8.

8 IMPORTANCIA DE CIZALLA EN LOS FERMENTADORES AGITADOS

Segn (Doran, 1995) La mezcla en los biorreactores debe proporcionar las condiciones de
cizalla necesaria para dispersar las burbujas, gotas y flculos de clulas. Puesto que las
acumulaciones de partculas pueden interferir negativamente en los
resultados del bioproceso; es necesario que el efecto de cizalla (fuerza de
corte), por medio del arrastre, permita la limpieza del medio donde est
actuando el microorganismo y se estn dando las reacciones. De esta
forma lograr que los componentes que interactan dentro del fermentador
trabajen con menores obstculos y el microorganismo consuma de manera
ms eficiente el sustrato.
Los diferentes tipos de clulas presentan
diferentes niveles de sensibilidad de cizalla; se conoce que los insectos, los
mamferos y las clulas vegetales son especialmente sensibles a las fuerzas
mecnicas. Los biorreactores usados para el cultivo de estas clulas deben
limitar la intensidad de cizalla a la vez que proporcionan una adecuada
mezcla y transferencia de materia. Actualmente, no se comprenden
totalmente los efectos de la cizalla sobre las clulas. La disgregacin de las
clulas es el resultado obvio de las altas fuerzas de cizalla aunque tambin
pueden presentarse otros fenmenos ms suaves. Las condiciones de
cizalla ptimas experimentadas por las clulas estn muy poco definidas
debido a la gran variedad que pueden existir en los recipientes agitados.

8.8.1 INTERACCIN ENTRE LAS CELULAS Y TURBULENCIAS

Los efectos hidrodinmicos se han estudiado principalmente con clulas
animales debido a que el dao de cizalla es un problema importante en
cultivos a gran escala. Muchas clulas animales utilizadas en bioprocesado
son fondos dependientes; es decir, las clulas deben estar unidas a una
superficie slida para sobrevivir. En los biorreactores, el rea superficial
necesaria para la fijacin de las clulas las proporcionan de manera muy
eficiente los slidos microportadores. Existen muchos beneficios asociados a los
microportadores, sin embargo, una desventaja es que las clulas fijadas a ellos no pueden
cambiar de posicin fcilmente en respuesta a las fuerzas de cizalla. Las interacciones entre
los microportadores y los remolimos en un flujo turbulento puede causar dao mecnico a
las clulas. (Doran, 1995). Esto se da a causa del movimiento hidrodinmico
producido en la agitacin, acompaada de la generacin de flujos
turbulentos que contienen remolinos, dentro de estos ltimos se da un alto

grado de interaccin entre clulas donde existe

desgastamiento y dao de las superficies de las clulas.

rozamiento

Ilustracin 1: trayectoria de los microportadores y zonas de alta cizalla

8.8.2 CIZALLA ENTRE LAS BURBUJAS

Cuando se inyecta un aire que contiene clulas sensibles a la cizalla pueden
intervenir diferentes mecanismos dainos. De experimentos realizados el
dao parece estar asociado en primer lugar con las burbujas que estallan
en la superficie del lquido. La rotura de la fina pelcula de la burbuja y el
rpido empuje desde la burbuja hacia arriba produce grandes fuerzas de
cizalla, capaces de daar ciertos tipos de clulas. Lo anterior es
denominado fenmeno de cavitacin, y no es conveniente
para el
biporocceso dado que a medida que van creciendo y estallando las
burbujas, estas aumentan la presin y la temperatura dentro del medio a
nivel molecular, por ende existe un dao directo a las clulas presentes en
el biorrector, causando daos en su estructura y funcionamiento. (Doran,
Principios de ingeniera de los bioprocesos, 1995)

