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ISOLATION GIVES FROM A SAMPLE OF BEEF

AISLAMIENTO BACTERIANO (Pseudomona mallei)


REALIZADO A PARTIR DE UNA MUESTRA DE
CARNE DE RES
Carlos Hernndez1 , Jess Avilez2 , Heiner Montalvo3

RESUMEN
Las Pseudomonas, son un gnero de bacilos rectos o ligeramente curvados, Gram negativos, oxidasa
positiva, aerbicos estrictos aunque en algunos casos pueden utilizar el nitrato como aceptor de
electrones. El gnero Burkholderia se form a partir del gnero Pseudomonas en funcin de los datos
de ARNr; entre los cuales podemos encontrar la Pseudomona mallei o Burkholderia mallei. La
Burkholderia mallei es un cocobacilo Gram-negativo aerbico bastante claros, no tiene capsula
fcilmente visible por microscopia de fondo claro ni forma esporas, no tiene flagelos por lo que es una
bacteria inmvil, produce una enfermedad bacteriana zoontica grave, que afecta principalmente a
los caballos, mulas y asnos, llamada muermo. Para la identificacin de este microorganismo se
realiz una preparacin dejando la muestra de carne de res al aire libre por tres das y en agua
peptona por 24horas a 37 C, siembra de la bacteria en medios selectivos para sta como lo es el
medio McConkey y el medio agar SANGRE, tincin de Gram y pruebas bioqumicas pertinentes. A
partir de todos estos procedimientos se podr identificar la morfologa y los resultados de las
respectivas pruebas de identificacin bioqumica para la Pseudomona mallei.
Palabras claves: aislamiento, cocobacilo, carne de res, Pseudomona mallei, zoontica, muermo
esporas pruebas Bioqumicas.

ABSTRACT
The Pseudo monkeys, they are a kind of straight bacilli or lightly curled, negative Gram, oxidasa
positive, aerobic strict though in some cases they can use the nitrate as aceptor of electrons. The kind
Burkholderia was formed from the kind Pseudo monkeys depending on the information of ARNr;
between which we can find the Pseudo monkey mallei or Burkholderia mallei. The Burkholderia mallei
is a Gram-negative aerobic cocobacilo clear enough, easily visible capsule has neither as microscopy
of clear bottom nor form spores, does not have scourges for what it is an immobile bacterium, there
produces a bacterial disease serious zoontica, which concerns principally the horses, mules and
jackasses, called glanders. For the identification and isolation of the microorganism we did a
preparation leaved the sample of beef to the open air for three days and propagation the sample of
beef in peptone water for 24 hours to 37C, sowing of the bacterium in selective media for her as of
the McCONKEY media and blood agar, coloration of Gram and biochemical tests relevant. From of all
procedures we could identify the morphology and the results of the respective biochemical tests for
the Pseudomonas mallei.
Keywords:. Isolation, cocobacilo, meat of beast, Pseudomona mallei, zoontica, glanders, spores,
Biochemical tests.

1. INTRODUCTION
El ingenio humano se ha derrochado
generosamente con el espritu de un verdadero
cazador detrs de cada posibilidad de dar con
los microorganismos que circundan en nuestro
medio, y no obstante no se conforma
solamente con conocerlos, observarlos, sino
tambin aislarlos para as saber las
condiciones a las cuales estos crecen y se
desarrollan.
En este caso tenemos a la
Burkholderia mallei, un bacilo Gram negativo,
que causa severa enfermedad infecto contagiosa
en solpedos, pero la infeccin accidental puede
ocurrir tambin en humanos, a travs del suelo
contaminado o el contacto directo con animales
enfermos, por va digestiva, respiratoria o a
travs de heridas en la piel (DANCE, 1991). El
primer relato de la enfermedad, fue realizado por
Aristteles y Hipcrates en los siglos 3 y 4 a.C.
(WILKINSON,
1981;
BLANCOU,
1994;
ALIBASOGLU et al., 1986; NEUBAUER et al.,
1997). La Pseudomona mallei puede permanecer
viable en el agua corriente y fuera del cuerpo, el
microorganismo presenta poca resistencia frente
a la desecacin, el calor, la luz o los reactivos
qumicos, de manera que es poco probable su
supervivencia despus de dos semanas. La
Pseudomona mallei tambin conocida como
Burkholderia mallei, es una bacteria numerosa en
los
frotis
de
lesiones
frescas,
este
microorganismo se tie ya se con azul de
metileno o con la tincin de Gram siendo
cocobacilos Gram-negativos bastante claros, la
Pseudomona mallei no tienen capsulas
fcilmente visibles por microscopia de fondo
claro ni forman esporas, no tiene flagelos por lo
que es una bacteria inmvil. Por medio de este
trabajo se busca la identificacin y posterior
identificacin de la Pseudomona mallei a partir
de una muestra de carne de res, la cual se
consigui y se trat con el debido
procedimiento adecuado con el fin de
garantizar la presencia de la bacteria en
estudio, para una posterior siembra y
realizacin de pruebas de
identificacin
bioqumicas para de esa manera comprobar o

