E.M.B.

Agar
EOSINA Y AZUL DE METILENO
Selectivo para gramnegativos-escasas exigencias nutricionales
Dsllo de todas las especies de la flia Enterobacteriacea
Diferencial para fermentadores de lactosa.
resultados
E. coli

Tipo de colonia
Verdosas, con brillo metlico y centro
negro azulado

K. pneumoniae

Mucosas, rosa purpura

P. mirabilis

Incoloras

E. faecalis

incoloras., pequeas, puntiformes

Shigella flexneri

incoloras

Caractersticas del medio:

Placas preparadas: color prpura

Mac Conkey Agar

til aislamiento de bacilos Gram negativas. De fcil desarrollo, aerobios y
anaerobios facultativos
diferencia bacterias que utilizan o no, lactosa en muestras clnicas, de agua y
alimentos
Crece todas las especies de la flia Enterobacteriaceae
Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras
Caractersticas del medio
Medio preparado: rojo prpura

Mueller-Hinton agar
USO
Medio de cultivo recomendado universalmente para la realizacin de la prueba de
sensibilidad a los antimicrobianos.
FUNDAMENTO
Medio de cultivo nutritivo no selectivo que promueve el desarrollo microbiano. Por
su composicin, ha sido recomendado por el Clinical and Laboratory Standards
Institute (CLSI) antiguamente llamado National Committee for Clinical Laboratory
Standards (NCCLS), para ser utilizado en forma rutinaria en la realizacin del
antibiograma en medio slido, debido a que presenta buena reproducibilidad lote a
lote en las pruebas de sensibilidad, su contenido en inhibidores de sulfonamidas,
trimetoprima y tetraciclina es bajo, la mayora de los patgenos microbianos crece
satisfactoriamente y una gran cantidad de datos adicionales que han sido evaluados
y avalados usando este medio de cultivo. Cuando se suplementa con sangre de
carnero al 5%, permite realizar las pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos en
especies de estreptococos. Tambin, con el agregado de sangre puede utilizarse para
el cultivo y aislamiento de microorganismos nutricionalmente exigentes.

FRMULA
caene
caseina

300 g/l
17.5 g/l

almidon
1.5 g/l
agar
15 g/l
pH final 7.3 +/- 0.1

Simmons Citrato Agar

uso
Medio utilizado para la diferenciacin de enterobacterias, en base a la
capacidad de usar citrato como nica fuente de carbono y energa.
Fundamento
En el medio de cultivo, el fosfato monoamnico es la nica fuente de nitrgeno
y el citrato de sodio es la nica fuente de carbono. Ambos componentes son
necesarios para el desarrollo bacteriano. Las sales de fosfato forman un
sistema buffer, el magnesio es cofactor enzimtico. El cloruro de sodio
mantiene el balance osmtico, y el azul de bromotimol es el indicador de pH,
que vira al color azul en medio alcalino. El medio de cultivo es diferencial en
base a que los microorganismos capaces de utilizar citrato como nica fuente
de carbono, usan sales de amonio como nica fuente de nitrgeno, con la
consiguiente produccin de alcalinidad.
El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de
citrato permeasa, a travs del ciclo del cido tricarboxlico. El desdoblamiento
del citrato da progresivamente, oxalacetato y piruvato. Este ltimo, en
presencia de un medio alcalino, da origen a cidos orgnicos que, al ser
utilizados como fuente de carbono, producen carbonatos y bicarbonatos
alcalinos. El medio entonces vira al azul y esto es indicativo de la produccin
de citrato permeasa.
Frmula (en gramos por litro)
Citrato de sodio
Cloruro de
sodio
Fosfato
dipotsico
Fosfato
monoamnico
Sulfato de
magnesio
Azul de
bromotimol
Agar

2
5
1
1
0.2
0.08
15

Instrucciones
Suspender 24,2 g del
medio deshidratado por
litro de agua destilada.
Dejar reposar 5 minutos
y mezclar calentando a
ebullicin durante 1 o 2
minutos. Distribuir en
tubos y esterilizar en
autoclave a 121C
durante 15 minutos.
Enfriar en posicin
inclinada.

pH final: 6.9 0.2

Microorganismo

Citrato permeasa

Color del
medio

Klebsiella pneumoniae
ATCC 700603

Positivo

Azul

Positivo

Azul

Negativo
Negativo

Verde
Verde

S. typhimurium ATCC
14028
E. coli ATCC 25922
S. flexneri ATCC 12022

T.S.I. Agar (Triple Sugar Iron Agar)

