UNIVERSIDAD AUTNOMA DE

UNIVERSIDAD AUTNOMA DE CHIAPAS

Facultad de ciencias qumicas
Facultad deIVciencias
Campus CHIAPAS
(Extensin qumicas Campus IV (Extensin
Ocozocoautla)
Ocozocoautla)

Prctica 5
actividad de la
enzima succinato

BIOQUIMICA
Profesor: Dra. Ana Olvia Caas Urbina

Licenciatura: Qumico Farmacobilogo

Alumna:

Espinoza Lpez Yuridia

Gmez Prez Maritza Elizabeth
Hernndez Nigenda Diana Laura.
Morales Gonzles Ana Laura.
Zamayoa Espinosa Aida Patricia

Cuarto semestre

Ocozocoautla de Espinosa Chiapas Noviembre del 2015

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INTRODUCCIN

Una oxidorreductasa es una enzima que cataliza la transferencia de electrones

desde una molcula donante (el agente reductor) a otra aceptora (el agente
oxidante) (Jenner Us Martin, 2014). Segn Gonzlez nos dice que las enzimas
oxidorreductasas catalizan reacciones de oxidorreduccin, es decir, transferencia
de hidrgeno (H) o electrones (e-) de un sustrato a otro, segn la reaccin general:

Ejemplos son la succinato deshidrogenasa o la citocromo oxidasa.

Segn Sierra en el 2013 nos dice que las clulas de la gran mayoras de los
organismos vivos llevan a cabo un conjunto de reacciones de xido reduccin
mediante la cual la gran cantidad de energa liberada a travs de la degradacin
de molculas orgnicas es almacenada en molculas de alto nivel energtico
(ATP). La succinato deshidrogenasa es una enzima clasificada dentro del grupo de
las oxidorreductasas, cataliza una reaccin muy importante en el metabolismo
oxidativo de la clula: la conversin del succinato en fumarato. Esta enzima se
localiza en eucariontes en la membrana mitocondrial interna. El H 2 cedido por el
succinato puede ser transferido del FADH2 a un colorante susceptible como el
azul de metileno que al cambiar su estado redox pasa de coloreado a incoloro o
viceversa. Segn Gonzalez en el 2010 nos dice la coloracin de la oxidacin y
reduccin del azul de metileno al cambiar su estado redox.

Indicador Color (reducido) Color (oxidado)

Azul de metileno Incoloro Azul

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Figura 1.- Reaccin del succinato deshidrogenasa del Manual de

laboratorio. Bioqumica. Facultad de Ciencias Qumicas Extensin
Ocozocoautla. UNACH, citado por Caas en el 2015.

La succinato deshidrogenada remueve 2H+ y 2 electrones del succinato para

formar fumarato y la coenzima reducida (FADH 2). La enzima est sujeta a una
poderosa inhibicin competitiva por parte de reactivos como el fenol lo cual
constituye una manera de inhibir la actividad de la enzima a nivel de laboratorio
(Sierra, 2013). Para estudiar el transporte de cargas en la reaccin se emple un
aceptor artificial de electrones (azul de metileno), cuya decoloracin permite
diferenciar la actividad enzimtica en los ensayos a realizar en la presente
prctica.

OBJETIVO

Que el alumno aprecie la actividad de le enzima Succinato Deshidrogenasa

mediante una reaccin colorimtrica.

MATERIALES Y MTODO

MATERIALES

2 tubos de ensaye Bao mara a 50C

pipetas de 5ml Pinzas para tubo de ensaye

Reactivos

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NaOH Azul de metileno al

0.1%

Acido succnico Aceite mineral

Fenol al 90% Hgado de pollo

METODOLOGA

Pesar 1g de hgado En el mortero molerlo con

Transferir en partes
de pollo. 3 o 4 ml de cido
iguales a 2 tubos.
succnico, hasta obtener
una masa.

Incube ambos tubos

Observe los cambios
por 10 minutos en el
bao mara (50%)

RESULTADO

Concentraciones:

( porcentaje en masa ) ( g de disolucin)

g soluto :
100

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( 90 )(20 g)
g soluto : =18 g de fenol
100

Se necesitan 18 g de fenol en 20 ml de disolucin.

( 3 ) (50 g)
g soluto : =1.5 g de cido succinico
100

Se necesitan 1.5 g de cido succnico en 50 ml de disolucin.

