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Monografia Extraccion de Antocianina PDF
Monografia Extraccion de Antocianina PDF
TRABAJO MONOGRFICO:
EXTRACCION DEL COLORANTE ANTOCIANINA A PARTIR DEL MAIZ
MORADO Y SU APLICACIN EN LA INDUSTRIA ALIMENTARIA
Presentado por:
Bach. MEDINA REGALADO, Gina
Asesor:
Ing. RODRIGUEZ NUEZ, Jos Luis
HUACHO PERU
2012
INDICE GENERAL
INDICE DE CUADROS
iv
INDICE DE FIGURAS
RESUMEN
INTRODUCCION
1.1. Generalidades
1.6.1. Usos
1.6.2. Beneficios
10
10
11
12
13
14
a. pH
15
ii
b. Temperatura
16
17
d. Luz
18
e. Acido ascrbico
18
f. Metales
18
g. Azucares
19
h. Enzimas
20
i. Reacciones de condensacin
20
22
3.1. Antecedentes
22
22
23
25
a.
mtodos cualitativos
25
b.
mtodos cuantitativos
26
26
27
a. Purificacin
27
b. Concentracin
27
c. Secado
28
29
a. Temperatura
29
b. Tamao de partcula
30
iii
30
d. Tiempo de extraccin
31
31
f. Numero de lavados
31
g. Calidad de solvente
31
32
32
33
c. Extraccin de cocciones
33
d. Lixiviacin
33
35
36
37
37
39
40
51
54
55
CONCLUSIONES
58
BIBLIOGRAFIA
59
iv
NDICE DE CUADROS
10
11
37
38
39
40
42
42
44
45
46
por maceracin
48
50
51
52
53
54
56
vi
NDICE DE FIGURAS
01. Antocianinas naturalmente existentes
14
35
RESUMEN
El presente trabajo titulado Extraccin del colorante antocianina a partir del maz morado
y su aplicacin en la Industria Alimentaria tuvo como objetivos: Conocer los aspectos
relacionados con el colorante antocianina, sus caractersticas qumicas-fsicas y .los
productos que los contienen, as como, los diferentes mtodos de extraccin y determinar
el mtodo de extraccin ptimo de antocianina, a partir del maz morado.
En el trabajo se aplic el mtodo descriptivo y analtico, se recopil informacin de
diversas fuentes y se procedi a su anlisis, ordenamiento y obtencin de conclusiones.
Los resultados y conclusiones a las que se llegaron en el trabajo son los siguientes:
La extraccin se realiza por varios mtodos; mtodo de maceracin, calentamiento,
coccin, lixiviacin, siendo el mtodo de maceracin el de mayor rendimiento; en este tipo
de extraccin los factores a controlar son tamao de partcula, tiempo de maceracin,
relacin de materia prima solvente, temperatura.
En la extraccin de antocianina se obtiene los mejores resultados cuando la coronta molida
es de menor tamao de partcula(<150m) y e s pasada dos veces por el molino coloidal..
Por cada 100g de maz se obtiene 43.06mg de antocianinas a partir del grano entero,
130.88mg a partir del grano molido y 104.36mg a partir de la coronta molida.
La aplicacin del colorante de maz morado como pigmento en alimentos ha estado limitada
por su susceptibilidad, entre otros factores, al pH y a la temperatura, por lo que es viable
colorear alimentos de bajo pH.
INTRODUCCIN
Conocer los diferentes mtodos de extraccin de antocianina, a partir del maz morado
En la extraccin por maceracin, los factores que influyen en la extraccin son: tamao
de partcula, tiempo de maceracin, relacin materia prima (m)/solvente(s), evaluacin
de solventes (cidos y su concentracin) y temperatura de maceracin.
CAPITULO I
EL MAIZ MORADO, CARACTERSTICAS Y USOS
1.1. GENERALIDADES.
El maz morado es un conjunto de variedades de Zea mays que poseen un fruto
(infrutescencia) de color morado. Crecen en los Andes del Per , Bolivia y
Argentina , dispersos y cultivados tambin en las costas del territorio peruano, desde
mucho antes de los Incas.
Desde la poca precolombina, es el cereal de mayor importancia como producto
bsico en la alimentacin, como originario del continente americano. En Per, el
maz morado se desarrolla entre los 1.200 a ms de 4.000 m.s.n.m con muchos
contrastes debido a los variados microclimas que se presentan en la cordillera de
Los Andes.
