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Propiedades Eléctricas de Las Membranas
Propiedades Eléctricas de Las Membranas
147
cial de membrana resultan de cambios conformacionales de protenas estructurales de la membrana plasmtica, llamados canales inicos, que provocan
variaciones de la permeabilidad selectiva de la membrana a los iones. Las
seales elctricas en la clula se pueden propagar de forma pasiva como resultado de las propiedades elctricas de la membrana. Este tipo de actividad elctrica (que se denomina pasiva, por contraposicin a las respuestas activas que
entraan cambios de la permeabilidad de membrana) es de extremada importancia funcional por cuanto determina la extensin espacial y el curso temporal de las seales subumbrales.
148
ndice
1. Introduccin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 150
2. Las clulas presentan una diferencia de potencial
transmembrana entre el interior y el exterior celular:
el potencial de membrana en reposo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 151
3. Bases inicas del potencial de membrana en reposo . . . . . . . . . . . . . . . 152
3.1. Permeabilidad inica y potencial de equilibrio . . . . . . . . . . . . . . 152
3.2. La distribucin asimtrica de iones a travs
de la membrana celular y su permeabilidad selectiva
generan el potencial de membrana en reposo . . . . . . . . . . . . . . . . 154
3.3. Los iones de cloro (Cl) se suelen distribuir de forma pasiva . . . . 158
3.4. La bomba de sodio/potasio (Na/K) mantiene el gradiente
de concentracin inica y contribuye al potencial
de membrana en reposo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 158
3.5. La permeabilidad inica de ciertos canales voltajedependientes
puede contribuir a la generacin del potencial de membrana
en reposo (Vr) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 160
4. La membrana celular posee propiedades elctricas pasivas
que determinan la propagacin espacial y temporal de las
seales subumbrales . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 160
5. La membrana celular puede representarse como un circuito
elctrico equivalente que explica su comportamiento elctrico . . . . . . 164
6. Las propiedades elctricas pasivas de las neuronas tienen
importantes consecuencias funcionales . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 167
6.1. La constante de tiempo de la membrana (m) determina el
curso temporal de las variaciones del potencial de membrana . . . 167
6.2. La constante de espacio de la membrana (m) establece
la extensin espacial de las variaciones del potencial de
membrana . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 168
Conclusiones . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 171
Bibliografa recomendada . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 172
Glosario . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 172
149
1. Introduccin
La membrana plasmtica representa una barrera fsica entre el interior celular
y su medio circundante. La comunicacin entre ambos espacios es posible
por varios mecanismos que se constituyen en seales biolgicas. El ms
extendido es la transferencia de cargas elctricas, principalmente iones. En
este captulo se resumen las principales propiedades generales de carcter
biofsico y elctrico que poseen las membranas celulares. Tradicionalmente,
esos fenmenos elctricos pueden considerarse equivalentes a los observados
en circuitos elctricos, ya que responden a las mismas leyes fsicas, por ejemplo, la ley de Ohm. No obstante, conviene recordar que la naturaleza viva de
la clula depende de su capacidad de regenerar y modular esos mecanismos
fsicos de transferencia de cargas elctricas para lo cual es preciso consumir
energa qumica.
Las clulas excitables ejercen sus funciones generando seales elctricas
en trminos de cambios de potencial de la membrana plasmtica. Existen
diferentes clases de clulas excitables con funciones diversas, tanto en el reino animal como en el vegetal. As, ciertas plantas con capacidad de movimiento, como la mimosa (Mimosa pudica), poseen clulas que generan seales elctricas cuya funcin es activar el mecanismo contrctil. En el reino animal, se encuentran ejemplos de clulas excitables: a) las musculares esquelticas y lisas, que generan seales elctricas que activan el mecanismo contrctil; b) las clulas secretoras que activan el mecanismo secretor por medio de
seales elctricas, las que producen a su vez, un aumento intracelular transitorio de la concentracin del in Ca2+; y c) las neuronas.
La funcin primordial de la neurona es integrar la informacin que le llega
por los contactos sinpticos y emitir seales a otras neuronas y a efectores
(clulas musculares y de rganos de secrecin). Para realizar esta funcin las
neuronas operan con seales elctricas especializadas, que consisten en la
modificacin del potencial de membrana (Vm).