8.9 ESTRS DEL MICROORGANISMO POR EL EFECTO DE CIZALLA.

Las principales funciones de agitacin y aireacin son mejorar la mezcla, la
transferencia de masa y calor en fermentadores. A pesar de un aumento de
la agitacin y la aireacin se pueden obtener mejores efectos de mezcla y
de transferencia de masa, el exceso en ellos podra resultar en estrs alto
de cizallamiento y a su vez conducir a muchos efectos negativos, tales
como: la rotura de las clulas, la vacuolizacin y la autolisis, y la
disminucin de la productividad de la enzima. Las condiciones de operacin
ptimas del proceso de fermentacin tambin dependen estrechamente a

los estados morfolgicos de las clulas, que a su vez se basan en la

resistencia del organismo a esfuerzo cortante. En general se cree que las
bacterias podan resistir ms la tensin de cizallamiento en comparacin con los
hongos, sin embargo, se proporciona poca informacin en la literatura (Min Kao, I Chen,
Chen Huang, Chi Chang, Chuan Liu, & Jen Tsai, 2006). Ejemplos de
microorganismos sensibles por el estrs de cizallamiento, para los que no
existen sistemas de cultivo especficos, se encuentran muchas bacterias y
hongos anaerobios, tales como basidiomicetos. Los microorganismos
muestran reacciones muy diferentes cuando se exponen a tensin de
cizallamiento. Algunos de ellos no se ven afectados por el estrs de cizalla
en absoluto, como la mayora de cepas Escherichiacoli , mientras que otros
muestran reacciones muy intensas, como las tasas de crecimiento mucho
ms lento o incluso la muerte del organismo. Esta es causada
principalmente por la tensin mecnica de fluidos del estallido de las
burbujas de gas o el estrs de corte directo por dispositivos de agitacin
Jonczyk, Takenberg, Hartwig, Beutel, Berger, & Scheper, 2013).
(Kao, 2007) Estudio el efecto de variables de operacin incluyendo el efecto
de cizalla, sobre la produccin de quitinasa a partir de Paenibacillus sp.
CHE-N1. Los efectos del estrs del microorganismo se pudieron observar
debido a los cambios en la actividad de quitinasa y el crecimiento celular a
medida que se aumentaban la velocidad de agitacin desde 100 hasta 300
rpm. La ausencia de oxigeno fue predominante a baja velocidad de
agitacin (100 rpm); mientras que a 300 rpm se alcanzaron los mayores
valores de estrs debido a la cizalla, y a causa de ello se obtuvieron los
valores ms bajos de actividad de quitinasa (U/ml) y crecimiento celular,
este ltimo efecto se vio claramente en imgenes de cromatografa en el
que previamente fueron teidas las clulas con color rojo y en las imgenes
su predominancia fue disminuyendo a medida que aumentaban las rpm. Por
otro lado, segn un estudio realizado por (Jonczyk, Takenberg, Hartwig, Beutel, Berger,
& Scheper, 2013) sobre el estrs de los microorganismos sensibles al efecto de cizalla en un
sistema de biorreactor de bolsa. En el cual se investig un biorreactor de bolsa desechable
desarrollado para el cultivo de clulas de mamferos para evaluar su potencial en el
esfuerzo cortante de las clulas anaerbicas sensibles ramulus Eubacterium y el esfuerzo
cortante de los basidiomicetos sensibles Flammuli navelutipes y sapidus Pleurotus. Todos
los cultivos se compararon con efectos de cizalla de cizalla provocados por biorreactores
con agitadores convencionales (STR). Se encontr un buen crecimiento de todos los
microorganismos investigados ,cultivados en el reactor bolsa. E. ramulus mostr tasas de
crecimiento de = 0,56 h -1 (bolsa) y = 0,53 h -1 (STR). Los resultados muestran
claramente que el sistema de reactor bolsa desechable puede ser recomendado para el
cultivo de microorganismos sensibles de estrs de cizallamiento. Incluso los cultivos

exigentes que desean estrictas condiciones anaerbicas, se llevaron a cabo con xito en el
modo por lotes y de alimentacin por lotes en el sistema de bolsa.