Tubo 1: Con fenol Tubo 2: Sin fenol.

Ilustracin 2: El tubo 1
contiene fenol y el tubo 2 no
contiene. En el tubo 2 hubo
cambio de coloracin a
transparente y en el tubo 1
no hubo separacin y
adems formo un halo a
incoloro. Despus de
DISCUSION DE RESULTADOS calentar a bao mara.

En la prctica, se utiliz 1 gramo de hgado de pollo y se mezcl con cido

succnico; esto se hizo debido a que en el hgado se encuentra la enzima de

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inters, es decir, la enzima succinato deshidrogena y el cido succnico es el que

nos ayud a reducir el azul de metileno en lugar del succinato. (Alberto, 2012)

Despus de mezclar el hgado con cido succnico, obtuvimos una masa que fue
repartida por partes iguales en dos tubos de ensayo; a uno de los tubos se le
aadi fenol (tubo 1), el cual ayudo a inhibir la actividad de la enzima ya que
ocurre una desnaturalizacin.
En este paso se observ que el tubo 1 (con fenol), separ la masa de hgado con
cido succnico del fenol agregado.

Posteriormente, se agreg azul de metileno a los dos tubos, haciendo que el tubo
1 se coloreara de azul y el tubo 2 (sin fenol) se coloreara de caf, este paso se
realiz, ya que el azul de metileno fue el aceptor de electrones del complejo
succinato-FADH2.
Despus, se agreg aceite de beb, ya que contiene aceite mineral, este se
encarg de aislar los dos tubos de ensayo del aire del ambiente y as prevenir la
oxidacin temprana del FADH2. (Alberto, 2012)

Finalmente, se calent a bao Mara por 10 minutos a 50C con el fin de que la
enzima fuera liberada de la mitocondria.

En general, cada uno de los reactivos desempeo una funcin importante en la

realizacin de la prctica, como resultado final se obtuvieron dos tubos uno de
color transparente (tubo 2) y en el otro se form un halo incoloro (tubo 1), en
ambos la enzima succinato deshidrogenasa o deshidrogenasa del cido succnico
actu como una oxidorreductasa, ya que cataliza la oxidacin del succinato para
formar fumarato siendo la coenzima el FAD.
El succinato cedi un H2 que es transferido del FADH2 al azul de metileno, por lo
que este cambio su estado redox de coloreado a incoloro o viceversa. (Alvarado &
et. Al. 2008)

CONCLUSIN.
Se logr llegar al objetivo debido a que se obtuvo como se esperaba una
decoloracin en el tubo 2, ya que hubo una reduccin del azul de metileno que
fueron cedidos desde el FADH2 obteniendo FAD oxidado y azul de metileno

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reducido, y en el tubo 1 no hubo una decoloracin debido a la inhibicin del

fenol, con la realizacin de esta prctica se comprob la accin de la enzima
succinato deshidrogenasa.

CUESTIONARIO

1. Cules son los colores del azul de metileno en sus estados oxidado y
reducido?
En estado reducido el color es azul y en su estado oxidado es incoloro.

2. Cul es la funcin del fenol en la reaccin?

El fenol inhibe la actividad de las enzimas ya que desnaturaliza las protenas,
en este caso a la enzima deshidrogenasa, provocando la prdida de su
actividad.

3. En qu va metablica est involucrada la enzima succinato

deshidrogenasa? Lista los activadores, inhibidores, Km y mecanismo de
rx de sta enzima
La oxidacin del succinato a fumarato est involucrada en la reaccin 6 del
ciclo de Krebs.
Activadores: glicerofosfato, acido beta oxibutirico, isocitrato y protena SDHA
F2.
Inhibidores: 2-Oxoglutarato, oxalato y cido oxaloactico
Km: 0.3 mM
En la succinato deshidrogenasa el anillo isoaloxazina del FAD est unido
covalentemente a la cadena lateral de una histidina del enzima. El FAD es el
aceptor de hidrgeno en esta reaccin por que el cambio de energa libre es
+
insuficiente para reducir al NAD .

REFERENCIAS

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Alvarado & et.al. (2008). BIOQUIMICA II. Obtenido de

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Recuperado el 07 de noviembre de 2015 de: http://www.brenda-
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Berg, J., Tymoczko, J. & Stryer, L. (2008). Bioqumica. El oxalacetato se regenera

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