no la presencia del microorganismo en la


muestra de alimento estudiada.
2. MATERIALS
10 gramos de carne, bolsa estril, balanza
analtica, recipiente para macerar, 90 ml de
agua de peptona, pipetas, asas redondas y en
punta, incubadora, 2 medios McConkey Agar, 2
medios Agar Sangre, Mechero, 4 portaobjetos.
Para Pruebas Bioqumicas:
Perxido de hidrogeno (H2O2), 2 medios
Simmons Citrato, 2 caldos nitrato, reactivo
Griess-Ilosvay, 2 medios SIM, 2 caldos
peptona
Tripticasa, reactivo de Kovacs, 2 medios KIA, 2
medios TSI, 2 medios RM-VP, indicador rojo de
metilo.
Para Tincin: Cristal violeta, agua
destilada, Lugol, alcohol acetona, safranina de
Gram, aceite de inmersin.
3. METHODS
La metodologa que se desarrollara para el
aislamiento bacteriano (Pseudomona mallei)
se dividir en seis fases las cuales se
procedern a realizar en el tiempo indicado y
de manera minuciosa y siguiendo todos los
estndares a tener en cuenta para la obtencin
de buenos resultados en este asilamiento. Las
seis fases sern las siguientes:
Fase 1: Conseguir el material (muestra de
alimento) donde se desarrolle esta bacteria.
La muestra de alimento utilizada para el
aislamiento bacteriano (Pseudomona mallei)
fue de carne de res debido a la presencia de
esta bacteria en dicho alimento, la cual fue
comprada en una tienda en el municipio de
cerete.
Fase 2: Realizar la respectiva preparacin de
la muestra de alimento con el fin de que la
bacteria se propague satisfactoriamente.

Para esta fase la muestra del alimento fue


cortada en fragmentos y expuesta al aire libre
por un tiempo de dos das, para que la bacteria
se propagara satisfactoriamente.
Fase 3: Llevar la muestra a un ambiente
adecuado de propagacin con condiciones
ptimas para el desarrollo de la bacteria.
Posteriormente al tener la carne de res,
expuesta al aire libre, esta se llev al
laboratorio fig. 1.

Figur
a 3. Muestra de carne macerada.

Figura
1. Muestra de carne

Se pesaron 10 gramos de la muestra, (fig. 2),


se macero, (fig. 3) y se introdujo en una bolsa
de agua peptonada en 90 y fue llevada a la
incubadora a 37C por un tiempo de 24 horas
con el fin de que la bacteria se propagara, en
la fig. 4 se observa el pre-enriquecimiento
selectivo.

Figura 4. Mezcla de carne con agua


Peptona

Fase 4: Sembrar en los respectivos medios


de cultivos.
Despus del pre-enriquecimiento selectivo de
la muestra se tomaron inculos con un asa
redonda para su posterior siembra en los
medios agar sangre y McConkey, por medio
del mtodo francs y se llevaron los agares a
la incubadora a 37C por 24 horas, en la fig. 5
se observa los medios utilizados.

Figura 3. Muestra de carne pesada (10


gramos)

Figur
a 5. Agar Sangre (derecha) y Agar
McConkey (izquierda)

Figura 6. Microorganismos desarrollados


en Agar Sangre

Fase 5: realizar la coloracin pertinente


(tincin de Gram).
Una vez obtenido el crecimiento de las
colonias en los respectivos agares se realiz la
coloracin de Gram, donde se observ las
caractersticas de la bacteria desarrollada en
cada medio.
Fase 6: Efectuar las pruebas bioqumicas.
Luego de haber realizado la tincin se procedi
al desarrollo de las pruebas bioqumicas, para
la identificacin de la bacteria, entre estas
tenemos:

KIA
TSI
Citrato
Nitrato
Motilidad y H2S
Indol
Rojo de metilo
Vogues proskauer
Catalasa

Figura 7. Microorganismos desarrollados


en Agar McConkey

4.2.

