CRECIMIENTO

Reproduccin bacteriana

Fisin binaria
Las bacterias generalmente se reproducen por fisin
binaria.
Una clula se divide en dos despus de desarrollar una pared
transversa.
Generalmente es asexual aunque en algunas especies puede ser
precedida de conjugacin.
 Crecimiento

Se define como un incremento ordenado de los principales

constituyentes de un organismo.
Involucra sntesis de estructuras celulares, cidos nucleicos,
protenas y otros componentes celulares a partir de nutrientes.
Todos los seres vivos toman nutrientes y excretan productos de
desecho.
 Crecimiento en Lote
En un sistema cerrado:

a)El crecimiento est determinado por un equilibrio dinmico

entre la velocidad de crecimiento y la velocidad de muerte

b)El crecimiento depende de la composicin del medio de cultivo,

principalmente de un sustrato limitante, de las condiciones
ambientales y del inculo inicial
FASES DE LA CURVA DE CRECIMIENTO EN LOTE
 Fases de crecimiento.
I. Fase lag
Es un perodo de adaptacin, cuando un cultivo de microorganismos
es llevado de un ambiente a otro.
Los microorganismos sufren una reorganizacin tanto en su
velocidad de crecimiento como en sus constituyentes
macromoleculares.
Durante esta etapa la masa celular puede cambiar sin cambiar el
nmero de clulas.
 Fases de crecimiento.
II. Fase de aceleracin del crecimiento
 Fases del crecimiento

III. Fase exponencial

Es un perodo de balance o de estado estacionario en el crecimiento,
durante el cual la velocidad especfica de crecimiento es constante.

La composicin qumica del medio de cultivo esta cambiando debido

a que los nutrientes se estn consumiendo y productos
metablicos son producidos.
 Fases del crecimiento

IV. Fase de desaceleracin

La velocidad de crecimiento disminuye y los
microorganismos dejan de reproducirse empezando a entrar
a la fase estacionaria
Fases de crecimiento.
V. Fase estacionaria
Los nutrientes se agotan y los productos txicos se
acumulan.
La masa total puede permanecer constante pero el nmero
de clulas puede descender.
La tasa de crecimiento es igual a la tasa de muerte.
Fases de crecimiento.
VI. Fase de declinacin o muerte
La tasa de muerte es mayor que la tasa de crecimiento.
Los nutrientes se agotan y se acumulan productos txicos
Tiempo de generacin o duplicacin
Una clula crece
progresivamente y se
n=1
divide en dos clulas
iguales. n=2

El tiempo requerido para n=3

que la clula se divida (o

para que la poblacin de
un organismo se duplique n=4

en nmero) se conoce
como tiempo de generacin
2n
o duplicacin.
En donde n = al nmero de generaciones
Clculo del nmero de generaciones

En donde:

n = Nmero de generaciones
t0 = Tiempo inicial de incubacin
t = Tiempo final de incubacin
g = Tiempo de duplicacin (o generacin)
Clculo del tiempo de generacin

ln (N N0)
g=
t t0

En donde:

g .-Tiempo de generacin
N0.- Nmero de microorganismos inicial
N.- Nmero de microorganismos final
t0.- Tiempo Inicial
t.- Tiempo final
La velocidad especfica de crecimiento es obtenida a
partir de la pendiente de una grfica de lnX vs tiempo
 Velocidad de Crecimiento...
Bajo condiciones exponenciales se describe:

dX/dt=X (1)
dN/dt= n N (2)

donde:
X = Concentracin de m.o. en g/l
N = Concentracin de m.o. en clulas/l
t = Tiempo
= Velocidad especfica de crecimiento en h-1 (masa)
n = Velocidad especfica de crecimiento en h-1 (nmero)
 Velocidad de Crecimiento...
dX/x=dt
Xt=X0et (3)
Xt es la concentracin final de microorganismos en g/l en tiempo (t)
X0 es la concentracin inicial de microorganismos en g/l
e es la base de logaritmo natural

Si la velocidad especfica de crecimiento es constante

lnXt=lnX0+ t (4)

La ec. 4 puede ser resuelta para el caso en el cual Dt=td el tiempo

requerido para X2=2X1
td=ln2/ =0.693/ (5)
si td es igual al tiempo de generacin, entonces:
 Que significa la constante ?

