Escuela de Ciencias Agrcolas, Pecuarias y del Medio Ambiente

Programa Ingeniera Ambiental

MICROBIOLOGA AMBIENTAL
INFORME

PRESENTADO POR:

Estudiante

Correo electrnico estudiante

Cdigo

Grupo de
campus

Edna Karina
Caviedes
Cedeo
Luz Estella
Castellanos
Leidy Tatiana
Ramrez
Alexander
Ortiz Rojas
Diana Jimena
Zapata
Mayron
Mazabel
Castro
Juan Carlos
Moreno
Nupia

ekcaviedesc@unadvirtual.edu.co
edkacace@gmail.com

1075297613

358010_32

41109672
tatis1328@hotmail.es

1075275653

alorro@hotmail.es

96343016

zady.ysx@hotmail.com

1084577848
1081730856

juan.nupia@gmail.com

1079182682

TUTOR DE LABORATORIO:
Diego Lancheros (dialelanca@gmail.com)

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA UNAD

PROGRAMA INGENIERIA AMBIENTAL
CEAD NEIVA

358010_32

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Programa Ingeniera Ambiental
2016-5
INTRODUCCION
En el desarrollo de esta prctica se conoce las diferentes Normas de Bioseguridad que se
deben tener en cuenta en un Laboratorio, con el fin de evitar accidentes o contraer
enfermedades. Adems, se identifican los diferentes tipos de materiales y equipos necesarios
para el desarrollo de las diferentes practicas dentro del Laboratorio.
Se realiza un anlisis Microbiolgico con diferentes tipos de tcnicas empleadas en el campo
de la Ingeniera, con el fin de determinar los distintos tipos de hongos y bacterias. Dentro de las
tcnicas empleadas se utiliz la Tincin de Gram con el fin de lograr observar las Bacterias
presentes en la saliva de la Boca de una persona; en el anlisis microbiolgico de suelo se
lleva a cabo con el fin de crear un medio de cultivo para hongos.
En la actualidad existen tcnicas aplicadas en el Campo de la Microbiologa Ambiental con el
fin de diagnosticar e implementar alternativas para el desarrollo agrcola en el mbito de la
Ingeniera Ambiental y la Industria, realizando pruebas para determinar los indicadores de
contaminacin de agua potable, teniendo en cuenta las Normas Ambientales Vigentes
(Resolucin 2115 del 2007). Entre las tcnicas ms utilizadas encontramos la Filtracin por
membrana.
OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
Reconocer e identificar los diferentes tipos de tcnicas de anlisis utilizadas en el campo de la
Microbiologa en el momento de determinar los diferentes tipos de bacterias y hongos
presentes en diferentes sustancias y/o medios.
OBJETIVOS ESPECIFICOS

Aplicar las Normas de Bioseguridad para la realizacin de prcticas en el Laboratorio.

Conocer las diferentes tcnicas para identificar hongos y bacterias en el laboratorio.
Identificar los diferentes medios de cultivo para el crecimiento de Microorganismos.

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PRACTICA 1- BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO

Los laboratorios de microbiologa estn regidos por normas de seguridad e higiene que deben
cumplirse a cabalidad para garantizar la proteccin contra infecciones de los estudiantes u otro
personal que labora en estas instalaciones, as como garantizar la calidad de las tcnicas y la
confiabilidad de los resultados.
NORMAS DE BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO

Entrar al laboratorio en forma ordenada, dejar las carteras, libros y otros objetos
personales en el lugar que se les indique para tal fin.

Llevar puesta la bata de laboratorio en todo momento. La misma debe permanecer

completamente cerrada.

Limpiar y desinfectar las superficies de trabajo, antes de comenzar y al finalizar la

sesin prctica.

Lavar las manos con agua y jabn antes de realizar las actividades programadas, antes
de salir del laboratorio y siempre despus de manejar materiales que se sabe o se
sospecha que son contaminantes.

Trabajar cerca del mesn, adoptando una buena postura y estando fsicamente
cmodo.

Llevar un calzado apropiado, preferiblemente cerrado y de suela antideslizante en las

reas de laboratorio.