Tincin de Gram

Despus de haber realizado el procedimiento y


preparar las muestras para la tincin, (se
utilizaron colonias de ambos Agares) se puede
decir que el microorganismo es un bacilo Gram
negativo, debido la coloracin
fucsia y
morfologa que se observa en la figura N9 y
10.

4. RESULTS AND DISCUSSION


4.1. Siembra en agar MaCconkey y
agar sangre
La siembra realizada en los medios selectivos
para el crecimiento de Pseudomona mallei o
Burkholderia mallei Fue satisfactoria dado que
el crecimiento fue manifest en los medios (fig.
7 y 8).

Figura 8. Tincin de Gram para Agar sangre

4.3.2. KIA: Alc/Ac fermentacin de la


glucosa, presencia de H2S y gas en
profundidad
para
microorganismos
desarrollados en agar McConkey (derecha);
Alc/Ac fermentacin de la glucosa, presencia
de H2S y gas en pico de flauta para
microorganismos desarrollados en agar
sangre. (Izquierda), fig.12
Figura 9. Tincin de Gram para Agar
McConkey

4.3. Pruebas bioqumicas


En estas pruebas bioqumicas, se utilizaron
colonias del microorganismo en ambos agares,
para tener resultados seguros y comparativos,
con el fin de tener un porcentaje de error
mnimo y as identificar la bacteria.
4.3.1. TSI: A/A Para microorganismos
desarrollados en agar sangre, (izquierda); El
microorganismo tuvo la capacidad de
fermentar lactosa, la sacarosa y glucosa en el
pico de Flauta, pero no se sabe si en la
profundidad debido a que se produjo sulfuro.
Para microorganismos desarrollados en agar
MaCconkey,
(derecha).
Alc/A
El
microorganismo tuvo la capacidad de
fermentar la glucosa en pico de Flauta, pero no
se sabe si en profundidad debido a que se
produjo sulfuro.

Figura 11. Prueba TSI para


Microorganismos desarrollados Agar
McConkey (derecha) Y Agar Sangre
(izquierda)

4.3.3. Citrato: Prueba de citrato positiva


para los microorganismos desarrollados ambos
agares, debido al viraje de color en pico de
flauta de verde a azul intenso, lo que quiere
decir que La bacteria utiliz el citrato como
nica fuente de carbono para el metabolismo.
Fig 13.

Figura 10. Prueba TSI para


Microorganismos
desarrollados
Agar
McConkey
(derecha) Y Agar Sangre
(izquierda)

Figura 12. Prueba del citrato para


microorganismos desarrollados en Agar
McConkey (derecha) Y Agar Sangre
(izquierda

4.3.4. Motilidad y SH 2: Prueba SIM


negativa para microorganismos desarrollados
en agar sangre y agar McConkey (Fig. 14), ya
que el microorganismo no tiene flagelo. Se
present ennegrecimiento del medio, lo que
indica que se liber H2S, por la accin
enzimtica de los aminocidos que contiene
azufre.

Figura 14. Prueba del Nitrato para


microorganismos desarrollados en Agar
McConkey (derecha) Y Agar Sangre
(izquierda

4.3.6. Indol: Prueba de Indol negativa, para


microorganismos desarrollados en agar sangre
y agar McConkey, no hay formacin de anillo
rojo en la superficie; coloracin rojo debido al
reactivo. (fig. N16)

Figura 15. Prueba de Indol para


microorganismos desarrollados en Agar
McConkey Y Agar Sangre
Figura 13. Prueba del citrato para
microorganismos desarrollados en Agar
McConkey (derecha) Y Agar Sangre
(izquierda)

4.3.5. Nitrato: Prueba positiva para


microorganismos desarrollados en agar sangre
y agar McConkey, debido al viraje de color
(rosado y amarillo). Lo cual permite afirmar que
la bacteria tiene la capacidad de reducir el
nitrato en nitritos o en nitrgeno libre.

4.3.7. Rojo de metilo: Prueba rojo de


metilo positiva presento el anillo rojo en la
superficie. (fig.N17)

Figura 18. Prueba de catalasa para


microorganismos desarrollados en Agar
McConkey Y Agar Sangre

Para comparar los resultados prcticos y


tericos se organizaron en tablas las cuales
se muestran a continuacin.

