Universidad Tcnica Federico Santa Mara

Departamento de Ingeniera Qumica y Ambiental

Laboratorio de Microbiologa
Practico N 1
REQUERIMIENTOS NUTRICIONALES, MEDIOS DE CULTIVOS Y
SIEMBRA DE MICROORGANISMOS
Todas las formas de vida, desde los microorganismos a los seres humanos,
comparten ciertos requerimientos nutricionales en lo que se refiere a las sustancias
qumicas necesarias para su crecimiento y funcionamiento normal. Debemos tener
presente que en la naturaleza existe una gran variedad de tipos de requerimientos
nutricionales entre las bacterias.
Los organismos toman de su ambiente los materiales necesarios para todas las
reacciones metablicas, dichos elementos se denominan NUTRIENTES y son los que
les permiten a los microorganismos sintetizar su material celular y generar energa. Los
nutrientes se pueden clasificar en:
1.- Nutrientes indispensables: sin los que la clula no puede vivir
2. Nutrientes no indispensables: los cuales son utilizados si estn presentes, pero no
son esenciales.
3.-Macronutrientes: cuando se requieren en gran cantidad.
4.-Micronutrientes: cuando se requieren en pequeas cantidades. Con frecuencia, son
requeridos a tan pequea concentracin que es difcil determinar exactamente la
cantidad requerida y otras veces pasa desapercibido el requerimiento de un determinado
micronutriente por no ser detectable.
5.-Nutrientes con fines energticos: no son incorporados directamente en el material
celular y al ser degradados liberan energa.
6.- Nutrientes con fines estructurales: con los que la clula sintetiza macromolculas y
otras estructuras.
En general las vas asimiladoras de nutrientes de los microorganismos, reflejan al
ambiente natural en el cual viven. De acuerdo a la fuente de energa y a la fuente de
carbono, los microorganismos pueden clasificarse:
a) Quimiohetertrofo: aquellos que ocupan un compuesto orgnico tanto como fuente
de energa, como de carbono. Tambin son llamados Organotrofos.
b) Quimiolittrofos: aquellos que ocupan un compuesto inorgnico como fuente de
energa y CO2 como fuente de carbono. Tambin son llamados littrofos.
c) Fotohetertrofos: aquellos que ocupan luz como fuente de energa y compuestos
orgnicos simples como fuente de carbono.
d) Fotoauttrofos: aquellos que ocupan luz como fuente de energa y CO2 como fuente
de carbono. Tambin son llamados auttrofos.

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Estas dos ltimas categoras son conocidas tambin como Fottrofos.

Como puede verse, el conocimiento del hbitat de un organismo es una ayuda
prctica para hacer un medio de cultivo especfico para un microorganismo recin
aislado. Sin embargo, no debe pensarse que el medio de cultivo es un duplicado del
ambiente natural, ya que su objetivo en el laboratorio es obtener, para el trabajo
experimental, poblaciones de clulas generalmente muchos mayores que las que se
encuentran en la naturaleza.

Ejemplos de organismos que emplean diferentes tipos de produccin de energa y

fuentes de carbono:
- Quimiohetrtrofos: animales, la mayora de las bacterias, hongos y protozoos.
- Quimiolittrofos:

bacterias del hidrgeno, bacterias sulfurosas incoloras, bacterias

nitrificantes, bacterias frricas.

- Fotohetertrofos:

pocas algas, la mayora de las bacterias prpuras y verdes,

algunas Cianobacterias.

- Fotoauttrofos:
plantas verdes, la mayora de las algas, Cianobacterias, algunas
bacterias prpuras y verdes

