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Extracin del ADN (cido Desoxirribonucleico) genmico y
electroferesis en gel
Informacin gentica. Genoma. Tcnicas. Separacin de molculas
Medicina / VARIOS
PRACTICA N 3
EXTRACION DEL DNA GENOMICO Y ELECTROFORESIS EN GEL
RESUMEN
El proceso de extraccin del ADN geonmico sigue ciertas pautas para su
correcta purificacin que son muy diferentes a los empleados en la purificacin
de protenas, lo que refleja las diferencias bsicas en la estructura de estos dos
tipos de macromolculas. El primer paso en la purificacin del ADN por lo
general consiste en homogeneizar las clulas y asla los ncleos de los cuales
se extrae el ADN. El medio de extraccin ordinario contiene un detergente
(SDS); a continuaciones le agrega solucin de te para resuspender el ADN,
luego los cidos nucleicos se precipitan aadiendo etanol .Para concluir el
anlisis de la extraccin del ADN hay que resaltar que e n este proceso ocurre
una lisis celular lo cual significa que el ADN queda libre por consiguiente hay
que protegerlo de las enzimas porque estas podran degradarlo .
INTRODUCCION
El cido desoxiribonucleico o ADN (DNA) es la molcula que guarda el cdigo
gentico de todas las clulas. Sin importar que el organismo sea multicelular o
unicelular, eucariota o procariota, todos tienen el DNA como vehculo de su
cdigo gentico.
Durante el laboratorio de hoy estaremos utilizando un mtodo rpido para aislar
DNA a partir de tejidos animales. Este se llama "DNeasy Tissue Kit" y es
producido por QIAGEN. Este usa tecnologa avanzada de membranas de
silicato para purificar rpidamente DNA celular total sin usar extracciones
orgnicas ni precipitacin con etanol.
El primer paso en la purificacin del DNA consiste en homogeneizar las clulas
y distar los ncleos de los cuales se extrae el DNA. El medio de extraccin de
ordinario contiene un detergente, como el SDS, que sirve para lisar los ncleos
y liberar el DNA, hecho que aumenta notablemente la viscosidad de la solucin.
El detergente inhibe tambin cualquier actividad nucleasa en la preparacin.
El objetivo de los pasos de purificacin es separar el DNA de materiales
contaminantes, como RNA y protenas.
La desproteinizacin se logra en general agitando la mezcla con un volumen de
fenol. El fenol (o alternativamente cloroformo) es un desnaturalizador activo de
protenas que suprime la solubilidad de las protenas en la preparacin y las
precipita. Puesto que el fenol y la solucin salina amortiguadora no se mezclan,
solo se requiere centrifugar la suspensin para separar las bases,
permaneciendo el DNA (y el RNA) en la solucin dentro de la fase acuosa de
arriba y la protena presente como un precipitado concentrado en la interfase.
La fase acuosa se retira del tubo y se somete a ciclos repetidos de agitacin
con fenol y centrifugacin hasta agotar toda la protena de la solucin.
Aadiendo etanol fro. El etanol fro forma una capa arriba de la solucin
acuosa del DNA, el cual, se enrolla sobre una varilla de vidrio conforme sale de
la solucin. En la interfase el RNA sale de la solucin salina.
En contraste, el RNA sale de la solucin como precipitados que se asienta en el
fondo del vaso. Luego de este primer paso de purificacin, se disuelve el DNA y
se trata con ribonucleasa mediante tratamiento con una proteasa. Enseguida
se quita la proteasa por desproteinizacin con fenol y se vuelve a precipitar el
DNA.
Centrifuga
Eppendorf 1.5 ml
Pipetas de vidrio
Colador
Mortero y pistilo
Hgado
Cebada
Cloruro de sodio
Solucin de etanol
Isopropanol
Detergente SDS
Agua destilada
Vortex
Hielo
Vaso de precipitado
Tubos eppendor
Incubadora
Agua destilada
Agarosa
RNAsa
Buffer TAE
Marcador de membrana.
Cmara de electroforesis
Bromuro de etidio
RPOCEDIMIENTO
HIGADO
Picar el hgado y Triturar el hgado con sal, solucin de lisis y SDS hasta
que la muestra quede liquida.