USO
Medio universalmente empleado para la diferenciacin de enterobacterias, en
base a la fermentacin de los hidratos de carbono glucosa, lactosa y sacarosa y
a la produccin de cido sulfhdrico.
FUNDAMENTO
En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los
nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. La lactosa, sacarosa y
glucosa son los hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es el
sustrato necesario para la produccin de cido sulfhdrico, el sulfato de hierro y
amonio, es la fuente de iones Fe3+ , los cuales se combinan con el cido sulfhdrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenol es el
indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmtico. El agar es
el agente solidificante. Por fermentacin de azcares, se producen cidos, que
se detectan por medio del indicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo
en medio cido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidr- geno que
reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el tpico sulfuro de hierro
de color negro.

formula
extracto de carne
pluripeptona
cloruro de sodio
lactosa
sacarosa
glucosa
sulfato de hierro y amonio
tiosulfato de sodio
rojo de fenol
agar
pH FINAL: 7.3 0.2

30 g/l
20 g/l
5 g/l
10 g/l
10 g/l
1 g/l
0.2 g/l
0.2 g/l
0.025 g/l
13 g/l

Lisina Hierro Agar.

Uso
Medio de cultivo utilizado para diferenciar microorganismos, especialmente
Salmonella spp., basado en la decarboxilacin / desaminacin de la lisina y en
la produccin de cido sulfhdrico.
Fundamento
En el medio de cultivo, la peptona y el extracto de levadura aportan los
nutrientes para el desarrollo bacteriano. La glucosa es el hidrato de carbono
fermentable, y la lisina es el sustrato utilizado para detectar la presencia de las
enzimas decarboxilasa y deaminasa. El citrato de hierro y amonio, y el
tiosulfato de sodio, son los indicadores de la produccin de cido sulfhdrico. El
purpura de bromocresol, es el indicador de pH, el cual es de color amarillo a pH
igual o menor a 5.2, y de color violeta a pH igual o mayor a 6.8.
Por decarboxilacin de la lisina, se produce la amina cadaverina, que alcaliniza
el medio y esto produce el viraje del indicador al color violeta. La
decarboxilacin de la lisina, tiene lugar en medio cido, por lo que es necesario
que la glucosa sea previamente fermentada.
Los microorganismos que no producen lisina decarboxilasa, pero que son
fermentadores de la glucosa, producen un viraje de la totalidad del medio de

cultivo al amarillo, pero a las 24 hs de incubacin se observa el pico de color

violeta debido al consumo de las peptonas, y el fondo amarillo.
La produccin de sulfuro de hidrgeno, se visualiza por el ennegrecimiento del
medio debido a la formacin de sulfuro de hierro.
Las cepas de los gneros Proteus, Providencia y algunas cepas de Morganella,
desaminan la lisina, esto produce un cido alfa-ceto-carbnico, el cual, con la
sal de hierro y bajo la influencia del oxgeno forma un color rojizo en la
superficie del medio.

Frmula (en gramos por litro)

Peptona de gelatina
Extracto de
levadura
Glucosa
Lisina
Citrato de hierro y
amonio
Tiosulfato de sodio
Prpura de
bromocresol

5
3
1
10
0.5
0.04
0.02

Agar

15

Instrucciones
Suspender 35 g del
medio deshidratado
en un litro de agua
destilada. Dejar
embeber unos 15
minutos. Calentar
cuidadosamente,
agitando con
frecuencia y hervir
durante un minuto
hasta la disolucin
completa. Distribuir y
esterilizar a 121C
durante 15 minutos.
Enfriar en pico de
flauta dejando un
fondo vertical apto
para la puncin.

pH final: 6.7 0.2

Microorganismos

Color en el pico de flauta

Color en la base del tubo

Ennegrecimiento del medio

Rojo

Amarillo

Negativo

Prpura

Prpura

Positivo

Prpura

Prpura

Positivo

Providencia spp.

Rojo

Amarillo

Negativo

Citrobacter freundii

Prpura

Amarillo

Positivo

Morganella spp.*

Rojo

Amarillo

Negativo

Edwarsiella spp.

