Mtodos diagnsticos

en
Gentica Clnica

Dra. Norma Elena de Len Ojeda

MsC. Mayra Hernndez Iglesias
Lic. Lourdes Marrn Portales
MsC. Marta Mara Acosta Sabats

Dermatoglifos
Grabado en la piel. Harold Cummins ( 1926)

La evidencia ms antigua que se conoce de las huellas

digitopalmares fue encontrada en una cueva aborigen de
Nueva Escocia.
Durante siglos los chinos utilizaron la impresin de las
huellas como identificacin personal para legalizar
transacciones comerciales.
La quiromancia fue la primera referencia al examen
sistemtico de la mano y sus configuraciones, su prctica
en China e India se remonta a los albores del siglo IV a.c.

Aplicaciones de los Dermatoglifos

Medicina Forense: En dactiloscopia para la
identificacin personal.
Antropologa Fsica: Para el estudio de marcadores
dermatoglficos en poblaciones humanas.
Estudio de gemelos: Como elemento de ayuda en la
determinacin de la cigocidad gemelar.
Paternidad: Como recurso excluyente o ms probable
en una relacin de parentesco de primer grado.

En gentica mdica son empleados

especficamente en el estudio de:

Anomalas y variantes dermatoglficas.

Enfermedades monognicas.
Enfermedades multifactoriales.

Tcnica de obtencin del dermatoglifo

Materiales
Tinta

Rodillo
Lmina de cristal
Papel
Lpiz
Lupa
Microscopio estereoscpico

Huella digitopalmar

Crestas drmicas

Nomenclatura
Trirradio: Sistema de crestas que confluyen en
un punto

Dedos:

Bucle ulnar
(U)

Bucle radial
(R)

Vorticilo
(W)

Arco
(A)

Nomenclatura (cont.)
Areas palmares
Tenar
Hipotenar
Espacios Interdigitales
Pliegues de flexin palmares

rea Tenar
Figuras verdaderas

Bucle
proximal

Figura
compuesta

Bucle
distal

Vorticilo

rea Tenar
Figuras no verdaderas

Campo abierto

Vestigio

rea Hipotenar
Figuras verdaderas

Bucle
radial

Bucle
carpal

Bucle
ulnar

Vorticilo

rea Hipotenar
Figuras no verdaderas

Arco
ulnar

Arco
carpal

Arco
radial

Espacios interdigitales
Figuras verdaderas

Bucle

FiguraD

Vorticilo

Lneas principales: A, B, C y D.

Constituyen el radiante mayor

de cada trirradio subdigital.
Su salida de la palma se
designa como tipo modal de
lnea principal (A, B, C, D).

Parmetros cuantitativos.

ndice
de
Walker

ngulo
atd

Conteo de
crestas ab,
bc y cd.

ndice de
lneas
principales

Pliegues de flexin palmares

Distal
Transverso
Proximal

Surco
simiano

Lnea
de
Sydney

Informe dermatoglfico
Dedos:
1 2 3
W R U

4
U

5
U

IW= 12,3% t
atd= 40
Area tenar= 0/0
Area hipotenar = Au
Espacios Interdigitales
I2=0 I3=L I4=0
Pliegues de flexin palmares
y digitales = n/s
Conclusiones:
Dentro de lmites normales.

Mano control

Sndromes
con
patrones
dermatoglifcos
Alteraciones dermatoglficas
en
Sndromes Genticos
I- Craneosinostosis
II- Extremidades con/sin
defectos faciales
III- Secuencias disruptivas
IV- Cardiopatas congnitas
V-Displasias neuroectodrmicas

Continuacin

VI- Baja talla con/sin displasia esqueltica

VII- S. Sobrecrecimiento con defectos asociados
VIII- S. Craneodigitales
IX- S. Cromosmicos

CROMOSOMAS HUMANOS

Tcnicas para el estudio de los cromosomas

humanos.

Tcnicas para el estudio de los

cromosomas
humanos.
Tipos de cromosomas.
Cariotipo.
Obtencin de cromosomas.

Tipos de cromosomas. Cariotipo.

Cromatina sexual. Cuerpo Barr y cuerpo Y.
Obtencin de cromosomas.
Cromatina sexual. Cuerpo Barr .

Tcnicas para el estudio de los cromosomas

humanos.

Citogentica
Tipos de cromosomas. Cariotipo.
Obtencin de cromosomas.

Ciencia que estudia los

Cromatina sexual. Cuerpo Barr y cuerpo Y.
cromosomas y el proceso de
divisin celular

Tcnicas para el estudio de los cromosomas

humanos.

Obtencin de cromosomas humanos

Tipos de
de cromosomas.
Toma
muestra porCariotipo.
puncin venosa
0C
Cultivo
de
sangre
en
incubadora
a
37
Obtencin de cromosomas.
durante 72 horas
Cromatina sexual. Cuerpo Barr y cuerpo Y.
Medio de cultivo
Fitohemaglutinina
Colchicina o Colcemid
Solucin hipotnica
Fijacin

Tcnicas para el estudio de los cromosomas

humanos.

