Documentos de Académico
Documentos de Profesional
Documentos de Cultura
Instituto Nacional
de Investigaciones
Agrcolas
PUBLICACIN DIVULGATIVA
Morillo, M; Salazar, S; Castillo, E. 2012. Evaluacin del potencial reproductivo del macho bovino. Maracay, VE, Instituto Nacional de Investigaciones Agrcolas. Centro Nacional de Investigaciones Agropecuarias.
60 p.
INSTITUTO NACIONAL
DE INVESTIGACIONES AGRCOLAS
CENTRO NACIONAL
DE INVESTIGACIONES AGROPECUARIAS
PUBLICACIN DIVULGATIVA
Contenido
Introduccin 5
Historia del animal 9
Evaluacin del estado de salud general de animal 11
Evaluacin del los rganos genitales externos 14
Evaluacin de los rganos genitales internos 20
Evaluacin funcional de la libido
y prueba de capacidad de servicio 22
Recoleccin de semen en el bovino 23
Evaluacin de semen de bovino 30
Dilucin y congelacin de semen de bovino 45
Evaluacin de semen congelado 50
Consideraciones generales 57
Bibliografa consultada 59
3
Introduccin
En aos recientes se ha venido incrementado el uso de las biotecnologas reproductivas en el pas. Su utilizacin consolida
el desarrollo de la actividad agropecuaria, para as buscar un
aumento de la productividad del rebao nacional que permita
ofrecer ms carne y leche de calidad a la poblacin venezolana.
Todo lo anterior con el fin de afianzarse en el camino hacia la soberana agroalimentaria de la nacin.
Entre las biotecnologas reproductivas ms utilizadas se destacan la inseminacin artificial y el trasplante de embriones, las
cuales consisten en depositar semen o embriones viables en
una vaca receptora sincronizada para tal fin, la cual es realizada
por un profesional entrenado en las tcnicas. Entre las limitantes
de estas biotecnologas reproductivas, se puede mencionar una
que se constituye en un factor determinante para el xito de las
mismas, como es la calidad del semen utilizado en ambas tcnicas.
La ganadera de doble propsito es una importante industria nacional, siendo esta una fuente de ingresos significativa para el
mercado pecuario venezolano. Este tipo de ganadera esta llamada a satisfacer el incremento del consumo local de carne y
leche, siendo este un sector del cual cada vez ms depende
econmicamente gran cantidad de venezolanos. Esta condicin
exige que el sector maximice la eficiencia de su sistema de produccin de doble propsito, para lo cual se requiere no slo producir de una forma sostenible, sino tambin basar sus metas en
5
10
13
cartar la presencia de adherencias, heridas o hematomas aumento de temperatura, aumento de tamao, deformaciones
y secreciones. La mucosa en caso de prolapso prepucial y la
evaluacin del orificio prepucial se realiza introduciendo tres
dedos para descartar estenosis, fimosis y otras lesiones. Los
toros Bos indicus (ceb y acebuados) son ms propensos a
sufrir lesiones, debido a que tienen un prepucio muy pnduloso.
Escroto: la inspeccin del escroto revela informacin sobre el
estado de los testculos. El escroto debe ser simtrico, la asimetra a menudo refleja diferencias en el tamao testicular. Se
observar la piel buscando que est libre de lesiones, heridas,
cicatrices, adherencia, calor y sensibilidad que pudieran comprometer la salud de los testculos. Tanto los animales Bos indicus (ceb y sus cruces), como los Bos taurus (razas europeas),
presentan mecanismos de adaptacin al medio ambiente tropical, el cual se caracteriza por poseer escrotos muy pndulosos,
hacindolos propensos a tener lesiones por traumatismos.