Existen diferentes variedades de maz morado todas derivadas de un lnea ms
ancestral denominada "Kculli".
Dentro de su composicin se encuentra las antocianinas, pigmento natural muy
requerida en la industria alimentaria, que en los ltimos aos ha generado un gran
inters, sobre todo en los pases desarrollados, donde se restringe el uso de
colorantes artificiales o sintticos. (Sevilla y Valdez, 1985).
1.2.
: Vegetal
Divisin
: Tracheophyta
Clase
: Angiosperma
Orden
: Gramideas
Familia
: Gramideae
Gnero
: Zea
Especie
: Zea Mays
1.5.
Coronta
Humedad
11.4
11.20
Protena
6.7
3.74
Grasa
1.5
0.32
Fibra
1.8
24.01
Cenizas
1.7
3.29
76.9
57.44
Carbohidratos
Fuente: Collazos (1962).
1.6.1. Usos.
El origen del maz morado es muy remoto y el uso de su extracto es tambin
antiguo. Segn datos de los historiadores se sabe que el maz era empleado en la
alimentacin como bebida, con l se elaboraba, la chicha que viene a ser una
bebida fermentada.
El uso de su extracto sufri un cambio con el tiempo as es como en la colonia, por
influencia de la repostera espaola y por el ingenio de las amas de casa criollas,
aparecieron la mazamorra y la chicha morada de sabores exquisitos (Fernndez,
1977).
Actualmente el maz morado es usado a nivel casero, como colorante natural y
saborizante en bebidas y otros preparados alimenticios como la mazamorra
morada. A nivel industrial, con fines de obtener colorantes se utiliza nicamente la
coronta por el significativo porcentaje de antocianinas; sin embargo tambin se
puede aprovechar el grano para la ex traccin de almidones y/o derivados o en la
elaboracin de alimentos balanceados para animales.
Las antocianinas extradas de maz morado se utiliza en la elaboracin de yogurt
(Salinas, Rubio y Daz; 2005).
1.6.2. Beneficios.
Baja el colesterol
Mejora la microcirculacin
Es anti-inflamatorio
CAPITULO II
LA ANTIOCIANINA, CARACTERISTICAS, PROPIEDADES Y USOS
ANTOCIANINA
Cianidina-3-galactsido
Manzana
Cianidina-3-arabinsido
Cianidina-7- arabinsido
Pelargonidina-3-glucsido
Fresa
Pelargonidina-3-galactsido
Cianidina-3-glucsido
Mora negra
Naranja
Cianidina-3-glucsido
Cianidina-3-glucsido
Delfinidina-3-glucsido
Cianidina-3-glucsido
Maz morado
Pelargonidina-3-glucsido
Peonidina-3-glucsido
Cebolla
Cianidina-3-laminariobisido
Cianidina-3-monsido
11
CONTENIDO DE
RENDIMIENTO (%)
ANTIOCIANINA
Coronta
610.998
(mg/10g)
79.47
Grano
51.935
)
6.75
Grano molido
157.841
20.53
768.839
100.00
TOTAL
Fuente: Fernndez (1995.)
12
Este colorante natural tiene un potencial benfico para la salud; por tratarse
de un rico antioxidante con propiedades medicinales comprobadas a nivel
mundial; entre ellas:
-
13
antocianinas son
sales
las
14
I Pelargonidina
R 1 = R2 = H
II Cianidina
R1 = OH ; R 2 = H
III Peonidina
R1 = OCH3 ; R2 = H
IV - Delphinidina
R1 = R2 = OH
V - Petunidina
R1 = OCH3 ; R2 = OH
VI- Malvidina
R1 = R2 = OCH3
FACTORES
QUE
INFLUYEN
EN
LA
ESTABILIDAD
DE
LAS
ANTOCIANINAS
Siendo deficientes de electrones, el ncleo flavilium de las antocianinas es
altamente reactivo y estos compuestos, por tanto, rpidamente
cambian hasta
15
a. pH.
