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casi
invariablemente
bsicamente
por
hidrlisis
que
experimentan
los
La regla
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En donde:
a = coeficiente de absorbancia (absortividad) las unidades dependen de las
unidades utilizadas para la determinacin de la concentracin.
b = longitud de la celda usualmente en centmetros.
c = concentracin de la muestra en las unidades apropiadas.
I
En esta prctica se emplear la tcnica colorimtrica de Nelson y Ting para
determinar glucosa, fructosa y sacarosa.
OBJETIVOS
El estudiante explicar por escrito el fundamento del mtodo empleado para
la determinacin de azcares en las muestras de frutas que se le asignarn.
El estudiante relacionar los contenidos de azcares determinados en las
muestras de diversos frutos.
El estudiante se concientizar del concepto y los instrumentos de medicin
utilizados en la espectrofotometra, y de la aplicacin de curvas estndar utilizando
el mtodo de Nelson y Ting.
MATERIAL
6 matraces volumtricos de 100 ml con tapn.
2 matraces volumtricos de 500 ml con tapn.
2 matraces volumtricos de 250 ml con tapn.
1 embudo de vidrio.
2 matraces Erlenmeyer de 125 ml.
6 pipetas de 10 ml.
2 pipetas de 1 ml.
2 pipetas de 5 ml.
2 vasos de precipitados de 250 ml.
1 bao Mara simple.
5 celdas de espectrofotmetro.
1 gradilla.
2 crculos de 10 cm de dimetro de papel filtro Whatman # 1.
Papel sanitario blanco (proporcionado por el estudiante).
Algodn o gasa .
1 cuchillo de cocina (proporcionado por el estudiante).
1 tabla para cortar la fruta (proporcionada por el estudiante).
Fruta: 3 ejemplares por especie por equipo. En el caso del meln con 1
ejemplar basta (proporcionados por el estudiante).
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EQUIPO:
1 extractor de jugos.
1 licuadora o mortero.
1 potencimetro.
1 bao Mara con control de temperatura y agitacin.
1 espectrofotmetro Spectronic 20' a 515 nm.
REACTIVOS
Solucin alcalina de Ferrocianuro (150 g/L).
Solucin de Arsenomolibdato (25 g/450mL de agua).
H2SO4 2N.
NaOH 10N, 1N y 0.1N.
HCl 1:1 (Vol/Vol).
Na2CO3 anhidro. (12.5 g/L)
Na2CO3 monohidratado. (14.3 g/L).
Tartrato de potasio (12.3 g/L).
NaHCO3 (10 g/L).
Na2SO4 anhidro disuelto en 35 ml de agua destilada.
CuSO4 5H2O 3.46g disueltos en 50 ml. de H2O.
Glucosa (300 g/ml).
MTODO
PREPARACIN DE REACTIVOS
Reactivo de Nelson A.- Disuelva 12.5 g Na2CO3 anhidro ( 14.3 g Na2CO3
H2O), 12.3 g de tartrato de potasio, 10 g de NaHCO 3 y 100 g de Na2SO4 anhidro en
350 ml de H2O y afore a 500 ml. Preparar 200mL para todo el grupo.
Reactivo de Nelson B.- Disuelva 7.5 g de CuSO 4 5H2O en 50 ml. de H 2O
y aada una gota de H2SO4. Preparar 100mL para todo el grupo
Reactivo Alcalino de Nelson.- Mezcle 25 ml del reactivo de Nelson A + 1.0
ml. del reactivo de Nelson B.
Curva de la Glucosa.- Elabore una solucin stock de glucosa en agua que
contenga 300 g/ml. Prepare una serie de diluciones desde 300 hasta 30 g/ml.
Reactivo de Arsenomolibdato.- Disuelva 25 g de (NH4)6Mo7O24 4H2O
(molibdato de amonio tetrahidratado) en 450 ml. de agua destilada (para todo el
grupo).
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G+F=S
G/Q + F = L
En donde:
G = Porcentaje de glucosa en la muestra.
F = Porcentaje de fructosa en la muestra.
S = Porcentaje de azcares reductores totales (Suma de G y F).
L = Porcentaje aparente de fructosa.
Q = Proporcin entre Kg y Kf (Kg/Kf)
En una mezcla de glucosa y fructosa se asume que ambos azcares
presentes son fructosa. La fructosa aparente L se calcula a partir de la frmula S
= K.A.D., sustituyendo L por S y K f por K. Se obtiene la siguiente frmula para el
porcentaje de glucosa en la muestra:
G = (S - L) X Q
Q-1
El cociente q/(Q-1), se utiliza como una constante en los clculos del valor
real de la glucosa. El valor real de la fructosa se obtiene por diferencia.
DETERMINACIN DE AZCARES TOTALES Y SACAROSA
Nota: Esta determinacin no se llevar a cabo en esta sesin de laboratorio)
La sacarosa de la muestra es invertida con el cido clorhdrico.
procedimiento se describe a continuacin:
El
1.- Se colocan 50ml. del jugo diluido en un vaso de precipitados de 150 ml. y se
aaden 10 ml. de cido clorhdrico (1:1).
2.- Se deja reposar esta mezcla durante 18 horas a temperatura ambiental.
3.- Se aaden 5 ml. de solucin de hidrxido de sodio 10N y los contenidos se
ajustan a un pH de entre 5 y 7 con una solucin de hidrxido de sodio 1N
mediante el uso de un potencimetro.
4.- Los contenidos se transfieren a un matraz volumtrico aforado de 100ml y se
afora con agua destilada.
5.- Se toma una alcuota de 1 ml de esta solucin y se pipetea en un matraz
volumtrico de 100 ml. y se sigue el procedimiento descrito para la determinacin
de azcares reductores totales.
6.- Se calcula la cantidad de sacarosa de la diferencia entre el contenido de
azcares reductores antes y despus de la inversin, multiplicada por el factor de
0.95.
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