Evitar llevar en el laboratorio accesorio que pueda ser fuente de contaminacin (por
ejemplo joyas).

Recoger el cabello largo.

Evitar desplazamientos
indispensable.

No comer, beber, fumar, almacenar comida, objetos personales o utensilios, aplicarse

cosmticos ni ponerse o quitarse lentes de contacto en ningn rea del laboratorio.

Conocer el manejo de todos los equipos y reactivos a emplear antes de iniciar las
actividades indicadas en la prctica. Si usted tiene alguna duda, dirjase al profesor.

Mantener el rea de trabajo ordenada, libre de libros, cuadernos u objetos personales,

exceptuando aquellos equipos y materiales necesarios para la realizacin del trabajo
prctico.

innecesarios,

movimientos

bruscos.

Hablar

slo

lo

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Tener cuidado con el alcohol cuando manipule el mechero. Nunca debe dejar ste
desatendido.

Regresar los reactivos y equipos empleados (microscopio, mechero, etc.), limpios y de

manera ordenada a su respectivo lugar una vez finalizada la actividad. Reporte
cualquier dao de los mismos al profesor.

No usar ningn reactivo que no est debidamente identificado, verificar las etiquetas de
los mismos y estar seguro de cmo emplearlo.

Realizar solamente aquellas actividades indicadas por el profesor, no llevar a cabo

experimentos no autorizados.

Reportar inmediatamente cualquier accidente al profesor (derrame de material

contaminado, heridas, quemaduras, etc.), ninguno puede ser catalogado como menor.

Emplear tcnicas aspticas para el manejo de cultivos de microorganismos.

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PRCTICA No. 1
RECONOCIMIENTO DEL LABORATORIO Y MATERIALES DE MICROBIOLOGIA

Escriba debajo de cada instrumento del laboratorio el nombre

Probeta Graduada

Vaso de Precipitado

Trpode

Gradilla
plstica con
escurridera

Mortero con
mazo

Vidrio reloj

Matraz Erlenmeyer

Embudo de vidrio

Caja de Petri
Cpsulas de
porcelana

Desecadores
Bureta
Graduada

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Cilindro Graduado

Esptula

Pipeta Volumtrica

Frasco lavador
o Pisetas

Pipeteador de
Cremallera

Botella Winkler

Agitador
Matraz
aforado o
Volumtrico

Tubo de Ensayo

Termmetro

Pinza para crisol

Embudo de
Separacin

Soporte
universal

Aro metlico

Escobilla o
Churrusco
Lavador

Mechero

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Ayudante de
pipeta o
pipeteador

Rejilla
Balanza Analtica o
Precisa

1
2
3
4
5
6
7
8
9
1
0
11
1
2
1
3
1

Frasco
Volumtrico

Escriba el nmero que corresponda de acuerdo a su empleo o utilidad.

MATRAZ
ERLENMEYER
BALON FONDO
PLANO
MATRAZ DE
SUCCION
VASO DE
PRECIPITADO
BOTELLA
YODOMETRICA O
WINKLER
TUBOS DE ENSAYO
MATRAZ AFORADO
O
VOLUMETRICO
CILINDRO
GRADUADO

19

Se emplea para triturar sustancias.

6
9

Se utilizan para calentar pequeas cantidades de

lquidos, y hacer ensayos a pequea escala.
Se utiliza para separar lquidos inmiscibles.

20

Se utiliza para colocar tubos de ensayo.

22

Se emplean para lavar precipitados y transferirlos

a otro recipiente.

23
2

EMBUDO
DE
SEPARACION
BURETA
GRADUADA
BURETA
AUTOMATICA
PIPETA GRADUADA

21

PIPETAS
VOLUMETRICAS
EMBUDOS

18

Se utiliza sobre el mechero para calentar

Se utiliza para calentar lquidos con poca perdida
de evaporacin y para construir generadores de
gases.
Sirven para tomar cantidades pequeas de
muestras slidas para ser pesadas o trasferidas
de un envase a otro
Se utiliza para sostener mltiples aditamentos,
tales como pinzas, aros o anillos etc.
Se utiliza para pesar slidos, cubrir vasos de
precipitado y evaporar gotas de lquidos voltiles.
Se utiliza para la determinacin de oxgeno
disuelto.
Se utiliza para medir volmenes aproximados de
lquidos.
Se emplean para calcinar sustancias