Almacenar a 4C.
CEBADA
Tambin se preparo la solucin stop que contiene el fago hind III, y la solucin
del DNA plasmidico 12l.
RESULTADOS
1.
Con el NaCl conseguimos producir el estallido de los ncleos para que queden
libres las fibras de cromatina.
El etanol se utiliza para precipitar la solucin del ADN.
La accin de este detergente es formar un complejo con las protenas y
separarlas del ADN. As nos quedar el ADN libre de las protenas que tiene
asociadas, e inhibe cualquier actividad nucleasa presente en la preparacin.
http://pdf.rincondelvago.com/biologia-molecular_1.html
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Nicaragua
Honduras
anterior
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(laarena favorece la ruptura de membranas) Agregar suavemente y
deslizando por las paredes del vaso de precipitado eletanol helado. Se
formar un sistema bifsico y en la interfase quedansuspendidas las
fibras de ADN, simulando esos fideos de sopa llamadoscabellos de
ngel
FUNDAMENTO TERICO
El ADN es una de las partes fundamentales de los cromosomas, son
estructuras constituidas por dos pequeos filamentos o brazos, que
pueden ser iguales o desiguales, estn unidos por un punto comn
llamado Centrmero; varan en forma y tamao, pueden verse
fcilmente al momento de la divisin celular por medio de un
microscopio.
Los cromosomas qumicamente estn formados por protenas y por
MATERIALES
- Hgado de pollo
- Detergente lquido
- Enzimas (suavizador de carne en polvo o jugo de papaya
- Alcohol blanco
- Licuadora
- Recipiente de vidrio o plstico
- Vaso de precipitados o cualquier vaso con graduaciones (para
bebs)
PROCEDIMIENTO
1.- Debemos cortar en pequeos trozos el hgado de pollo, luego lo
colocamos en la licuadora y vertemos suficiente agua como para
que, al cabo de 10 segundos de licuar, tengamos la consistencia de
una crema.
Luego vertemos el licuado en un recipiente que tenga graduaciones
(vaso de precipitados) por medio de un colador para separar algunas
partes que no se hayan licuado lo suficiente.
Medimos el licuado en el recipiente y aadimos de detergente
lquido del total del licuado.
Revolvemos suavemente con ayuda de una cuchara.
2.- Aadimos 1 cuchara de Enzimas y revolvemos con cuidado y
lentamente por unos 5 minutos. Si mezclamos con demasiada
rapidez o con mucha fuerza se corre el peligro de romper el ADN,
con lo que no podramos observarlo.
Ms Experimentos
oscar@ccg.unam.mx
Diseo
Jos B. Esquivel Rojas
mario_isaac96@hotmail.com
http://wwwme.org/web.php?id=32753&pag=19704
Resumen
La presente investigacin se describe el procedimiento para una tcnica casera con
sus diversas concentraciones moleculares, con el fin de establecer la concentracin
estndar para la extraccin del ADN, la cual se realiz teniendo como muestras
porciones del hgado del pollo y cebolla. Con el marco terico, en relacin al ADN, y
con la experiencia realizada se ha llegado a la conclusin de cual es la concentracin
estndar para conseguir la cromatina, de ah podemos inferir apoyado por el marco
terico que lo que sigue es el ADN.
Palabras claves: Membrana celular y nuclear, cromatina, ADN, protenas, tcnica
casera y concentracin estndar.
----------------------------------------------------------------------------------------------1. Introduccin
El ADN es considerado la macromolcula de la vida, en el que se encuentra guardado
la informacin gentica de los seres vivos, en ese sentido el ADN no solo almacena la
informacin gentica sino la expresa. Esta base conceptual nos da idea de la
importancia que tiene el estudio y la observacin del ADN y que en este caso lo
3. Importancia:
Poblacin beneficiara: Los estudiantes y la comunidad porque a travs de la
comunicacin cientfica, en concordancia con las prioridades y planes de desarrollo
locales, regionales y nacionales:
Programa de Popularizacin y divulgacin del conocimiento cientfico.
