Manual de prcticas de Bioqumica vegetal

Agronoma

Por:
MsC. Marcela Uribe Lastra

Corporacin Universitaria Santa Rosa de cabal,

UNISARC
2011

PRESENTACIN

La enseanza de las ciencias naturales pretende dar unas bases cientficas que le permitan
a los estudiantes enlazar los conceptos tericos con el quehacer diario, para lograr esto se
requiere de herramientas metodolgicas que permitan el acercamiento entre la teora y la
prctica.
El objetivo principal de este manual es describir los protocolos de las prcticas de
laboratorio de Bioqumica vegetal, de una manera simple, para los estudiantes de
Agronoma, con el fin de incentivarlos hacia el estudio de las ciencia bsicas de un modo
prctico y sencillo y que incentive en estos el inters natural que permita enlazar tanto la
biologa como la qumica, dos ciencias indispensables en el entendimiento de el
funcionamiento de la vida.

Marcela Uribe Lastra

Qumico MsC

REGLAS DE COMPORTAMIENTO Y SEGURIDAD EN EL LABORATORIO

En esta introduccin se pretende que los estudiantes tomen contacto con el laboratorio,
para lo cual se indican las normas generales de comportamiento en el mismo, reglas de
seguridad y normas generales para la realizacin de las prcticas.
Normas generales de comportamiento
1. El estudiante debe leer y estudiar con anticipacin las experiencias que se
realizaran en el laboratorio, para lograr esto es importante la elaboracin del preinforme.
2. Se deber utilizar vestimenta apropiada para realizar trabajos de laboratorio y
cabello recogido (bata preferentemente de algodn y de mangas largas, zapatos
cerrados, evitando el uso de accesorios colgantes).
3. El estudiante debe tener la gua de la prctica y un cuaderno donde hacer las
anotaciones.
4. Durante el desarrollo de las prcticas no se podr salir del laboratorio sin
consultarle al profesor.
5. No se debern realizar pruebas diferentes a las indicadas en la gua, deben
ceirse a los procedimientos descritos en la misma
Reglas de seguridad
1. En el laboratorio no est permitido comer, beber o fumar.
2. Es imprescindible mantener el orden y la limpieza. Cada persona es responsable
directa de la zona que le ha sido asignada y de todos los lugares comunes.
3. No se permitir pipetear con la boca
4. Se tomaran especiales precauciones la trabajar con cidos, bases o sustancias
peligrosas para evitar accidentes.
5. Si fuera necesario calentar el contenido de un tubo de ensayo a la llama, se har
con el tubo algo inclinado y con la boca del mismo dirigida hacia un lugar donde
no se encuentre ninguna persona.
6. Los residuos lquidos se vertern en las pilas del fregadero y los slidos se
depositaran en los recipientes dispuestos para tal fin.
7. Si se produce algn accidente, avisar rpidamente al profesor.

ELABORACION DE UN INFORME DE LABORATORIO (TIPO ARTCULO

CIENTIFICO)
1. Titulo: Debe ser el mismo de la gua de laboratorio.
2. Autores: Nombres y apellidos de los integrantes del grupo de laboratorio, especificar
en pie de pgina datos como la carrera que estudia, el semestre que cursa y el correo
electrnico.
Introduccin: Consiste en una revisin sobre el tema tratado en el laboratorio y debe
estar igualmente relacionada con los objetivos de la prctica. Debe ser breve, mximo de
media pgina. No pude ser la misma que aparece en la gua.
4. Materiales y mtodos: Consiste en contar en forma organizada el procedimiento que
usted realiz durante la prctica, por lo tanto deben estar escritos en pasado. Los
materiales (reactivos, instrumentos, muestras, entre otros) se van nombrando a medida
que el mtodo se describe, por lo tanto no se deben separar los materiales de los
mtodos. Abstngase de hacer comentarios como: la profesora nos entreg la
monitora dijo
5. Resultados y discusin: Corresponde al reporte y anlisis de las observaciones que
usted hizo durante el laboratorio. Es la parte ms importante del informe. Para ello usted
deba apoyarse en la bibliografa tratando de dar una explicacin lgica a lo observado en
la prctica. La bibliografa utilizada debe ir reportada en el texto por ejemplo si usted
extrae un prrafo del libro de Villee, al final de este usted debe poner entre parntesis el
autor y el ao de la siguiente forma: (Villee, 2001). Solo deben ir aqu estos datos, el
nombre de libro, la editorial, las pginas y la dems informacin van en la bibliografa.
Cuando se trata de dos autores debe ir los dos por ejemplo (Jensen y Salisbury, 1994)
cuando son ms de dos autores la referencia se hace as: (Alberts et al., 1996)
Se debe analizar cada uno de los resultados. Sus figuras y tablas deben estar enumeradas,
por lo que usted debe citarlas a la hora de hacer el anlisis.
6. Conclusiones: Son frases cortas que se refieren a sus resultados y discusin, por lo
que deben ser redactadas con sus propias palabras. No se salga del contexto.
7. Bibliografa: Debe hacerse de la siguiente manera: Apellido de cada autor, seguido
por las iniciales del nombre. Luego el ttulo del libro del artculo, luego el ao de
publicacin, la edicin, la editorial, el lugar de publicacin y las pginas consultadas.
Ejemplo: Villee C.A. 2004. Biologa, Octava edicin.
NOTA: Es importante que el formato del documento siga las norma ICONTEC y sea en
dos columnas