Las neuronas son capaces de generar distintos tipos de seales elctricas
especializadas, a saber:
Seales breves y de gran amplitud, llamadas potenciales de accin, cuya
funcin es transmitir rpidamente y a grandes distancias la informacin
por los axones (en las clulas musculares los potenciales de accin aseguran la rpida propagacin de la excitacin a lo largo de las fibra muscular
para su contraccin simultnea).
Respuestas ms lentas y de menor voltaje como por ejemplo, los potenciales marcapasos, los prepotenciales y pospotenciales, que controlan la excitabilidad y, por lo tanto, tienen una importante funcin integradora.
150
151
A)
V
Vm
B)
2
1
Fuera
70 mV
0 mV
Dentro
Vr
Tiempo
Figura 4.1. Registro intracelular y potencial de membrana en reposo. A) Representacin esquemtica de clula y
registro de voltaje con una micropipeta antes (1) y despus (2) de empalar la clula. La micropipeta se conecta a un
amplificador y se cierra el circuito con un electrodo extracelular. B) Registro de voltaje en el tiempo antes (1, fuera) y
luego de la penetracin transmembrana (2, dentro). El potencial de reposo (Vr) dentro de la clula es negativo con
respecto al exterior.
cial de reposo (Vr) siendo el interior de la clula negativo con respecto al exterior (figura 4.1). Esta diferencia de potencial se debe a la existencia de gradientes de concentracin inica a ambos lados de la membrana y a diferencias
de la permeabilidad relativa de la membrana celular a las distintas especies
inicas presentes.
Las diferencias de permeabilidad que existen en reposo para distintas especies inicas se deben a canales inicos con permeabilidad especfica para
una determinada especie inica.
152
mV
Electrodos
Membrana
A)
KCI
CI
K+
CI
B)
KCI
K+
K+
especie inica K+ y no a Cl, los iones K+ tendern a moverse del compartimiento A al B, siguiendo su gradiente de concentracin, transportando as cargas positivas de un compartimiento a otro. Este movimiento de cargas positivas hace desaparecer el equilibrio elctrico (mismo nmero de cargas positivas y negativas) que exista en cada compartimiento, dejando cargas negativas
libres en A, correspondientes a iones Cl que no son contrarrestadas por las
cargas positivas de los iones K+ que se desplazaron a B, y positivas libres en B
que corresponden a los iones K+ que pasaron de A a B. As pues, el paso de
iones K+ genera un desequilibrio elctrico que hace aparecer una diferencia de
potencial entre ambos compartimientos, siendo el compartimiento A negativo
respecto al B. Esta diferencia de potencial generada por el gradiente elctrico
crea una fuerza electromotriz que se opone al movimiento de cargas positivas
transportadas por el K+ desde A a B, siguiendo su gradiente de concentracin.
Eventualmente, el sistema alcanza un estado de equilibrio estable donde
ambos gradientes de concentracin y elctricos se igualan, de manera que
deja de existir un flujo neto de K+ de un compartimiento a otro, mantenindose entonces constantes indefinidamente el potencial y las concentraciones iniciales de KCl en A y B. El valor de la diferencia de potencial existente entre
ambos compartimientos cuando se alcanza el estado de equilibrio electroqumico est definido formalmente por la ecuacin de Nernst,
EK = RT / zF ln ([K+]A / [K+]B)
[1]
153
[2]
A)
B)
Na+ 9,2
K+ 140
CI (3-4)
(A )
Citoplasma
Na+ 120
K+ 2,5
CI 120
Medio
extracelular
Na+ 50
K+ 400
CI 40,1
Aspartato 75
Lactato 270
Citoplasma
Na+ 480
K+ 10
CI 540
Medio
extracelular
Figura 4.3. Concentraciones inicas (en mM) en el medio extracelular y en el citoplasma en la rana (A) y
en el calamar (B).
154
La semejanza de los valores de Vr medidos experimentalmente y los valores de EK estimados a partir de la ecuacin de Nernst y de las concentraciones
intra- y extracelular de K+ (Benstein, 1902), sugiere que la membrana celular
es exclusivamente permeable al K+, separando un compartimiento negativo
intracelular de uno positivo extracelular. Si as fuera, Vr cambiara 58 mV por
cada orden de magnitud de cambio, tanto de la concentracin extracelular de
K+ ([K+]e) como de [K+]i. En otras palabras, Vr se hara ms negativa, o
menos negativa (es decir, la membrana se hiperpolarizara o despolarizara),
con la disminucin y el aumento, respectivamente de [K+]e. Lo inverso ocurrira con [K+]i. Sin embargo, cuando se vara experimentalmente, en una clula
muscular (ver el trabajo de Conway, 1957) en una neurona o en un axn
(como hicieron por ejemplo Hodgkin y Keynes, en 1955, para concentraciones extracelulares, y Baker, Hodgkin y Shaw, en 1962, para concentraciones
intracelulares de K+ en el axn gigante de calamar) la pendiente de 58 mV por
unidad logartmica de variacin de [K+]e se aproxima aceptablemente para
valores altos de esta concentracin (> 10 mM), pero disminuye progresivamente la pendiente de la relacin para valores bajos de [K+]e alejndose de la
prediccin de la ecuacin de Nernst (figura 4.4).