Testculo: en los machos los testculos son los rganos genitales de mayor importancia porque es el sitio donde se originan los espermatozoides. En ellos se produce la testosterona,
importante para la espermatogenesis, comportamiento sexual,
crecimiento genital y corporal. El testculo es de forma ovoide,
turgente y elstico. Cuando el testculo presenta una consistencia dura o fibrotica indica que existieron procesos inflamatorios,
mientras que una consistencia muy blanda seala una alteracin
en el curso de la espermatogenesis.
Animales con problemas de descenso de uno (unilateral) o ambos (bilateral) testculos son llamados criptorquidicos, estos animales debern ser eliminados del rebao por ser este un factor hereditario transmisible a la descendencia. Los machos que
tengan testculos asimtricos deben ser vistos con sospecha de
una hipoplasia o degeneracin testicular.
15
Figura 1.
18
Cuadro 1.
19
Evaluacin funcional
de la libido y prueba
de capacidad de servicio
La libido o deseo sexual en el macho se define como el apetito
de montar a la hembra, mientras que la habilidad copulatoria es
la capacidad de completar el servicio. Se debe recordar que no
existe correlacin entre libido y permetro testicular. Durante el
examen funcional se debe prestar atencin a la cadena de reflejos sexuales, para determinar la existencia de alguna patologa
que impida el correcto servicio.
La manera como el toro realiza el contacto con la hembra no es
simple y refleja una serie de eventos fisiolgicos complejos, los
cuales requieren de una gran coordinacin por parte del animal.
En la evaluacin de la capacidad de servicio, se evalan todos
los eventos del comportamiento sexual del macho, estos incluyen: la bsqueda y deteccin, excitacin, flehmen, ereccin y
protrusin del pene, monta, penetracin con o sin eyaculacin,
eyaculacin y desmonta.
Tambin es importante el perodo refractario o de latencia que es
el tiempo transcurrido entre una eyaculacin y la subsiguiente, y
el tiempo de reaccin que es el tiempo transcurrido desde que el
animal entra en contacto con la hembra y se produce la primera
eyaculacin.
22
Recoleccin de semen
en el bovino
La recoleccin de semen se realiza por el mtodo parafisiolgico
de la vagina artificial o por el mtodo fsico de la eletroeyaculacin. El mtodo de la vagina artificial requiere de la utilizacin de
un animal para la monta (macho o hembra) o un maniqu y una
vagina artificial; este mtodo simula la monta natural y permite la
obtencin de una muestra de semen de excelente calidad, que
se puede considerar como caracterstica de la eyaculacin de
un toro. Adems, tiene la ventaja que permite la observacin del
comportamiento del animal en movimiento y durante su apareamiento.
La vagina artificial consiste en un tubo cilndrico de plstico rgido y resistente, de siete centmetros de dimetro y 3540 centmetros de largo, recubierto internamente por una camisa de
goma que se dobla sobre los extremos del cilindro formando una
cmara que se llena con agua caliente (4546 C) y aire, con el
fin de proveer el estimulo adecuado de temperatura y presin,
logrndose as la eyaculacin.
En uno de los extremo de la vagina artificial se coloca un embudo de ltex o goma que sostiene en su extremo un tubo graduado, el cual recibir el eyaculado, este ltimo se protege dentro
de un envase plstico que contiene agua a 37 C, a fin de evitar
cambios de temperatura (choque trmico). El otro extremo de
23
Figura 3.
Antes de la utilizacin del electroeyaculador se procede a la preparacin del animal, lo cual incluye: recortar los pelos del orificio prepucial y limpiar el exceso de sucio (bosta y barro), si es
necesario se debe lavar y secar cuidadosamente el rea. Un
ayudante procede a limpiar el recto y a estimular mediante masaje transrectal las glndulas accesorias (glndulas vesiculares
y ampollas de los conductos deferentes) y, posteriormente, se
introduce el electrodo adecuado (Figura 4).
Cuando se utiliza la eletroeyaculacin se inician los estmulos a
mnima intensidad y rtmicamente se incrementa, de acuerdo
con la reaccin del animal, cada estimulo debe durar menos de
26
Figura 4.