1. RECONOCIMIENTO DE LOS CARBOHIDRATOS

INTRODUCCION
Los carbohidratos constituyen la mayor parte de la materia orgnica de la Tierra a causa
de sus variadas funciones en todos los seres vivos. En primer lugar, los carbohidratos
sirven como almacn o transferencia de energa, son combustibles e intermediarios
metablicos, en general, son sustancias de reserva y estructurales. El almidn en las
plantas y el glucgeno en los animales son dos polisacridos que rpidamente pueden
movilizarse para liberar glucosa, el combustible primordial para generar energa. En
segundo lugar, los azcares ribosa y desoxirribosa forman parte de la estructura del ARN
y del ADN. En tercer lugar, los polisacridos son los elementos estructurales de las
paredes celulares de bacterias y plantas, y del exoesqueleto de los artrpodos y de
crustceos. De hecho, la celulosa, el principal componente de las paredes celulares de las
plantas, es el compuesto orgnico ms abundante de la biosfera. En cuarto lugar, los
carbohidratos estn unidos a muchas protenas, lpidos y metabolitos secundarios.
Unidades de azcar se encuentran unidas a las anticianidinas para poder translocarse a
travs del floema de los vegetales y proporcionar la coloracin a flores y algunos frutos.
Clasificacin de los carbohidratos
Monosacridos

Oligosacridos

Polisacridos

Pentosas:
xilosa, arabinosa, ribosa

Disacridos:
lactosa, sacarosa, maltosa

Homopolisacridos: almidn,
glucgeno, celulosa

Hexosas:
aldohexosas:

Trisacridos: rafinosa

Heteropolisacridos:
hemicelulosa, pectinas

Glucosa, galactosa
Cetohexosas: fructosa

Clasificacin en funcin de la distribucin de los carbohidratos en la naturaleza

En animales

Reserva energtica: glucgeno

En cidos nucleicos: D-ribosa
Azcar de la sangre: D-glucosa
Azcar de la leche: lactosa
Azcares de los antgenos de los
grupos sanguneos: A, B, O

En plantas

Reserva energtica: almidn, inulina y hemicelulosa

Producto de la fotosntesis: D-glucosa
Productos de degradacin: gomas y muclagos.
Productos varios: glucsidos de metabolitos secundarios
En cidos nucleicos: D-ribosa
Elicitores procedentes de patgenos o clula husped:
oligosacarinas

OBJETIVOS

Caracterizar cualitativamente los carbohidratos de acuerdo con su reactividad en

presencia de reactivos especficos

MATERIALES Y REACTIVOS

Tubos de ensayo
Pinzas para tubo de ensayo
Gradillas
Vasos de precipitados
Mechero, trpode y malla
Pipetas graduadas
Reactivo de Fehling

Reactivo de Tollens
Reactivo de Benedict
Lugol
Solucin de glucosa 0,1 M
Solucin de fructosa 0,1 M
Solucin de sacarosa 0,1 M
Solucin de almidn 0,1 M

PROCEDIMIENTO
Pruebas para azcares reductores:
Prueba de Fehling
Mezcle en un beaker 4 ml de reactivo de Fehling A con 4 ml de reactivo de Fehling B,
agite, en 4 tubos de ensayo ponga 1 ml de las soluciones de carbohidratos a evaluar y
aada a cada uno 2 ml de la mezcla de Fehling A y B, caliente los tubos de ensayo en
bao mara durante cinco minutos y observe.
Prueba de Tollens
Ponga en diferentes tubos de ensayo 2 ml de las soluciones de los carbohidratos a
evaluar, aada 1 ml de reactivo de Tollens, agite y caliente en bao mara durante 10
minutos, observe cambios de color.
Prueba de Benedict
Ponga en los tubos de ensayo 2 ml del reactivo de Benedict, luego agregue las soluciones
de los carbohidratos a evaluar, agite y ponga en bao mara durante 5 minutos y observe
cambios de color.
Prueba para polisacridos
Prueba de yodo
Ponga en diferentes tubos de ensayo 2 ml de las soluciones de los carbohidratos a
evaluar, aada a cada uno 5 gotas de solucin de lugol, agite y observe cambios de color.

