Universidad de Pamplona

Centro de Preparacin de Medios

Manual de Limpieza y Desinfeccin

CENTRO DE PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO

UNIVERSIDAD DE PAMPLONA

MANUAL DE LIMPIEZA Y DESINFECCION

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Manual de Limpieza y Desinfeccin

INTRODUCCION

El objetivo de este manual es establecer una serie de procedimientos para

llevar a cabo el programa de limpieza y desinfeccin en el centro de
preparacin de medios con el fin de mantener el laboratorio libre de
contaminacin ambiental y proporcionar un rea de trabajo limpia, saludable y
segura.
El cumplimiento de estos procedimientos asegurara la reduccin de la
contaminacin del producto, mayor calidad y menos devoluciones de los
medios de cultivos elaborados.
Se realiza como un aporte para el proceso de certificacin de los laboratorios
de microbiologa
Este documento se realiza como un aporte para el proceso de certificacin de
los laboratorios de microbiologa, y menciona algunos trminos relacionados
con el proceso de limpieza y desinfeccin ,compuestos utilizados y
los procedimientos bsicos de limpieza y desinfeccin de las reas que
conforman el centro de preparacin de medios.

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OBJETIVOS

GENERAL:
Describir los procedimientos de limpieza y desinfeccin que deben aplicarse
en las instalaciones del centro de preparacin de medios de cultivos para
garantizar la inocuidad de los medios elaborados

ESPECIFICOS:
Explicar los procesos de limpieza y desinfeccin de instalaciones, equipos y
materiales del centro de preparacin de medios
Disponer de un documento de consulta permanente para todos lo auxiliares
que laboran en el centro
Establecer dosificacin de detergentes y agentes desinfectantes para la
adecuada realizacin de los protocolos de limpieza y desinfeccin

INTRODUCCION

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Manual de Limpieza y Desinfeccin

Un programa de limpieza y desinfeccin , es un conjunto de actividades que

son aplicadas a cada una de las reas de proceso para eliminar o disminuir a
un mnimo aceptable la carga microbiana presente en los equipos, personal,
planta fsica y en el ambiente donde se realiza el proceso; adems de mejorar
la atmsfera de trabajo, hacindola , mas agradable, y optimizar la calidad
sanitaria de los productos.
Es importante mantener el laboratorios y el material limpios, ya que el propio
trabajo crea un flujo microbiano.
Estos microorganismos vienen del exterior:

Con materias u objetos contaminados

Con el aire, el agua
Con el hombre mismo, que se comporta como reservorio natural de las
bacterias

La implementacin del programa de limpieza y desinfeccin debe responder a

las necesidades y exigencias de la empresa, por tanto es muy importante
conocer los principios de limpieza y desinfeccin para evitar la contaminacin
de los productos.
Este programa de limpieza y desinfeccin debe permitir :

Definir lo que se debe hacer y los fundamentos de los mtodos que se van
a aplicar in situ

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Asignar a cada uno sus funciones y responsabilidades, as como el tiempo

necesarios para cada operacin

Asegurarse de que se ha realizado lo que se ha anotado en el registro

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LIMPIEZA Y DESINFECCION
La limpieza y la desinfeccin tiene como fin asegurar una buena higiene, tanto
a nivel de los locales, los materiales, el personal y el ambiente.
La limpieza regular y peridica permite mantener una flora microbiana
ambiental reducida necesaria y suficiente para ciertas actividades.

A continuacin se mencionan algunas definiciones relacionadas con el proceso

de limpieza y desinfeccin:

Desinfeccin: Es el conjunto de operaciones que tiene como objetivo la

reduccin temporal del numero total de microorganismos
vivos y la destruccin de los patgenos y alterantes; sin
embargo , la

esterilizacin busca la obtencin definitiva

de un medio completamente exento de grmenes

Desinfectante: Cualquier agente que limite la infeccin matando las

vegetativas de los microorganismos.

Detergente:

Material tensoactivo diseado para remover y eliminar la

contaminacin indeseada de alguna superficie de algn
material

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Eficiente:

Que produce realmente un efecto satisfactorio

Esterilizacin: Es la destruccin o eliminacin de todas formas de vida.

Puede llevarse a cabo por procesos fsicos o qumicos.

Higiene:

Todas las medidas necesarias para garantizar la sanidad e

inocuidad

Limpieza:

Es el conjunto de operaciones que permiten eliminar la

suciedad visible o microscpica. Estas operaciones se
realizan mediante productos detergentes elegidos en
funcin del tipo de suciedad y las superficies donde se
deposita

Solucin: Combinacin de un slido o de un producto concentrado con

agua, para obtener una distribucin homognea de cada uno de
los componentes.

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LA SUCIEDAD

El objetivo de la limpieza es la eliminacin de la suciedad , se debe llevar a la

naturaleza de esta y a la manera en como se adhiere a la superficie que se
desea limpiar.