9. MEZCLADO
Segn (Doran, 1998) el mezclado es una operacin fsica que hace a el fluido ms
uniforme, eliminando gradientes de concentracin, temperaturas y otras propiedades. ste
se efecta por intercambio de material entre diferentes localizaciones para producir la
mezcla final de los componentes. Si un sistema se encuentra perfectamente mezclado existe
una distribucin homognea aleatoria de las propiedades del sistema.
El mezclado es una de las operaciones ms importantes en bioprocesado. Para crear las
condiciones ambientales ptimas para la fermentacin, los biorreactores deben
proporcionar a las clulas acceso a todos los sustratos, incluyendo el oxgeno en los
cultivos aerobios. No es suficiente con llenar el fermentador con el medio rico en
nutrientes, ya que a menos que el cultivo se encuentre bien mezclado se formaran zonas
sin nutrientes en aquellos puntos de mayor consumo por parte de las clulas.
Si un sistema est perfectamente mezclado, hay una distribucin homognea de las
propiedades del sistema. La mezcla es una de las operaciones ms importantes de
bioprocesamiento. La mezcla liquida eficiente es esencial en un biorreactor para mantener
no slo una concentracin de oxgeno disuelto uniforme, sino tambin una concentracin
uniforme del lquido. Para crear un entorno ptimo en el biorreactor, la agitacin es
necesaria para tener acceso a todos los sustratos incluyendo el oxgeno en el cultivo
aerbico de las clulas. Otro aspecto de un sistema de agitacin es la transferencia de calor
uniforme. La mayora de los biorreactores deben ser capaces de operar a una temperatura
uniforme constante. Un sistema de chaquetas para la refrigeracin, o un serpentn de
enfriamiento, que proporcione la transferencia de calor suficiente. Los objetivos de la
agitacin y el mezclado eficaz son hacer circular el fluido durante un tiempo suficiente,
para dispersar las burbujas de gas en el lquido, tener pequeas burbujas con alta rea
interfacial, y para mantener las condiciones uniformes para las operaciones de transferencia
de masa y calor.
9.1 EQUIPOS DE MEZCLA Y CARACTERISTICAS DE FUNCIONAMIENTO

La mezcla se realiza generalmente en tanque agitado, como el mostrado en la figura 18. Los
tanques agitados se construyen generalmente de forma cilndrica. Si es posible, la base del
tanque se redondea con el fin de eliminar las esquinas y cavidades donde las corrientes de
fluido no pueden penetrar y propiciar la formacin de regiones estancadas.
La mezcla se alcanza utilizando un rodete instalado sobre el tanque. Cuando se utilizan
fluidos newtonianos, la relacin entre el dimetro del tanque y la del rodete es normalmente
3:1 (Doran, Principios de ingeniera de los bioprocesos, 1995).

Figura 18. Configuracin tpica de un tanque agitado.

Fuente: (Doran, Principios de ingeniera de los bioprocesos, 1995).
9.1.1

CARACTERSTICAS DE SU FUNCIONAMIENTO:

El rodete se coloca generalmente en la parte inferior de un agitador mecnico situado en

el centro del tanque, aunque en estos casos pueden existir fugas si la junta entre el eje y
el suelo del tanque no es perfecta. El agitador se mueve por medio de un motor. El
efecto rotatorio del rodete consiste en bombear el lquido y crear un flujo regular. El
lquido es empujado fuera del rodete, circula a travs del reactor y peridicamente
retorna a la regin del rodete. Para que exista una mezcla eficaz con un solo rodete, la
profundidad del lquido en el tanque no debe ser superior a 1.0-1.25 veces el dimetro
del mismo (Doran, Principios de ingeniera de los bioprocesos, 1995).
Los deflectores, que son lminas verticales de metal unidas a la pared del tanque por
medio de unos corchetes reducen los vrtices del lquido. Para lquidos de baja
viscosidad, los deflectores se colocan perpendicularmente a la pared, tal como se
muestra en la figura 19 (a). Los deflectores tambin pueden montarse separados de la

pared a una distancia de 1/50 el dimetro del tanque o formando un ngulo, tal como se
muestra en la figura 3 (b) y (c). Estas disposiciones evitan la sedimentacin y la
formacin de zonas estancadas al lado de los deflectores durante la mezcla de
suspensiones viscosas de clulas (Doran, Principios de ingeniera de los bioprocesos,
1995).

Figura 19. Disposicin de los deflectores.