CUESTIONARIO
1. Qu son los azcares reductores y no reductores mencione 3 de cada uno?
2. Defina y dibuje las estructuras qumicas de la glucosa, la fructosa, la sacarosa y la
celulosa
3. Investigue los componentes de los reactivos a utilizar en la prctica: Fehling A ,
Fehling B, Tollens y Benedict
4. Investigue los mecanismos de reaccin de las pruebas de Fehling, Tollens,
benedict y la prueba de yodo.
5. Qu aplicaciones prcticas tienen estas pruebas?
6. Cul es la importancia energtica del almidon?
7. Elabore una tabla resumen donde sern registrados los resultados obtenidos en
cada una de las pruebas para su posterior anlisis.

BIBLIOGRAFIA
Plummer, D. 1985. Bioqumica Prctica. 5 Edicin. Editorial McGraw Hill Latinoamericana
S.A.. Bogot. 225.
VARGAS, W.1985 Fundamento de Ciencia Alimentaria. 2 edicin. Universidad Nacional
de Colombia.
VERA J.A. 1990. Gua para el laboratorio de Qumica de Alimentos. Unidad universitaria
del Sur de Bogot.

2. PROPIEDADES DE LOS LPIDOS

INTRODUCCIN
Los lpidos constituyen un grupo qumicamente diverso de compuestos cuya caracterstica
comn y definitoria es su insolubilidad en agua. Las funciones biolgicas de los lpidos son
igualmente diversas. En muchos organismos las grasas y los aceites son las formas
principales de almacenamiento energtico, mientras que los fosfolpidos y los esteroles
constituyen la masa de las membranas biolgicas. Otros lpidos, an estando presentes en
cantidades relativamente pequeas, juegan papeles cruciales como agentes
emulsionantes, mensajeros intracelulares y transportadores.
Las grasas reaccionan en caliente con el hidrxido sdico o potsico descomponindose en
los dos elementos que la forman: glicerina y los cidos grasos. Estos se combinan con los
iones sodio o potasio del hidrxido para dar jabones, que son en definitiva las sales
sdicas o potsicas de los cidos grasos. A este proceso se le conoce como saponificacin
y puede representarse mediante la siguiente reaccin:

A parte de la saponificacin, otra caracterstica de las grasas es que son insolubles en

agua. Cuando se agitan fuertemente en ella se dividen en pequesimas gotitas formando
una "emulsin" de aspecto lechoso, que es transitoria, pues desaparece en reposo, por
reagrupacin de las gotitas de grasa en una capa que por su menor densidad se sita
sobre la de agua. Por el contrario, las grasas son solubles en los llamados disolventes
orgnicos como el ter, benceno, xilol, cloroformo, etc.
Las molculas de agua se unen entre s gracias a las cargas positivas y negativas de
oxgenos e hidrgenos respectivamente que se atraen formando grupos OH. En los lpidos
no existen estos grupos, pues estn formados bsicamente por C y H, y por esto mismo
no son miscibles en agua.
Por otro lado, es pertinente definir una molcula tensoactiva. Esta se caracteriza por tener
una cabeza hidroflica y una cola hidrofbica. En el caso de los jabones y detergentes, las

molculas tensoactivas son sus iones carboxilados RCCO. Por otro lado, las fuerzas de
tensin superficial son aquellas que tienden a disminuir la superficie libre del lquido que
se forma entre el agua y el aire. Durante el lavado de grasas, los jabones y detergentes
disminuyen esta tensin superficial rodeando la grasa, orientando su extremo hidroflico
hacia el agua.
OBJETIVOS

Determinar la solubilidad de los lpidos en diferentes en solventes polares y

apolares.
Analizar evaluar las diferentes variables correlacionadas con el proceso de
saponificacin.

MATERIALES Y REACTIVOS

Acetona
Cloroformo
Etanol
ter de petrleo
Hidrxido de sodio al 30%
Metanol
NaCl

Vasos de precipitado de 250 ml

Varilla de agitacin
Plancha de calentamiento
Pipetas graduadas de 5 y 10 ml
Tubos de ensayo
Gradilla
Aceite vegetal

PROCEDIMIENTO
Prueba de solubilidad de lpidos
Enumere 5 tubos de ensayo y adicineles lo siguiente:
-

Tubo
Tubo
Tubo
Tubo
Tubo

1:
2:
3:
4:
5:

1ml
1ml
1ml
1ml
1ml

de
de
de
de
de

agua destilada
acetona
etanol
cloroformo
ter

A continuacin agrguele a cada uno de ellos una gota de aceite vegetal agite
vigorosamente y anote sus observaciones.
Reaccin de saponificacin:
Transfiera 12ml de aceite de origen vegetal (girasol, oliva, soya,) a un beaker de 150 ml y
adicione 15 ml de una solucin de NaOH al 30% y 5 ml de metanol. Agite la mezcla y
caliente con llama moderada.
Contine el calentamiento de la mezcla, hasta cuando esta ebulla. Mantenga el volumen
de la solucin constante mediante la adicin, cuando sea necesario, de una mezcla de
agua metanol (1:1).

