EL MICROSCOPIO

Objetivo
Dar a conocer el uso y sus partes del microscopio. As tambin los distintos tipos
de microscopios que existen.

Introduccin
Un microscopio, ya sea simple (una sola lente) o compuesto (lentes mltiples), es
un instrumento que aumenta el tamao de una imagen y permite ver ms detalles
de lo que sera posible a simple vista. El microscopio ms sencillo es una lupa o
un par de gafes o anteojos para leer. El poder de resolucin del ojo humano (o
sea, la distancia que debe haber entre dos objetos para que se vean separados y
que no parezcan uno solo, 0,2 mm) est determinado por el espacio que hay entre
las clulas fotorreceptoras contiguas de la retina. La funcin de un microscopio es
la de ampliar una imagen hasta un grado en el cual la retina pueda resolver la
informacin que, de otro modo, estara por debajo de su lmite de resolucin.
En la investigacin biolgica moderna se dispone de diversos microscopios
pticos para el uso general o especializado. Sus diferencias radican
principalmente en factores como la longitud de onda con que se ilumina la
muestra, en la alteracin fsica de la luz que llega a la muestra o que emana de
ella y en los procesos analticos especficos que puedan aplicarse a la imagen
final.

Material y mtodos
El da mircoles 3 de Febrero se asisti al Hospital General Zona No. 71 del IMSS,
localizado en la ciudad de Veracruz, Ver. Con el fin de observar los pasos de cmo
se desarrolla la prueba de tejidos y al resultado final poder verlo en un microscopio
ptico.

Resultados
Tener el conocimiento de la evolucin del microscopio y los distintos tipos que
existen.

Antecedentes
La construccin del primer microscopio se atribuye a los hermanos Hans y
Zacaras Jansen en 1590, quienes incorporaron tubos de telescopios y lentes
convergentes, con lo que obtuvieron imgenes aumentadas hasta 150 veces,
aunque con grandes aberraciones. Los primeros estudios sobre la historia del
microscopio fueron realizados por el filsofo Francis Bacon Von Verulam, quien le
asign el nombre de microscopium. Sin embargo los primeros microscopios que
se utilizaron para observar el mundo microscpico de manera sistemtica fueron
fabricados por Anton Van Leeuwenhoek. La necesidad de mejorar sus
descripciones lo llev a perfeccionar sus microscopios y a optimizar las lentes que
fabricaba, con lo cual logr magnificar sus objetos de estudio hasta 266 veces.
Pasaron ms de 200 aos desde el descubrimiento de la clula, hasta que en
1872, Ernst Abbe estableci las bases y teora matemtica para fabricar de
manera cientfica lentes para los microscopios; desde entonces la microscopia se
convirti en una herramienta fundamental para el estudio de clulas y tejidos; su
perfeccionamiento ha llevado tres siglos.

Desarrollo
EI microscopio es el instrumento ms importante en la histologa, debido al
pequeo tamao de las estructuras analizadas. Cabe destacar que cuando se
alude al trmino "microscopio" siempre se refiere al microscopio ptico, a menos
que se especifique otra cosa.
El ojo puede diferenciar variaciones de intensidad de la luz (contraste entre luz y
sombras) y de color (distintas longitudes de onda). En consecuencia, es necesario
modificar la luz, para que el preparado se observe como formado por elementos
ms oscuros y ms claros o de distintos colores. Las clulas y los tejidos no
coloreados se suelen captar con el microscopio como carente de color y
transparente, porque no presentan suficiente contraste. Con la ayuda de tinciones
histolgicas se logra una absorcin diferencial de la luz, de modo que se
visualizan las distintas estructuras.

Tipos de microscopio
Microscopio ptico
El microscopio ptico est compuesto por partes mecnicas y pticas. Los
componentes pticos constan de tres sistemas de lentes: condensador, objetivo y
ocular. El condensador produce un haz de luz que ilumina el objeto estudiado. El
objetivo aumenta el objeto y proyecta la imagen sobre el ocular. El ocular aumenta
an ms la imagen y la proyecta sobre la retina del ojo observador.
El aumento total resultante se determina mediante el producto del aumento del
objetivo por el aumento del ocular (eventualmente se debe multiplicar por un factor
que depende del tubo). El poder de resolucin depende de la longitud de onda de
la luz utilizada y de las aperturas numricas del objetivo y el condensador (el
ocular slo acta aumentando la imagen del objetivo, no mejora el poder de
resolucin). El mximo poder de resolucin que se puede obtener es de 0,2 m,
pero con los preparados de rutina habituales rara vez excede de 0,5 m.
El microscopio utilizado por la mayor parte de los estudiantes e investigadores es
el microscopio ptico.
Las partes bsicas de un microscopio ptico o de luz son las siguientes:

Ocular: Contiene lentes que amplifican el tamao de los objetos.

