PRCTICA N 01

METODOS CUALITATIVOS PARA LA IDENTIFICACION DE CARBOHIDRATOS (MONOSACARIDOS,

DISACRIDOS Y POLISACARIDOS)
I. OBJETIVOS
- Estudiar la estructura, propiedades, funciones y clasificacin de los carbohidratos.
- Identificar por mtodos colorimetritos los principales monosacridos, disacridos y polisacridos
II. FUNDAMENTO TERICO
Los carbohidratos se presentan en forma de azcares, almidones y fibras, y son uno de los tres principales
macronutrientes que aportan energa al cuerpo humano (los otros son los lpidos y las protenas). Actualmente est
comprobado que al menos el 55% de las caloras diarias que ingerimos deberan provenir de los carbohidratos.
Los carbohidratos o hidratos de carbono glcidos constituyen compuestos qumicos formados principalmente por
carbono, hidrgeno y oxgeno, elementos que se conjugan para formar diversos tipos, en una proporcin
generalmente de 1:2:1, respectivamente.
Estas biomolculas ejercen funciones fundamentales en los seres vivos, como: soporte (celulosa), reserva de alimento
(almidn), reserva energtica (glucgeno), energa inmediata (glucosa).
Cuando el carbohidrato esta formado por una sola molcula, se denomina monosacrido, por dos, disacrido y por
mas de dos, polisacrido.
Los disacridos son azucares formados por la unin de dos monosacridos mediante el enlace glucosdico. Si este
enlace se efecta entre dos carbonos anomricos, el disacrido no tendr el potencial aldehdo o cetona libre, por lo
tanto no dan positivas aquellas pruebas que involucren la participacin de estos grupos, recibiendo el nombre de
azcar no reductor, la sacarosa y la trealosa son ejemplos de los disacridos no reductores. Todos los disacridos que
posean un carbono anomrico libre, darn positivas estas reacciones, llamndose azucares reductores, debido a que
promueven la reduccin del reactivo usado y ellos mismos se oxidan. Aunque la mayora de los disacridos carecen
de importancia para el hombre, con algunas excepciones como la sacarosa, su estudio se debe a que disacridos como
la maltosa y la celubiosa, se originan como producto de la hidrlisis de polisacridos, la maltosa, por ejemplo, es el
producto de la hidrlisis del glucgeno y el almidn. Los polisacridos, si son abundantes y representan para el
hombre la principal fuente de energa metablica de fcil aprovechamiento, el almidn, constituido por solo
molculas de glucosa es sin lugar a dudas la base alimenticia del globo terrestre, especialmente en la poblacin de
bajos recursos.
III. FUNDAMENTOS QUMICOS DE LAS PRUEBAS.
3.1.- Ensayo general para glcidos.
Las pentosas y las hexosas por accin del cido sulfrico concentrado, se deshidratan formando furfural e hidroximetilfurfural, los cuales pueden condensarse con -naftol para dar complejos coloreados, Debido a que el cido
sulfrico degrada rpidamente a los polisacaridos transformndolos en monosacridos, este ensayo es general para
todos los glcidos (an para los que estn combinados con otras sustancias), y se le conoce con el nombre de Reaccin de Molisch,
3.2.- Ensayos para azcares reductores.
La propiedad reductora de los azcares depende de la presencia de un grupo aldehdo en la molcula. Por lo tanto
aquellos carbohidratos reductores que no tienen el grupo aldehido son reductores solamente despus de sufrir un
proceso de tautomerizacin e isomerizacin.
Los principales reactivos para azcares reductores son el de Fehling y el de Barfoed (ambos contienen iones cpricos
que se reducen en el ensayo hasta xido cuproso).