ESTADO DE LA SUCIEDAD:
Se consideran:

SUCIEDAD LIBRE: Impurezas no fijadas en una superficie, fcilmente

eliminables.

SUCIEDAD ADHERENTE: Impurezas fijadas que precisan una accin

Mecnica o qumica para desprenderlas del
soporte

SUCIEDAD INCRUSTADA: Impurezas introducidas

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ETAPAS DE LA LIMPIEZA Y DESINFECCION

LIMPIEZA:

Recoger y desechar los residuos del producto, polvo o cualquier otra

suciedad presentes en el lugar a limpiar

Humedecer con suficiente agua potable el lugar o superficie que se va a

limpiar

Preparar la solucin de detergente que se va a usar

Enjabonar la superficie por limpiar, esparciendo la solucin de detergente

con esponja o cepillo

Restregar la superficie fuertemente con ayuda de un pao o cepillo,

eliminando toda la suciedad posible

Dejar la solucin de detergente aplicada por un tiempo corto para que este
acte

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Enjuagar con suficiente agua asegurndose de que todo el detergente se

elimine

Observar detenidamente el lugar que se limpio para verificar que haya sido
eliminada toda suciedad
DESINFECCION:

Asegurarse de que la superficie este limpia, si no es as limpiar como se

explico anteriormente
Antes de proceder a desinfectar se debe tener lista la solucin
Desinfectante
Aplicar la solucin desinfectante sobre el lugar o superficie que se va a
desinfectar
La solucin desinfectante se deja sobre el lugar que se esta desinfectando
por un tiempo mnimo de un minuto, dependiendo de la sustancia utilizada
Durante este tiempo, se esta logrando eliminar la mayor cantidad posible
de microorganismos, de modo que la superficie a limpiar queda bien
desinfectada

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LOS PRODUCTOS DE LIMPIEZA

COMPOSICION
DE LA
SUCIEDAD
AZUCARES
SOLUBLES

FAMILIA

EJEMPLOS DE
PRODUCTOS

CARACTERISTIC
AS PRINCIPALES

Alcalinos

Sosa potasa

Solubilizante

OTROS
HIDRATOS DE
CARBONO

Alcalinos
Productos

Saponificante

PROTEINAS

MATERIAS
GRASAS

enzimaticos
Alcalinos

Sosa potasa

Desengrasante
Solubilizante
saponificante

Productos

Proteasas

Hidrolizante

Anionicos

Desengrasante
Humectante

Cationicos

Emulsificante

No ionicos
Lipasas

Hidrolizante

Clorhidrico

Desengrasante
Solubilizante

enzimaticos
Tenso-activos

Productos
MINERALES

Hidrolizante

enzimaticos
ACIDOS

Nitrico
SECUESTRANTE

Fosforico
EDTA
Polifosfatos
Gluconato

Secuestrante

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AGENTES DESINFECTANTES

AGENTE
MECANISMO DE ACCION
DESINFECTA
NTE
ALCOHOLES Los alcoholes actan
destruyendo la membrana
celular y desnaturalizando las
protenas. Su accin es rpida,
incluso desde los 15 segundos,
aunque no tiene efecto
persistente. Sus efectos
biolgicos de dao microbiano
permanecen por varias horas.

ALDEHDOS

FORMALDEH
DO

GLUTARALDE
HDO

ESPECTRO DE ACCION

USOS

Los alcoholes poseen una

rpida accin y amplio espectro
de actividad, actuando sobre
bacterias gramnegativas y
grampositivas, incluyendo
micobacterias, hongos y virus
pero no son esporicidas.
El etanol al 70% destruye
alrededor del 90% de las
bacterias cutneas en dos
minutos

El alcohol se utiliza
muy
frecuentemente
para la desinfeccin
o limpieza de la piel,
Su aplicacin est
tambin indicado en
la desinfeccin de
material no crtico
como termmetros

Actan mediante la alquilacin

de los grupos qumicos de las
protenas y cidos nucleicos de
las bacterias, virus y hongos. El
formaldehdo acta sobre las
protenas por desnaturalizacin.
El glutaraldehdo acta de forma
similar en pH alcalino. Sobre la
pared celular, el glutaraldehdo
acta al nivel de los puentes
cruzados del peptidoglicano

Los aldehdos tienen un amplio Esterilizacin de

espectro de actividad contra
objetos inanimados,
microorganismos y virus.
como instrumentos.
Desinfeccin de
El formaldehdo es bactericida, material de metal,
esporicida y virucida, pero
caucho y plstico.
trabaja ms lentamente que el Desinfeccin de alto
glutaraldehdo.
nivel de
hemodializadores
El formaldehdo es un producto
Al 20% a 30% es
qumico extremadamente
astringente.
reactivo y que interacta con
protenas, ADN y ARN in vitro.