Fuente: (Doran, Principios de ingeniera de los bioprocesos, 1995)
En la figura 20, se muestran algunos diseos de rodetes aunque existen muchos ms.
Algunos rodetes presentan tambin palas planas; en otros como las hlices y tornillos
helicoidales, la pendiente de las palas individuales vara de forma continua. La eleccin del
rodete depende de varios factores, entre los que se destacan la viscosidad del lquido que se
va a mezclar y la sensibilidad del sistema a la cizalla mecnica. En la figura 5 indican los
intervalos de viscosidad recomendados para varios rodetes. Para lquidos de baja a media
viscosidad, se recomienda la utilizacin de hlices y turbinas de palas planas. El rodete ms
utilizado en la industria de la fermentacin es la turbina de discos con 6 palas planas
mostradas en la figura 4 (Doran, Principios de ingeniera de los bioprocesos, 1995).

Figura 20. Diseo de rodetes.

Fuente: (Doran, Principios de ingeniera de los bioprocesos, 1995)

Figura 21. Intervalos de viscosidad para diferentes rodetes.

Fuente: (Doran, Principios de ingeniera de los bioprocesos, 1995)
9.2 MECANISMOS DE MEZCLADO
En los tanques agitados se crean grandes corrientes de circulacin de lquido. Para que la
mezcla sea efectiva, el flujo impulsado por el rodete debe recorrer todo el recipiente en un

tiempo razonable todos estos factores son importantes en el mezclado de fluidos, los cuales
pueden describirse como una combinacin de tres procesos fsicos:
La Distribucin se denomina algunas veces MACROMEZCLA y la difusin
MICROMEZCLA. La Dispersin puede clasificarse como MICRO O MACROMEZCLA
dependiendo de la escala del movimiento del fluido. El proceso de rotura del flujo en
remolinos cada vez ms pequeos se denomina DISPERSION. Esta facilita una
transferencia ms rpida de materia a travs del recipiente. El grado de homogeneidad que
es posible alcanzar como resultado de la dispersin viene limitada por el tamao de los
remolinos ms pequeos que pueden formarse en un determinado fluido. (Doran, principios
de ingenieria de los bioprocesos, 1995)
De los procesos anteriormente mencionados, en el mezclado, la distribucin es muy
importante, pero es relativamente lento. En grandes tanques, el recorrido de circulacin es
grande y por tanto tambin el tiempo que tarda en recorrerlo. Esto, junto con la regularidad
del bombeo del fluido por el rodete, impide una mezcla rpida, por ello la distribucin a
menudo es la etapa ms lenta del proceso de mezclado. Por otro lado el proceso de rotura
del flujo en remolinos cada vez ms pequeos se denomina dispersin, la dispersin facilita
una trasferencia ms rpida de materia atraves del recipiente. El grado de homogeneidad
que es posible alcanzar como resultado de la dispersin viene limitada por el tamao de los
remolinos ms pequeos que puedan formarse en un determinado fluido. Este tamao viene
dado aproximadamente por la escala de turbulencia, :
3 1

(v ) 4
( )

Donde es la dimensin caracterstica de los remolinos ms pequeos, v es la viscosidad

cinemtica del fluido y la velocidad local de disipacin de energa por turbulencia es
igual a la potencia suministrada por el rodete. Dentro de los remolinos existe poca mezcla
ya que el flujo rotatorio interior se produce siguiendo unas lneas de rotacin, por lo tanto,
para alcanzar la mezcla a una escala menor que la de turbulencia debe existir difusin. La
difusin molecular se considera generalmente como un proceso lento, pero que en
pequeas distancias puede ser bastante rpido, tal es el caso de los fluidos de baja
viscosidad, que debido a la potencia suministrada provoca remolinos de 330 a 100 m, por
consiguiente la mezcla a escala molecular se produce simultneamente con las dems, en
tiempos aproximados de 1 segundo. (Doran, principios de ingenieria de los bioprocesos,
1995)
El tipo e flujo del fluido existente en un tanque que se encuentra agitado mediante un rodete
de flujo radial se muestra en la figura 1. Cerca del rodete existe una regin de alta
turbulencia donde las corrientes de fluido convergen e intercambian materia. En zonas

alejadas al rodete, el flujo es ms lento y casi laminar por lo que en estas regiones la
mezcla es menos intensa que el rodete.