El reactivo de Barfoed permite distinguir a los monosacridos de los polisacridos controlando el tiempo que toma la
reaccin; los monosacridos reductores producen un precipitado de oxido de cobre mucho ms rpido que los
azcares ms complejos, Es necesario advertir que el reactivo de Barfoed debido a su acidez puede hidrolizar a la
sacarosa y dar reaccin positiva con ella.
3.3.- Ensayos que se fundamentan en la formacin de derivados del furfural.
A este tipo de ensayos corresponden el de Seliwanoff, el de Bial, el del acetato de anilina y otros. Cuando se hierve
una monohexosa en medio cido se forma el hidroximetil-furfural que en presencia de resorci na forma un producto
de condensacin de color rojo. La estructura furansica de la fructosa permite la formacin del derivado del furfural
con mayor rapidez que las estructuras piransicas de las aldosas, con este motivo la fructosa sometida al ensayo de
Seliwanoff produce coloracin roja en el tiempo que la glucsa apenas forma un tenue halo rosado.
3.4.- Formacin de osazonas.
La mayora de los azcares simples reaccionan con la fenilhidrazina a temperatura elevada para formar osazonas. En
primer lugar una mlecula de fenilhidrazina forma la fenilhidrazona correspondiente; una segunda molcula del
reactivo oxida al grupo alcohol contiguo a la hidrazona hasta carbonilo y finalmente una tercera molcula del reactivo
reacciona con este ltimo grupo para formar la osazona. Las osazonas tienen forma cristalina y punto de fusin
caractersticos para cada azcar.
3.5.- Prueba de Lugol:
Es una prueba que se usa para identificar almidn. El color azul, se debe, posiblemente a la formacin de un
complejo: Ioduro de almidn.
IV. REACTIVOS.
- Reactivos de Molisch. Disolver 15 gr. de -naftol en 100 ml. de a l c o h o l e t l i c o d e 9 5 %
- R e a c t i v o d e F e h l i n g . La solucin "A" del reactivo se prepara disolviendo 34 g. de sulfato de cobre en 500
ml. de agua con unas gotas de cido sulfrico, y la solucin "B" se prepara disolviendo 60 g de hidrxido de sodio y
173 g de tartrato doble de sodio y potasio en 500 ml. de agua.
- R e a c t i v o d e B a r f o e d . Disolver 66.5 g. de acetato de cobre-II en un litro de agua destilada, agregar una
solucin de 9 ml de cido actico glacial en 25 ml. de agua.
- R e a c t i v o d e S e l i w a n o f f . Mezclar 12 ml. de cido clorhdrico concentrado con 3.5 ml. de una solucin de
resorcina al 0.05 /o y diluir la mezcla con agua hasta 35 ml. Esta solucin debe usarse inmediatamente.
- R e a c t i v o d e b e n e d i c t . Sulfato cprico + Citrato de sodio + Carbonato de sodio,
mezclar en iguales cantidades.
- Reactivo de Lugol. 5 g de Iodo y 10 g de KI aadir H2O c.s.p 100 ml
- Soluciones de carbohidratos al 1% y al 2%: glucosa, maltosa, manosa, ribosa, galactosa, fructosa, sacarosa, lactosa,
almidn.
- H2 S04 (c), NaOH 1 N y HCl 1 N
- fenilhidrazina
- Acetato de sodio, Agua destilada
V. MATERIALES
- 4 goteros

- Gradilla con tubos de ensayo

- Esptula

- Embudo

- Papel de filtro

- 4 pipetas de 5 o 10 ml.

- Vasos de precipitado 50, 500 ml.

- Probetas

- Microscopio electrnico.
VI. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