Es la velocidad especfica de crecimiento en un sustrato dado, y

significa la afinidad del microorganismo por el sustrato

Que indica la Ecuacin de Monod?

Explica la velocidad de crecimiento en funcin del sustrato

limitante

Que significa la constante max ?

 Distribucin de los tiempos mximos de
duplicacin para diferentes microorganismos
Tasas de crecimiento de algunos microorganismos
bajo condiciones ptimas
Efecto de la fuente de carbono sobre el crecimiento
MTODOS PARA DETERMINAR EL CRECIMIENTO
MICROBIANO

1.Determinacin de la masa celular o biomasa

1.1 Mtodos directos:
Peso seco
Peso hmedo
Volumen hmedo

1.2 Mtodos indirectos:

Determinacin de Nitrgeno total
Espectrofotometra
Radiacin IR
ESPECTROFOTOMETRA
MTODOS PARA DETERMINAR EL CRECIMIENTO
MICROBIANO
2. Determinacin del Nmero de microorganismos
2.1 Mtodos Directos
Cuenta total microscpica (Cmara de Neubauer, de
Petroff)
Cuenta viable (Vaciado en placa, Extensin con varilla de
vidrio, Cuenta en tubo de Hungate, Tincin con azul de
tripano)
Medicin lineal o radial

2.2 Mtodos Indirectos

Nmero ms Probable (NMP)
Turbidimetra
Nefelometra
CUENTA DIRECTA DE CLULAS EN LA CMARA DE NEUBAUER
Diluciones para cuenta viable
Cuenta viable
Recuento de anaerobios por la
tcnica de Hungate
 DETERMINACIN DEL CRECIMIENTO POR NEFELOMETRA

Solucin de BaCl2 al 1.0% Solucin de H2SO4 al 1.0% Escala de UFC

ml ml Mc. Farland Millones/ml

0.1 9.9 4.0 300

0.2 9.8 3.7 600
0.3 9.7 3.5 900
0.4 9.6 3.4 1,200
0.5 9.5 3.3 1,500
0.6 9.4 3.2 1,800
0.7 9.3 3.15 2,100
0.8 9.2 3.10 2,400
0.9 9.1 3.04 2,700
1.0 9.0 3.00 3,000
Nefelmetro de Mc Farland
Consiste en varios tubos de vidrio hermticamente cerrados que contienen BaCl2 al 1% +
cantidades crecientes de H2SO4 al 1%; por lo tanto, en cada tubo se origina un
precipitado de BaSO4, origen de la turbidez, la cual se relaciona con un nmero de
clulas/ mL.
Inconveniente: es un mtodo poco preciso, que slo se emplea cuando no hace falta
exactitud. Ha sido desplazado por los mtodos espectrofotomtricos.
 MTODOS PARA DETERMINAR EL CRECIMIENTO
MICROBIANO

3. Determinacin de metabolitos asociados a crecimiento

3.1 Mtodos Directos
Componentes de Pared celular
Protenas
cidos nucleicos

3.2 Mtodos Indirectos

Produccin de cidos orgnicos
Produccin de alcoholes y glcidos
Produccin de CO2
DETERMINACIN DEL CRECIMIENTO POR
CUANTIFICACIN DE PROTENAS

Por ejemplo:

Mtodo de Lowry
Mtodo de Bradford
 DETERMINACIN DEL CRECIMIENTO POR
CUANTIFICACIN DE CIDOS NUCLEICOS

Extraccin del ADN en cada tiempo de muestreo.

Determinacin de la pureza del ADN por el clculo de la
relacin de absorbancia a 260 nm y 280nm (A260/ A280).
Valores obtenidos entre 1.8 y 2.0, indican que las muestras no
contienen residuos proteicos ni fenol.
La concentracin del ADN extrado se determina por medio
de la siguiente frmula:
D.O.260 = 1 contiene 50 g de ADN de doble cadena por
mililitro(Ausubel et al., 1995)
MTODOS PARA DETERMINAR EL CRECIMIENTO
MICROBIANO

4. Determinacin de la utilizacin de algn nutriente

4.1 Mtodos Indirectos

Oxgeno
Azcares
CO2
cidos grasos
 Crecimiento en contnuo

A diferencia del crecimiento por

lote, es un sistema abierto:

a) Hay administracin constante de

medio de cultivo
b) Por lo tanto el sustrato no es
limitante,
c) Depende de la tasa de dilucin