Por un lado, la buena correlacin existente entre la prediccin de Nernst y
los valores normales y despolarizados de Vr cuando [K+]e se aumenta sobre
los valores naturales, indica que la permeabilidad al K+ es el elemento ms
importante en la generacin del potencial de membrana en reposo (figura 4.4).
Por otro lado, la desviacin progresiva de lo predicho por la ecuacin de
Nernst [2] para valores hiperpolarizados de Vr respecto a las concentraciones
bajas de [K+]e sugiere que otro in permeable interviene en la generacin del
potencial de membrana y que su participacin aumenta para bajas concentraciones de [K+]e. Hodgkin y Horowicz, en 1959, demostraron la participacin
del Na+ en el Vr variando la concentracin extracelu1ar de Na+ ([Na+]e). Los
efectos sobre Vr de los cambios de [Na+]e eran mucho menores que los observados para modificaciones de [K+]e lo que sugiri que la contribucin del in
Na+ al Vr era pequea. Por lo tanto la participacin de la permeabilidad selectiva de la membrana al K+ es primordial en la generacin de Vr a la que se
agrega una pequea participacin de la permeabilidad al Na+.
Los experimentos anteriormente comentados indican que en condiciones de
reposo, el axn gigante de calamar (como la mayora de las clulas excitables)
es un sistema en el que hay por lo menos dos especies inicas permeables, Na+
y K+, que estn asimtricamente distribuidas a los lados de la membrana plasmtica, y que median una diferencia de potencial ms o menos constante, el Vr.
En un sistema como la membrana plasmtica en el que existe ms de una
especie inica mvil, Vr es constante slo cuando la corriente inica neta es
155
cero. Lo mismo ocurrira para un sistema con ms iones permeables. Si suponemos que solamente el K+ y el Na+ son mviles, la corriente ser cero cuando la salida de Na+ iguale a la entrada de K+. Adems, Vr depender de las
concentraciones relativas de K+ y Na+ a ambos lados de la membrana (de los
gradientes de concentracin) y de la permeabilidad relativa Na+/K+, o de cualquier otro in mvil existente como por ejemplo el Cl (vase ms abajo). En
esas condiciones Vr se deriva de la relacin que describe las dependencias de
Vr de las relaciones de concentracin de Na+, K+ y Cl a ambos lados de la
membrana y de los coeficientes de permeabilidad de los iones mviles (PNa,
PK y PCl) o ecuacin de Goldman (1943)-Hodgkin-Katz (1949), tambin llamada ecuacin del campo constante,
Vm = RT / zF ln (PK[K]e + PNa[Na]e + PCl[Cl]i) /
(PK[K]i + PNa[Na]i + PCl[Cl]e) [3]
O sustituyendo como en las ecuaciones [1] y [2],
Vm = 58mV log (PK[K]e + PNa[Na]e + PCl[Cl]i) /
(PK[K]i + PNa[Na]i + PCl[Cl]e) [4]
donde las unidades del coeficiente de permeabilidad P son cm/s y ste se define como RT/aF siendo la movilidad del in en la membrana, el coeficiente de particin entre la membrana y la solucin acuosa y a el ancho de la
membrana, Asumiendo una relacin PNa/PK de 0,01, Hodgkin y Horowicz encontraron un buen ajuste de la relacin Vr frente a [K+]e a los valores experimentales (figura 4.4) determinados en el axn gigante, usando la ecuacin [4].
As, concluyeron que los iones Na+ juegan un papel en el mantenimiento de
Vr y que el Cl no contribuye al Vr.
