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Articulo - Biomasa Microbiana PDF
Articulo - Biomasa Microbiana PDF
ISSN 1726-2216
Depsito legal 2002-5474
Departamento Acadmico de Biologa, Universidad Nacional Agraria La Molina, Lima Per.
Presentado: 21/12/2007
Aceptado: 03/10/2008
Introduccin
Existen diversos parmetros considerados clave
para determinar la calidad del suelo, aquellos de
naturaleza fsica y fsico-qumica (estabilidad de
agregados, pH, conductividad elctrica), qumica
(parmetros nutricionales y fracciones de carbono),
como del tipo microbiolgico y bioqumico (carbono
de biomasa microbiana, respiracin microbiana o
diversas actividades enzimticas). El componente
microbiolgico puede servir como indicador del
estado general del suelo, pues una buena actividad
microbiana en suelo es reflejo de condiciones fsicoqumicas ptimas para el desarrollo de los procesos
metablicos de microorganismos (bacterias, hongos,
Humedad
(%)
5.0
10.0
15.0
18.0
Variables evaluadas
Temperatura
(oC)
pH
37.0
7.8
18.0
8.0
21.0
27.5
37.0
7.8
18.0
37.0
4.0
6.1
7.8
8.2
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Ecol. apl. Vol. 7 Nos 1 y 2, pp. 123-130
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Los tratamientos indicados se realizaron siete das
previos a la realizacin del ensayo, para la adecuacin
de la microflora a sus nuevas condiciones.
Se
determin
la
respiracin
de
los
microorganismos del suelo, mediante la cuantificacin
de la produccin de CO2 de acuerdo al mtodo
descrito por Anderson (1982).
La actividad
deshidrogenasa en suelos, determinada por reduccin
de sales tetrazolium de acuerdo al mtodo descrito por
Casida (1977) y modificado por Roberge (1978) y
recuento de bacterias y de hongos en suelo. Adems
de manera paralela a los ensayos, se realizaron anlisis
de humedad gravimtrica y pH del suelo.
Cuantificacin de la produccin de dixido de carbono
Para los ensayos de respiracin, cada sistema
estuvo conformado por un recipiente plstico de 250 g
de capacidad, con 25 g de suelo tamizado (peso
hmedo), al cual se aadi glucosa en solucin al 25
%; luego de mezclar cuidadosamente, se introdujo un
pequeo vial conteniendo una solucin NaOH 1 N,
inmediatamente el sistema fue cerrado y sellado. Del
mismo modo se instal un recipiente vaco que sirvi
como blanco. Los sistemas de cada tratamiento, junto
con el blanco, fueron incubados a 37 C por 24 horas.
El CO2 producto de la respiracin microbiana fue
absorbido por la solucin de NaOH con formacin de
Na2CO3. El NaOH remanente o no combinado se
valor con HCl. Cumplido el periodo de incubacin,
la solucin del vial (NaOH no combinado), fue
titulada en presencia de BaCl2, que precipita el
carbonato formado y fenolftalena.
Los resultados fueron calculados haciendo uso de
las siguientes frmulas:
V NaOH convertido en Na2CO3 (mL) = gasto
HCl blanco (mL) gasto HCl tratamiento (mL)
CO2 (mg) = V NaOH convertido en Na2CO3
(mL) x Normalidad HCl x 22
Determinacin de la actividad deshidrogenasa
En forma paralela, la actividad deshidrogenasa, fue
determinada por reduccin de sales tetrazolium, su
extraccin y cuantificacin espectrofotomtrica de
acuerdo al mtodo descrito por Casida (1977) y
modificado por Roberge (1978) en la utilizacin de
etanol como extrayente.
Se tomaron 20 g de suelo tamizado (peso hmedo)
que fueron mezclados con 0.2 g de carbonato de
calcio, CaCO3, de esta mezcla se pesaron 2 g en cada
uno de 2 frascos estriles color mbar con cierre
hermtico que fueron incubados a 28C hasta el
anlisis.
Para la instalacin del ensayo, se aadi solucin
de extracto de levadura al 0.1% esterilizada por
autoclavado y solucin de cloruro de trifenil
tetrazolium (TTC) al 3% esterilizada por filtracin a
cada uno de los sistemas; excepto para el suelo blanco,
al cual se aadi agua destilada estril en lugar de
adicionarle la solucin de TTC.
Tras el
homogeneizado, cerrado de los frascos y sellado con
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HUMEDAD
5.0 %
10.0 %
15.0 %
18.0 %
CO2
0.007
0.071c
0.097d
0.038b
a
(mg CO2g-1h-1)
DHA
116.0
131.96b 153.16c 173.09d
(g formazn g-1(24h)-1)
0a
Aerobios mesfilos
viables
16.03
16.11
17.42
17.89
(Ln (UFCg-1))
Mohos y levaduras
10.91
11.09
11.08
11.20
(Ln (UFCg-1))
a,b,c,d
En cada fila, tratamientos seguidos por diferentes letras indican
la existencia de diferencias significativas de acuerdo a la prueba de
diferencias de pares de medias de Tukey (P=0.05).