Figura 23. Tipo de flujo desarrollado por un rodete de flujo radial situado en la parte
central del tanque
Fuente: (Doran, 1995)

9.3 POTENCIA NECESARIA PARA EL MEZCLADO

Generalmente, para mover los rodetes en los recipientes agitados se utiliza energa
elctrica. Para una determinada velocidad de agitacin, la potencia necesaria depende de la
resistencia ofrecida por el fluido a la rotacin del rodete. El consumo medio de potencia por
unidad de volumen en biorreactores industriales vara desde 10 KW m -3 para recipientes
pequeos (capacidad 0.1 m3) hasta 1-2 KW m-3 para recipientes grandes (capacidad 100
m3). El rozamiento producido en la caja de cambios del motor del agitador y las juntas
reducen la energa transmitida al fluido, por lo que la potencia elctrica consumida por los
motores de los agitadores es siempre mayor a la necesaria para la mezcla, y su magnitud
depende de la eficacia del mecanismo utilizado. Los costes energticos de operacin de los
agitadores en los biorreactores representan una parte importante de la economa del
proceso. A continuacin se muestran los directrices a seguir para calcular la potencia
necesaria para el mezclado.
9.3.1

FLUIDOS NEWTONIANOS SIN AEREACIN

La potencia de mezcla para fluidos no aireados depende de la velocidad del agitador, del
dimetro y geometra del rodete y de propiedades del fluido como la densidad y la
viscosidad. La relacin entre estas variables se expresa generalmente en forma de nmeros
adimensionales, como el nmero de Reynolds de rodete Re i y el nmero de potencia Np que
se define como:

N p=

P
N i3 D i5

Donde P es la potencia,

es la densidad del fluido, N la velocidad del agitador y D el

i
i

dimetro del rodete. La relacin entre Rei y Np se Ha determinado experimentalmente para

un amplio intervalo de configuraciones de rodete y tanques. Los resultados obtenidos con
cinco diseos de rodete: turbina Rushton, canalete, hlice marina, ancla y cinta helicoidal,
se muestran en las figuras 4 y 5. Una vez que se conoce el valor de N p, la potencia se
calcula a partir de la ecuacin:
P=N p N i3 D i5
Para un determinado rodete, la relacin general entre nmero de potencia y numero de
Reynolds depende del rgimen de flujo existente en el tanque. Pueden identificarse tres
regmenes de flujo diferentes:
Rgimen laminar: Este rgimen laminar corresponde a Re i<10 para muchos rodetes
aunque para aquellos agitadores con muy poca separacin de pared, como el mezclador
de ancla y el de cinta helicoidal, el flujo laminar persiste hasta Re i =100 o incluso
superiores, as:
N p

1
oP=k 1 N i2 Di3
i

Donde k1 es una constante de proporcionalidad. La potencia requerida para flujo laminar

es directamente proporcional a la viscosidad del fluido e independiente de la densidad.
Rgimen turbulento: El nmero de potencia en flujo turbulento es independiente del
nmero de Reynolds. Entonces:
,

P=N p N i D
Donde

Np

5
i

es un valor constante del nmero de potencia en el rgimen turbulento. El

rgimen turbulento se encuentra totalmente desarrollado a Rei>103o 104para la mayora de

los rodetes pequeos en recipientes con deflectores mientras que sin deflectores, el rgimen
turbulento no se desarrolla totalmente hasta Rei>105, incluso aunque se reduzca el valor de
,

Np

entre y 1/10 del valor obtenido con deflectores.

 Rgimen de transicin: La potencia requerida en este caso depende tanto de la densidad

como de la viscosidad del fluido, cabe resaltar que dicho rgimen se encuentra entre el
rgimen laminar y turbulento. El rgimen de flujo e intervalo de nmero de Reynolds
para el periodo de transicin depende de la geometra del sistema.
Existe una fuerte dependencia entre consumo de potencia y dimetro del agitador y, en
menor extensin, de su velocidad. Pequeos cambios en el tamao del rodete tienen un gran
efecto sobre la potencia requerida, como sera de esperar de una dependencia del dimetro
del rodete elevado al cubo o de orden quinto. En rgimen turbulento, un aumento del 10%
en la velocidad del agitador aumenta la potencia solo en un 30%. Adems la fuerza de
rozamiento y, por tanto la potencia necesaria para la agitacin, depende de la geometra del
rodete y de la configuracin del tanque.