Los organismos vivos requieren carbono en alguna forma, todos requieren al menos
pequeas cantidades de CO 2 , pero la mayora requiere algunos compuestos orgnicos de
carbono, tales como azcares y otros carbohidratos. Las plantas utilizan el CO 2 y lo
convierten en carbohidratos mediante la fotosntesis. Muchas bacterias requieren
tambin slo CO 2 como nica fuente de carbono. Hablando en trminos nutricionales,
todos estos organismos son auttrofos. Otras bacterias son nutricionalmente semejantes
a los animales, en el sentido de que no pueden utilizar el CO 2 como nica fuente de
carbono y dependen de los auttrofos para la produccin de carbohidratos y otros
compuestos orgnicos, que luego ellos utilizan como alimentos. Los microorganismos
que requieren compuestos orgnicos como fuente de carbono son hetertrofos.
Todos los organismos vivos requieren nitrgeno, en alguna forma. Las plantas utilizan
el nitrgeno en forma de sales inorgnicas de nitrato de potasio, en tanto que los
animales requieren compuestos orgnicos, de nitrgeno tales como las protenas y sus
productos de degradacin, es decir pptidos y ciertos aminocidos. Las bacterias son
extremadamente verstiles en este aspecto, algunos tipos utilizan nitrgeno atmosfrico,
algunas utilizan compuestos inorgnicos de nitrgeno y otras requieren nitrgeno
procedente de compuestos orgnicos nitrogenados.
El requerimiento animal tpico de azufre se satisface como compuestos orgnicos de
azufre mientras que el requerimiento tpico vegetal de azufre se satisface con
compuestos inorgnicos de azufre. Algunas bacterias requieren compuestos orgnicos
de azufre, algunas son capaces de utilizar azufre elemental. El fsforo lo proporcionan
usualmente los fosfatos, por ejemplo sales de cido fosfrico.
Los organismos vivos requieren varios elementos metlicos como sodio, potasio, calcio,
magnesio, hierro, cobre y cobalto entre otros para su crecimiento normal. Las bacterias

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no son una excepcin. Las cantidades requeridas son usualmente simples vestigios y se
miden en partes por milln.
Las vitaminas son necesarias para los organismos vivos, la mayora de stas participan
en la formacin de sustancias que activan a las enzimas. Los animales, incluidos los
seres humanos, deben recibir estas sustancias en la dieta. Las bacterias muestran un
patrn variable en este aspecto de la nutricin aunque todas las bacterias requieren
vitaminas en sus procesos metablicos normales, algunas son capaces de sintetizar sus
requerimientos totales de vitaminas a partir de otros compuestos del medio. Otras no
crecern a menos que se les proporcione en el medio, una o ms vitaminas preformadas.
Todos los organismos requieren agua para sus funciones metablicas y para su
crecimiento. En el caso de las bacterias, todos los nutrientes deben estar en solucin
para que puedan penetrar en el organismo.
Los nutrientes que se utilizan dependen del tipo de bacteria. El siguiente cuadro
presenta un resumen segn sus requerimientos especficos:

Fuentes de:
Energa
Carbono
Nitrgeno

Azufre
Iones
inorgnicos
Sales

AUTTROFOS
luz
CO 2 , CO 3

HETERTROFOS

UTILIZACIN

Oxidacin, fermentacin
glucosa,
lactosa,
c.
pirvico, almidn, celulosa
peptonas,
extracto
de
levadura y carne

Sntesis
de
compuestos
carbonados
N 2 , NH3 , NO 2 , NO 3
Sntesis
de
compuestos
nitrogenados: aminocidos, bases
nitrogenadas, etc.
SO 4 , S, H2 S
aminocidos
azufrados: Sntesis de otros aminocidos
metionina, cistena y cistina azufrados y CoA
iones disueltos: Fe+2 , iones disueltos: Kg+, Mg+, Cofactores enzimticos
Fe+3 y Ca+2
Mn+, Na
Sulfatos (sntesis de a sulfurados); fosfatos (a Como sustancias
fosfatados); carbonatos (a carbonados y tampones); amortiguadoras de pH.
cloruros (equilibrio inico de Na K).

CULTIVO
Cultivo es el procedimiento a travs del cual se crean en el laboratorio de microbiologa
las condiciones ambientales adecuadas con el fin de promover el crecimiento de los
microorganismos.
Uno de los procedimientos ms importantes para identificarlos es observar su
crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. Este
material alimenticio en el cual crecen es el MEDIO DE CULTIVO.

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Conceptos de Medio de Cultivo.

Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros
componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los
microorganismos. Es decir, es un soporte que proporciona sustancias nutritivas que
permitan el desarrollo y reproduccin de microorganismos. La diversidad metablica de
los microorganismos es enorme, por ello, la variedad de medios de cultivo tambin lo
es, no existiendo un medio de cultivo universal adecuado para todos ellos.
El conocimiento de las necesidades nutritivas y fsicas de los microorganismos es
fundamental para seleccionar un medio de cultivo adecuado.
Los requisitos que debe reunir el cultivo de un microorganismo tienden a reproducir el
ambiente natural en el que se desarrollan.
Las caractersticas de los microorganismos a tener en cuenta al momento de preparar un
medio de cultivo adecuado para su desarrollo en el laboratorio son:

Tipo trfico: se refiere a los requerimientos de carbono y energa.