Revolver: Pieza rotante que tiene los lentes de los objetivos. Se gira con
delicadeza.
Objetivo: Es donde se alojan los lente. Comnmente hay cuatro tipos de
lentes; 4X, 10x, 40x, 100x.
Platina: es el sitio donde se colocan las preparaciones.

Condensador: Ayuda a obtener el mximo de luz posible, utilizando un

espejo.
Diafragma: es un anillo rotante debajo de la platina que permite ajustar la
cantidad de luz que pasa por la preparacin.
Fuente de luz: Localizada debajo de la platina.
Tornillo macrometrico: Es el ms grande de dos tornillos, localizados a los
lados del microscopio. Este tornillo permite ajustes para enfocar los lentes.
Tornillo micromtrico: Es el tornillo ms pequeo. Permite ajustes pequeos
para enfocar la preparacin.

Sobre la base del microscopio ptico comn se han desarrollado varios

microscopios especiales, cada uno de los cuales presenta ventajas y limitaciones
especficas, segn veremos a continuacin.
Microscopio de campo oscuro
El microscopio de campo oscuro se utiliza para analizar partculas pequeas, que
presentan muy escaso contraste con la microscopia ptica o que se encuentran en
el lmite del poder de resolucin o por debajo de este. Para la microscopia de
campo oscuro se emplea un condensador especial, el cual impide que llegue luz
directa al objetivo, de manera que solo incide en esta luz desviada o esparcida por
las pequeas partculas que se desea investigar. Estas se observan luminosas
sobre un fondo oscuro (del mismo modo que las partculas de polvo se visualizan
por la dispersin que realizan de la luz de un rayo de sol). En histologa se utiliza a
menudo el campo oscuro para el anlisis de preparados radioautogrficos.

Microscopio de contraste de fase

Los tejidos no coloreados producen muy escaso contraste, dado que no absorben
cantidades importantes de luz. Sin embargo, producen cierto retardo en las
longitudes de onda, de acuerdo con Ia "densidad ptica" variable de los tejidos, es
decir, los distintos ndices de refraccin. Mediante el microscopio de contraste de
fase es posible transformar estas diferencias de fase, no visibles, en diferencias de
amplitud, es decir, que las diferencias de refraccin entre los componentes del
tejido se transforman en diferencias de intensidad, que pueden ser captadas por el
ojo humano. De esta manera es posible transformar en visibles componentes de
las clulas vivas que, de otra manera, slo se observan en tejidos muertos y
teidos.
Microscopio de interferencia
El microscopio de interferencia est construido sobre la base de principios
similares al microscopio de contraste de fase, dado que tambin en este caso se
utilizan las diferencias de fase producidas por la luz que atraviesa el objeto.
Mientras que el microscopio de contraste de fase slo es un instrumento
cualitativo, mediante el microscopio de interferencia es posible obtener datos
cuantitativos. Una variante especial del microscopio de interferencia es el
microscopio de contraste por interferencia diferencial (tambin denominado
microscopio de interferencia de Nomarski), en el cual los dos haces luminosos
separados tienen polaridad opuesta, por lo que se aumenta el contraste y se
obtiene una imagen de aspecto tridimensional del objeto investigado
Microscopio de luz polarizada
Existen cuatro tipos de polarizacin: absorcin, reflexin, dispersin y por
birrefringencia (doble refraccin). El sistema ptico de luz polarizado utiliza como
base al de campo claro. Se diferencia del microscopio ptico comn por tener dos
filtros polarizantes, uno de ellos es el polarizador, se encuentra antes del
preparado y el otro, el analizador, est ubicado por detrs.
El campo formado entre el polarizador y el analizador se conoce como campo de
luz polarizada de tal modo que el analizador bloquea las longitudes de ondas
orientadas conforme el polarizador, por lo que es imposible registrar algn rayo de
luz por la salida del ocular. En consecuencia, mediante el microscopio de luz
polarizada es posible obtener informacin respecto a la estructura a nivel
molecular. Adems, el microscopio de luz polarizada se puede utilizar para el
estudio de clulas vivas.
Microscopio de fluorescencia
La microscopia de fluorescencia fue en un inicio estudiada por August Khler y
Carl Reichert, despus hubo un largo perodo en que quedo en desuso; en fechas