Tipos de Cromosomas

Metac
ntricos:
Centrmeros
en posicin medial
Tipos
de cromosomas.
Cariotipo.
del cromosoma, definiendo brazo corto (p) y brazo
Obtencin de cromosomas.
largo (q)
Cromatina
sexual. Cuerpo
y cuerpo
Y.
Submetac
ntricos
: CentrBarr
mero
desplazado
de la
posicin medial.
Acrocntricos: Centrmero casi terminal y se
define en el brazo corto (p) con tallos y satlites

Tcnicas para el estudio de los cromosomas

humanos.

Clasificacin de los cromosomas

Grupo
A:cromosomas.
pares 1 - 3 Cariotipo.
Tipos de
Grupo
B: pares 4 - 5
Obtencin de cromosomas.
Grupo C: pares 6 - 12 (incluyendo el X)
Cromatina
sexual.13
Cuerpo
Grupo
D: pares
- 15 Barr y cuerpo Y.
Grupo E: pares 16 - 18
Grupo F: pares 19 - 20
Grupo G: pares 21 - 22 (incluyendo el Y)

Tcnicas para el estudio de los cromosomas

humanos.

Definicin de Banda
Tipos de cromosomas. Cariotipo.
Es
una parte del cromosoma que se distingue
Obtencin de
claramente
decromosomas.
su segmento adyacente mediante
una
apariencia
ms
oscura
clara
Cromatina
sexual.
Cuerpo
Barry ms
cuerpo
Y.

Tcnicas para el estudio de los cromosomas

humanos.

Tipos de cromosomas. Cariotipo.

Obtencin de cromosomas.
Cromatina sexual. Cuerpo Barr y cuerpo Y.

Tcnicas para el estudio de los cromosomas

humanos.

Concepto de cariotipo
Tipos de cromosomas. Cariotipo.

Es el ordenamiento de los cromosomas

Obtencin de cromosomas.
de acuerdo a criterios internacionalmente
Cromatina
sexual. Cuerpo Barr y cuerpo Y.
establecidos
Los cromosomas se clasifican por pares
en grupos denominados por letras de la A
a la G

Tcnicas para el estudio de los cromosomas

humanos.
CARIOTIPO 46,
Tipos de cromosomas. Cariotipo.
Obtencin de cromosomas.
Cromatina sexual. Cuerpo Barr y cuerpo Y.

XX

Tcnicas para el estudio de los cromosomas

humanos.
CARIOTIPO 46, XY
Tipos de cromosomas. Cariotipo.
Obtencin de cromosomas.
Cromatina sexual. Cuerpo Barr y cuerpo Y.

Tcnicas para el estudio de los cromosomas

humanos.

ESTUDIO DE LA CROMATINA SEXUAL

Tipos de cromosomas. Cariotipo.

Toma de
muestra
por raspado de la
Obtenci
n de
cromosomas.
mucosa oral.
Cromatina
sexual. Cuerpo Barr y cuerpo Y.
Extensin el lminas portaobjetos.
Coloracin.
Observacin al microscopio.

Tcnicas para el estudio de los cromosomas

humanos.

Corpsculo o cuerpo Barr:

Tipos de cromosomas. Cariotipo.

Uno de los cromosomas X, el que completa su

Obtencin de cromosomas.
replicacin ms tarde que su homlogo, queda
Cromatina sexual.
Cuerpo
Barr y cuerpo
Y.
condensado
e inactivo
durante
la interfase
de
clulas somticas.
# cuerpos Barr = # cromosomas X 1

Tcnicas para el estudio de los cromosomas

humanos.

Tipos de cromosomas. Cariotipo.

# cuerpo
Barr
Hembra
Varn
0Obtencin de cromosomas.
45,X
46,XY
1Cromatina sexual. Cuerpo
46,XX
Barr y cuerpo Y. 47,XXY
2
47,XXX
48,XXXY
3
48,XXXX
49,XXXXY

Tcnicas para el estudio de los cromosomas

humanos.

CUERPOS DE BARR
Tipos
T de
C cromosomas.
N I C A A CCariotipo.
E T O O R C E N A
Obtencin de cromosomas.
Cromatina sexual. Cuerpo Barr y cuerpo Y.

Tcnicas para el estudio de los cromosomas

humanos.

Ventajas de la tcnica de Cromatina

Tipos de cromosomas. Cariotipo.
Sexual:
Obtencin de cromosomas.

Cuerpo Barr y cuerpo Y.

1-Cromatina
Rpida ysexual.
sencilla.
2- Se realiza en ncleos interfsicos .
3- No requiere de cultivo de clulas.
4- Da el estado de los cromosomas sexuales de
forma inmediata.