Puede sintetizarse lo anterior si suponemos que existen en la membrana
tres pilas de concentracin, una donde el K+ es el in mvil, otra donde lo es
el Na+, y una pila donde el in permeable es el Cl. Las pilas de Na+ y K+ tienen polaridades opuestas y potenciales de equilibrio fijos (EK y ENa) determinados por sus respectivos gradientes de concentracin, siendo la pila de K+
negativa en el citoplasma y la de Na+ negativa en el compartimiento extracelular. La pila de Cl no interviene en la generacin de Vr y su potencial de equilibrio es igual al potencial de membrana (ECl = Vr). Las pilas representan los
canales pasivos que estn abiertos de modo continuo e independiente del Vm
que son permeables exclusivamente a las especies inicas K+, Na+ y Cl, y que
tienen los respectivos potenciales de equilibrio EK, EN y ECl (figura 4.9B). Las
respuestas activas son generadas por otro tipo de canales inicos que son sen-
156
+10
+
0
10
20
+
30
Vr (mV)
40
50
60
70
V = 58 log
140
80
90
100
110
[K]o + 0,01[Na]o
V = 58 log
[K]o
140
120
0
0-2
0-5
1-0
2-5
10
20
50
100
[K+]o (mM)
Figura 4.4. Dependencia del potencial de membrana en reposo (Vr) de la concentracin extracelular de
K+ ([K+]e). La recta corresponde a los valores calculados con la ecuacin de Nernst (ecuacin [2]), considerando una concentracin intracelular de potasio de 140 mM. La lnea continua que ajusta a los valores experimentales se obtuvo de la ecuacin de Goldman-Hodgkin-Katz (ecuacin [4]), considerando
una relacin de permeabilidad Na/K de 0,01.
sibles a la diferencia de potencial transmembrana, activndose a valores especficos del Vm, por lo que se denominan canales voltajedependientes.
Si examinamos la desviacin gradual de los valores experimentales de Vr
de lo predicho por la ecuacin de Nernst [2] para cambios de [K+]e (figura
4.4), observamos que los valores de Vr se ajustan aceptablemente con el formalismo de Goldman-Hodgkin-Katz (ecuacin [4]). Analizando la ecuacin
[4], se comprueba que el trmino de K+ domina el numerador, lo que explica
por qu para valores altos de [K+]e Vr se aproxima al valor de EK y; por lo tanto, al lmite de la pendiente de 58 mV. En otros trminos, la pila de K+ tiene
mucha ms influencia que la de Na+ para valores normales y altos de [K+]e
que corresponden con valores naturales y despolarizados del Vr. En cambio,
para valores bajos de [K+]e el numerador del trmino de K+ tendr cada vez
menos influencia (por ejemplo, aumentando [K+]e por 10, no multiplicar por
10 el numerador, como ocurrira con la ecuacin de Nernst [2], sino menos).
En esas condiciones, la influencia de la pila de Na+ ir aumentando para valores bajos de [K+]e (figura 4.4). Es importante enfatizar que las ecuaciones [3]
157
2-5 mM
K
Cl
120 mM
120 mM
30 mM
Cl
60
70
Vr (mV)
80
90
100
110
120
10
15
20
25
30
Minutos
Figura 4.5. Efecto de las variaciones de concentracin extracelular de cloro. Se disminuy la concentracin
de Cl de 120 a 30 mM, con lo que se produjo una despolarizacin transitoria, y cuando se volvi a la concentracin inicial ocurri una hiperpolarizacin transitoria.
y [4] no son vlidas para los iones divalentes, y que formalismos ms complejos son necesarios.
3.3. Los iones de cloro (Cl) se suelen distribuir de forma pasiva
La membrana plasmtica es permeable a Cl y la relacin PCl / PK = 0,1, aproximadamente, para el axn gigante de calamar. Sin embargo el Cl no interviene en1a generacin de Vr dado que en la mayora de las neuronas y en
otras clulas excitables se encuentra en equilibrio. O sea, que el potencial de
equilibrio del Cl (ECl) es el del Vr (ECl = Vr). Esto se debe a que en la mayora de las clulas no hay una bomba de Cl que establezca gradientes de este
in a ambos lados de la membrana. As, Hodgkin y Horowicz vieron que al
provocar experimentalmente cambios mantenidos de [Cl]e el Vr se modificaba transitoriamente volviendo gradualmente al valor inicial en pocos minutos
(figura 4.5), La vuelta gradual al Vr se hace por redistribucin inica siguiendo
las leyes del equilibrio de Donan que restablece una nueva igualdad Vr = ECl.