El color presentado por las antocianinas es grandemente influenciado por el pH
del medio (Timberlake 1980). En el rango de pH cido (1.0 o menos), los
pigmentos antocinicos existen enteramente en la forma de sal flavilium que da
el color rojo. Cuando se incrementa el pH en el rango de 4.0 a 5.0, la solucin
viene a ser menos coloreada. Esta decoloracin es causada por la transformacin
de la sal flavilium de color rojo a la base carbinol de menos color. El
incremento
16
17
envasado en
18
Si
bien
la
presencia de
cido
ascrbico en
jugo
de
frutas
es
Metales
19
20
h. Enzimas
En frutas recin cosechadas, la prdida de antocianina ha sido atribuida a
la actividad del sistema enzimtico antocianasa y fenolasa (Wagen, et al.,
1960); Sakamura, et al. (1965), mencionado por Shrikande (1976). La
antocianasa hidroliza el protector 3-glicsido de las antocianinas para producir
azcares libres y agliconas inestables.
Junto a la antocianasa, la polifenoloxidasa puede tambin contribuir a la
destruccin de la antocianina por medio de la oxidacin acoplada. Tratndose
de compuestos polifenlicos, cabe esperar que resulten afectados por la
polifenoloxidasa, pero no se ha confirmado la existencia de enzimas especficas
oxidantes de las antocianinas. Se ha demostrado que las peroxidasas actan
sobre las antocianinas decolorndolos rpidamente en presencia de catecol. Se
admite que este ltimo acta de compuesto intermediario, siendo oxidado, en
primer lugar, por la accin de la enzima, a 0 - quinona, luego a su vez el
antociano (Yufera, 1979).
i.
Reacciones de condensacin
tambin
sean
21
CAPITULO III
METODOS DE EXTRACCION DE LA ANTOCIANINA
3.1. ANTECEDENTES.
3.1.1. A nivel internacional.
Salinas, Rubio y Daz (2005), Extraccin y uso de pigmentos del maz ( Zea
mays L) como colorantes en
23
24
25
seleccin,
El rendimiento de la lixiviacin se
maximiza cuando se usa coronta molida fina en agua acidulada con una acidez
inica de 3.2 a una temperatura de 9C en un tiempo de contacto de 70 minutos
a volumen constante. El proceso de filtrado retiene mejor los slidos insolubles
como medios filtrantes de 170 Mesh. La lixiviacin ptima permiti un
rendimiento de 9.78% de antocianinas con la presencia de los pigmentos
pelargonidina
26
b. Mtodos cuantitativos.
Los mtodos cuantitativos para antocianinas pueden ser divididos en dos
categoras:
a) Anlisis de antocianinas frescas como por ejemplo las de frutas fres cas o jugo,
y
b) Anlisis de antocianinas almacenados provenientes de jugos o productos
procesados.
27
Contacto del solvente con las partculas del soluto, esto es en la masa de
la solucin.
La primera etapa ocurre tan rpido por lo que sus efectos son despreciables
respecto a la extraccin total. En las clulas vegetales, especficamente los
pigmentos, el material soluble se encuentra en el interior de la pared celular en
los plastidios, por lo que se hace necesario romper la pared por efecto de una
presin mecnica u osmtica que permita al contenido fluir al exterior.
28
La
disminucin
del
volumen
de
lquido
para
reducir
los
Para
aumentar
la
concentracin de
slidos
solubles
de
los
se disminuyen
Con
ello
reduciendo
la
presin
de
trabajo
del
29
Las razones para desecar son mltiples, siendo algunas las siguientes:
- Facilitar la manipulacin en algn tratamiento posterior.
-
travs de las
30
suficientemente alta para que permita una buena solubilidad del pigmento, sin
llegar al extremo de hidrolizar al pigmento ni de solubilizar. Muchos estudios
sobre la estabilidad de la antocianina han indicado que las antocianinas son
fcilmente degradadas por el calor.
La tasa de degradacin depende de la estructura de la antocianina (Furia,
1978). Kan et al (1976), recomienda usar temperaturas comprendidas entre 60
90C.
b. Tamao de partcula: La reduccin del tamao facilita la extraccin de
un constituyente deseado, contenido en una estructura compuesta (Brennan,
1970). Por lo tanto, para obtener una buena difusin del soluto en el
solvente es necesario determinar el grado de molienda o fineza del
producto. As cuanto ms pequea sean las partculas mucho mayor es el
rea interfacial entre el slido y el lquido; sin embargo, cuando el material
es demasiado fino ofrece dificultades en la extraccin ya que en algunos casos
impide la libre circulacin del lquido, la separacin de las partculas del
lquido y el drenaje del slido residual resulta ms difcil, y en algunos casos
la ruptura de las clulas deja en libertad materiales indeseables.
c. Agitacin del solvente: Incrementa la difusin y por lo tanto aumenta la
transferencia de material, desde la superficie de las partculas a la solucin.