La muestra NO debe ebullir hasta la sequedad. Agite continuamente para evitar que el
material se adhiera a las paredes del recipiente. Si el material se adhiere a las paredes del
beaker, debe devolverse a la solucin con ayuda del agitador. Mientras la saponificacin
continua, prepare una solucin salina concentrada (100gr de NaCl en 300 ml de agua,
filtrar el exceso de NaCl).
Una vez la saponificacin se ha completado (despus de 1 hora aproximadamente)
transfiera la mezcla caliente, con agitacin, al beaker que contiene la solucin de NaCl
concentrada. Agite la mezcla vigorosamente por unos minutos y deje reposar toda la
noche.
CUESTIONARIO
1. Disee una tabla para registrar los datos de la prueba de solubilidad, teniendo en
cuenta que el aceite puede ser soluble, parcialmente soluble insoluble en los
diferentes solventes probados.
2. Mediante un diagrama explique de que depende la solubilidad de los lpidos
3. Qu es el ndice de saponificacin, qu importancia tiene y como se determina?
4. Porque la temperatura de reaccin de la saponificacin debe ser baja?
5. Qu es el efecto de salado? Por qu se separa el jabn mediante ste proceso?
6. A que se debe la accin limpiadora de los jabones y detergentes
BIBLIOGRAFA
Hart H., Hart D.J, Craine L.E. Qumica Orgnica. Novena edicin. Editorial Mc Graw Hill.
Mxico. 1995.
Kent V. Jabones y detergentes Revista de divulgacin de I.E.S. N17, 2002, Madrid.
Vargas, W.1985. Fundamento de Ciencia Alimentaria. 2 edicin. Universidad Nacional
de Colombia. Bogot
White A. Principios de Bioqumica. Segunda edicin. Editorial Mac Graw Hill. 1983. Espaa.

3. ACTIVIDAD ENZIMATICA

INTRODUCCION
Las enzimas son catalizadores biolgicos que aceleran las reacciones metablicas de los
seres vivos. Resulta, por lo menos en lo que concierne su parte proteica, de una sntesis
proteica a nivel celular. Existe al menos una enzima diferente por reaccin catalizada, lo
que representa miles de enzimas en un mismo organismo. Las hay extracelulares e
intracelulares.
En cuanto a la catlisis enzimtica, esta se da por la formacin de un sitio activo. Este sitio
es una regin privilegiada que interacta con substratos que a su vez se transforman en
productos. El sitio activo est constituido por aminocidos de 4 tipos: de contacto,
auxiliares, colaboradores y no colaboradores. Son los grupos funcionales radicales de los
aminocidos los que intervienen directamente en la catlisis. Su participacin se debe a su
capacidad para transferir electrones (carcter nucleoflico) y protones (carcter cidobsico).
La estructura terciaria es primordial para la catlisis. Permite la formacin del sitio activo
ya que aproxima los aminocidos que lo constituyen. Esta conformacin juega a la vez un
rol importante en la proteccin del sitio activo, y se adapta con exactitud al substrato.
La mayora de las enzimas son de naturaleza proteica y estn sujetas a el fenmeno de la
desnaturalizacin, si la forma de la enzima es alterada por algn factor externo (por
ejemplo, aplicndole calor, cidos o lcalis), no es capaz de cumplir su funcin celular.
La reaccin enzimtica in vivo o in Vitro puede inhibirse utilizando inhibidores que pueden
ser o no ser anlogos estructurales de los verdaderos substratos de la enzima. De
acuerdo a la complejidad de los complejos que forman en presencia de la enzima y/o del
substrato, y de la modificacin cintica que generen, los inhibidores son calificados como
competitivos, incompetitivos, no competitivos o mixtos. En presencia de una enzima (E) y
su sustrato (S), un inhibidor (I) puede formar complejos binarios complejos EI o ternarios
ESI. Solo el complejo ES es productivo.
Cuando el inhibidor se fija a la enzima libre formando el complejo EI se habla de inhibicin
competitiva. Cuando se fija sobre el complejo ES es incompetitivo. Cuando se fija con
afinidades diferentes a E y a ES es mixto y cuando lo hace con la misma afinidad por
ambos es no competitivo.
OBJETIVOS

Conocer la actividad de la catalasa en tejidos vegetales y animales

Evidenciar la hidrlisis del almidn por accin de la amilasa presente en la saliva
Evidenciar la hidrlisis de la sacarosa por accin de la glucosidasa de las levaduras
Demostrar la presencia y definir el modo de accin de otros sistemas enzimticos
tales como polifenoloxidasas.