3.4. La bomba de sodio/potasio (Na/K) mantiene el gradiente de
concentracin inica y contribuye al potencial de membrana en reposo
Las diferencias de concentracin entre el medio intracelular y el espacio
extracelular de las especies inicas K+ y Na+ son la llave de la generacin del
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A)
Vm mV
Na+
Ouabana
Na+
40
50
B)
Cero K+
Vm mV
Na+
Na+
40
50
10 min
Figura 4.6. Efecto de la bomba Na/K. A-B, respuestas hiperpolarizantes producidas por la inyeccin
intracelular de Na+ en una neurona de caracol. A) Efecto de la aplicacin de ouabana. B) Accin de una
solucin extracelular sin K+ (Thomas, 1969).
Vr. Los gradientes de concentracin de estos iones se mantienen por un proceso metablico de transporte que consume energa en forma de ATP y que es
realizado por la bomba Na/K, que traslada Na+ al exterior celular y K+ al interior celular, manteniendo alta la concentracin intracelular de K+ ([K+]i).
Se ha observado que en condiciones de reposo la ouabana, un bloqueador
de la bomba de Na/K, despolariza algo (aproximadamente 5 mV) la membrana
(figura 4.6A), lo que indica que la bomba contribuye elctricamente a Vr. Esto
se debe a que la bomba saca ms Na+ que el K+ que hace ingresar al interior
celular, existiendo por lo tanto una corriente neta de cargas positivas que atraviesa la membrana de dentro afuera, hiperpolarizando la membrana. Adems,
Thomas, en 1969, vio que la inyeccin de Na+ intracelular (lo que aumenta la
actividad de la bomba Na/K) produce una hiperpolarizacin transitoria, efecto
que es impedido por bloqueadores de la bomba Na/K (figura 4.6), como ouabana. Sin embargo, la inyeccin intracelular de K+ no produce hiperpolarizacin en condiciones control, indicando que el fenmeno se debe al transporte
activo hacia fuera de Na+ por la bomba (figura 4.6B). Es tambin interesante
destacar que si se intoxica la clula con ouabana, inicialmente se produce una
pequea despolarizacin por el bloqueo de la bomba, pero luego el potencial
159
puede mantenerse horas en condiciones de reposo, aunque eventualmente tender a cero cuando las concentraciones intracelulares y extracelulares de K+ y
Na+ se igualen. Las concentraciones intracelulares-extracelulares de K+ y Na+
tienden a igualarse, dado que el K+ tiende a salir por su gradiente de concentracin en contra de un pequeo gradiente elctrico, mientras que el Na+ tiende a
entrar de acuerdo con sus gradientes de concentracin y elctrico.
3.5. La permeabilidad inica de ciertos canales voltajedependientes
puede contribuir a la generacin del potencial de membrana en reposo (Vr)
Vimos en la introduccin que las clulas excitables son capaces de generar respuestas activas mediadas por aumentos de permeabilidad de canales inicos
voltajedependientes que se activan a ciertos valores del Vm. En algunas clulas
excitables hay canales voltajedependientes que se encuentran activos a valores
normales del Vr y, por lo tanto, intervienen en su mantenimiento. Es bien conocido el papel de un canal voltajedependiente de K+ que media una corriente
inica llamada corriente M (IM) presente en algunas neuronas (vase Adams,
1982). Esta corriente est parcialmente activada en el Vr y se activa an ms por
despolarizacin, desactivndose cuando el potencial de membrana se hiperpolariza. El canal que media IM aade su permeabilidad a la del canal de K+ de fuga,
aumentando la permeabilidad de la membrana al K+, lo que incrementa la
influencia de este in sobre Vr hiperpolarizando la clula al aumentar la permeabilidad relativa de K+ y acercar as Vm a EK. Esta corriente es especficamente
bloqueada por acetilcolina por medio de un mecanismo muscarnico y con la
intervencin de protenas-G. Por ello, la aplicacin extracelular de acetilcolina
(carbacol o muscarina) despolariza las clulas que tienen IM. Otra corriente inica que en ciertas clulas se encuentra activada en el Vr es IQ (tambin llamada Ih,
If). En 1989, Edman y Grampp demostraron que esta corriente es transportada
por iones K+ y Na+, es activada por hiperpolarizacin y su potencial de equilibrio se encuentra en valores despolarizados (20 mV) por lo que tiende a despolarizar algo la membrana. IQ es especficamente bloqueada por Cs+ que hiperpolariza aquellas clulas en las que IQ est parcialmente activada en el Vr.