Figura 5.
29
Evaluacin de semen
de bovino
Para considerar a un toro como apto desde el punto de vista
reproductivo, asumiendo que es un animal clnicamente sano,
este debe cumplir con tres requisitos bsicos: buena libido, buen
estado clnico reproductivo y buena calidad espermtica. La
evaluacin del semen es un elemento importante para la certificacin de la aptitud reproductiva en un toro. Una vez que el
semen recolectado llega al laboratorio, este se debe colocar en
bao Mara, a una temperatura de 37 C para comenzar con su
evaluacin.
La evaluacin macroscpica del semen debe incluir los parmetros siguientes:
Volumen: primero se registra el volumen contenido en el tubo
graduado de recoleccin, luego con el uso de una pipeta gradua
da se aspira toda la muestra y se registra su volumen. En cuanto
al volumen existen algunos valores de referencia, tanto para el
semen obtenido can vagina artificial como para las recolecciones con electroeyaculador.
Se ha sealado, basado en experiencias con vagina artificial,
que el eyaculado de un toro joven tiene en promedio un volumen
mayor a dos mililitros, mientras que un toro adulto tiene un volumen mayor a cuatro mililitros. Las pruebas con electroeyacu30
Cuadro 2.
Blanco cremoso
Blanco lechoso
Blanco acuoso
N de espermatozoides (esp)
1000000 esp./mm3
800000 600000 esp./ mm3
< 50000 esp./ mm3
31
Cuadro 3.
Densidad
macroscpica
N de espermatozoides
Azoospermico
0 espermatozoides en el eyaculado
Oligospermico
Ralo
Semidenso
Denso
Denssimo
33
B
Figura 6. Evaluacin de la motilidad masal, A) Colocacin
de gota de semen en el portaobjetos y B) Observacin microscpica (100X).
34
El semen de toro es demasiado concentrado como para hacer una determinacin exacta de la motilidad individual, sin
diluir el semen. Un volumen pequeo de la muestra se debe
diluir con una solucin isotnica (con la misma concentracin
de iones libres que en el semen), para poder observar individualmente a los espermatozoides. Se utiliza cloruro de sodio a
0,9% o citrato de sodio a 2,9%. Luego se coloca una gota diluida (10 a 12 microlitros - ul) en un portaobjeto y se cubre para
observar al microscopio. En toros esto requiere de una dilucin
de uno en 100 (Figura 7).
En el Cuadro 5 se muestra la clasificacin dada a la motilidad
individual en eyaculados de bovino.
Cuadro 5.
Descripcin
Valor
Clasificacin
Excelente
> 70%
Bueno
50 70%
Regular
30 50%
Malo
< 30%
36
B
Figura 7. Evaluacin de la motilidad individual: A) Colocacin de gota de semen diluido en el portaobjetos
y B) Observacin microscpica (100X).
37
Vitalidad: existe un conjunto de tcnicas que permiten una coloracin selectiva entre espermatozoides vivos y muertos, esto
como consecuencia de los cambios bioqumicos que se producen tras la muerte del espermatozoide (accin cromacitolgica).
La tcnica se realiza extrayendo una gota, de aproximadamente
10 microlitos (ul) de semen puro y colocndola sobre la punta
de un portaobjetos limpio y desengrasado, previamente atemperado a 36-37 C sobre la platina trmica. Sobre esta gota se
coloca una gota de aproximadamente 30 microlitos (ul) del colorante vital eosina, el cual debe estar a la misma temperatura del
semen en un tubo de ensayo dentro de un bao Mara (Figura
8). Se mezcla semen y colorante suavemente, con la punta de la
pipeta por aproximadamente 20 segundos. Luego con otro portaobjetos, tambin atemperado, se apoya sobre el borde de la
gota para que por capilaridad se distribuya sobre el portaobjetos,
luego se levanta y se realiza el extendido en forma firme. Se deja
secar sobre la platina trmica y se procede a su lectura.