5. Materiales y mtodos
5.1 Descripcin de los materiales y mtodos
- Hgado de pollo (Gallus gallus, sp.)
- Cebolla (Allium cepa, sp)
- Varilla de vidrio
- Mortero
- Vasos de precipitado
- Pipeta
- Probeta
- Alcohol de 96%
- Cloruro de sodio (ClNa)
- Zumo de pia (Ananas comosus, sp)
- Trozo de tela
- Shampoo HS, para cabello normal
5.2 Procedimiento
1. Triturar medio hgado de pollo en un mortero con el fin de romper las membranas
y queden los ncleos sueltos.
2. Licuar la cebolla para romper la pared celular.
3. Aadir al triturado 50 cc de agua, remover hasta hacer una especie de papilla o
pur.
4. Filtrar varias veces sobre una tela para separar los restos de tejidos que hayan
quedado por romper.
5. Medir el resultado con una probeta para calcular su volumen.
6. Aadir al filtrado un volumen igual de cloruro de sodio 2M, con esto debemos
conseguir el estallido de los ncleos.
7. A continuacin echamos 1 cc de detergente lquido. La accin del detergente es
formar un complejo con las protenas y separarlas del ADN.
8. Aadir con una pipeta de 50cc de alcohol de 96, esto se hizo de forma que el
alcohol resbale por las paredes del vaso y se formen dos capas.
9. Introducir una varilla de vidrio e ir removiendo en la misma direccin. Sobre la
varilla se vana adhiriendo unas fibras blancas, visibles a simple vista que es el
resultado de la agrupacin de muchas fibras de ADN.
6. Resultados
Se realiz el tamiz dos veces para separar los tejidos de las clulas del hgado de
pollo, una vez conseguido separar las clulas se tena que hacer estallar que se hizo
con la sal (cloruro de sodio) tanto la membrana celular como la nuclear.
Se echa una pequea cantidad de detergente con el fin de capturar las grasas y las
protenas. La enzima (sumo de pia) descompacta los filamentos, liberando una
cadena. Y el alcohol forma una interfase en la cual el filamento se libera.
7. Discusin:
Decimos en esta parte que la mayora de la bibliografa y documentos flmicos
establecen en primer lugar que se trata de la extraccin del ADN
(http://learn.genetics.utah.edu/es/units/activities/extraction/). Pues bien, si bien
es cierto que logramos descompactar el ncleo logrando filamentos, lo cierto es que
estas en realidad son las cromatinas o hebras de cromatina, Que es en fin de cuentas
el conjunto de ADN, histonas y protenas. Entonces podemos inferir conceptualmente
que es el ADN. No olvidemos que para extraer debers ADN se utilizan tcnicas muy
complejas como la ultracentrifugacin, electroforesis, espectrofotometra entre
otros.
8. Conclusiones
Del experimento podemos decir que:
1. Al descompactar el ncleo liberamos los filamentos que en realidad son las
cromatinas.
2. Haciendo una inferencia conceptual podemos concluir que en ese material subyace
el ADN.
9. Anexos
Rutas De Internet:
http://ciencia-y-educacion.blogspot.com/
http://pdf.rincondelvago.com/biologia-molecular_1.html
http://www.cienciafacil.com/experimentoscapitulo1.pdf
http://youtube.com/watch?v=yZ_IPafioSU&feature=related
http://youtube.com/watch?v=7jnHtKYI0ng&feature=related
http://youtube.com/watch?v=oJFjk4ArMrM&feature=related
http://youtube.com/watch?v=bKKduKtUfwg&feature=related
http://youtube.com/watch?v=NeoJiv_XiZs&feature=related
http://www.cienciafacil.com/adn.html
11. Agradecimientos:
A mis padres por su importante apoyo espiritual y material, a mis profesores por
dotarme de slidos conocimientos y a mi colegio que me da la oportunidad de poder
expresar mis ideas.
Al Profesor M. en C. Wilder Chicana Nuncebay, Responsable del Planetario Luis E. Erro
de Mxico, por su apoyo en la construccin del marco terico
Al profesor Lic. Mario Posso Rojas de la Universidad Nacional Agraria, por su apoyo en
la elaboracin del paper.
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