MATERIALES Y REACTIVOS

Tubos de ensayo
Vasos de precipitado de 250 ml
Gradilla
Plancha de calentamiento
Pinzas para tubo de ensayo
Pipetas graduadas de 2, 5 y 10 ml
Caja de petri
Balanza
Solucin de almidn
Reactivos de Fehling A y B

Lugol
Metabisulfito de sodio 1%
Zanahoria
Hgado
Manzana
Rbano
Levadura
Acido clorhdrico

PROCEDIMIENTO
Presencia de catalasa en tejidos animales y vegetales
Corte dos trozos de zanahoria y dos trozos de hgado introduzca cada muestra en un tubo de
ensayo, ponga 3 ml de agua destilada y ponga a hervir un tubo con zanahoria y otro tubo con
hgado en un bao mara durante 15 minutos, pasado este tiempo deje enfriar el tubo, retire el
agua y adicione 10 gotas de perxido de hidrgeno (H2O2) a cada tubo, observe y registre lo
observado en la siguiente tabla:
Tabla 1.Accin de la catalasa
Hgado hervido
Hgado sin hervir
Zanahoria hervida
Zanahoria sin hervir

Reaccin con el H2O2

Hidrlisis del almidn por accin de la amilasa

Marque 6 tubos de ensayo y realice las siguientes preparaciones:
-

Tubos 1 y 2: 2 ml de solucin de almidn

Tubos 3 y 4: 2 ml se solucin de almidn y 1 ml de saliva
Tubos 5 y 6: 2 ml de solucin de almidn y 1,5 ml de HCl

Deje los tubos en reposo durante 30 minutos y adicione a los tubos 1,3 y 5 reactivo de Fehling A
y B previamente mezclados y a los tubos 2,4 y 6 lugol. Reporte las observaciones en la siguiente
tabla:
Tabla 2. Hidrlisis del almidn
Lugol
Tubo 1
Tubo 2
Tubo 3

Felhing

Tubo 4
Tubo 5
Tubo 6
Hidrlisis de la sacarosa por la glucosidasa de las levaduras
Disuelva 2 gr de levadura en 20 ml de agua destilada, deje reposar esta mezcla durante 15
minutos, filtre la mezcla y el liquido resultante es el extracto de lavadura.
Prepare los siguientes tubos:
Tubo A: 1 gr de sacarosa ms 5 ml de agua y agitar
Tubo B: 1 r de sacarosa mas 5 ml de agua mas 3 ml de extracto de levadura y agitar
Adicione a cada tubo una reaccin de Fehling y anote los resultados.
Accin de las polifenol-oxidasas
Corte 12 tiras delgadas de manzana y rbano de aproximadamente 5cm, raspando los bordes
para destruir clulas del tejido. A continuacin, hierva en un bao mara la mitad de los trozos
de manzana y rbano.
Sobre una caja de Petri ponga 2 trozos de manzana y rbano sin hervir, y sobre otra ponga 2
trozos de cada uno pero hervidos.
Enseguida, sumerja 2 trozos de manzana y rbano sin hervir en un tubo de ensayo con solucin
de metabisulfito sdico. Haga lo mismo con 2 trozos de manzana y rbano hervidos.
CUESTIONARIO
1. Investigue las enzimas encontradas normalmente en los vegetales y en los tejidos
animales
2. Qu tiene que ver la desnaturalizacin de las protenas con esta prctica? En que
pruebas se puede evidenciar la desnaturalizacin de las enzimas
3. Mediante un diagrama explique cmo acta la glucosidasa de las levaduras sobre la
sacarosa
4. Investigue que es el pardeamiento enzimtico
5. Qumicamente qu es el metabisulfito de sodio y que efecto tiene sobre las polifenol
oxidasas? Qu aplicaciones industriales tiene este compuesto?
BIBLIOGRAFIA
Fersht, A. 1998. Structure and Mechanism in Protein Science: A Guide to Enzyme Catalysis and
Protein Folding. W. H. Freeman. ISBN 0-7167-3268-8
Athel C. 2004.Fundamentals of Enzyme Kinetics. (3rd edition), Portland Press (), ISBN 1-85578158-1.