Prpura

Prpura

Positivo

Proteus mirabilis
ATCC 43071
Salmonella
typhimurium ATCC
14028
Salmonella enteritidis
ATCC 13076

Klebsiella
pneumoniae ATCC
700603

Prpura

Prpura

Negativo

Escherichia coli ATCC

25922

Prpura

Prpura

Negativo

MR-VP Medio
uso
Medio utilizado para la realizacin del ensayo de Rojo de Metilo y Voges
Proskauer.
Es particularmente til para la clasificacin de enterobacterias.
Fundamento
En el medio de cultivo, la pluripeptona aporta los nutrientes necesarios para el
desarrollo bacteriano y la glucosa es el hidrato de carbono fermentable.
La glucosa puede ser metabolizada por los microorganismos, a travs de
distintas vas metablicas. Segn la va utilizada, se originarn productos
finales cidos (cido lctico, cido actico, cido frmico), o productos finales
neutros (acetil metil carbinol).
Esta diferencia en el metabolismo bacteriano, podra ser reconocida por la
adicin de un indicador como rojo de metilo, para revelar la presencia de
productos cidos, y por la adicin de alfa naftol e hidrxido de potasio para
evidenciar la presencia de productos finales neutros.
Voges y Proskauer, describieron una coloracin rojiza que apareca despus de
adicionar hidrxido de potasio a los cultivos de ciertos microorganismos en
medio con glucosa. Esta coloracin se debe a la oxidacin del acetilmetil
carbinol a diacetilo el cual reacciona con la peptona del medio para dar un
color rojo.

Frmula (en gramos por litro)

Pluripeptona
7

Instrucciones
Suspender 17 g del polvo por

Glucosa
Fosfato
dipotsico

Microorganism
o
E. coli ATCC
25922
K. pneumoniae
ATCC 700603
P. mirabilis
ATCC 43071
S. typhimurium
ATCC 14028

litro de agua destilada. Calentar

suavemente agitando hasta
disolver. Distribuir y esterilizar
5
en autoclave a 118-121C
durante 15 minutos.
pH final: 6.9 0.2
5

Crecimiento

RM

VP

Bueno

Bueno

Bueno

Bueno

Citrobacter
freundii

Bueno

Enterobacter
aerogenes

Bueno

O.F. Medio Basal de Hugh & Leifson.

Uso
Medio de cultivo, que al ser suplementado con hidratos de carbono, se usa
para determinar el metabolismo oxidativo-fermentativo de las bacterias Gram
negativas. Esta prueba es til para diferenciar especies bacterianas. Tambin,
permite determinar movilidad y produccin de gas.
Fundamento
El medio basal O.F., fue desarrollado por Hugh y Leifson, para evidenciar la
importancia del significado taxonmico del metabolismo oxidativo-fermentativo

de los hidratos de carbono por las bacterias Gram negativas.

Cuando un microorganismo es inoculado en 2 tubos del medio O.F. conteniendo
el mismo hidrato de carbono, y uno de los 2 tubos es sellado con vaselina o
parafina antes de la incubacin, se puede diferenciar bien el metabolismo
oxidativo o fermentativo, as como la no utilizacin de un hidrato de carbono
por la bacteria en estudio.
En el medio de cultivo, el agregado de una alta concentracin de un
determinado hidrato de carbono, hace que los microorganismos utilicen para
su desarrollo dicha sustancia, evitando que bacterias aerbicas utilicen la
triptena presente con la consecuente produccin de reaccin alcalina, la que
se neutraliza por la ligera acidez producida por un microoganismo oxidativo.
El fosfato dipotsico agrega capacidad reguladora, el cloruro de sodio mantiene
el balance osmtico, y el azul de bromotimol es el indicador de pH que vira al
color amarillo en medio cido. El contenido de agar, da la propiedad de ser un
medio semislido, y permite determinar la movilidad y la distribucin de los
productos cidos en el medio de cultivo. La glucosa es el hidrato de carbono
ms frecuente que se agrega al medio basal O.F., pero tambin pueden
agregarse otros azcares, como ser, lactosa, sacarosa, maltosa, manitol o
xilosa, entre otros.
Por oxidacin o fermentacin de un determinado hidrato de carbono, se
acidifica el medio y el indicador de pH vira del color verde al amarillo.

Frmula (en gramos por litro)

Triptena
Cloruro de sodio
Fosfato dipotsico
Agar

2
5
0.3
2.5

Azul de bromotimol

0.03

Instrucciones
Suspender 9.8 g del polvo por litro
de agua destilada. Mezclar. Calentar con

agitacin frecuente y hervir 1 minuto.

Esterilizar a 121C durante 15 minutos. A
100 ml de base estril, agregar 10 ml de la
solucin estril del hidrato de carbono al
10% (alternativamente agregar el hidrato
de carbono antes de esterilizar y autoclave
a 118C durante 10 minutos).

pH final: 7.1 0.1

reaccin
oxidacin
fermentacin
sin oxidacin o
fermentacin

tubos con
reaccin
abierto
cerrado
ninguna

tubos abiertos
tubo cerrado
amarillo (A)
verde (-)
amarillo amarillo amarillo (A) amarillo
(AG)
(AG)
azul o verde (-)

verde (-)