Tipo respiratorio: aerobios, anaerobios, anaerobios facultativos y microaerfilos.
Temperatura ptima de crecimiento
Rango de pH: en general el rango ptimo de pH

Un buen medio de cultivo es aquel que le provee a los microorganismos los nutrientes
indispensables en la concentracin adecuada, cantidad necesaria de sales y agua, que
tenga la consistencia y el pH adecuados, que sea estril y que no contenga sustancias
inhibidoras.
La adicin de elementos nutritivos en concentracin adecuada, depende del
conocimiento que se tenga de las condiciones del desarrollo en el hbitat natural.
La cantidad de sales y agua que se agregue a un medio de cultivo, se relaciona
directamente con el pH y la presin osmtica que se le quiera brindar a los
microorganismos.
En funcin de la consistencia se puede clasificar a los medio en lquidos, semislidos y
slidos. En el laboratorio, los medios de cultivo pueden presentarse en forma lquida, en
cuyo caso se los denomina caldos, o en forma slida si se le agrega agar.
En cuanto a la esterilizacin, este procedimiento garantiza la destruccin de todos los
microorganismos no deseados que se encuentran presentes durante la preparacin del
medio de cultivo. Si los componentes del medio son estables al calor se los lleva al
autoclave (121 C, 15 minutos). Si se requiere sangre u otros componentes inestables,
como antibiticos y compuestos fcilmente oxidables al calor, se los esteriliza por
separado por otros procedimientos y se lo agrega al medio que ha sido esterilizado
cuando se haya enfriado a 50 C.
En cuanto a los inhibidores, cabe aclarar que un compuesto puede actuar como inhibidor
para algunos microorganismos y no para otros.

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1.- Nutrientes medio de cultivo

a) Factores orgnicos de crecimiento

Los factores orgnicos de crecimiento son compuestos orgnicos especficos que se
requieren en muy pequeas cantidades por las bacterias hetertrofas y no pueden ser
sintetizadas por las clulas.
Estas sustancias normalmente son aportadas al medio de cultivo por el extracto
de levadura o por la sangre, e incluyen vitaminas, aminocidos, purinas y pirimidinas,
Algunos microorganismos son capaces de sintetizar estos compuestos, se
denominan prototrofos para diferenciarlos de los mutantes auxtrofos que requieren el
factor de crecimiento.

a.1) Vitaminas Fueron los primeros factores de crecimiento descubiertos. En los

organismos vivos, muchas vitaminas funcionan en forma de coenzimas por ejemplo el
cido nicotnico que es parte del coenzima NAD. Algunos microorganismos tienen
requerimientos vitamnicos muy complejos, mientras que otros slo necesitan algunas
vitaminas. Las bacterias del cido lctico Streptococcus y Lactobacillus, tienen unos
requerimientos vitamnicos muy complejos que incluso pueden superar a los del
hombre. La cobalamina (vitamina B12 ) es requerida por algas y bacterias acuticas. Sin
embargo, los hongos no requieren nunca vitamina B12 .
a.2) Aminocidos Muchos microorganismos requieren aminocidos especficos. La
incapacidad para sintetizar un aminocido est relacionada con la falta de enzimas
necesarias para su sntesis. Los aminocidos requeridos pueden ser suministrados como
aminocidos libres o incorporados en otros elementos.
La determinacin de los requerimientos para un aminocido en particular es complicada
por el hecho de que en ocasiones la presencia de un aminocido en exceso disminuye la
absorcin de otros que se requieren para el crecimiento. Este fenmeno se denomina
aminoacid imbalance.
a.3) Purinas y pirimidinas
Las purinas y pirimidinas, que son componentes
estructurales de los cidos nucleicos y coenzimas, son factores de crecimiento para
muchos microorganismos. Es imposible conocer la forma en que deben ser
suministrados a la clula.
Si se suministran como bases libres, deben convertirse en el interior de la clula en
nucletidos antes de poder ser utilizadas.
Normalmente los nucletidos no pueden ser utilizados como factores de crecimiento ya
que la presencia del grupo fosfato, produce la ionizacin de la molcula y se disminuye
la capacidad de penetracin en la clula.
a.4) Anillo porfirinico
La clorofila, citocromo y hemoglobina, todos contienen el
anillo porfirnico. El requerimiento de este anillo, explica porqu hay microorganismos
patgenos como Haemophilus influenzae que requieren cultivarse sobre medios que
contengan hemates (grupo hemo). Las bacterias que requieren el grupo hemo carecen
de la capacidad de sintetizar porfirinas y su crecimiento queda restringido a ambientes
donde existe sangre. Como este anillo es necesario para la sntesis de citocromo, el
aparato respiratorio de estas clulas se encuentra alterado en ausencia del grupo hemo.
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a.5) cidos grasos Las bacterias del rumen requieren ciertos factores de crecimiento
presentes en el rumen. Estos factores de crecimiento fueron identificados como cidos
grasos de 4- 6 tomos de carbono lineal o ramificado y que son solo factores de
crecimiento para las bacterias del rumen.