12

Mide con precisin volmenes variables de

16

15
5
8

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4
1
5

VIDRIO RELOJ

10

1
6

ESPATULAS

1
7
1
8
1
9
2
0
2
1
2
2

CAPSULA

CRISOLES

14

MORTERO CON
MAZO
GRADILLA

SOPORTE
UNIVERSAL
PISETAS

13

2
3

TRIPODE

2
4

CAJA DE PETRI

11

17

24

lquidos.
Se emplea para titular soluciones, aadiendo
volmenes regulados se llena y se enrasa
manualmente.
Sirve para medir un volumen especfico. Se
utiliza para preparar soluciones a concentracin
exactas.
Se utiliza para filtraciones al vaco con bomba de
succin.
Se utilizan para filtrados y trasvasar lquidos de
un recipiente a otro.
Se utiliza para disolver sustancias, calentar
lquidos y recoger filtrados.
Se usa para calentar sustancias y evaporar
lquidos.
Mide volmenes exactos de lquidos.
Es utilizada para preparar cultivos de hongos y
bacterias, y tambin para seleccionar muestras
de animales.
Se utiliza para calentar lquidos, con poca
perdida de evaporacin, hacer titulaciones y
recristalizar un slido.
Se emplea para titular soluciones, aadiendo
volmenes regulados se llena y se enrasa
automticamente.

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PACTICA No 3
MTODOS DE SIEMBRA PARTE B
En esta etapa los estudiantes utilizarn una de las tcnicas de siembra ms usadas en
laboratorio, que permite el recuento de microorganismos en una muestra como aguas, suelos
etc. La tcnica a realizar en este punto hace referencia a los recuentos de microorganismos
utilizando diluciones seriadas en base 10, donde se dispersa la poblacin de microorganismos
permitiendo conocer el nmero aproximado en una muestra.
MATERIALES
1.
2.
3.
4.
5.
6.

Muestra de suelo o agua residual.

Frascos con solucin salina 0.85% o agua peptonada al 0.1% (90 ml)
Tubos tapa rosca con 9 ml de solucin salina o agua peptonada al 0.1% (6 tubos)
Cajas de Petri con agar Lisina (8 cajas)
Pipetas de vidrio o pipeta automtica. (1 ml)
Rastrillos.

PROCEDIMIENTO
1. Pesar 10 gramos de la muestra, mezclarla con los 90 ml de solucin salina o agua
peptonada.
Se utiliz una muestra de suelo trada por una compaera de Nataga-Huila, el tutor nos
dividi en dos grupos y se procedi a pesar los 10 gramos en la balanza, luego se midi
90 ml de solucin salina en una probeta y se adicionaron a un frasco volumtrico de
tapa rosca, luego se adicionaron los 10 gramos de suelo al frasco con los 90ml de la
solucin salina.

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2.

Realizar diluciones seriadas desde 10-1 hasta 10-4

Este procedimiento se realiz dentro de la caja de Flujo laminar y se prendi el Mechero

para evitar contaminar con agentes externos al procedimiento. Se tomaron 3 tubos de
ensayo por grupo en nuestro caso se realizaron las diluciones solo en los tres tubos de la
10-1 hasta 10-4 luego de agitar la mezcla de suelo y solucin salina para homogenizarla se
procedi con una pipeta a extraer 1 ml y adicionarlo por cada uno de los tubos de ensayo
Los cuales ya contenan 9ml de solucin salina al 5.5%. Se procedi a marcar los tubos de
ensayo segn corresponda 10-1 10-2 10-3 10-4
En nuestro caso igual que el punto anterior se tomaron 4 cajas de Petri con agar lisina que
era el medio de cultivo que haba en el laboratorio Servilab donde se desarroll la prctica;
se marcaron con la fecha y el nmero de las diluciones correspondientes 10-1 10-2 10-3 10-4
con un lpiz rojo; en el borde de la tapa de cada caja de Petri.

