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UNIVERSIDAD TCNICA DE MACHALA

UNIDAD ACADMICA DE CIENCIAS QUMICAS


Y DE LA SALUD
LABORATORIO DE MICROBIOLOGA II
PRACTICA # 3
TEMA: Ticin de Gram
1. DATOS INFORMATIVOS
NOMBRE DEL ESTUDIANTE: Helen Romero
CARRERA: Bioqumica Y Farmacia
CURSO: 6to B
FECHA: 27/06/2016
DOCENTE RESPONSABLE: Dra. Rely Reyes
2.- FUNDAMENTACIN
La tincin de Gram, tambin conocida como coloracin de Gram, es una
tcnica de laboratorio que se utiliza rutinariamente en los estudios
microbiolgicos de las bacterias. Fue diseada por Christian Gram, un
cientfico dans, en el ao 1884. El objetivo de Gram era conseguir una
prueba con la que fuera posible diferenciar diferentes grupos de
bacterias para as poder estudiarlas y clasificarlas. La prueba result
todo un xito y pronto se convirti en una tcnica muy til no solo para
el estudio de las bacterias, sino tambin para poder identificarlas
rpidamente en una infeccin y seleccionar el antibitico ms adecuado
para tratarla. (Jatin, 2011)
La tcnica se basa en aplicar una serie de colorantes a una muestra de
cualquier origen (esputo, orina, pus, etctera) que supuestamente
contenga bacterias no identificadas. Los colorantes tien la pared de las
bacterias de color morado y, tras unos minutos, se realiza un lavado del
colorante. Despus de eso puede que el colorante permanezca en la
pared bacteriana o que se haya ido. En el primer caso permanecera el
color morado, y se tratara de bacterias Gram positivas y, en el segundo,
la pared tendra un color rosado, y seran Gram negativas. (Jatin, 2011)
Estos dos grupos de bacterias son los pilares en los que se basa la
clasificacin de la amplia mayora de las bacterias. Cada uno de los
grupos responde de forma diferente a cada tipo de antibiticos, por eso

es una tcnica til para seleccionar el frmaco antimicrobiano inicial


ante una infeccin. Hay que tener en cuenta que en ciertas situaciones
(como la sepsis) es muy importante iniciar un tratamiento antibitico
adecuado de forma precoz, por eso la tincin de Gram se pide de
urgencia en muchas ocasiones. (Jatin, 2011)
La tincin de Gram tambin tiene ciertas limitaciones. Algunas
bacterias no tienen pared, como por ejemplo las Chlamidias, y no se
podrn identificar, al igual que los virus. En esos casos la tincin no
colorear ningn germen. Otro aspecto negativo de la prueba es que no
puede identificar el tipo exacto de bacteria responsable de la infeccin.
Para ello es necesario realizar un cultivo microbiolgico que se
acompaa siempre de un antibiograma para estudiar de forma exacta el
antibitico ms efectivo. (Jatin, 2011)
Fundamentos de diferenciacin de gram positivo y gram negativo
Los fundamentos de la tcnica se basan en las diferencias entre las
paredes celulares de las bacterias gram positivas y gram negativas
La pared celular de las bacterias gram positivas posee una gruesa capa
de peptidoglicano, adems de dos clases de cidos teicoicos: anclado en
la cara interna de la pared celular y unido a la membrana plasmtica,
se encuentra el cido lipoteicoico, y ms en la superficie, el cido
teicoico que est anclado solamente en el peptidoglicano (tambin
conocido como murena).
Por el contrario, la capa de pptidoglucano de las bacterias gram
negativas es delgada, y se encuentra unida a una segunda membrana
plasmtica exterior (de composicin distinta a la interna) por medio de
lipoprotenas. Tiene una capa delgada de peptidoglicano unida a una
membrana exterior por lipoprotenas. La membrana exterior est hecha
de protena, fosfolpido y lipopolisacrido. (Jatin, 2011)
Por lo tanto, ambos tipos de bacterias se tien diferencialmente debido
a estas diferencias constitutivas de su pared. La clave es el
peptidoglicano, ya que es el material que confiere su rigidez a la pared
celular bacteriana, y las gram positivas lo poseen en mucha mayor
proporcin que las gram negativas. (Jatin, 2011)
La diferencia que se observa en la resistencia a la decoloracin se debe
a que la membrana externa de las bacterias gram negativas es soluble
en solventes orgnicos, como por ejemplo la mezcla de alcohol/acetona.
La capa de peptidoglucano que posee es demasiado delgada como para
poder retener el complejo de cristal violeta/yodo que se form
previamente, y por lo tanto este complejo se escapa, perdindose la
coloracin azul-violcea. Por el contrario, las bacterias gram positivas,