b) Suplementos
Algunos microorganismos son muy difciles de cultivar y deben agregarse a los medios
elementos que son denominados como suplementos como por ejemplo; Extracto de
levadura, peptonas y extracto de carne.
b.1) Extracto de levadura. Es un extracto de la hidrlisis cida o enzimtica de las
clulas de levadura, que han sido lisadas previamente por calor. Es una fuente rica en
vitamina B, contiene adems nitrgeno orgnico y compuestos carbonados. Se puede
adquirir comercialmente en forma de polvo.
b.2) Peptonas. Productos que resultan de la digestin de materiales proteicos, por
ejemplo carne, casena y gelatina. Existen disponibles en el comercio muchos tipos
diferentes de peptonas (dependiendo de la protena utilizada y del mtodo de digestin)
para su utilizacin en medios bacteriolgicos; las peptonas difieren en cuanto a su
capacidad de soportar el crecimiento de las bacterias.
Las peptonas son la principal fuente de nitrgeno orgnico; pueden contener adems
algunas vitaminas y a veces carbohidratos, dependiendo del material proteico digerido.
b.3) Extracto de carne. Es un extracto concentrado de los productos hidrosolubles de la
carne de buey. Es la fuente principal de carbohidratos, compuestos orgnicos de
nitrgeno, vitaminas hidrosolubles y sales.

c) Otros Requerimientos
Otros elementos necesarios para el crecimiento y que deben encontrarse presentes en los
medios de cultivos son: NaCl en cantidades del 0,5% para evitar fenmenos de lisis en
la clula bacteriana.
Todos los medios de cultivo deben ser hidratados con agua la cual debe ser
destilada para evitar la formacin de carbonato de calcio que enturbie el medio e
impida el crecimiento bacteriano.

2.-Estado medio de cultivo

a) Slidos: permiten visualizar las caractersticas macroscpicas de la(s)
colonia(s) y cuantificar su desarrollo. Fueron introducidos por R. Koch
(1881) y han representado un valioso aporte en bacteriologa, para obtener
cepas puras de microorganismos, lo cual facilita la clasificacin y
tipificacin bacteriana.

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b) Lquidos: son de mayor sensibilidad en el desarrollo de los microorganismos,

sin embargo se contaminan con mayor frecuencia. fueron los primeros
medios de cultivo usados y fueron ideados por L.Pasteur. En ellos el crecimiento microbiano est uniformemente disperso por todo el lquido.
c) Semislidos: permiten observar la movilidad de algunos microorganismos.

3.-Presentacin medio de cultivo

a)

b)

En placa: se usa slo para medios slidos. Su principal utilidad est en el

aislamiento primario, es decir la siembra de la muestra con obtencin de
colonias separadas (aisladas) para su posterior identificacin y sensibilidad.
En tubo: puede contener medio lquido, slido o semi-slido.