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3. Sembrar por duplicado las diluciones 10 -2 10-4 10-6 tomando 0,1 ml de cada dilucin por
superficie, con ayuda del rastrillo homogenizar la microgota sobre la superficie del agar
sin romperlo.
Se tom un ml de cada dilucin con la pipeta, utilizando una pipeta diferente por cada
dilucin; segn orientacin de la Microbiloga Goretti quien realizo acompaamiento a la
prctica de laboratorio. Se procedi con la misma pipeta de forma suave agregar el 0.1 ml
de dilucin en cada una de las cajas de Petri y de una forma suave se esparci en la
superficie, sin ir a romper el medio de cultivo en este caso el Agar lisina.

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4. Incubar por 48 horas a 36 a 38 C y realizar el recuento.

Se procedi a observar por medio del Estereoscopio, la cual se visualiz en la muestra
10-1 13 hongos redondos blancos en el fondo de la caja, en el 10 -2 se observan 5
hongos filamentosos en la parte superior, 10-3 se observa 2 hongos filamentosos en la
superficie y en la 10-4 se pueden ver 2 hongos filamentosos.
El hongo tiene como nombre Aspergillus niger, es comn en nuestra vida cotidiana ya
que produce un moho que se encuentra en diferentes alimentos que consumimos, esta
se puede formar en levaduras e Hifas. Su caracterstica ms comn es que son hongos
Filamentosos compuesto de clulas llamadas Hifas.

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PRACTICA 4. TECNICAS DE TINCIN

PARTE A - TINCIN DE GRAM PARA BACTERIAS.
Para poder observar al microscopio los distintos tipos de microorganismos existen distintos
tipos de coloraciones o tinciones que tienen afinidad con ciertas partes de la clula y permite
diferenciarlas y observar algunos rganos de las clulas. Para el caso de bacterias la tcnica
ms usada es la tincin de Gram, donde se permite clasificar las bacterias en Gram positivas
(violetas) y Gramnegativos (Fucsias).
MATERIALES
1. Muestras de Microorganismos, (practica aislamiento)
2. Colorantes para tincin de Gram (Cristal violeta, Lugol. Alcohol acetona, Fucsina de
Gram)

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3. Aceite de inmersin
4. Microscopio.
5. Asas redondas
PROCEDIMIENTO
1. Tomar las colonias de bacterias que los estudiantes sembraron anteriormente (tcnicas
de aislamiento) y realizar un frotis en una lmina portaobjetos, colocando una gota de
agua y con ayuda del asa redonda homogenizar para expandir el frotis en la lmina.
En este caso lo realizamos mediante frotis bucal se tomaron muestras de tres
estudiantes voluntarios; frotando la lengua con un aplicador de madera con algodn
luego se coloc la muestra en una lmina portaobjetos se procedi a realizar el
extendido de forma uniforme. Antes del procedimiento se dio explicacin por parte de la
Microbiloga donde nos explic que con este procedimiento se lograban observar e
identificar cocos, bacilos y clulas epiteliales.

2. Dejar secar al aire libre la muestra, una vez se encuentre seca, fijar al calor la muestra
en el mechero (se coloca 3 veces rpidamente sobre el fuego la lmina) para fijar la
muestra.

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3. Una vez se encuentra la muestra fijada se procede a colocarle varias gotas de cristal
violeta, dejando por un minuto y luego lavar en el grifo (solo para quitar el exceso de
colorante.
Se procedi a colocar las muestras en una parrilla, se les aplico varias gotas de cristal
violeta, con el fin de colorear las bacterias Gram positivas dejando por un minuto, luego
se lava con agua destilada de forma suave para evitar quitar la muestra.

4. Colocar unas gotas de Lugol, dejar por un minuto y lavar.

Se coloc unas gotas del mordiente Lugol que nos ayuda a un ms a fijar la muestra.
Luego se lava como se debe hacer en cada procedimiento.

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5. Colocar una gota de alcohol acetona, dejar por 15 minutos, lavar.

Se agreg ala muestra una gota de alcohol acetona para decolorar la muestra se dej
los quince minutos, luego se lav nuevamente.