El fundamento de esta tcnica es el siguiente: el colorante penetra
la membrana de los espermatozoides muertos, dejando sin teir
los que se encontraban vivos al momento de realizar la tincin.
Para sacar el porcentaje de espermatozoides vivos se procede a
observar el frotis a 400 aumentos, contando en guarda griega todos los espermatozoides de cada campo evaluado, discriminando
los que estn teidos, como muertos, y los sin teir, como vivos.
Se cuentan no menos de 100 clulas y se saca el porcentaje. Se
considera como valor mnimo aceptable 70% de espermatozoides
vivos.
Otros sustitutos eficaces de la eosina como colorante vital son el
rosa de bengala, la eritrosina, el verde cresol o el azul de bromofenol con el que se ha tenido ms claridad en la interpretacin;
mientras que, en todo caso, como colorantes de fondo se prefiere el azul de anilina o la nigrosina. Con el colorante eosina38
B
Figura 8. Colocacin de la gota de semen diluido (A) y la gota
del colorante vital (B).
39
Figura 9.
congelacin. El aumento excesivo de acrosomas daados poscongelacin pudiera indicar algn problema en el proceso de
congelacin o estar relacionado con una composicin lipdica de
la membrana anormal que incide en una mayor susceptibilidad
del espermatozoide al enfriamiento.
Concentracin espermtica: la concentracin de espermatozoides se expresa como el nmero de espermatozoides por ml.
La determinacin de la concentracin zoosprmica se lleva a
cabo en forma simple mediante mtodos semejantes al recuento
de glbulos rojos realizado en hematologa.
El recuento directo de clulas espermticas se realiza utilizando
el hemocitometro. El hemocitometro (Cmara de Newbauer) fue
diseado para contar eritrocitos, la cual consiste en una lmina
especial que tiene dos cmaras de conteo.
Las cmaras de conteo tienen 0,1 milmetro de profundidad y
un rea graduada en el fondo de la cmara de un milmetro al
cuadrado. Esta cuadricula central se divide en 25 cuadros ms
pequeos. Al conocerse la profundidad y el rea es posible determinar el nmero de espermatozoides en un volumen dado
(Figura 10).
Por lo general, se utiliza un factor de dilucin de 1 en 200 en
el caso del semen del toro, la solucin utilizada para diluir el
semen debe inmovilizar a los espermatozoides de tal manera
que se pueda llevar a cabo el recuento; normalmente se utiliza
una solucin de cloruro de sodio a 3% (solucin hipertnica) o
solucin salina formulada al tres por mil. De esa dilucin se toman unos 20 microlitos (ul) y se depositan en el hemocitometro.
Para el clculo de la concentracin espermtica se cuenta el
nmero de espermatozoides en cinco de los 25 cuadras de la
cuadricula central (las cuatro esquinas y el centro). Este resulta42
44
Dilucin y congelacin
de semen de bovino
Una vez que los espermatozoides son eyaculados, la supervivencia de los mismos en el plasma seminal slo se limita a pocas horas. Por lo tanto, con el fin de mantener a los espermatozoides vivos y con buena motilidad durante periodos ms largos
de tiempo, enfriar o crioconservar, se hace necesaria la dilucin
del eyaculado con soluciones protectoras.
Se han utilizado diferentes soluciones como diluyentes o expansores del semen, la mayora son variaciones de unas cuantas
frmulas principales, casi todos los diluyentes para preservar semen o congelarlo tienen yema de huevo o leche descremada o
bien una combinacin de esos dos ingredientes bsicos.
Los constituyentes de un buen diluyente para la preservacin y
crioconservacin de semen deben reunir las caractersticas siguientes:
- Abastecer de nutrientes como fuente de energa para el metabolismo espermtico, los azucares simples, como glucosa o
fructosa, proporcionan esa fuente de energa al espermatozoide y los disacridos y trisacridos no son metabolizados
para la obtencin de energa, sino que actan como crioprotectores adicionales.