El agitador debe tener una velocidad adecuada o moderada considerando lo
siguiente (Zapata, 1978):
-
31
aumentar
la
relacin
de
extraccin
disminuir
32
por
maceracin:
Esta
extraccin
es
sencilla.
Se
du racin
33
34
de
aceites
de
semillas,
nueces
y sustancias vegetales
35
3.4.
36
37
S.T (%)
mg Antocianina/100 g
Sin moler
1.345
625.90
10
1.603
795.8
1.652
896.2
1.736
947.05
38
CON ENZIMA
SIN ENZIMA
PARTCULA
Micrones
ASTM
AcyT
ID
Brix
AcyT
ID
Brix
> 1190
( m)
1190-500
16
1.05
1.6
2.4
1.03
1.8
795.8
(mg/100g)
827.1
1.30
35
625.9
(mg/100g)
652.5
1.32
2.9
500-315
50
899.7
1.15
3.1
858.9
1.34
3.0
315-150
80
999.1
1.26
4.0
883.2
1.36
3.4
< 150
100
1049.8
1.27
3.3
887.1
1.38
3.5
1120.5
1.28
3.8
890.2
1.38
3.7
MC*
39
b.
ANTOCIANINAS
Neutrasa
0.00
(%)
0.01
860.5
(mg AcyT/100g)
500.5
Canalpha
0.01
747.6
Biomacerasa
0.05
786.6
Celluclast
0.01
880.5
Extrazyme
0.01
1068.6
ENZIMAS
Sin enzima
Araujo (1995), observ que el uso de enzimas como proteasas (Neutrase), amilasas
(Canalpha) o pectinasas (Biomacerase) no aumentan el rendimiento de extraccin
de las antocianinas; a pesar de ser esta ltima e nzima un complejo enzimtico que
contiene principalmente poligalacturonasa, proteasa, amilasa, y otras actividades
colaterales como celulasa y hemicelulasa. Sin embargo, el uso del complejo
enzimtico Extrazyme permite aumentar
el rendimiento de extraccin de
40
c.
AcyT(mg/100)
RENDIMIENTO (%) *
S.T. (%)
490.33
91.59
0.5665
499.80
93.36
0.5932
525.15
98.00
0.6152
12
532.48
99.47
0.6165
24
535.34
100.00
0.6230
48
515.07
96.21
0.6590
: 1/20
: ambiente (oscuridad)
41
Los resultados de los ensayos realizados por Fernndez (1995), muestran que
a medida
que
se
incrementa el
volumen
del
solvente,
aumenta
la
42
AcyT (mg/100)
% S.T
1/4
1/8
1 / 10
1 / 12
1 / 16
20
175.17
260.00
272.20
321.30
333.20
373.20
1.9092
1.2094
0.9720
0.8983
0.6530
0.5172
2 Extraccin
m/s *
mg AcyT/100
mg AcyT/100
mg AcyT/100
S.T (%)
1/4
175.17
75.07
250.24
0.545
1/8
260.00
95.77
355.77
0.662
1 / 10
272.20
105.70
377.90
0.674
1 / 12
321.30
120.49
441.00
0.741
1 / 16
333.20
108.92
441.12
0.643
1 / 20
373.20
104.30
477.50
0.662
Extracto Total
43
prima/solvente 1/12.
con el fin de verificar estos resulta dos, Fernndez (1995) realiz un
ensayo adicional que consisti en extraer la materia colorante por calentamiento
durante 10 minutos a temperaturas comprendidas entre 40 a 100C, previa
maceracin, con dos proporciones de materia prima/solvente (1/12 y 1/2 0).
Los resultados obtenidos fueron reportados en el cuadro 10; donde se observa
que a temperaturas altas (80 y
100C), se extrae mayor cantidad de antocianinas cuando se usa menor cantidad
de solvente. Considerando esto y adems que el uso de un volumen d e
extraccin menor facilita la operacin de concentracin de colorante es que
Fernndez (1995) consider una proporcin materia prima solvente de 1/12
para la maceracin y extraccin de antocianinas.