6. Colocar unas gotas de Fucsina de Gram, dejar por un minuto, lavar y dejar secar la
muestra.
Se procedi a colorear con fucsina con el fin de dar coloracin a las bacterias Gram
negativas; luego se lav y se dej secar.

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7. Una vez se encuentra seca la muestra agregar una gota de aceite de inmersin y
observar en el microscopio en el objetivo de 100x.
La funcin del aceite de inmersin es restringir el movimiento de la muestra, adems de
evitar el rozamiento entre el cubre objetos y el objetivo, generalmente se utiliza cuando
vamos observar con el objetivo 100x. Otra funcin del aceite de inmersin es evitar que
la luz se desve; al contrario lo que se pretende es que la luz llegue concentrada hacia
la muestra.

8. Observar las morfologas (bacilos, cocos, Gram positivos, Gram negativos)

Hubo dificultad para enfocar la muestra y la imagen no fue lo suficientemente clara; pero
sabemos que los bacillos son de forma alargada, los cocos de forma redonda, las
bacterias Gram positivas se observan de color violeta y las Gram negativas de color
rojizo o rosado.

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PRACTICA 5 ALGUNAS TECNICAS APLICADAS EN MICROBIOLOGA AMBIENTAL.
La microbiologa enfocada en la parte ambiental ha permitido diagnosticar e implementar
nuevas alternativas para el desarrollo agrcola, en el mbito de la ingeniera ambiental y la
industria.
Con los conocimientos adquiridos en el curso y teniendo un conocimiento bsico de la
microbiologa, los estudiantes realizaran las siguientes pruebas que actualmente se utilizan a
nivel mundial y especficamente en el pas.
INDICADORES DE CONTAMINACION DE AGUAS POTABLES
Los indicadores de contaminacin son utilizados para medir el grado de contaminacin o
afectacin de cuerpos de agua, agua de consumo etc., en Colombia para el caso de aguas
potables la normatividad exige un valor de 0 unidades formadoras de colonia en 100 ml de
agua muestreada para el caso de coliformes totales como indicador.
FILTRACIN POR MEMBRANA
La Filtracin por membrana son filtros de superficie, estas muestran una estructura
microporosa. Es una tcnica utilizada para retener solidos suspendidos y otras sustancias de
un lquido y as purificarlos.
Durante el proceso de la Filtracin las partculas de gran tamao son retenidas por los poros de
la membrana, existen 3 procesos: La Microfiltracin, la Ultrafiltracin y Nanofiltracin. Estos
filtros preferiblemente deben de ser de un dimetro para as poder captar el grado de
Coliformes fecales y totales presentes en el agua, deben de estar libres de qumicos para evitar
el crecimiento de Microorganismos.

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CONCLUSIONES
Esta prctica nos permiti adquirir destrezas en el manejo de los diferentes materiales
utilizados en el Laboratorio de Microbiologa, en el empleo de Tcnicas para identificar
diferentes Microorganismos como Bacterias y Hongos. Se puso en prctica las Normas de
Bioseguridad necesarias para evitar cualquier incidente sanitario.
Se realiz la muestra de Tincin de Gram tomada del frotis bucal de una persona, ya que por
falta de tiempo fue necesario realizar esta; en el anlisis de la muestra obtenida no se reconoce
con exactitud los Microorganismos presentes en la muestra.
En el anlisis Microbiolgico de suelos despus de 48 horas a una temperatura dentro de 36 a
38C, las cuales fueron puestas en la Incubadora se lograron identificar en las 4 muestras la
presencia de Hongos Filamentosos comnmente llamados Mohos que como nombre cientfico
es Aspergillus Niger.
BIBLIOGRAFA
Prof. Alessandra Garcs. Normas de Seguridad en el Laboratorio de Microbiologa. Abril 2008
http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/10_normas_de_bioseg
uridad.pdf

Laboratorio de Tecnologa Educativa. Departamento de Microbiologa y Gentica. Universidad

de Salamanca. Recuento de Coliformes Totales-Filtracin a travs de membrana. (n.d.).
http://virus.usal.es/Web/demo_fundacua/demo2/FiltraMembColiT_auto.html