160
Las propiedades pasivas de las clulas excitables se pueden analizar tal como hicieron Hodking y Rushton en 1946, inyectando corriente por la membrana celular y registrando las variaciones de Vm para valores subumbrales.
Se introducen dos electrodos dentro de la clula, uno para registrar el Vm
(figura 4.7) y el otro para inyectar corriente (Im). En fibras grandes como el
axn gigante de calamar pueden usarse electrodos metlicos, pero clulas ms
pequeas se penetran con pipetas de vidrio de punta submicroscpica (< 1
m) rellenas de un lquido conductor, por ejemplo, KCl (figura 4.7). Unos de
los electrodos intracelulares se conecta a un amplificador y el otro a un generador de pulsos de corriente, cerrndose los circuitos de registro e inyeccin
intracelular por medio de electrodos extracelulares colocados en el bao que
contiene la clula o axn (figura 4.7). Cuando se estimula la clula con pulsos
de corriente que atraviesan la membrana circulando entre los dos electrodos
conectados al generador de pulsos, la corriente induce a variaciones del potencial de membrana que dependen de estos elementos:
Intensidad.
Direccin de la corriente.
Propiedades pasivas de la membrana.
La respuesta de la membrana a pulsos de corriente tiene un curso temporal
exponencial que se caracteriza por una variacin del potencial de membrana
desde el potencial de reposo hasta estabilizarse (si el pulso es suficientemente
largo) en un valor estacionario que llamaremos VK. Al terminar el pulso, el
potencial de membrana Vm regresa exponencialmente para estabilizarse nuevamente en el potencial de reposo (figura 4.7B).
La variacin de Vm depende adems de la direccin de la circulacin de la
corriente inyectada por la membrana, o sea de la polaridad de los electrodos
de estimulacin extra e intracelular. Cuando se conecta el electrodo intracelular al polo negativo del generador de corriente y el extracelular al polo positivo, la corriente circular hacia dentro de la clula atravesando la membrana
desde el exterior al interior celular (de acuerdo a la convencin aceptada) lo
que genera una hiperpolarizacin (figura 4.8). Cuando el electrodo intracelular se conecta al polo positivo y el extracelular al negativo, la corriente circula hacia fuera y la clula se despolariza (figura 4.8). La despolarizacin podr
superar el umbral y alcanzar el nivel de disparo con lo que se genera un potencial de accin (figura 4.8).
La magnitud de VK para respuestas subumbrales aumenta linealmente con
la intensidad del pulso de corriente. Si se representa VK en funcin de la intensidad de la corriente inyectada (Im), lo que se denomina relacin voltajecorriente, los valores experimentales se ajustan bien a una funcin lineal
161
A)
Vm
Im
2
4
1
3
Vk
B)
Vk
30 mV
100 ms
Vr
70 mV
0,5 nA
Im
Figura 4.7. Registro intracelular y respuesta a pulsos de corriente despolarizante. A) Esquema del preparado experimental representando una clula empalada con dos micropipetas. Una conectada a un amplificador para el registro de Vm (1) y otra para la inyeccin de corriente transmembrana Im (3). Los correspondientes circuitos de registro y estimulacin se cierran por electrodos extracelulares en el bao (2-4). El electrodo intracelular de estimulacin se ha representado positivo con respecto al extracelular, por lo que la corriente circular hacia afuera por la membrana. B) Efecto de los pulsos despolarizantes. La membrana retrasa el
efecto de la corriente y hay variaciones exponenciales del potencial de membrana al inicio y fin del pulso de
corriente. Eventualmente se alcanza un valor de voltaje estacionario (VK) durante el pulso despolarizante.
(figura 4.8) que cruza el eje de las ordenadas en el valor de Vr. La relacin
lineal entre VK e Im indica que la membrana celular se comporta como una
resistencia elctrica (se dice que tiene un comportamiento resistivo u hmico), ya que obedece a la ley de Ohm. Esta ley establece que si se pasa corriente por una resistencia se crear una diferencia de potencial a ambos lados de la
resistencia que variar linealmente con la intensidad de la corriente. As, para
la membrana, la relacin tendra la siguiente forma:
Vm = Vr + (Im Rm)
[5]
162
A)
0 mV
Vr
30 mV
73 mV
100 ms
0,25 nA
0 nA
0,2 nA
B)
Im (nA)
0,2
0,0
0,2
40
40
Vr
80
Vm (mV)
120
Hiperpolarizacin
Despolarizacin
160
Figura 4.8. Efecto de la aplicacin de pulsos de corriente transmembrana. A) Respuestas a pulsos negativos y positivos de intensidad creciente. Para pulsos positivos se llega al nivel de disparo y se generan
potenciales de accin. Las lneas gruesas son ajustes a una nica exponencial. B) Curva V/I, los valores
experimentales fueron obtenidos de A. Vm se midi en la parte estacionaria al final de la respuesta a los
pulsos. La funcin lineal (lnea gruesa) que ajusta a los valores experimentales corresponde a la ley de
Ohm [Vm = (Im Rm) Vr]. Ntese que la respuesta es no lineal para despolarizaciones supraumbrales
(> 40 mV). Clula cromafn de bovino.
