL/50 kg de semilla). La
fertilizacin qumica se realiz con 84 kg ha -1 de fosfato monoamnico (11-23-0); 36 kg/ha de
sulfato de amonio (21-0-0-24) y 140 kg/ha de rea (46-0-0), incorporados a la siembra en suelo
conteniendo un promedio de 7,1 a 7,6 ppm de fsforo. La inoculacin con Pseudomonas sp.
increment significativamente la materia seca (36,6 % ), nmero de granos ( 15.11 % ) y
rendimiento ( 9,0 %) con respecto al testigo. En Lactuca sativa L. lechuga variedad Longifolia
se demostr que cepas nativas de Pseudomonas influyen positivamente en el desarrollo de las
plantas, destacando Ps. fluorescens con un promedio de 223,86 cm2 de rea foliar frente a 74,62 cm
2
del testigo.

Las bacterias solubilizadoras de fosforo pueden mejorar la fertilidad del suelo y la

nutricin de las plantas por lo que sus poblaciones deben ser establecidas e incrementadas,
partiendo de su inoculacin en plantas, semillas o suelo. Existen preparados a base de bacterias
solubilizadoras de fosforo, comercializados como biofertilizantes Fosforina, Biofosfobuap,
Rizofos maz, Solbac P. Con la aplicacin del biofertilizante Fosforina se ha podido suplir
total o parcialmente las necesidades de fsforo en cultivos como Lycopersicon esculentum
tomate, Cucumis sativus pepino, Nicotiana tabacum tabaco, Saccharum officinarum caa de
azcar y ctricos. Las aplicaciones se realizaron remojando las semillas durante 5 minutos con el
producto comercial sin diluir (8 Lha -1) y asperjando el suelo con una solucin diluda 1:10 a
-1
razn de 20 Lha , con una solucin final de 200 L. En semilleros de tabaco se alcanz entre 30 a
50 % de incremento en la biomasa seca de semillas y un ahorro de 50 % de la dosis de fsforo. En
tomate, se logr sustituir 50% a 75 % del fertilizante fosforado recomendado, con incrementos de
rendimientos de 5 a 38 %. En caa de azcar, el rendimiento se increment en 38 % y el
contenido de fsforo del jugo en 46 %, cuando se aplicaron solubilizadores de fsforo.

En suelos tropicales, el uso del biofertilizante Phosphobakterin constituido por

Bacillus megatherium var. phosphaticum permiti la sustitucin de hasta 70 % del fertilizante
fosfatado y el biofertilizante Biofosfobuap constitudo por Acinetobacter calcoaceticus y
Chromobacterium violaceum increment entre 30 y 50 % los rendimientos de Zea mays L.
maz , Triticum vulgare trigo y Hordeum vulgare cebada y disminuy en 50 % el uso de
fertilizantes qumicos fosfatados.

Las diferencias en el rendimiento, como resultado de la inoculacin de bacterias

solubilizadoras de fsforo, son independientes y se manifiestan de igual manera, cualquiera sea, la
dosis de fsforo aplicada, aseveraciones que se demostraron cuando se determin el efecto de un
inoculante comercial Rizofos maz (solubilizador de fsforo constituido por Pseudomonas sp.) y
su interaccin con la fertilizacin fosforada sobre el rendimiento de Zea mays L. maz hbrido DK
747, cultivado en suelo con un contenido de 10,1 ppm de fsforo. El ensayo fue conducido como
un diseo en bloques completo aleatorio con dos factores: inoculacin (con y sin Pseudomonas sp.)
y fertilizacin qumica (O, 75 kg/ha, 150 kg/ha). El inoculante se incorpor a la semilla y el
fertilizante superfosfato triple de calcio (0-23-0).al costado de la lnea de siembra. La respuesta
hacia ambos factores mostr un comportamiento aditivo, sin interaccin de inoculacin x
fertilizacin qumica. En el caso de la inoculacin, la diferencia en el rendimiento alcanz un
promedio de 8,4 % y dicho incremento fue independiente a la estrategia de fertilizacin empleada.

6.7.4 Oxidacin Reduccin

Durante la mayor parte del ciclo microbiano del fsforo no se altera su estado de oxidacin. Las
transformaciones del fsforo mediadas por los microorganismos pueden considerarse como una
transferencia de fosfato inorgnico a orgnico, o como una transferencia de formas fosfatados
insolubles e inmovilizadas a formas solubles o componentes mviles.
 Aunque el fosfato normalmente no se reduce por accin microbiana, parece ser que algunos
microorganismos del suelo y de los sedimentos pueden utilizarlo como aceptor terminal de
electrones en ausencia de sulfato, nitrato y oxgeno. El producto final de la reduccin del fosfato
seran las fosfinas (PH3), que son voltiles y arden espontneamente en contacto con el oxgeno,
produciendo un brillo verde. La produccin de fosfinas se ha observado a veces cerca de lugares de
enterramiento y pantanos, donde se produce una gran descomposicin causando un fenmeno
luminoso conocido como fuego fatuo.

