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Ingenieria Genetica
Ingenieria Genetica
MANIPULACIN GENTICA
TECNOLOGA DEL ADN RECOMBINANTE
del
ADN
Si aplicamos estos mtodos y tcnicas a los seres vivos para obtener un producto o
servicio, hablamos de BIOTECNOLOGA, que ha experimentado una autntica revolucin
gracias a ellos. Por ejemplo, la insulina o la hormona del crecimiento que se inyectan los
diabticos hoy da es la humana, pero la fabrican bacterias ( E. coli), tambin se puede citar
muchas vacunas. Por tanto la Ingeniera Gentica se sita entre la Gentica Molecular y la
Biotecnologa. Es decir, para poder fabricar insulina con bacterias antes hay que manipular
el gen humano (localizarlo, cortarlo, clonarlo e insertarlo en la bacteria, es decir, hacer
ingeniera gentica).
Gentica
sirve
Molecular de base para la
Manipulacin
gentica
se aplica
en la
Biotecnologa
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etc. En 1995 sirve para exculpar a un jugador de futbol americano del asesinato de
su mujer.
1990 El mdico French Anderson inicia la primera terapia gnica en un nia con una
inmunodeficiencia. Comienza el P.G.H. de manera oficial.
1995 Secuenciacin del genoma de la levadura Sacharomyces cerevisiae
1997 Secuenciacin del genoma de la bacteria Escherichia coli
1998 Secuenciacin del genoma del gusano Caenorhabditis elegans, y de las
bacterias que producen el tifus y la tuberculosis.
2000 La empresa Celera Genomics anuncia que ha terminado la secuenciacin
completa dl genoma humano.
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Enzimas de retriccin
En 1970 se descubri que las bacterias tienen un sistema de defensa para eliminar
el ADN extrao que les infectaba. Eran unas enzimas que cortaban el ADN en unos puntos
concretos de la secuencia (dianas de restriccin, formadas por cuatro u ocho bases).
Se denominan enzimas de restriccin, restrictasas o endonucleasas de
restriccin. Reconocen puntos concretos del ADN (secuencias palindrmicas o capicas) y lo
cortan ah. Actan como tijeras moleculares. Se conocen ms de 100 distintas y cada una
corta en una secuencia especfica a cada hebra de ADN.
El corte puede ser de dos tipos y as se originan:
Enzima
Eco RI
Eco RII
Bam HI
Hae III
Hind III
Kpn I
Sma I
Bsu RI
Bacteria
Tipo de extremo
Escherichia coli
Escherichia coli
Bacillus amyloquefaciens
Haemophilus aegyptius
Haemophilus influenzae Rd
Klebsiella pneumoniae
Serratia marcenscens
Bacillus subtitlis
cohesivos
cohesivos
romos
cohesivos
cohesivos
romos
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Al cortar una molcula de ADN con distintas enzimas de restriccin se obtienen una
mezcla de fragmentos de distinto tamao. Los fragmentos obtenidos se pueden separar por
un mtodo llamado electroforesis, basndose en la capacidad de desplazamiento en un
campo elctrico segn su tamao y de carga elctrica. Las pequeas recorren una distancia
mayor y las largas menor. Los fragmentos se mueven sobre una lmina de gel de agarosa.
Despus se tien con un colorante y se obtienen una bandas. Cada banda corresponde a un
tamao medido en pares de bases.
El tamao de los fragmentos se suele expresar en KILOBASES (1000 nucletidos) si
son cadenas monocatenarias, o 1000 pares de bases si se habla de bicatenarias. Si el
tamao es inferior a 1000 bases se habla de bases o pares de bases.
Transcriptasa inversa
Tambin se puede obtener el fragmento de ADN, en este caso ADN estructural, es
decir, que codifica una protena o enzima, si se conoce su secuencia de aminocidos o la de
su ARNm (ste se sintetiza in vitro o se asla de la clula por hibridacin). Una vez
aislado, la transcriptasa inversa lee este ARNm y sintetiza se obtiene el ADN que lo
codifica, llamado ADNc o complementario, que es un ADN sin intrones. Este mtodo es muy
importante si el gen que se introduce es de eucariontes y se introduce en una bacteria. El
gen introducido no tiene intrones.
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De todos los clones obtenidos slo uno portar el gen deseado. Cmo se localiza o
se extrae de la biblioteca genmica?. Es decir, hay que localizar un fragmento de ADN,
que est dentro de una clula. El mtodo depende del vector utilizado:
La sonda lleva una molcula (reporter) que puede un istopo radioactivo o una sustancia
fluorescente. Sirve para verla por medio de autorradiografa (si lleva istopos) o con
microcosopio de florescencia si lleva sustancia fluorescente. VER PGINA 215 BRUO. La
sonda se aade al conjunto de clones y se espera que hibride.
Si se quiere clonar el gen de la insulina humana y luego secuenciarlo, la sonda se prepara a
partir de clulas del pncreas. Se asla de ellas el ARNm de la insulina, luego con la
transcriptasa inversa (y con nucletidos marcados con istopos radiactivos) se obtiene el
ADNc, que contiene nicamente secuencias codificantes, sin intrones porque procede del
ARNm maduro.
AMPLIFICACIN
DEL
ADN.
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partir de una cadena molde fabricar dos cadenas hijas idnticas. Para esto hay que
suministrarlas:
El mecanismo es simple: consiste en repetir ciclos de sntesis. Cada ciclo consta de:
1.
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