recientes se ha consolidado como una tcnica indispensable en la medicina y

biologa celular.
En el microscopio de fluorescencia se ilumina el preparado con intensa luz de Ia
Iongitud de onda capaz de activar el colorante fluorescente empleado. Esto se
lleva a cabo mediante un filtro del color adecuado que se coloca por debajo del
condensador: as se filtra la luz antes de que incida en el preparado. Adems, se
coloca un filtro por encima del objetivo con un color correspondiente a la longitud
de onda de la luz que emite el colorante utilizado cuando fluoresce. De esta
manera se logra que la imagen se forme slo debido a la emisin de la luz
fluorescente. Las estructuras fluorescentes se destacan entonces en color sobre
fondo oscuro como fuentes luminosas, por lo que es posible visualizar estructuras
de dimensiones mucho ms pequeas que el poder de resolucin del microscopio.
Microscopio de barrido confocal
Mediante el microscopio de barrido confocal se excluye Ia luz no emitida por el
plano focal. EI preparado se ilumina por un rayo lser que barre todos los puntos
del plano focal, mientras que la luz emitida por el preparado atraviesa una
hendidura muy estrecha que detiene la luz emitida por otros niveles, distintos del
plano focal. De esta manera se logra obtener la informacin necesaria para formar
una imagen bidimensional que se registra sobre una pantalla de televisin. AI
recoger con una computadora una serie de imgenes de distintos planos focales
es posible reconstruir una imagen tridimensional del objeto.
Microscopio de luz ultravioleta
Con el empleo de luz ultravioleta con Iongitud de onda de alrededor de 250 nm, es
posible duplicar el poder de resolucin. El microscopio de luz ultravioleta, cuyo
sistema ptico suele estar construido en cuarzo, permite el paso de la luz
ultravioleta, que es invisible. En consecuencia, Ia formacin de la imagen se
registra en una pelcula fotogrfica. Aunque se logra un ligero aumento del poder
de resolucin mediante esta tcnica, la principal importancia del microscopio de
luz ultravioleta es que los cidos nucleicos absorben la luz ultravioleta de
determinada longitud de onda (260 nm), por lo que se pueden detectar con
facilidad.
Microscopio electrnico
La construccin del microscopio electrnico representa un verdadero-logro en
cuanto a incrementos del aumento y del poder de resolucin.
La formacin de Ia imagen en el microscopio electrnico se debe, principalmente,
a la dispersin de los electrones. As se dispersan los electrones que colisionan
con los ncleos atmicos y con sus electrones en el objeto, a menudo de manera
tal que inciden por fuera de la lente objetivo. En consecuencia, la imagen sobre la
pantalla se forma por la ausencia de estos electrones, como "imagen en sombra".

La dispersin de los electrones depende del espesor del objeto y de su densidad

molecular.
Con el poder de resolucin prctico que se puede obtener es posible lograr
aumentos tiles superiores a 500.000 veces. El microscopio electrnico est
limitado por el escaso poder de penetracin del haz de electrones. Esto implica la
necesidad de utilizar cortes de tejido muy delgados (de alrededor de 50 nm). Esta
limitacin se puede superar en parte mediante el uso del denominado microscopio
electrnico de alto voltaje, cuyo haz de electrones es alrededor de 10 veces ms
rico en energa que el que se utiliza en los microscopios electrnicos comunes. El
microscopio estereoelectrnico permite cortes de tejido ms gruesos, ya que el
mismo preparado es fotografiado desde dos ngulos algo diferentes.
Microscopio electrnico de barrido (MEB)
En el microscopio de barrido los electrones no atraviesan el objeto, la imagen se
forma indirectamente, a travs de Ia captacin puntual de detalles en la superficie
del preparado. El preparado se recubre de una delgada capa de un metal pesado
y se bombardea con un haz de electrones muy estrecho (de alrededor de 10 nm
de dimetro), que "barre" sobre el objeto en un patrn lineal y lo copia.
La imagen obtenida se visualiza directamente sobre la pantalla y se puede
registrar en una fotografa o en forma digital. El MEB forma la imagen de la
superficie y no es necesario utilizar cortes ultrafinos, dado que el haz de
electrones no atraviesa el preparado.

Conclusin
El microscopio es sin duda el elemento ms importante en cualquier laboratorio.
Nos permite, por ejemplo, ver clulas, microorganismos y bacterias, lo cual es
imposible de observar a simple vista.
Es un instrumento sumamente importante en las pruebas histolgicas ya
que es el que nos permite observar con mayor eficacia las diferentes partes de las
clulas y se ha podido dar a conocer mejor las diferentes estructuras de los
tejidos.
En definitiva un microscopio es un instrumento que se utiliza para obtener una
imagen aumentada de objetos minsculos o detalles muy pequeos de los
mismos.

Bibliografa

Fortoul Teresa. (2013) Histologa y biologa celular 2 ed. Mxico, D.F.

Editorial McGraw-Hill Interamericana
Geneser, F. (1999) Histologa. 3 ed. Estados Unidos. Editorial Mdica
Panamericana.
Ross. Pawlina. (2012) Histologa 6 ed. Buenos Aires. Editorial Mdica
Panamericana.