4. FOTOSINTESIS
INTRODUCCION
La fotosntesis es un proceso metablico que realizan las plantas, las cianobacterias y algunos
protistas. En los organismos eucariotes se realiza en los cloroplastos. La reaccin general de la
fotosntesis es la siguiente:
Energa solar + 6 H2O + 6 CO2

C6H12O6 + 6 O2

Energa

La fotosntesis no es un proceso simple y consta de mltiples etapas. Las primeras etapas se

conocen como reacciones lumnicas y se encargan de convertir la energa solar en energa
qumica produciendo oxgeno como producto de desecho, se dan en las membranas de los
tilacoides. Las segundas reacciones se conocen como Ciclo de Calvin (o reacciones de
oscuridad) y producen molculas de azcar utilizando el CO2 y los productos de alto contenido
energtico de las reacciones luminosas, estas se llevan a cabo en el estroma.
Con esta prctica se pretende un acercamiento al complejo e importante proceso de la
fotosntesis, para ello se realizaran diferentes procedimientos, empezando por la identificacin
de los cloroplastos en clulas vegetales vivas mediante el uso del microscopio, seguida de una
identificacin de los pigmentos fotosintticos mediante una tcnica de separacin llamada
cromatografa y terminando con la medicin de la tasa fotosinttica mediante un ensayo de
discos flotantes cuyo principio se explica a continuacin.
Los discos de hoja normalmente flotan. Cuando los espacios de aire se infiltran con una
solucin, la densidad de la hoja se incrementa y los discos se precipitan. La solucin de
infiltracin incluye una pequea cantidad de bicarbonato de sodio. Los iones del bicarbonato
sirven como fuente de carbono para la fotosntesis (Figura 1). Durante el proceso de la
fotosntesis se libera oxgeno del interior de la hoja, cambiando as, que el disco flote. La
respiracin celular por su parte consume oxgeno y se da al mismo tiempo que la fotosntesis, la
velocidad que se demoran los discos precipitados en flotar es una medida indirecta de la tasa
neta de fotosntesis.

Figura 1. Esquema general del experimento de discos flotantes

OBJETIVOS

Identificar los cloroplastos en una clula vegetal

Comprobar la presencia de clorofila mediante cromatografa en papel
Reconocer y comprobar el fenmeno de la fotosntesis
Medir la tasa fotosinttica

MATERIALES Y REACTIVOS

Microscopio
Porta objetos y cubre objetos
Vasos de precipitados de 250 ml
Mortero con pistilo
Pipetas graduadas de 2, 5 y 10 ml
Gotero
Papel filtro
Plancha de calentamiento
Tubo capilar
Regla
Elodea
Solucin de bicarbonato de sodio 2%

Etanol 95%
Acetona
Cloroformo
Jeringa plstica nueva desechable de
10 ml (sin aguja)
Jabn lquido
Hojas de espinaca frescas
Perforadora de un hoyo
3 vasos de precipitado de 250 ml
Cronmetro
Fuente de luz

PROCEDIMIENTO
Identificacin de cloroplastos
Corte una hoja de elodea pngala en el portaobjetos y agregue una gota de agua, luego
cbrala con el cubre objetos y observe en el microscopio con los objetivos de 10 y 40X,
dibuje lo observado, exponga la hoja a una fuente de luz artificial o natural y observe la
ciclosis de los cloroplastos al interior de la clula.
Identificacin de clorofila por cromatografa
1. En un vaso de precipitado de 250ml ponga etanol hasta alcanzar un centmetro de
profundidad y cbralo con un vidrio reloj para crear una atmosfera alcohlica en el
interior.
2. Corte hojas de espinaca y pngalas en el mortero adicione 5 ml de acetona y macere
hasta tener una mezcla homognea.
3. Filtre la mezcla anterior usando una gasa o muselina para obtener el lquido.
4. Recorte un pedazo de papel filtro de 2 cm de ancho por 10 cm de largo, marque con
un lpiz dos lneas paralelas a cada borde
5. Con un tubo capilar ponga la muestra en una de las lneas marcadas (Figura 2)
6. Introduzca el papel filtro con la muestra hacia abajo dentro del vaso de precipitado
con alcohol, evitando tocar las paredes del vaso y procurando que la muestra no entre
en contacto con el solvente.
7. Haga que el papel quede en forma vertical
8. Deje correr por absorcin el solvente sobre el papel filtro hasta que alcance la lnea
superior
9. Retire el papel y deje secar a temperatura ambiente
10. Calcule el Rf para cada pigmento separado