6.1. Reacciones cololimetricas.

6.6.1) Reaccin de Molisch. Coloque en un tubo de ensayo 1 ml de la solucin del carbohidrato, aada dos gotas del
reactivo de Molisch y mezcle bien, Incline el tubo, y deje resbalar cuidadosamente por las paredes del mis mo, para
que caigan al fondo sin mezclarse, 2 ml. de cido sulfrico concentrado, La formacin de un anillo de color violeta en
la interfase indicar reaccin positiva.
6.6.2) Ensayo de Fehling. Prepare el reactivo mezclando cantidades iguales de las soluciones A y B.
Coloque en un tubo de ensayo 1 ml de la solucin del carbohidrato, agrguele igual cantidad del reactivo de Fehling,
Caliente la mezcla en un bao de agua durante 5 minutos. Un precipitado rojo indicar la presencia de azcares
reductores.
6.6.3) Ensayo de Benedict. Coloque en un tubo de ensayo 0.5 de la solucin del carbohidrato, agregue 2 ml del
reactivo de Benedict, llevar a bao de Mara hirviente por 5 minutos. La aparicin de un
precipitado verde, amarillo o rojo indica la presencia de un azcar reductor.
6.6.4) Ensayo de Barfoed. Coloque en un tubo de ensayo 1 ml de la solucin del carbohidrato, y agregue igual cantidad del reactivo. Ponga los tubos en un bao de agua hirviendo durante 30 minutos y anote el tiempo, que demora
cada azcar en formar el precipitado xido de cobre.
6.6.5) Ensayo de Seliwanoff. Ponga 1 ml. de cada solucin de azcar en un tubo que contenga 2 ml. del reactivo.
Sumerja los tubos en un bao de agua hirviendo y observe los cambios de coloracin en cada tubo durante los
primeros 15 minutos de calentamiento, Anote el tiempo de formacin de cada color y el color mismo.
6.6.6) Ensayo de Lugol. Coloque en un tubo de ensayo 1 ml de la solucin del carbohidrato, y agregue I gota
del reactivo de Lugol, mezclar y observar. La aparicin de una coloracin azul indica la presencia del almidn y una
coloracin roja, indica el glucgeno o eritrodextrina. Si el color no cambia, el carbohidrato es un monosacrido o un
disacrido.
6.6.7) Formacin. de osazonas, Ponga 1 ml. de cada solucin de azcar en diferentes tubos. En un tubo ms grande
ponga 2 g. de clorhidrato de fenilhidrazina, 3 g. de acetato de sodio y 10 ml. de agua destilada, caliente este tubo
sobre una llama hasta que la solucin se vuelva turbia luego agregue 2 ml. de esta solucin caliente a cada tu bo que
contiene los azcares, ponga estos tubos en un bao de agua hirviendo y anote el tiempo que demora en formarse
cada osazona. Despus de formarse los cristales de osazona retire los tubos y pngalos a enfriar, filtre y lave los
cristales con agua, pngalos a secar en la estufa y determine los respectivos puntos de fusin.
6.2. Preparacin del almidn de diversas especies de granos para observar los grnulos al microscopio.
Suspenda algunas partculas del almidn comercial (Papa, yuca y frjol) en dos gotas de agua sobre un portaobjeto.
Cubra con la laminilla y examine al microscopio. Dibuje dos o tres grnulos en el cuadro que tiene en su informe,
anote sus observaciones.
6.3 Hidrlisis cida de disacridos.
Tome cuatro tubos de ensayo y siga el siguiente procedimiento:

Seguidamente:
1. Hervir simultneamente todos los tubos en bao de Mara durante 2 min.
2. Neutralizar los tubos 1 y 2 aadiendo 7 gotas de NaOH 1 N y 7 gotas de agua a los tubos 3 y 4
3. A cada tubo aada 0.5 ml de Benedict y lleve a bao de Mara por 2 min.

4. Observe los resultados y anote en su informe.

6.4 Hidrlisis cida del almidn.
A 10 ml de Sol. de almidn agregar 1 ml de HCl cc, y mantngala a ebullicin con llama baja.
Cuando la T sea 80C se prueba una gota de esta solucin con una gota de R. de Lugol, se
repite varias veces con lapso de 1 hasta que el color no cambie. Anote los resultados
indicando el color observado despus de cada min, hasta que considere que la hidrlisis se
ha completado.

MARCHA ANALTICA PARA MONOSACRIDOS, DISACRIDOS Y

POLISACRIDO