163
164
Extracelular
Extracelular
Re
Re
Rm
Re
Rm
Rm
Em+
Em+
Em+
Em+
Em+
Ri
Ri
Ri
Ri
Ri
Cm
Rm
Re
Em+
Cm
Rm
Re
Cm
Rm
Cm
Intracelular
B)
Lquido
extracelular
Cm
Membrana
A)
Lquido
intracelular
Extracelular
Em
RNa
+
ENa
RCI
+
Rk
ECl
Cm
Intracelular
por aproximacin asociamos un proceso celular (por ejemplo, axones y dendritas) a un cilindro, de lo anterior se deduce que cuanto ms delgado y largo
sea un procesos celular mayor ser su resistencia interna.
Vimos que el inicio y terminacin instantnea del pulso de corriente transmembrana provoca variaciones exponenciales de Vm (figuras 4.7 y 4.8). Este
comportamiento se debe a que la membrana se comporta como un condensador elctrico (se dice que muestra un comportamiento capacitivo). Un condensador est constituido por dos superficies conductoras separadas por un
aislante o dielctrico. En la clula, los conductores son los medios intra y
extracelular, representados por sus resistencia Ri y Re, respectivamente, y el
dielctrico es la parte lipdica sin canales inicos de la membrana celular. Por
lo tanto, en el circuito equivalente debe tambin representarse un condensador
de membrana (Cm) que modele el comportamiento observado.
El comportamiento capacitivo se modela conectando el condensador Cm en
paralelo con la resistencia de membrana Rm (figuras 4.9 y 4.10A). Cuando se
hace pasar un pulso de corriente por ese circuito (haciendo por ejemplo circu-
165
A)
Extracelular (0 mV)
IR = IR+Ic
D Vm
Rm
= IR
Rm
+
Cm
Ic = Cm
dVm
dt
Vm
Em
B)
Vm
Im
1 1010 A
IR
Ic
200 ms
166
167
umbral
30 mV
20 ms
Vm
70 mV
500 pA
Im
pulso 1
pulso 2
Figura 4.11. Suma temporal de potenciales subumbrales. Las respuestas provocadas por dos pulsos de
corriente transmembrana de breve duracin se suman en el tiempo, y pueden eventualmente cruzar el
umbral de disparo.
El comportamiento capacitivo, que retrasa la variacin de voltaje con respecto a la corriente transmembrana, es de gran importancia funcional dado que
otorga una propiedad integradora fundamental sin la cual no podra funcionar el sistema nervioso. Esta propiedad, conocida como suma temporal de
potenciales, permite que estmulos subumbrales repetidos en el tiempo a
intervalos suficientemente cortos se sumen y, si son despolarizantes, generen
un potencial de accin cuando el Vm cruza el nivel de disparo de la clula
(figura 4.11). Igualmente puede ocurrir la suma de estmulos que provoquen
hiperpolarizaciones. Ms an, estmulos despolarizantes e hiperpolarizantes
pueden sumarse, compitiendo por tanto por el control del potencial de membrana.