Produccin de CO2
0.10
0.08
5%
0.06
10%
0.04
15%
18%
0.02
0.00
18 (%)
humedad
DHA
g formazn g-1
(24 h)-1
200
150
5%
100
10%
15%
50
18%
0
humedad (%)
Figura 1.
Efecto de diferentes porcentajes de
humedad en la produccin de CO2 y actividad
deshidrogenasa (DHA) a nivel de laboratorio.
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Tabla 3. Efecto de diferentes temperaturas en la
produccin de CO2, actividad deshidrogenasa,
microorganismos aerobios mesfilos viables y
mohos y levaduras a nivel de laboratorio.
ACTIVIDAD
MICROBIANA
TEMPERATURA (C)
8.0
21.0
27.5
37.0
CO2
0.021
0.066
0.140
0.128
(mg CO2g-1h-1)
DHA
48.13 b
80.79 c
156.78 d
(g formazn 0.169 a
g-1(24h)-1)
Aerobios
mesfilos
16.03
16.11
17.42
17.89
viables
(Ln (UFCg-1))
Mohos
y
levaduras
10.91
11.09
11.08
11.20
(Ln (UFCg-1))
a,b,c,d
En cada fila, tratamientos seguidos por diferentes letras
indican la existencia de diferencias significativas de acuerdo
a la prueba de comparaciones mltiples de Kruskal Wallis
(P=0.05).
Produccin de CO2
0.15
0.12
8.00
0.09
21.00
0.06
27.50
0.03
37.00
0.00
1
tem peratura (C)
g formazn g-1
(24 h)-1
DHA
150
120
8.00
90
21.00
60
27.50
30
37.00
0
8
temperatura (C)
127
Produccin de CO2
0.06
4.00
0.04
6.10
7.80
0.02
8.20
0.00
pH
8.2
CO2
0.055 a
0.054 a
0.048 a 0.052 a
(mg CO2g-1h-1)
DHA
8.10 a 45.31 b 171.19 d 106.40 c
(g formazn g-124h-1)
Aerobios mesfilos
viables
(Ln(UFCg-1))
13.51
14.78
14.78
13.71
Mohos y levaduras
10.87
11.12
10.90
10.62
(Ln(UFCg-1))
a,b,c,d
En cada fila, tratamientos seguidos por diferentes letras indican
la existencia de diferencias significativas de acuerdo a la prueba de
comparaciones mltiples de Kruskal Wallis (P=0.05).
200
4.00
150
(24 h)
6.1
-1
4.0
g formazn g-1
ACTIVIDAD
MICROBIANA
DHA
6.10
100
7.80
50
8.20
0
pH
128
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Conclusiones
1. La
actividad
microbiana
mejora
significativamente con el incremento de la
humedad.
Se encontr la mayor tasa de
produccin de CO2 y actividad deshidrogenasa a
un porcentaje de humedad de 18.0 % en suelo
[0.097 mg CO2g-1h-1 y 173.09 g formazng1
(24h)-1].
2. La temperatura afecta significativamente la
actividad microbiana del suelo; encontrndose
que la temperatura de 27.5 C fue ptima para la
produccin de CO2 [0.140 mg CO2g-1h-1] y 37.0
C para la actividad deshidrogenasa [156.78 g
formazng-1(24h)-1].
3. El pH del suelo tambin result ser un factor
limitante para la actividad microbiana. A pH 7.8
se registr la mayor actividad deshidrogenasa
[171.19 g formazng-1(24h)-1], descendiendo
significativamente a valores de pH 4.0, 6.1 y 8.2.
Agradecimientos
Agradecemos al CONCYTEC - PROCYT 207 2005 y al Laboratorio de Ecologa Microbiana y
Biotecnologa
Marino
TabussoUNALM
(Subcuenta Biologa 111 de la Fundacin para el
Desarrollo Agrario). Al Programa de Leguminosas de
la Facultad de Agronoma de la UNALM y al profesor
Mg. Sc. Abelardo Caldern del Laboratorio de
Fisiologa Vegetal por las facilidades prestadas.
Literatura citada
Aguilera M., Borie G., Rokov P. & Peirano P. 1988.
Bioqumica de suelos derivados de cenizas volcnicas.
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Laboratorio de Ecologa Microbiana y Biotecnologa Marino Tabusso. Universidad Nacional Agraria La
Molina. 2005. Av. La Molina s/n. Lima 12 - Per. dzuniga@lamolina.edu.pe
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