INFORME LABORATORIO METODOS DE SIEMBRA DE MICROORGANISMOS

HURTADO M. JESS DAVID

LOPEZ C. JHONNY ALEJANDRO
FUELANTALA M. IVN ALEJANDRO
SOLANO D. IVN ANDRS
VELASCO H. HELEN KARINA

UNIVERSIDAD DEL VALLE SEDE ZARZAL

FACULTAD INGENIERA EN ALIMENTOS PROGRAMA ACADMICO
TECNOLOGA EN ALIMENTOS

ZARZAL VALLE COLOMBIA

SEPTIEMBRE 26 -09 - 2015

Mtodos de siembra de microorganismos

FUELANTALA M. Ivn Alejandro (201457394)
HURTADO M. Jess David (201457307)
LOPEZ C. Johnny Alejandro (201457269)
SOLANO D. Ivn Andrs (201457113)
VELASCO H. Helen Karina (201457324)
Universidad del Vale- Sede Zarzal.
Facultad de Ingeniera.
Programa de Tecnologa de Alimentos.
Cuarto Semestre

Septiembre 26 de 2015

RESUMEN
El presente informe trata acerca de la siembra y cultivo de los M.O. que se presentan
aisladas, donde se utilizan las tcnicas de siembra como herramientas u procedimientos
inciales para su observacin en un periodo de tiempo, lo que se conoce como un ciclo
celular.
Para este procedimiento se utilizaron las diferentes tcnicas de siembra, como lo son;
siembra por zigzag, siembra por estra, siembra por vertido, siembra por extensin, siembra
por puncin o en tubo y medios de cultivos como lo son; agar Eosin methylene blue, agar
nutritivo, agar Macconkey, agar oxytetracyclin gluc yeast ext, agar plate count. Tambin se
us la tcnica de tincin de Gram la cual lleva reactivos como; cristal violeta, safranina,
alcohol cetona, todo esto para poder teir las muestras y poder observarlas.
Estas muestras de medios de cultivos dieron como resultado, una demostracin del ciclo
celular de los M.O., que se encuentran en un medio de cultivo a un periodo de tiempo y en
unas condiciones de ambiente para su reproduccin celular.
ABSTRAC
This report is about the planting and cultivation of the M.O. presented isolated, where
planting techniques such as tools or getting started for observation over a period of time,
used what is known as a cell cycle.
Techniques of planting, were used for this procedure as they are; sowing by zigzag, sowing
by stria, planting by pouring, sowing by extension, sowing needle or tube and media
cultures as they are; agar Eosin methylene blue, nutrient agar, Macconkey agar, agar
oxytetracyclin gluc yeast ext, plate count agar. Gram which reactive stain technique was
also used as; Crystal Violet, safranin, alcohol ketone, all of this to be able to dye samples
and see them.

INTRODUCCIN
La siembra microbiolgica es un procedimiento tcnico que consiste en colocar una
pequea fraccin o volumen de la muestra, sobre o dentro, de uno o varios medios de
cultivo que contengan los nutrientes necesarios para las especies que presuntivamente
contiene, con la finalidad de que puedan desarrollarse adecuadamente, para factibilidad su
estudio y posterior identificacin. El nmero de clulas microbianas que se encuentran en el
volumen o fraccin sembrada se denomina inoculo. (1)
JUSTIFICACION
La prctica de mtodos de siembra de microorganismos da con el fin de comprender la
referencia de crecimiento microbiano como el aumento del nmero de M.O. en un periodo
de tiempo. El crecimiento de M.O. se denomina ciclo celular, el cual es el desarrollo de una
bacteria aislada, entre ellos veremos en la prctica la distincin de diferentes M.O., en
diferentes agares de cultivo, todo con el fin de distinguir cada una de ellas y denotar cmo
son en distintos lugares en especfico.
Los microorganismos no se encuentran aislados, sino que su nmero suele ser muy elevado
por unidad de volumen o por unidad de superficie. Por consiguiente, all donde se
encuentran son muy abundantes. Adems suelen formar agrupaciones de varios
microorganismos que interaccionan entre s: unos pueden usar como alimento los productos
residuales de otros, o pueden ser atacados por los vecinos que compiten por el mismo
alimento. Estas interacciones dan lugar a sucesiones de microorganismos: la microflora de
una superficie, de un alimento o del interior de una cavidad abierta del cuerpo puede variar
con el tiempo.
Conocemos diferentes tipos de M.O. y la intensin es clasificarlos, saber cmo es su ciclo
celular en un periodo de tiempo y su replicacin mediante los agares de cultivo. Entre ello
usaremos diferentes tcnicas de siembra de M.O para la apreciacin de la proliferacin
celular o crecimiento microbiano. Todo con el fin de comprender el ciclo celular y
diferenciar los agares de cultivo.
Fuente:Flavia Andino Rugama; Yorling Castillo. (Febrero de 2010). Un enfoque prctico
para la inocuidad alimentaria. estel
OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
Obtener un desarrollo suficiente de los mtodos de siembra como tambin la identificacin
y tipo de microorganismos, ya que es de vital importancia permitir su identificacin y su
caracterizacin.