al poseer una pared celular ms resistente y con mayor proporcin de


pptidoglucano, no son susceptibles a la accin del solvente orgnico,
sino que este acta deshidratando los poros, cerrndolos, lo que impide
que pueda escaparse el complejo cristal violeta/yodo, y manteniendo la
coloracin azul-violeta.
3.- OBJETIVOS:
Reconocer microscpicamente los diferentes tipos de bateras utilizando
coloracin y fijacin de Gram.
4.- MATERIALES E INSUMOS
Materiales
Cubre objetos

Equipos
Microscopio

Reactivos
Cristal violeta

Porta objetos

Lugol

Mechero
Asa de platino

Alcohol cetona
Fucsina

Cultivo de bateras

Safranina

Soporte
5.- PROCEDIMENTO
Procedimiento de fijacin
1. Colocar una pequea gota de suero fisiolgico en el portaobjetos
2. Tome una muestra de cultivo y disuelva la colonia en el portaobjetos
3. Suspender la muestra sobre el mechero para fijarla
Procedimiento de tincin
1. Colocar cristal violeta en toda la muestra por un minuto
2. Se lava con agua corriente
3. Luego se agrega lugol este debe aplicarse como el cristal violeta y
tambin se debe cubrir la muestra por 1 min. Enjuagar con agua
corriente.
4. Cubrir la muestra con alcohol cetona para decolorarla, es el paso
ms crtico. Este debe cubrir la muestra por el tiempo que puede
durar de 15 a 30seg segn corresponda y la reaccin debe ser
detenida con el lavado con agua corriente. El tiempo debe ser el
mismo para todas las muestras.

5. El ltimo paso consiste en agregar una tincin de contraste, para


teir a las bacterias que pierden el cristal violeta. Para esto se agrega
safranina cubriendo la muestra por 15seg o 1min dependiendo.
Luego se lava la muestra con agua corriente.
6.- CUADRO DE RESULTADOS
Estafilococos aureus

Estreptococos

En la prctica se puedo observar que los Estreptococos tienen forma


coccea, tienen la particularidad de presentarse en forma de cadenas
de longitud variable. Adems dan positivo a la tincin de Gram en
cultivos jvenes, estos se van a teir de color azul
Los Staphylococcus son celulas esfricas que tienen la particularidad de
presentarse en forma de racimos de uvas. Adems dan positivo a la
tincin de Gram tindose de color azul.
7.- CONCLUSIONES
Al finalizar la prctica se concluye que la tincin de Gram es una
tcnica muy importante en los anlisis microbiolgicos, debido a que
hace posible la diferenciacin de diferentes grupos de bacterias para as
poder estudiarlas y clasificarlas.
Adems esta tcnica es de mucha utilidad cuando
se necesita
identificar de urgencia a la bacteria en caso de que se presenta un
cuadro de infeccin, para luego seleccionar el antibitico ms adecuado
para tratarla.
8.- RECOMENDACIONES
Se recomienda que:

Cuando se tome una muestra de cultivo, nunca olvidar que se debe de


realizar a lado de la llama del mechero para evitar la contaminacin de
la muestra.
Para tener una mejor observacin de la muestra realizar una correcta
emulsin de la muestra.
Se debe tener muy en cuenta el tiempo en el que se utilizan los
colorantes y dems reactivos durante la tincin.
Procurar hacer con mucho cuidado la fijacin de la muestra, caso
contrario se podra quemarla y fallara nuestra prctica.
9.- BIBLIOGRAFA
https://www.google.com.ec/search?
q=estreptococos&espv=2&biw=1366&bih=667&source=lnms&tbm=isch
&sa=X&ved=0ahUKEwiki9Keh7LNAhWDbB4KHew8A30Q_AUIBigB

Jatin,

M.

(08 de

Febrero

de

2011).

MedlinePlus.

Obtenido

de

https://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/007621.h
tm

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