45
- Proteger a los espermatozoides contra el efecto daino del enfriamiento rpido, con ese fin son utilizados la yema de huevo
o la leche para proteger a los espermatozoide del choque frio,
especialmente, en el paso del eyaculado de la temperatura
corporal a 5 C en el proceso de congelacin, tambin estas
sustancias orgnicas tienen nutrientes, los cuales son utilizados por los espermatozoides.
- Proporcionar un ambiente de pH estabilizado para prevenir
los cambios dainos en el pH cuando se forma cido lctico,
la solucin buffer ms usada es el Buffer Tris, el cual mantiene
el pH casi neutro.
- Mantener la presin osmtica adecuada y el equilibrio electroltico correcto.
- Inhibir el crecimiento bacteriano, para ello se utiliza antibiticos, como Lincospectin, Penicilina o Estreptomicina.
- Aumentar el volumen del semen de tal manera que se pueda
usar para mltiples inseminaciones.
- Proteger a las clulas espermticas durante la congelacin,
en este caso se utiliza glicerol el cual desplaza el agua de
la clula espermtica impidiendo la formacin de cristales de
hielo.
En el Cuadro 6 se presentan las frmulas para la preparacin
de un litro de los dos diluyentes ms usados en criopreservacin
seminal, el Tris Yema Glicerol y el Citrato Yema.
46
Cantidad
24,22 gr
Acido ctrico
13,60 gr
Fructosa
Antibitico Lincospectin
Glicerina
10,00 gr
3 ml
150 mg/ml
60 ml
Yema de Huevo
200 ml
Agua Destilada
737 ml
Citrato Yema
Citrato de Sodio
74 partes
Yema de Huevo
25 partes
Glucosa
1 parte
Penicilina
1.000 u/ml
estreptomicina
500 mg/ml
47
N esp./dosis: 20.000.000
Volumen Dosis: 0.25 ml
Pajuelas media:
Equilibracin (estabilizacin): proceso que consiste en mantener a 5 C por un perodo de tres a seis horas para acondicionar
los espermatozoides a la congelacin posterior, durante este perodo se procede a efectuar la identificacin, llenado y sellado de
las pajuelas.
Congelacin horizontal: consiste en realizar la congelacin de
las pajuelas de semen colocadas en la rampa de congelacin en
los vapores del nitrgeno lquido, por un tiempo de 10 minutos. A
una temperatura aproximada de 110 C.
Almacenamiento temporal: las pajuelas permanecen en nitrgeno liquido a una temperatura de -196 C, hasta realizar el examen microscpico a las 24 horas y a los 15 das poscongelacin
para verificar la motilidad individual.
Almacenamiento definitivo: las pajuelas permanecen en nitrgeno liquido a una temperatura de -196 C, si renen buenas caractersticas de supervivencia espermtica (motilidad individual
poscongelacin).
49
51
Cuadro 7.
Escala
Clasificacin
Sin Movimiento
% esp. Movilidad
progresiva
Vigor
0
2
25
15
3
2
52
tozoides totales por pajuela, de los cuales al ser descongelado deben existir un mnimo de 10 millones de clulas mviles
por pajuela.
Para ello se realiza una dilucin de 1/200 de la pajuela en solucin salina formulada y se hace el recuento en la cmara de
Newbauer. Luego se multiplica el resultado por 5.000.000 y
por el porcentaje de espermatozoides mviles, obtenindose
el nmero total de espermatozoides mviles por dosis.
- Examen microbiolgico: la contaminacin del semen por la
flora bacteriana, bien sea del tipo sanitario o por deficiencias
de la higiene, incide enormemente en la economa y en deter
minados aspectos de la reproduccin de la hembra, como
disminucin de la fertilidad y aumento de la mortalidad embrionaria. Puesto que muchos microorganismos no tienen su
origen ni en los testculos ni en las glndulas accesorias, es
muy importante seguir correctamente los procedimientos de
recoleccin para minimizar el riesgo de contaminacin del semen.