Pruebas de laboratorio para el estudio del ADN

Tecnologa del ADN recombinante

Hibridacin molecular. Southern blot.
Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR).
Diagnstico prenatal de enfermedades
monognicas en Cuba

Pruebas de laboratorio para el estudio del ADN

Tecnologa del ADN recombinante
Obtencin de un segmento especfico de ADN
del genoma humano
Unin de este segmento a una molcula de
ADN de un microorganismo
Obtencin de mltiples copias del segmento
de ADN humano que se estudia

Pruebas de laboratorio para el estudio del ADN

Herramientas
1.Enzimas de restriccin
2.Un vector
3.Sondas, probes y oligonucletidos

Pruebas de laboratorio para el estudio del ADN

Enzimas de restriccin.
Producidas por las bacterias. Tienen la
propiedad de degradar o destruir todo ADN
extrao que penetre en ellas. Este mecanismo
se conoce como RESTRICCIN

Pruebas de laboratorio para el estudio del ADN

Vector
Se emplean (virus, cromosomas artificiales de
levadura o plsmidos) para introducir un
segmento de ADN en el ADN de otra clula o
una bacteria.
Propiedades
Que se REPLIQUE
Que se pueda DETECTAR
Que se pueda INTRODUCIR en una clula

Pruebas de laboratorio para el estudio del ADN

Sondas de cidos nucleicos

Hebra de ADN marcada con sustancias
fluorescentes o radiactivas que se hibridiza
con la hebra complementaria del fragmento de
ADN objeto de estudio.

Hibridacin con sondas o Southern blot

etapas:

Digestin del ADN con enzimas de restriccin tras conseguir extraer

un ADN de alta pureza.

Separacin de los fragmentos obtenidos por medio de una

electroforesis en gel de agarosa.

Desnaturalizacin de los fragmentos separados y cortados.

Transferencia de las cadenas simples a una membrana de

nitrocelulosa o nylon y fijacin de las mismas por medio de calor
(80C).

Prehibridacin con sondas de ADN inespecfico para bloquear los lugares

de unin inespecficos que pudiera haber en la membrana.
Marcaje de la sonda con nucletidos radioactivos (P 32 normalmente).
Hibridacin de la sonda marcada y desnaturalizada con los fragmentos de
ADN fijados a la membrana, y lavado de la membrana para eliminar el
exceso de sonda o aquellas que hayan hibridado mal.
Revelado en placa radiogrfica e interpretacin de los resultados.

Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR)

Esta tcnica fue ideada en 1989 por Kary B. Mullis que obtuvo el premio
Nobel de Qumica en 1993 por dicho invento.
Permite amplificar ms de un milln de veces un ADN obtenido a partir de
una regin seleccionada del genoma, siempre y cuando se conozca su
secuencia de nucletidos.
El uso de la PCR permite amplificar muestras tan mnimas como pueden
ser clulas de la raz del pelo, una minscula mancha de sangre o
semen e incluso caspa son suficientes en muchos casos para llevar a
cabo un anlisis de identificacin gentica.

Fases o pasos de la reaccin en cadena de la polimerasa

1. Desnaturalizacin: Se produce la separacin de las dos cadenas de
ADN a temperaturas entre 90 y 95 C
2. Hibridacin: Se disminuye la temperatura entre 40 y 60 C para
producir la unin de los primers a las secuencias flanqueantes del
fragmento que se va a amplificar.
3. Extensin: La Taq polimerasa incorpora nucletidos en el extremo 3' del
primer utilizando como molde la cadena de ADN previamente
desnaturalizada. La Taq polimerasa alcanza su mxima actividad a los
72C.

Descripcin de la reaccin en cadena de la polimerasa

Lectura de los resultados de la PCR

La forma ms habitual conlleva
Separacin electrofortica de los fragmentos

amplificados en un gel de agarosa

Tincin con bromuro de etidio (u otro colorante
fluorescente o radioactivo)
Observacin final en transiluminador con luz
ultravioleta

Ventajas de la PCR
Permite amplificar muestras mnimas
parcialmente degradado.

o en casos en los que el ADN est

Permite obtener en poco tiempo un elevado nmero de copias de la

secuencia de ADN que es objeto de estudio.
Permite la determinacin y agrupacin allica en clases discretas, lo que
facilita la elaboracin de bases de datos al ser la estandarizacin inmediata y
posibilitar la aplicacin de mtodos bioestadsticos y programas elaborados.

Usos de la PCR
* Individualizacin genotpica para alelos seleccionados.
* Test de Paternidad
* Diagnstico de enfermedades hereditarias
* Clonacin de genes
* Mutagnesis
* Anlisis de ADN fsil
* Genotipo de mutaciones especficas

Diagnstico prenatal molecular en Cuba

1. Fibrosis Quistica (HAR)
2. Sicklemia (HAR)
3. Acondroplasia (HAD)
4. Distrofia Muscular Duchenne ( HRLX)
5. Corea de Huntington (HAD)
6. Ataxia Espinocerebelosa de Holguin (HAD)
7. Distrofia Miotnica (HAD)
8. Atrofia ptica de Leber (HM) Sancti Spiritus
9. Hemofilia (HRLX)
10.Atrofia Espinal Wernig- Hoffman (HAR)
11.Frgil X (HLX)
12.Fenilcetonuria (HAR)