4.- Agentes Solificantes.

a) Agar-Agar. Es un carbohidrato complejo (polisacrido) que se obtiene de ciertas
algas marinas y que se encuentra constituido por agarosa y agaropectina.
El agar es insoluble en agua fra y soluble en agua caliente a una temperatura por sobre
los 45C. Funde a una temperatura entre 80 y 100C. Una vez fundido se mantiene
lquido hasta una temperatura de 44-45C.
El agar es muy poco txico. Tiene el inconveniente de que a pH cido no solidifica, por
lo cual es muy importante ajustar el pH del medio al cual se le ha agregado agar a un pH
= 7.
b) Gelatina. Se obtiene por hidrlisis del colgeno. Es insoluble en agua fra y soluble
en agua caliente. No es muy transparente. Lica a 28C y tiene el inconveniente de que
es fcilmente atacada por los microorganismos.
No se emplea generalmente como agente solidificante. Es empleada de preferencia en
las pruebas de identificacin bioqumica para las bacterias.
Silico gel. Es un gel inorgnico que se prepara con HCl y silicato de sodio. Tiene la
ventaja de solidificar a pH cido. Sirve para estudios de nutricin y para cultivar
microorganismos que degradan los otros agentes solidificantes. Se utiliza para aislar
microorganismos del suelo.
c)

5.- Clasificacin de medios de cultivo

a) Segn la fuente de nutrientes:
a.1. Natural: Son aquellos que existen como tales en la naturaleza, por ejemplo, papa,
huevos, leche, tierra, etc.

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a.2. Artificial: Estn compuestos de substancias que son manipuladas por el hombre en
el laboratorio.

b) Segn su composicin:
b.1. Medios sintticos o definidos: se le conoce su composicin qumica exacta.
Se usan para microorganismos a los que se les conoce sus requerimientos nutricionales.
Generalmente contienen: fuentes de carbono, como la glucosa; de nitrgeno, usualmente
de cloruro, sulfato o fosfato de amonio; y varias sales inorgnicas incluidas trazas de
metales.
Ejemplo: agar-almidn:

Almidn
NaCl
Agar
Agua Dest.

12,5 gr.
5,0 gr.
15,0 gr.
1,0 lt.

b.2. Medios complejos o no definidos: es aquel que tiene ingredientes de

composicin qumica desconocida o parcialmente conocida. Se usan para hacer crecer
microorganismos de difcil cultivo.
Ejemplos: agar sangre, agar yema de huevo, caldo lactosado, medio marino, agar
nutritivo.
Caldo nutritivo:
Extracto de carne
3 gr.
Peptona
5 gr.
Agua Destilada
1 lt.
c)

Segn su consistencia:
c.1. Medios lquidos: Ejemplos caldo nutritivo
c.2. Semislido:
Ejemplo caldo nutritivo, de la composicin descrita
anteriormente, ms 0,8 gr. de agar-agar por cada 100 ml de
medio.
c.3. Slido:
Ejemplos Agar nutritivo.

d) Segn su utilizacin:
d.1. Medios Selectivos:
Son medios que favorecen el crecimiento de determinados microorganismos. Es
un medio que ha sido modificado para incluir uno o ms agentes inhibitorios,
restringiendo el crecimiento de ciertas especies de organismos. Las sustancias
inhibitorias usadas son por lo general: antibiticos, colorantes, sales biliares para
enriquecer enterobacterias, cristal violeta que inhibe el crecimiento de bacterias Gram
positivas y permite el crecimiento de las Gram negativas, medio con 25% de NaCl para
enriquecer halfilas.
Otros ejemplos de medios selectivos son:
- Brillant green bile broth.
- Chapman, para desarrollo de Staphylococcus.

- MacConkey
- Baird-Parker medium.
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d.2. Medios de diagnstico o diferencial:

Contienen reactivos que diferencian entre los distintos tipos de bacterias, sirven
para una identificacin presuntiva o preliminar. Se usan para determinar propiedades
fisiolgicas y bioqumicas.
Ejemplos de este tipo de medio:
- Agar sangre.
- Agar leche.
- Agar yema de huevo.

- Agar citrato Simmons

- Agar gelatina.
- Agar almidn.

d.3. Medios de crecimiento o mantencin:

Tienen como objetivo preservar un stock de cultivo, con lo cual se tiene en el
laboratorio una cantidad de microorganismos viables.
Ejemplos de este tipo de medio:
- Agar nutritivo.
- Caldo peptonado.
- Medios de congelacin (se baja a la mitad los componentes
nutritivos del medio y se agrega glicerol para impedir la
formacin de cristales).

d.4. Medios mejorados:

Se obtienen aadiendo al medio corriente sustancias de mayor valor nutritivo que tiene
el efecto de proporcionar condiciones favorables para el cultivo de microorganismos
exigentes, por ejemplo: caldo cerebro corazn, agar sangre, etc.
El medio mejorado de uso ms corriente es el agar sangre.
Agar sangre. Puede utilizarse sangre recin extrada, desfibrinada o citratada. La
sangre no puede ser esterilizada, por lo que ha de ser extrada y aadida a los medios,
guardando las ms rigurosas condiciones de esterilidad.
Se extrae la sangre aspticamente, ya sea humana o de animal (cuy, conejo, etc.).
Se recibe en matraces estriles que contengan oxalato o citrato para que no se coagule, o
bien se desfibrina, agitndola con perlas de vidrio estriles.
Se mezcla la sangre con agar corriente previamente esterilizado y fundido y
enfriado a 50C, en proporcin a un tercio de sangre y dos tercios de agar nutritivo. Se
reparte en tubo o placas de Petri. Todas estas operaciones deben efectuarse al lado del
mechero Bunsen y alejadas de la corriente de aire para evitar contaminaciones.

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6.- Medios de cultivo para microorganismos anaerobios.

Los microorganismos anaerobios se pueden definir como bacterias que viven y
se reproducen slo en medios privados de oxgeno libre.
Los medios de cultivo para microorganismos anaerobios se componen de las
mismas sustancias nutritivas que utilizan los aerobios, pero es necesario privarlos de
oxgeno libre. Para esto se utilizan varios procedimientos que pueden agruparse en
procedimientos fsicos, qumicos y biolgicos.
Procedimientos fsicos.
medios.)

Expulsin del aire por ebullicin (regeneracin de los

Procedimientos qumicos. Se basan fundamentalmente en la utilizacin de

sustancias que poseen poder reductor por ser muy oxidables. Ejemplo Agar de Brewer
en el cual la sustancia reductora es el tioglicolato de sodio.
Procedimientos biolgicos. Estos procedimientos aprovechan la convivencia de
un microorganismo aerobio con un anaerobio estricto.
Entre los medios de cultivo especiales para anaerobios podemos citar: Agar de
Brewer, Caldo tioglicolato con agar (medio semislido), Caldo tioglicolato.

7.- Medios de cultivo para microorganismos marinos.

Para estudiar los microorganismos que forman la flora del agua de mar, la
espuma, las bacterias de peces, mariscos, etc., es conveniente utilizar medios de cultivo
similares en todo a los ya estudiados, pero preparados en base a agua de mar esterilizada
(reemplaza al agua destilada) y en el caso de medios a base de albminas animales,
slidos o lquidos, la carne o sus productos se reemplazan por carne de pescado o sus
derivados (harina, etc.).
Conviene estudiar la salinidad necesaria para el crecimiento de estos
microorganismos, el pH adecuado y la tensin de oxgeno y anhdrido carbnico u otros
gases para obtener el mejor desarrollo.
Existen medios de cultivo para microorganismos mariscos preparados como el
agar de Zobell.

8.- Indicadores de ph:

Los indicadores de PH son incorporados en algunos medios de cultivo y dan evidencia
visual de los cambios de PH que ocurren durante el crecimiento de las bacterias. Los
indicadores para este objetivo no debern ser txicos en la concentracin empleada.

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9.-Preparacion de medios de cultivo:

La preparacin de medios cultivos en microbiologa

implica los siguientes

pasos:
1.Pesar una cantidad especfica del medio de cultivo sobre papel aluminio,
teniendo la precaucin de no ensuciar la balanza, debido a que algunos compuestos son
muy higroscpicos los cuales se adhieren con gran facilidad a la superficie.
2.Posteriormente debe colocar el contenido pesado en un matraz erlenmeyer,
donde le aadir el volumen requerido segn las indicaciones y disuelva. Determine el
pH del medio lquido y ajuste al valor que sea ptimo para el tipo de bacterias que se va
a cultivar, generalmente se ajusta a pH=7.
3.Lugo caliente el medio al mechero hasta que hierva, teniendo la precaucin de
que no se adhiera o se pegue en el fondo del matraz. Hierva lentamente, ya que as
evitar perdidas del medio por derrame.
4.Si es necesario dosifique en tubos, cuidando de que estos estn correctamente
rotulados y cerrados (pueden ser tapas o algodn hidrfobo).
5.-

Finalmente esterilice el medio en el autoclave a 121 C, durante 15 minutos.