Es importante hacer un buen control microbiolgico del semen, ya que a veces se pueden encontrar altas concentraciones de bacterias, lo cual hace descender significativamente la
capacidad de crioconservacin y la fertilidad de ese semen.
Los problemas de contaminacin se resuelven mediante pruebas de sensibilidad de estos agentes frente a antibiticos,
adicionndose a la dosis seminal para conseguir una buena
inhibicin del crecimiento bacteriano.
- Examen biolgico: debido a que la fecundacin es una de
las claves para determinar la fertilidad in vivo de un macho, el
desarrollo de la tcnica de fecundacin in vitro se ha convertido en un procedimiento eficaz para predecir la fertilidad in
vivo de un macho.
54
55
56
Consideraciones finales
Con el desarrollo de las tcnicas de inseminacin artificial y trasplante de embriones en bovinos, se ha visto la necesidad de
evaluar ms rigurosamente el semen del macho reproductor, ya
que resulta en un factor determinante para el xito en la aplicacin de las mencionadas biotecnologas reproductivas. Por tal
motivo, el anlisis bsico del semen se ha enriquecido con la
incorporacin de nuevas tcnicas y equipos para determinar con
mayor exactitud las caractersticas convencionales del semen y,
adems, de la incorporacin de nuevos parmetros.
Cabe destacar que un macho reproductor no slo debe producir
semen de alta calidad para ingresar a un programa reproductivo,
si no tambin, debe poseer todas las herramientas fisiolgicas
necesarias que le permitan realizar efectivamente un servicio y
as de esta forma, poder ser clasificado como satisfactorio y ser
seleccionado como reproductor.
Por lo tanto, para garantizar la exactitud de los resultados del
anlisis del semen es necesario contar con profesionales especializados en el rea, ya que son ellos los que decidirn mediante la evaluacin, si un macho reproductor entra o no a un
programa de servicios dentro de una unidad productiva o centro
de congelacin de semen e inseminacin artificial.
57
58
Bibliografa consultada
Barham, B; Pennington, J. 2006. Breeding soundness evaluation
for beef and dairy bulls. University of Arkansas, Cooperative Extension Service. [on-line] Disponible: http://www.uaex.edu
Carballo, DM; Canseco, C; Garca, R; Montiel, F. 2008. Comparacin de dos diluyentes comerciales para criopreservar semen
de bovino bajo condiciones de campo en el trpico hmedo. En
Reunin Cientfica-Tecnolgica Forestal y Agropecuaria Veracruz (21, 2008, Mexico) y del Trpico Mexicano (1, 2008, Mexico). p. 264 277.
Catena, M; Cabodevila, J. 1999. Evaluacin del semen bovino.
Simposio Internacional de Reproduccion Bovina (UNCPBA).
Tandil. Taurus. 1(3):18-31.
Chayer, R; Pasqualini, C. 2009. Condicin corporal como herramienta para el seguimiento del manejo nutricional de los vientres
en rodeos de cra. [on-line] Disponible: http://www.produccionanimal.com.ar/informacion_tecnica/cria_condicion_corporal/25texto.pdf.
Gonzlez-Stagnaro C. (Ed.). 2005. Manual de ganadera de doble propsito. Maracaibo, VE. Fundacin Girarz. p. 504-508
Hafez, E.S.E; Hafez, .B. 2002. Reproduccin e inseminacin artificial en animales. 7 ed. Mxico. p. 375-386
Hidalgo, C; Tamargo, C; Diez, C. 2005. Anlisis del semen bovino. Asturias, Espaa. Informacin ganadera. 39 Boletn Informativo SERIDA. No. 2. p. 39-43
59
60
Agricultura y Tierras