Papel filtro
Lneas de lpiz

Muestra

Solvente
Figura 2. Montaje para cromatografa en papel

Ensayo del disco flotante para comprobar la fotosntesis

1. Disponga en un vaso de precipitado 20 ml de una solucin de bicarbonato de sodio al
0.2 %. En otro vaso de precipitado disponga 20 ml de agua destilada, este vaso ser
utilizado como CONTROL del experimento.
2. Adicione 5 ml de jabn lquido al vaso con la solucin de bicarbonato. El jabn lquido
humedecer la superficie hidrofbica de la hoja de espinaca, permitiendo que las
soluciones penetren el interior de los tejidos.
3. Corte con un sacabocados 10 o ms discos uniformes de hoja de espinaca fresca para
cada ensayo (10 para el vaso con bicarbonato) 10 o ms para el Vaso CONTROL
(Evite discos con venas centrales) (Figura 3A).
4. Seleccione los discos de hojas remueva el pistn de la jeringa y coloque los discos de
hoja dentro de la jeringa, deber incorporar nuevamente el pistn cuidando de no
daar los discos de hoja. Empuje suavemente el pistn hasta dejar solo un pequeo
volumen de aire para los discos de hoja (< 10%) entre el extremo de la jeringa y la
barrera de goma del pistn (Figura 3B).
5. Succione un pequeo volumen de bicarbonato de sodio y resuspenda all los discos de
hoja (Figura 3C).
6. Ponga su dedo ndice en la abertura de la jeringa y hale el pistn, de esta forma
crear vaco el cual deber conservar por 10 segundos. As pues, el bicarbonato de
sodio se infiltrar en los espacios de aire de la hoja. Repita este procedimiento unas 2
3 veces. (Figura 3D)
7. Coloque los discos y la solucin dentro de un vaso precipitado, y adicione 10 ml en el
fondo del vaso de una solucin de bicarbonato de sodio.
8. Para el tratamiento control infiltre los discos solo con agua y jabn lquido. NO
adicione bicarbonato.
9. Coloque ambos tratamientos, previamente marcados, con una fuente de luz y
empiece a contabilizar el tiempo. Despus de cada minuto cuente el nmero de discos
que flotan. Contine el conteo hasta que todos los discos floten.
10. Diligencie la tabla 1

A
B

D
E

Figura 3. Procedimiento discos flotantes de hojas

Tabla 1. Coleccin de datos y anlisis
Minutos

Discos que han flotado

Observaciones

Con estos datos es muy importante identificar, el punto donde el 50% de los discos flotan,
este trmino se denomina ET50 (Steucek, et. al., 1985) realice una grfica, donde en el
eje de X disponga tiempo en minutos y en el eje de la Y nmero de discos que flotan (Ver
Figura 4).

CUESTIONARIO
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.

Dibuje un cloroplasto con sus partes

Cul es el principio de la cromatografa?
Qu es el Rf y como se calcula?
Qu tipo de pigmentos fotosintticos se encuentran en los tejidos vegetales y que
colores los representan en la cromatografa en papel?
Qu relacin existe entre el ET50 y el tiempo?
Qu factores podran influir en la tasa fotosinttica? Explique.
Por qu es importante establecer un experimento control?
Por qu es importante estudiar la tasa fotosinttica en vegetales?

BIBLIOGRAFIA
Steucek, Guy L. Robert J. Hill and Class/Summer 1982. 1985. Photosynthesis I: An Assay
Utilizing Leaf Disks. The American Biology Teacher, 47(2):96-99.
Rukes, Kari L. and Timothy J.Mulkey. 1994. Measurement on the Effects of Light Quality
and Other Factors on the Rate of Photosynthesis. Bioscene, 20(3): 7-11.
http://www.acube.org/volume_20/v20-3p7-11.pdf.
Greenler, John. 1990. Exploring Photosynthesis with Fast Plants. WisconsinFast Plant
Notes, 4(1): 4-5. http://www.fastplants.org/pdf/activities/exploring_photosynthesis.pdf
Richard, David S. Measure of Photosynthetic Rate
http://www.susqu.edu/FacStaff/r/richard/photosynthlab.html

In

Spinach

Leaf

Disks

5. RESPIRACION CELULAR
INTRODUCCIN
La respiracin celular se asocia siempre a la toma de O2 y la degradacin de glucosa para
formar CO2, H2O y energa, pero en realidad este proceso solo corresponde al tipo de
respiracin aerobia que bien no poseen algunas bacterias y levaduras.
Podramos dividir la respiracin aerobia en tres pasos principales:
1. La gluclisis, que degrada la glucosa en cido pirvico y que permite formar ATP.
2. El ciclo de Krebs, del cual se desprende CO2 y unas molculas altamente
energticas como son el ATP, el NADH y el FADH2.
3. La cadena transportadora de electrones, en la cual el O2 se comporta como aceptor
final y se asiste a la formacin de H2O y de ATP.
Este tipo de respiracin es un proceso altamente energtico y mucho ms complejo que la
respiracin anaerobia. Dentro de la diversa gama de seres vivos existentes, algunos tienen
respiracin aerobia, otros son estrictamente anaerobios y otros tienen la facultad de
realizar ambos tipos de respiracin, razn por la cual reciben el nombre de facultativos.
Estos ltimos, ante la ausencia de oxgeno pasan de tener respiracin aerobia y anaerobia
mediante el proceso de fermentacin.
La fermentacin puede ser de dos tipos: lctica o alcohlica. En la primera el cido
pirvico es transformado en cido lctico, mientras que en la segunda es transformado en
etanol. Cabe anotar tambin que durante la fermentacin alcohlica se forma CO2 como
producto de desecho.
El etanol resultante de una fermentacin alcohlica se emplea en la elaboracin de
algunas bebidas alcohlicas, tales como el vino, la cerveza, etc, Aunque en la actualidad
se empieza a sintetizar tambin etanol mediante la fermentacin a nivel industrial a gran
escala para ser empleado como biocombustible.
Para separar el etanol del resto de la mezcla de fermentacin se emplea la destilacin, la
cual es el proceso de separar, mediante evaporizacin y condensacin, los diferentes
componentes lquidos slidos disueltos en lquidos o gases licuados de una mezcla,
aprovechando los diferentes puntos de ebullicin de cada una de las sustancias ya que el
punto de ebullicin es una propiedad intensiva de cada sustancia, es decir, no vara en
funcin de la masa o el volumen.
OBJETIVOS