m) establece
6.2. La constante de espacio de la membrana (
la extensin espacial de las variaciones del potencial de membrana
Otra propiedad importante es la que determina cmo decae a lo largo de un
axn (o una dendrita) el voltaje aplicado en un punto de ese axn. Esta propiedad establece la distancia a la cual se extiende por el axn una seal subumbral. Experimentalmente se puede establecer esa distancia inyectando corriente por un electrodo intracelular en un punto de un axn y registrando la variacin de potencial (Vr VK) inducida por la corriente inyectada con electrodos
intracelulares colocados a distancias conocidas a lo largo del axn (figura
4.12A). El cambio de potencial cerca del electrodo de inyeccin de corrientes
168
A)
Vm
Im
Vm
Vm
Vm
distancia (mm)
B)
1
Intracelular
Vo
long
Vo
RI
Rm
Im
long
RI
Rm
Im
RI
Rm
Im
RI
Rm
Im
Extracelular
O
Vo
V
2
X
Distancia a lo largo del axn
C)
Vr
70 mV
30 mV
2
O
500 mm
Figura 4.12. Propagacin espacial de potenciales subumbrales. A) Esquema del experimento que muestra el electrodo de corriente (Im) y los electrodos de registro de Vm colocados a distancias crecientes de
ste. B) Equivalente elctrico simplificado (sin rama capacitiva) que muestra la circulacin de las corrientes por los loci sucesivos y la cada exponencial de la corriente y Vm a lo largo del axn o equivalente. C)
Simulacin de suma espacial a lo largo de una dendrita con entradas excitatorias lejanas (1) y con distancias menores entre las sinapsis excitatorias activadas (2). Ntese la suma de las despolarizaciones en 2.
169
[8]
[9]
170
Conclusiones
1. El movimiento de cargas elctricas a travs de la membrana plasmtica es
un fenmeno definible bajo las leyes fsicas, incluida la ley de Ohm. El
principio fundamental que permite el fenmeno de la excitabilidad es la
distribucin desequilibrada de cargas a un lado y otro de la membrana. A
su vez, esto es consecuencia de la impermeabilidad selectiva de la membrana y del transporte de ciertos iones, como el potasio, en una direccin
preferente, el interior celular.
2. El citoplasma y el medio extracelular tienen concentraciones diferentes de
iones especficos que contribuyen a un valor globalmente negativo del interior con respecto al exterior. Los gradientes as formados permiten el flujo a favor cuando los canales especficos se abren de forma regulada.
3. Con independencia de estas respuestas activas, la membrana tambin presenta unas propiedades pasivas que no dependen de cambios en la permeabilidad. Esas propiedades pasivas dan cuenta de la distancia de propagacin de seales tanto supraumbrales como subumbrales, as como del curso temporal de las mismas.
171
Bibliografa recomendada
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extrusion of injected sodium. J Physiol Lond 1969; 201: 495-514.
Glosario
Canales inicos. Protenas estructurales de membrana que constituyen poros permeables
para determinadas especies inicas.
Constante.
De espacio. Medida del decremento de un cambio pasivo de potencial de membrana
en funcin de la distancia por el axn (o la dendrita).
De tiempo. Medida del cambio pasivo de potencial de membrana en funcin del tiempo.
Despolarizacin. Reduccin de la polarizacin relativa al potencial de reposo de la membrana (lo contrario de la hiperpolarizacin).
Excitabilidad. Respuesta a un estmulo que libera energa potencial almacenada en un
sistema que lo aleja de un estado previo de reposo.
Hiperpolarizacin. Aumento de la polarizacin relativa al potencial de reposo de la
membrana (lo contrario de la despolarizacin).
Potencial.
De accin. Despolarizacin todo o nada de breve duracin del potencial de membrana que ocurre cuando ste llega a un valor despolarizado umbral.
De equilibrio. Potencial elctrico debido a la diferencia de concentracin de una especie inica a travs de una membrana semipermeable.
De membrana. Diferencia de potencial (voltaje) existente a ambos lados de la membrana celular, siendo el interior (citoplasma) negativo con respecto al exterior. En las
clulas excitables, la diferencia de potencial es de 60 a 80 mV.
Resistencia de membrana. Comportamiento resistivo (elctrico) que se debe a la existencia de canales inicos permanentemente abiertos en la membrana celular. Debido a esta
propiedad, cuando pasa corriente por la membrana se cumple la ley de Ohm.
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Respuestas.
Activas. Cambios del potencial de membrana producidos por una modificacin de
permeabilidad inica de la membrana debida a la apertura o cierre de canales inicos. Al
contrario que las respuestas pasivas, requieren gasto energtico.
Pasivas. Cambios del potencial de membrana que resultan de la circulacin de
corriente transmembrana que se explican por las propiedades pasivas (resistencia y
capacidad de la membrana) sin que existan modificaciones de la permeabilidad.
Todo o nada. Caracterstica de ciertos tipos de respuestas activas, como los potenciales
de accin, en los que la amplitud y el curso temporal tienden a ser iguales e independientes de la intensidad del estmulo que las genera.
Umbral. Transicin abrupta del estado de reposo al de actividad en las clulas excitables
(vanse potencial de accin y excitabilidad).
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