Figura 16. Prueba de rojo de metilo para


microorganismos desarrollados en Agar
McConkey Y Agar Sangre

4.3.8. Rojo de metilo: prueba negativa


ya que presento un color amarillo en la
superficie, por el reactivo y no presento el
anillo rojo en la superficie. (fig. N17)

Figura 17. Prueba de rojo de metilo


para microorganismos desarrollados
en Agar McConkey Y Agar Sangre

4.3.9. Catalasa: Prueba de catalasa


positiva,
para
los
microorganismos
desarrollados ambos agares, formacin de
burbujas en la superficie del portaobjeto que
contena la muestra (fig. N11)

Tabla 1. Resultados tericos a las


diferentes pruebas bioqumicas.

microorganismo al no poseer flagelos que son


lo que dan la movilidad a las bacterias, por
consiguiente ser inmvil, as como lo dice la
teora, pero si produjo sulfuro en esta misma
prueba como lo fue de motilidad y H2S
realizada en el medio SIM. En la media
peptona tripticasa se realiz la prueba del
Indol. Dando como resultado negativo, lo que
indica que la bacteria no logro desdoblar el
H2S2 Indol de la molcula de triptfano. Por
ltimo en la prueba de la catalasa se present
un burbujeo inmediato lo que hace referencia a
que la Pseudomona mallei tiene la enzima
catalasa.
5. CONCLUSIN

Tabla 2. Resultados prcticos a las


diferentes pruebas bioqumicas.

La Pseudomona mallei es una bacteria


aerbica, la cual a menudo fermentan
carbohidratos a cidos orgnicos, esto se ve
evidenciado en el color amarillo del pico de
flauta en los medios TSI y KIA, donde adems
se
produjo
sulfuro
ya
que
hubo
ennegrecimiento de los medios. La prueba del
nitrato y rojo de metilo presentaron resultados
positivos no concordando con la teora
consultada, uno de los posibles errores pudo
ser la manipulacin en cuanto los pasos que
se siguieron ya sea mtodo de siembra,
colonia infectada, entre otras posibles causas
que no permitieron un buen resultados y
dichos resultados se pueden ver en el color
azul del medio Simmons Citrato y el anillo rojo
en el medio RM-VP, que indican que la bacteria
usa el citrato como nica fuente de carbono y
el anillo rojo en la superficie del medio RM-VP
que permite evidenciar la produccin de
productos cidos. La prueba del nitrato dio
positivo, lo que da cuenta que la bacteria
redujo el nitrato a nitritos, actividad que hacen
a
menudo
las
Pseudomonas.
Este

Para terminar este proceso de investigacin


cabe resaltar que el objetivo principal de este
trabajo fue realizado de forma exitosa ya que
primordialmente lo que se buscaba era aislar
la bacteria Pseudomona mallei a partir de
carne de res, para lo cual se realizaron
diferentes pruebas bioqumicas las cuales
produjeron un resultado exitoso ya que se
comprob en parte la existencia de la
bacteria en la carne; dado que para una
confirmacin
completa era necesario la
realizacin de pruebas de antibiticos que
validaran
el
resultado
obtenido
anteriormente.
A pesar de que no todas las pruebas dieron
los resultados esperados, caso de ello lo
muestran las pruebas de citrato y la prueba
de rojo de metilo se puede mejorar el
aislamiento aumentando la efectividad del
procedimiento u otros mtodos los cuales
garanticen buenos resultados, para eso se
pueden tomar varias recomendaciones.
6. RECOMMENDATIONS

Como recomendaciones tenemos las


siguientes las cuales son muy importantes a
la hora de aislar dicho microorganismo:

Mantener el rea de trabajo desinfectada


para evitar la contaminacin de diversos
microorganismos, garantizando as un
grado de desinfeccin en el rea de
trabajo.
Se debe utilizar los medios de cultivos
adecuados para as poder evidenciar si
existe o no crecimiento de bacterias, por
lo cual en nuestro caso se utilizaron
medios que garantizaran este crecimiento
(Agar sangre y Agar MaCconkey).
Trabajar cuidadosamente para as evitar
riegos de accidentes con dichas bacterias.
Utilizar
adecuadamente
todos
los
implementos
necesarios
para
la
realizacin prctica y as
evitar la
contaminacin de los mismos.

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