OBJETIVO ESPECIFICO

Conocer los mtodos de siembra y los medios de cultivo.

Recordar las tcnicas de tincin de Gram

Identificar y diferenciar los mtodos de siembra e identificar los medios de cultivo.

MATERIALES Y REACTIVOS
Mechero
Porta y cubre objetos

Microscopio
Asa de siembra

Pinzas
Bandeja de coloracin

Gotero
Beaker 250-50 ml

Cinta Adhesiva
Cristal Violeta
Alcohol Cetona

Azul de metileno
Safranina
Lugol de Gram
Medios de cultivo con
microorganismos

Agar nutritivo
Agar PDA
Agar Macconkey
Agua
Agar oxytetracyclin gluc yeast
ext

Cajas Petri
Tubos de ensayo
Servilletas
Incubadora

MARCO TERICO
Los microorganismos se cultivan en el laboratorio en materiales nutritivos denominados
medios de cultivo, cuyos componentes son muy variados. La eleccin del medio se basa en
el propsito del estudio. El materia se inocula en el medio se denomina inoculo. Cuando se
inocula un medio como el agar nutritivo u otros medios con agar en cajas Petri, por el
mtodo de siembra, por zigzag, por vertido, y siembra por tubos. Las clulas quedan
separadas individualmente, durante la en incubacin los microorganismos se reproducen
tan rpidamente que en un tiempo de 24 y 48 horas producen masas visibles a vista,
denominados colonias. (2)
Siembra: es la incorporacin a un medio de cultivo de una muestra, con propsitos
cuantitativos o cualitativos.
Agar: Se utiliza como agente solidificante. Es un polisacrido que se obtiene de ciertas
algas marinas. Las bacterias no son capaces de degradarlo.

METODOLOGA
Los mtodos de siembra aplicados, son conocidos por la factibilidad del desarrollo de
microorganismos, cuentan con un agar que es quien les facilita el crecimiento y la
multiplicacin, ya que les proporciona los nutrientes suficientes para que estos se
multipliquen al pasar de las horas.
Consiste en generar un camino en las cajas Petri y en tubos de ensayo por medio de una asa
eso si en cada paso la asa se cauteriza con fuego ya que se debe tener una vital practica sin
riesgo de contagio de microorganismos por contacto con esta misma. A continuacin las
cajas Petri primero se rellenan con un cultivo de agar lo cual este es un caldo de nutrientes
que se solidifica y se le riega los microorganismos por medio de la asa, se aplican 4
mtodos de siembra que facilitan la multiplicacin de los microorganismos y estos mtodos
son: mtodo zigzag, mtodo de extensin, mtodo de estra, mtodo por vertido, y por
tubos.
Despus de generar estos mtodos en las cajas Petri y en los tubos de ensayo se procede a
la tincin de Gram mtodo que facilita detallar y clasificar los tipos de microorganismos, se
trata en aplicarlo en el portaobjetos y con el fin de encontrar o detallar los microorganismos
en la muestra.
Al cabo de 2 das se observaron a simple vista manchas en los cultivos lo cual es una
obtencin factible de microorganismos. En primer lugar, observar a simple vista diversas
caractersticas como el color y el borde de las colonias crecidas en el agar as como el olor
y la turbidez del medio ya que en algunos casos suelen ser tpicos de un determinado tipo
de microorganismo y pueden servir de ayuda a la hora de su identificacin.
Que sin necesidad de observar en el microscopio, se puede concluir que hay vida en los
cultivos que se sometieron en los mtodos de siembra.

RESULTADOS
MUESTRA

PRESENCIA

AUSENCIA

FORMA DE LA

BORDE DE

COLOR DE LA

DE COLONIAS

DE

COLONIA

LA

COLONIA

COLONIA

COLONIA

Eosin Meth

Estria

Vertido

Nutri

ZigZag

Macc

ZigZag

Eosin Meth

Estria

Eosin Meth

Estria

Oxy

Nutri

Nutri

10

Oxy

Bacilos Gram +

Turbio

ZigZag

Bacilos Gram +

Turbio

ZigZag

Bacilos Gram +

Turbio

Bacilos Gram +

Turbio

Estos resultados obtenidos fueron desarrollados el da de la practica en el

laboratorio y se procedi a tomarlos y en algunas casillas no estarn llenas porque
en los cultivos no presentaba ninguna muestra, a excepto del agar.