El glutaraldehido, cuando la
solucin es alcalina (pH 7,5 a
8,5) se activa y posee actividad
esporicida. El glutaraldehdo
alcalino al 2% es bactericida,
fungicida, virucida, en cortos

Su actividad biocida se debe a

la alteracin del ARN, ADN y
sntesis de protenas.

Desinfeccin y
esterilizacin de
plsticos y caucho de
equipos de anestesia
Desinfecta en 45
minutos a 25C,

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periodos de tiempo, pero

necesita 6 horas de contacto
para destruir las esporas
bacterianas. Tiene una accin
moderada frente a
micobacterias.

HALOGENADO El mecanismo de accin sobre

S
los microorganismos es poco
conocido, pero se postula que
actan inhibiendo las reacciones
enzimticas y desnaturalizando
las protenas

eliminando grmenes
patgenos y
vegetativos,
incluyendo M.
tuberculosis,
Pseudomonas
aeruginosa y VIH 1 y
2.
Esteriliza en 10 horas,
destruyendo todas las
esporas.
Activo contra virus en
10 minutos a 20C.

Los hipocloritos tienen un

extenso espectro de actividad,
son bactericidas, virucidas,
fungicidas y esporicidas, pero
actividad variable frente a
micobacterias, segn la
concentracin en que se use.

El hipoclorito de
sodio se presenta
en solucin a una
concentracin de
5,25%. Para las
desinfecciones, las
diluciones en uso
son entre 0,1% y
1%.
Limpieza de vajilla.
Lavado de ropa en
general.
Cloracin del agua.
Desinfeccin de
algunos alimentos.
Desinfeccin de
desechos lquidos
contaminados

El yodo tiene una poderosa

actividad germicida, ataca
bacterias grampositivas y
gramnegativas, micobacterias,
esporas, hongos, virus, quistes
y protozoos.

La desinfeccin de
la piel sana.
El tratamiento de
afecciones de la piel
causadas por
bacterias y hongos.
La limpieza de las
heridas, en solucin
acuosa.

HIPOCLORITO
S

COMPUESTO Los compuestos yodados son

S YODADOS agentes oxidantes, se combina

irremediablemente con residuos

tirosina de las protenas.
Precipitan las protenas
bacterianas y cidos nucleicos.
Alteran las membranas celulares
al unirse a los enlaces C=C de
los cidos grasos.
Acta disminuyendo los
requerimientos de oxgeno de los
microorganismos aerobios,
interfiriendo la cadena

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respiratoria por bloqueo del

transporte de electrones a travs
de reacciones electrolticas con
enzimas.

YODOFOROS Tienen amplio espectro de

actividad contra bacterias y

hongos y presentan el mismo
mecanismo de accin y espectro
de actividad de los yodados. El
ms conocido de los yodforos
es la yodopovidona compuesta
de yodo y polivinil-pirrolidona

La yodopovidona es activa
contra bacterias grampositivas,
gramnegativas, hongos, virus y
micobacterias. Es efectiva
contra el S. aureus MRSA y
especies de enterococo.
Resistencia significativa a
yodopovidona no ha sido
reportada

El lavado de las
manos, como
antisptico.
La limpieza de la
piel sana en
procedimientos
quirrgicos.
La limpieza de
objetos de
superficie dura.

Los fenoles se utilizan ms

como desinfectantes, tienen
propiedades antibacterianas
frente a estreptococos,
estafilococos y Escherichia coli,
y tambin propiedades
antifngicas y antivirales

En la actualidad,
slo se emplea para
la desinfeccin de
puntos crticos en la
industria,
aplicndolo a
superficies, ropa
blanca,
instrumentos,
sanitarios y excreta

FENOLES

Son bactericidas a bajas

concentraciones, causando dao
a las membranas con prdida de
los constituyentes
citoplasmticos, inactivando
irreversiblemente las oxidasas y
deshidrogenasas de membrana
y produciendo desnaturalizacin
de las protenas.

OXIDANTES

Los oxidantes (peroxgenos) son Su espectro de actividad es

productos que liberan oxgeno
sobre bacterias vegetativas,
naciente. Considerados como
virus, micobacterias y esporas.
compuestos bactericidas tiles,
su mecanismo de accin
consiste en la inactivacin de
protenas enzimticas actuando
sobre los grupos -SH de las
protenas de estructura y de las
protenas de funcin de las
bacterias.

PERXIDO DE El perxido de hidrgeno tiene

HIDRGENO
efectos oxidantes por producir
OH y radicales libres, los cuales
atacan a los componentes
esenciales de los

Su espectro de
actividad es sobre
bacterias
vegetativas, virus,
micobacterias y
esporas.