En base a lo ya estudiado en el prctico, complete el siguiente recuadro, clasificando el

medio de Cultivo.

Uso
Nombre del medio de cultivo Componentes General Selectivo Diferencial Complejo definido
Agar nutritivo

Agar MacConkey

Caldo cerebro- corazn

Agar Bair-Parker

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Siembra de microorganismos
Sembrar o inocular es introducir artificialmente una porcin de muestra (inculo) en un
medio adecuado, con el fin de iniciar un cultivo microbiano. Luego de sembrado, el
medio de cultivo se incuba a una temperatura adecuada para el crecimiento.
La siembra puede realizarse en medio lquido, slido o semislido, utilizando asa en
punta o loop, hisopo o pipeta estril.

Cultivo en medio lquido

Habitualmente se realiza en tubos o en matraces. El crecimiento se puede manifestar por
enturbiamiento, por formacin de velo o pelcula, o por sedimento.
Cultivo en medio slido
Puede ser en tubos o placas.
a) Tubos con agar inclinado. Para sembrarlos, se mueve el ansa o la punta suavemente
sobre la superficie del agar con un movimiento en zigzag desde el fondo hasta la parte
superior, cuidando de no daar el agar.
b) Tubos sin inclinar. Se siembran introduciendo una punta en el centro del agar.
Tambin se llama siembra por picadura.
c) Siembra en placas. Puede ser en superficie o incorporada.
En superficie

1) Se colocan 0.1 mL de la dilucin de la muestra con pipeta estril en el centro

de
la
placa,
y
se
distribuye
con
un
rastrillo
estril.
2) Se siembra con un ansa para aislar, como se explica ms adelante.
3) Se siembra con un hisopo.

Incorporada

Se coloca 1 mL de la muestra en una placa estril vaca, en el centro de la

misma. Sobre ella se agregan 20 mL de medio de cultivo fundido y
termostatizado a 45C; luego se agita la placa.

Las placas se incuban invertidas, ya que la alta concentracin de agua en el medio puede
provocar condensacin durante la incubacin y si cae sobre la superficie del agar, se
extiende dando un crecimiento confluente.
En medio slido cada clula viable dar origen a una colonia y por lo tanto la siembra
en placas se puede utilizar, no solo para cultivar microorganismos, sino adems para
contar y aislar.

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1) Siembra de material slido a medio lquido

Placa Petri o Tubo ensayo

Tubo de ensayo (con asa loop)

Matraz (con asa loop)

2) Siembra de material lquido a medio slido

Tubo de ensayo o Matraz
Tubo de ensayo (con asa loop)
Placa Petri ( con asa loop)
3) Siembra de material slido a medio slido
Tubo de ensayo o placa Petri Tubo de ensayo (con asa loop)
Placa Petri (con asa loop)
4) Siembra de material liquido a medio lquido
Tubo ensayo o matraz
Tubo ensayo (con asa loop o pipeta)
Matraz (con asa loop o pipeta)

Para realizar los procedimientos anteriormente sealados, siga correctamente las

instrucciones dadas por el profesor o el ayudante de la asignatura, quienes le explicaran
como proceder correctamente en este practico de siembra.
Siembra en anaerobiosis.
Se utilizan los medios para anaerobiosis que se han descrito en la gua de
prctico de medios de cultivos.
En medios slidos. Es necesario efectuar previamente la regeneracin de los
medios, calentndolos a la temperatura de ebullicin.
La siembra debe efectuarse cuando la temperatura haya descendido entre 45 y
50C antes que se solidifique el agar. Se utilizan tubos largos para anaerobiosis los
cuales se siembran conforme a las tcnicas estudiadas para siembras en medios
lquidos, pues el agar est lquido.
Una vez efectuada esta operacin se agita el tubo de agar entre ambas manos por
rotacin y se deja en posicin vertical dentro de un recipiente con agua fra para que se
solidifique rpidamente impidiendo que penetre oxgeno en l.
En medios lquidos. Esta siembra se efecta en la misma forma que hemos
efectuado para los aerobios.
En medios semislidos. Si la muestra es slida se utiliza es asa depositando el
inoculo en el fondo del tubo. Estos medios semislidos necesitan tambin ser
regenerados, aunque en su composicin lleven un reductor.

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