Verificar el desarrollo de la fermentacin en vino

Aprender el manejo de equipo y las tcnicas de laboratorio empleadas para
purificar compuestos orgnicos mediante la destilacin simple.
Entender los aspectos tericos acerca de la destilacin simple y la obtencin de
alcohol etlico por fermentacin.

MATERIALES

Zumo de fruta
2 botellas de vidrio con tapa
Estufa
Erlenmeyer de 100 mL
Frasco lavador
Perlas de ebullicin
Baln de destilacin
Condensador recto
Termmetro

Plancha de calentamiento
Balanza
Soporte universal
Pinza para condensador y baln
de destilacin
Pinza de madera
Probeta de 250 mL
Picnmetro

PROCEDIMIENTO
Fabricacin del vino
Extraiga el zumo de aproximadamente un kilo de uvas, puede ser en licuadora o
manualmente, retire las cascaras y las semillas, filtrando con un colador, divida la
cantidad de zumo obtenido en dos, una mitad hirvala durante 5 minutos y la otra djela
cruda, embselas en dos recipientes de vidrio bien marcarlos y cirrelos bien. Djelos
reposar una semana.
Pasado este periodo completar la siguiente tabla:
Zumo hervido

Zumo no hervido

Presencia de burbujas
Grado de turbidez
Olor
Presencia de bacterias
Destilacin simple:
Transcurrido el t iempo recomendado para la fermentacin, decante
cuidadosament e el lquido a un baln de destilacin de 1 L; de manera que
no pase el residuo de levadura. Deje resbalar al fondo del baln 2 3
esferas pequeas de vidrio o trozos d e porcelana para evitar
sobrecalentamientos y as regular la ebullicin.
Monte el conjunto ilustrado en la figura No. 1, tomando las siguientes precauciones: El
conjunto no debe quedar tensionado para evitar rupturas, la parte superior del bulbo del
termmetro debe quedar a la altura del desprendimiento del tubo lateral del baln de
destilacin (ver parte superior derecha de la figura 1); el agua debe circular en el
refrigerante de manera que entre por la parte inferior y salga por la superior.

A continuacin caliente el baln de destilacin hasta que llegue al punto de

ebullicin del agua (aprox. 94 C). Anote la temperatura a la cual ocurri
la destilacin.
Recoja una fraccin de destilado, con ayuda de una probeta y determine su densidad con
ayuda de un picnmetro. Consulte los contenidos alcohlicos en peso y volumen segn la
densidad en el AOAC Oficial Methods of Anlisis.

Figura 1. Montaje de destilacin simple

Una vez realizado el montaje y cuando se hayan destilado aproximadamente 30 ml de
etanol proceda a determinar el porcentaje de etanol de la siguiente manera:
Primero halle la densidad del alcohol destilado usando un picnmetro

Densidad del alcohol = peso del alcohol

Volumen de alcohol

Luego

Hallar el % de etanol, segn la densidad en la tabla del

CUESTIONARIO
1. En cul de los dos zumos se presentara fermentacin y por qu?

2. Por qu razn los recipientes del experimento deben permanecer cerrados todo el
tiempo?
3. Qu tipo de fermentacin se espera que ocurra en esta prctica? Sustente su
respuesta
4. Escriba la reaccin de fermentacin de glucosa por levaduras
5. Cul es el propsito de destilar el producto de la fermentacin?
6. Qu tipo de levadura es utilizada para fabricar cerveza?
BIBLIOGRAFIA
DE LA TORRE, G., MORENO, P. 1.995.Qumica Orgnica. Vol 2. Unisur. Santa F de
Bogot.
GMEZ, M.J.1985. Qumica Orgnica. 1 Edicin. Universidad Nacional de Colombia.
Bogot.