Es activo frente a bacterias y

Antisptico tpico
virus, segn la concentracin y en solucin al 3%.
condiciones de utilizacin.
Estudios in vitro de soluciones
de perxido de hidrgeno al 3%

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COMPUESTO
S DE AMONIO
CUATERNARI
O
(agentes
activos
catinicos)

microorganismos como lpidos,

protenas y ADN.
Es un agente oxidante de efecto
fugaz por ser descompuesto por
las catalasas de los tejido

han mostrado amplio espectro

de eficacia, con mayor
actividad frente a bacterias
grampositivas

Son sustancias que lesionan la

membrana celular debido a que
desorganizan la disposicin de
las protenas y fosfolpidos, por
lo que se liberan metabolitos
desde la clula, interfiriendo con
el metabolismo energtico y el
transporte activo.

Activos para eliminar bacterias

grampositivas y gramnegativas,
aunque stas ltimas en menor
grado. Son bactericidas,
fungicidas y virucidas, actuando
sobre virus lipoflicos pero no
sobre los hidrfilos. No tiene
accin sobre las micobacterias,
ni son esporicidas.

Desinfeccin de
superficies no
crticas.
Accin
desodorante.
Limpieza de
superficies speras
o difciles.

RECOMENDACIN DE CONCENTRACIONES A EMPLEAR SEGN EL ELEMENTO

A DESINFECTAR

ELEMENTO A DESINFECTAR
Agua potable

PARTES POR
MILLN
(PPM)
0.2

Desinfeccin de manos

50

Desinfeccin de mesas e instrumental de acero inoxidable

200

Desinfeccin de pisos, mesones en baldosn, ropa, tiles

500

de aseo y material plstico

Desinfeccin de material orgnico

5000

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PREPARACION DE DESINFECTANTES
Para la preparacin de los agentes desinfectantes a las concentraciones deseadas
se emplea la siguiente formula:
V1C1=V2C2
DONDE:

V1= V2*C2/ C1
V1= Volumen deseado
C1= Concentracin conocida
V2= Volumen conocido
C2= Concentracin deseada

Ejemplo: Hipoclorito comercial al 13% y se desea preparar al 6% un

volumen de 50 mililitros = 50cc de hipoclorito al 6%.
V1C1=V2C2
V1 (13%) =( 50ml) (6%)
V1= (50ml) (6%)
(13)%
V1= 24 ml

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Se debe agregar 24 ml. de hipoclorito de sodio a 26 ml. de agua destilada para

tener 50 ml. de una solucin al 6%
FACTORES QUE AFECTAN LA EFICACIA DE LOS ANTISEPTICOS Y
DESINFECTANTES

CONCENTRACIN DEL AGENTE Y TIEMPO DE ACTUACIN

Existe una estrecha correlacin entre la concentracin del agente y el tiempo

necesario para matar una determinada fraccin de la poblacin bacteriana. Si
se modifica la concentracin se provocan cambios en el tiempo para lograr un
mismo efecto. Un ejemplo es con los fenoles: un pequeo cambio en la
concentracin provoca cambios muy acentuados en el tiempo para lograr un
mismo efecto, as, si reducimos la concentracin de fenol desde un valor dado
a la mitad, necesitamos emplear 64 veces ms tiempo para conseguir matar
una misma proporcin de bacterias. Refirindonos al tiempo, no todas las
bacterias mueren simultneamente, ni siquiera cuando se aplica un exceso del
agente.

pH
Afecta tanto la carga superficial neta de la bacteria como el grado de ionizacin
del agente. En general, las formas ionizadas de los agentes disociables pasan

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mejor a travs de las membranas biolgicas y por lo tanto son ms efectivos.

Los agentes aninicos suelen ser ms efectivos a pH cidos; los agentes
catinicos muestran ms eficacia a pH alcalinos.

TEMPERATURA
Normalmente, al aumentar la temperatura aumenta la potencia de los
desinfectantes. Para muchos agentes el aumento en 10 C supone duplicar la
tasa de muerte.
NATURALEZA DEL MICROORGANISMO Y OTROS FACTORES
ASOCIADOS A LA POBLACIN MICROBIANA.
Segn la especie, fase de cultivo, presencia de cpsula o de esporas y nmero
de microorganismos se afecta la potencia. El bacilo tuberculoso suele resistir a
los hipocloritos mejor que otras bacterias. La presencia de cpsula o esporas
suelen conferir ms resistencia.

PRESENCIA DE MATERIALES EXTRAOS

La presencia de materia orgnica como sangre, suero o pus afecta
negativamente la potencia de los antispticos y desinfectantes de tipo
oxidantes, como los hipocloritos y de tipo desnaturalizante de protenas, hasta
el punto de hacerlos inactivos en cuanto a su poder desinfectante y/o

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esterilizante.

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