Cuando se incuban anaerobiamente algunas muestras de suelo en un medio de manitol-

NH4H2PO4, el fosfato muy rpido. Esta disminucin no slamente es resultado de la asimilacin,
sino tambin de que aparentemente el fosfato es reducido a fosfito e hipofosfito

2H 2H
H3PO4 H3PO3 H3PO2

+5 +3 +1

En presencia de nitrato o sulfato, la reduccin del fosfato se retarda debido a que stos son
utilizados ms rpidamente como aceptores de electrones. Ms an, los cultivos puros de
Clostridium butyricum y Escherichia coli forman fosfito e hipofosfito a partir de ortofosfato.El
proceso parece bioqumicamente anlogo a la desnitrificacin o a la accin bacteriana sobre los
sulfatos; sin embargo, en contraste con la reduccin de los sulfatos, proceso en el cual el producto
final es el estado ms reducido del azufre (H 2S), no existe evidencia de que el producto final de la
reduccin de fosfato sea fosfina.

Es poco probable que la reduccin se lleve a cabo en ambientes bien aireados. Bacillus,
Pseudomonas y Clostridium reducen los PO-34 a hipofosfitos PO-32 y fosfitos PO3 en anoxia. La
oxidacin biolgica de compuestos de fsforo reducidos es evidente cuando se agregan fosfitos al
suelo. Los fosfitos desaparecen con un incremento correspondiente en la concentracin de fosfato.
El proceso se lleva a cabo microbiolgicamente porque ya no es evidente cuando se adiciona un
inhibidor biolgico como el tolueno. Muchas bacterias hetertrofas, hongos y actinomicetos
utilizan el fosfito como nica fuente de fsforo en medios de cultivo y oxidan el fosfito en la clula
a compuestos orgnicos de fosfato. El hipofosfito (HPO 2=) tambin puede ser oxidado a fosfato in
vitro por los hetertrofos. Las bacterias utilizan preferentemente fosfato en lugar de fosfito, por lo
que en medios que contienen ambos aniones el primero desaparece antes. No hay evidencia de que
la oxidacin proporcione energa para el desarrollo de bacterias quimioauttrofas.
Referencias bibliogrficas

Aguado, S. (Ed.). (2012). Introduccin al Uso y Manejo de los Biofertilizantes en la

Agricultura. Mxico. Recuperado de www.inifap.gob.mx
Baca, B., Soto, L., & Pardo, M. (2000). Fijacin biolgica de nitrgeno. Elementos, 38, 4349.
Beracochea, M. (2011). Respuesta de variedades comerciales de maz (Zea mays L.) a la
inoculacin con bacterias endfitas diaztrofas nativas. Tesis de Licenciatura.
Universidad de la Repblica, Uruguay.
Coyne M. (2012) Microbiologa del Suelo. Un enfoque exploratorio. Espaa: Editorial
Paraninfo.
Frioni, L. (2011). Microbiologa Bsica, Ambiental y Agrcola. Buenos Aires, Argentina:
Editorial O.G.
Garca, F., & Muoz, H. (2010). Caracterizacin de cepas nativas de Azospirillum spp. y su
efecto como promotoras del desarrollo vegetativo de arroz (Oryza sativa). Tesis de
Licenciatura, Universidad Nacional Pedro Ruiz Gallo, Per.
Garrido, R. (2007). Aislamiento e identificacin de bacterias diazotrficas rizosfricas y
endfitas asociadas a suelos y pastos del valle y sabana del Cesar en dos pocas
climticas. Tesis de Maestra. Universidad Militar Nueva Granada, Colombia.
Lara, C., Villalba, M., & Oviedo, L. (2007). Bacterias fijadoras asimbiticas de nitrgeno en la
zona agrcola de San Carlos. Revista Colombiana de Biotecnologa, 9(2), 6-14.
Loaces, I. (2011). Caracterizacin de bacterias endfitas productoras de siderforos en arroz
(Oryza sativa). Tesis de Maestra. Universidad De La Repblica, Uruguay.
Menezes, C. (2009). Aislamiento y caracterizacin de bacterias diazotficas asociadas a maz
(Zea mays) variedad PAU 871. Tesis de Licenciatura. Universidad de la Repblica de
Uruguay, Uruguay.
Pedraza, R., Bellone, C., & Bellone, C. (2010). Azospirillum inoculation and nitrogen
fertilization effect on grain yield and on the diversity of endophytic bacteria in the
phyllosphere of rice rainfield crop. European Journal of Soil Biology. 45, 36-43.
Prez, A., Rojas, J., & Fuentes, J. (2010). Diversidad de bacterias endfitas asociadas a races
de pasto colosuana (Bothriochloa pertusa) en tres localidades del departamento de
Sucre, Colombia. Acta Biolgica Colombiana 15(2), 219-228.
Salhia, B. (2010). The effect of Azotobacter chroococcum as nitrogen biofertilizer on the
growth and yield of Cucumis sativus. Degree of Master. The Islamic University, Gaza
Secretaria de Agricultura, Ganadera, Desarrollo Rural, Pesca y Alimentacin,
SARGARPA (2010). Uso de fertilizantes. Disponible en: http://www.sagarpa.gob.mx/