CAJA
PETRI
1
2
3
4
5

Nutritivo
Macconkey
Eosin methylene blue

FECHA DE
TOMA
26/09/2015
26/09/2015
26/09/2015
26/09/2015
26/09/2015

Eosin methylene blue

26/09/2015

Jess Hurt

AGAR CULTIVO

FECHA DE
TOMA

PERSONA QU
TOMA

26/09/2015

Ivn Sola

26/09/2015
26/09/2015
26/09/2015
26/09/2015
26/09/2015

Johnny L
Ivn Fuelan
Helen Vela
Jess Hurt
Ivn Sola

MTODO

AGAR CULTIVO

siembra en estra
siembra por vertido
siembra en zigzag
siembra en zigzag
siembra en estra
siembra por
extensin

Eosin methylene blue

TUBO

MTODO

siembra en tubos

2
3
4
5
6

siembra
siembra
siembra
siembra
siembra

en
en
en
en
en

tubos
tubos
tubos
tubos
tubos

oxytetracyclin gluc
yeast ext
plate count
Nutritivo
Macconkey
Eosin methylene blue

PERSONA QU
TOMA
Jess Hurt
Jess Hurt
Helen Vela
Ivn Fuelan
Johnny L

Tabla 1: Mtodos de siembra realizado por los estudiantes en los diversos tipos de agares

CAJA
PETRI
1
2

OBSERVACIN
No se observa nada
Se observa la proliferacin de M.O., hay cepa de hongo. Se observan
pequeos crculos de color Amarillo y otros ms grandes de color
blanco.

FECHA D

28/09/

28/09/

El zigzag tiene una buena caracterstica, hay gran proliferacin de

M.O., en el cultivo se puede apreciar una especie de nata de color
blanco opaco y una lnea prominente de color naranja.

28/09/

Se puede apreciar el medio de cultivo pero no en la misma magnitud

al anterior mencionado. Hay cultivos alrededor de la lnea zigzag de
28/09/
color blanco opaco.
Se ve como una cepa de hongo de color rosado, tiene una especie
5
28/09/
de pelos y es algo pequeo.
Se ven como 3 cepas de hongos de color blanco opaco, con pelos y
6
28/09/
en diferentes tamaos.
CONCLUSI
Todos tienen un color extrao, algo desagradable como en proceso de descompo
ON
una especie de gas.
4

TUBO

OBSERVACIN

Se ve una nata blanca con un color amarillo opaco, en el centro se

aprecia el trazado y se ve como los M.O. han ploriferado.

2
3
4
5
6

La nata es muy poca, pero se aprecia la lnea de trazo de M.O.

Se ve una nata blanca traslcida, hay una lnea de M.O. y la nata se
ve acuosa.
No se ve nada.
Se ven marcas de vapor, se ve la proliferacin de M.O. de color verde
oscuro en la capa superficial (precipitado) se ven de un color verde
pardo.
Se ve una nata blanca traslcida, hay proliferacin de hongos se ve
una pequea cepa.

Tabla 2: Observacin de los cultivos y mtodos de siembra que fueron realizados por los estudiantes. Estos son los
datos obtenidos despus de dos das de incubacin.

DISCUSIN DE LOS RESULTADOS

Extensin en superficie: Tras el perodo de incubacin se examinarn las placas. Las
colonias aparecen sobre la superficie, distribuidas uniformemente si la siembra se ha
realizado de forma correcta.
Aparecen las colonias distribuidas por toda la masa del agar. Aquellas que estn en la
superficie tendrn distintas formas fsicas, dependiendo del tipo microbiano, mientras que
las colonias que se desarrollan en el interior, bajo la superficie del agar, tienen forma
circular, aunque los microorganismos que formen las distintas colonias sean de distinto
tipo.
En los cultivos lquidos no tiene lugar la formacin de colonias, por lo tanto se examinar
la existencia de enturbiamiento ms o menos intenso, la formacin de una pelcula o velo
sobre la superficie, la aparicin de sedimento en el fondo del tubo, etc. La utilizacin de
medios de cultivo lquidos permite la obtencin de una poblacin microbiana grande, con
un elevado nmero de microorganismos, para ser utilizados posteriormente.

FECHA D

28/09/

28/09/

28/09/

28/09/

28/09/

28/09/

Trabajos citados
(1). Obtenido de http://gsdl.bvs.sld.cu/cgi-bin/library
(2). Obtenido de http://es.slideshare.net/sangra85/siembra-5897672
Flavia Andino Rugama; Yorling Castillo. (Febrero de 2010). Un enfoque prctico para la
inocuidad alimentaria. estel.
Bibliografa:
http://microrosa.wikispaces.com/file/view/Siembra+PRACT5.pdf
http://metodosdsiembras.blogspot.com.co/
http://www.pucmmsti.edu.do/websise/estudiante/materias/201220132/ST-BIO-231-P071/BIO-231%20PRACTICA%203%202-12-13.pdf
http://ocw.um.es/cc.-de-la-salud/higiene-inspeccion-y-control-alimentario/practicas1/practica-1-tecnicas-utiles-para-el-control

http://www.pomif.com/pages/practicas/bacteriologia/aislamiento
http://www.unavarra.es/genmic/microgral/manual%20practicas%20micagral.pdf
http://es.slideshare.net/ELVISCHAVARRICHOLAN/metodos-de-siembra-y-aislamientode-microorganismos
microblogogia.blogspot.com/.../cultivo-microbiologicodefinicion-y.html
http://www.unavarra.es/genmic/microgral/Tema%2002.-%20Cultivo%20de
%20microorganismos.pdf
http://www.ecured.cu/index.php/Medio_de_cultivo_(Microbiolog%C3%ADa)