En el cuadro 10 se muestra la influencia de la relacin materia prima/solvente
de maceracin y extraccin de antocianinas a diferentes temperaturas. y se utiliza
las siguientes Condiciones de maceracin:
44
Relacin 1/20
T (C)
mg AcyT1
Mg AcyT2
40
591.45
613.14
60
687.60
700.81
80
878.62
783.71
100
925.05
863.24
45
pH
mg AcyT/100
% S.T
TR*
HCl
1.90
547.45
16.39
RR
H2SO4
1.90
535.45
11.36
RR
Ctrico
3.90
240.91
12.04
MM
Actico
3.90
368.13
12.05
MM
46
para el citrato y el acetato, a este valor de pH las antocianinas son menos estables
al calor. Fernndez (1995), con el fin de uniformizar los resultados realiz un
ensayo a diferentes valores de pH. Los resultados obtenidos se muestran en
el cuadro 12 y las condiciones de maceracin.
Se puede notar en
el
pH
mg AcyT
% S. T.
H2O HCl
3.0
517.92
0.620
H2O HCl
4.0
446.03
0.614
H2O HCl
5.0
447.60
0.625
H2O H2SO4
3.0
474.54
0.656
H2O H2SO4
4.0
483.71
0.653
H2O H2SO4
5.0
489.00
0.652
Buffer citrato
3.0
202.65
1.918
Buffer citrato
4.0
212.83
2.253
Buffer citrato
5.0
297.86
2.820
Buffer acetato
3.0
202.65
0.613
Buffer acetato
4.0
231.16
0.727
Buffer acetato
5.0
329.84
1.253
47
sulfrico son los cidos que dan mejores resultado en la extraccin; sin embargo
Shrikande (1976), recomienda usar HCl porque producen sales de cloruro con
antocianinas, las que minimizan la descomposicin de los pigmentos acilados;
mientras que kan et al., 1975, menciona que el cido sulfrico tiene un efecto
superior respecto al clorhdrico y adems no
es venenoso porque es
H2SO4
muestras de los extractos obtenidos con dichos cidos, los cuales fueron
observados peridicamente. Las muestras que fueron obtenidas con HCl
despus de un cierto perodo de almacenamiento presentaron un precipitado
marrn
oscuro,
mientras
que
H2SO4
permanecieron estables por tres meses. Por esta razn y porque adems el
HCl se caracteriza por ser corrosivo, Fernndez, N.A. (1995.) decidi utilizar
H2SO4 en las pruebas siguientes.
48
iv.
% Acido
pH
AcyT (mg/100)
S. T (%)
TR*
0.05
2.15
606.64
0.6315
RR
0.10
1.90
628.31
0.8580
RR
0.50
1.25
659.67
1.4808
VM
1.00
1.20
631.16
1.8860
VM
2.00
0.90
609.57
2.9460
VM
49
v.
50
Cuadro 14.
Influencia de la temperatura
de maceracin en la extraccin
de antocianinas.
T
pH
AcyT (mg/100)
S. T. (%)
DC*
2.15
501.12
0.500
2.351
10
2.1z
508.60
0.5975
2.350
20
2.15
532.48
0.6176
2.204
40
2.15
613.14
0.6405
2.018
Condiciones de maceracin:
Solvente: H2O : H2SO4
Concentracin del cido: 0.1%
Tiempo de maceracin: 12 horas
m/s: 1/20
* DC = degradacin del color
51
i.
Vad
Vrec
AcyT (mg/100)
% E*
100
81
519.49
57.45
100
96
189.26
20.93
100
98
142.76
15.79
100
101
52.71
5.82
TOTAL
400
376
904.22
100.00
52
ii.
Tiempo
TEMPERATURA (C)
60
70
80
90
(min)
15
796.20
942.13
986.87
883.96
30
789.95
914.33
1002.55
833.81
45
900.58
651.25
739.00
787.52
60
935.23
867.83
760.00
652.20
53
el
TEMPERATURA (C)
60
70
80
90
(min)
15
1.357
1.440
1.492
1.504
30
1.448
1.443
1.564
1.602
45
1.447
1.547
1.721
1.637
60
1.576
1.539
1.853
1.631
En el cuadro 17, se observa una tendencia al aumento de los slidos totales con
el aumento del tiempo y temperatura de extraccin, sin embargo, estos
incrementos no indican necesariamente presencia de antocianinas, puede
extraerse adems otros flavonoides o taninos que tienen diferente longitud de
onda de mxima absorcin.
De lo expuesto, Fernndez (1995) concluye que el tratamiento a 80C
por 30 minutos es el que rinde mayor cantidad de antocianinas con menos
productos de degradacin, por lo que considera de calidad muy aceptable. Esto
concuerda con lo recomendado por Kan et al., 1975, de aproximadamente
de 60 90 C por un tiempo de 1 hora en la extraccin de antocianinas de
maz morado.
54
e.
CON ENZIMAS
mg AcyT/100
ID
SIN ENZIMAS
mg AcyT/100
ID
ENZIMA (%)
0.025
993.7
1.33
944.6
1.34
0.05
1076.50
1.42
944.5
1.35
0.1
1041.00
1.39
944.6
1.35
0.2
1035.00
1.38
944.4
1.35
CAPITULO IV
APLICACIN DE LA ANTOCIANINA EXTRAIDA DEL MAIZ MORADO EN LA
INDUSTRIA ALIMENTARIA
-
56
El color de los yogures coloreados por Salinas (2005) con cada uno de los cuatro
extractos fue diferente desde el primer da, no obstante que la concentracin de
antocianinas incorporada al yogur fue la misma para todos (cuadro 19). La
luminosidad del yogur coloreado con los extractos de arrocillo y peruano fue menor
que la registrada en los yogures coloreados con los extractos del grano de las
variedades cnico y purepecha, pero en todos los casos el valor de esta variable fue
mayor que la del yogur comercial de fresa, empleado como referencia. Los valores de
tono o matiz para los yogures coloreados con los dos primeros extractos fueron
menores de 21, que corresponden a un color rojo con tonalidades de rosa. En el
caso del yogur coloreado con los extractos de cnico y purepecha, los valores del
tono o matiz fueron de 35.4 y 30.4, respectivamente, y el color se observ menos
intenso.
Cuadro 19. Color de los yogures teidos con los extractos de antocianinas.
VALORES INICIALES
VALORES FINALES
MAIZ
L
Hue
Croma
Hue
Croma
Arrocillo
81.6
20.5
7.4
79.1
43.7
6.0
Peruano
82.4
16.9
7.4
82
44.2
5.7
Purepecha
85.4
30.4
6.7
82.6
55.8
5.7
Cnico
87.1
35.4
7.5
81.9
63.7
78.7
16.4
13.4
Yogur comercial
de
fresa
Fuente: Salinas (2005)
5.6
57
Salinas (2005) afirma que ninguno de los yogures coloreados con los
extractos de antocianinas igual los estndares de color del yogur comercial de
fresa usado como referencia, ya que la industria emplea mezclas de colorantes
para lograr los colores que desea, por lo que sera muy difcil con un solo
extracto alcanzar tales valores. Los mayores cambios de color en los
yogures
teidos
se
observaron durante
58
CONCLUSIONES
El mejor mtodo para extraer antocianina a partir del maz morado es el mtodo
de maceracin, ya que se obtiene un rendimiento de 85%
coloidal, esto
a la
59
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
1. ARAUJO VARGAS, M. 1995. Estudio de la extraccin del colorante de
maz morado (Zea mays L.) con el uso de enzimas . Tesis para optar el grado
de Mag. Sc en Tecnologa de Alimentos de la Universidad Nacional Agraria
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H.
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maz
morado.
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Digital
Autosuficiencia-Argentina.
http://www.autosuficiencia.com.ar/shop/detallenot.asp?notid=932v
9.
60
J.
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libre. http://es.wikipedia.org/wiki/Maiz_morado.
15. WROLSTAD, R.E. Y ERLANDSON, J.A. 1 973. Effest of metal ions on the
color of strawberry puree, J. Food Sci., 38: 460.
16. YUFERA, E.P. 1979. Qumica agrcola III. Alimentos. Ed. Alhambra S.A. 1
ed.p 320. Espaa.
17. ZAPATA, R. 1978. Extraccin de colorante a partir de Achiote. Tesis para
optar el ttulo de Ing. en Ind. Alimentarias. U.N.A. Lima - Per.