Objetivo: Busqueda de los antgenos virales o anticuerpos producidos como respuesta a los

antgenos, en suero sanguneo de una per sona infectada por el virus de la inmunodeficiencia
humana (VIH) .
Generalidades: El sindrome de la inmunodeficiencia adquirida (SIDA) conocido tambin
como AIDS las iniciales de su nombre en ingles (adquird inmunodeficiency sndrome) es
considerado en practicamente todos los paises del mundo como un serio problema de sa lud
publica.
El agente causal del SIDA es un retrovirus que fu denominado limphadenopaty asociated virus
por su primer descubridor, el Dr Luc Montagnier, del instituto Pasteur en Francia, en mayo de
1983. En mayo de 1984 el Dr Robert Gallo del Instituto Nacional del Cancer en U S A, aisla y
caracteriza un retrovirus de pacientes con SIDA y lo denomina human ymphotropic virus III
desde 1987, por acuerdo internacional se decide nombrar al virus human inmunodeficiency
virus (HIV en espaol virus de la inmunodeficiencia humana hasta el momento se han
reconocido dos cepas significativamente diferentes, llamandoles VIH I y VIH 2, el virus se
transmite por contacto sexual, bucal o anal por la inoculacin o administracin de sangre o
hemoderviados contaminados y perinatalmente de madre infectada a hijo; el paso
trasplacentario del virus est demostrado y existe la factibilidad de infeccin a travs de la
lactancia.
No existen evidencias que apoyen la transmisin por contacto casual entre las personas en
ambientes escolares, sociales o de trabajo; no existe la evidencia de la transmisin por medio
de insectos, ni por tos o estornudos, asi como tampoco a travs de agua o alimentos.
Despus de infectarse una persona, puede permanecer asintomtica durante varios aos
algunos pacientes pasan por un estado de molestias tempranas con presencia de fiebre,
artralgias y malestar general que se presentan al mismo tiempo que la seroconversin,
momento a partir del cual es posible detectar anticuerpos contra VIH en el suero del paciente
esto ocurre generalmente entre la segunda semana y el tercer mes posterior a la infeccin, a
partir de este momento pueden pasar en promedio de 8 a 9 aos para el de sarrollo del SIDA,una
vez que la enfermedad se ha desarrollado, la mortalidad es muy elevada, casi del 100%.
El virus es capaz de producir el deterioro progresivo y predecible de las funciones
inmunologicas, siendo el SIDA una manifes tacin tarda de este proceso, el padecimiento es de
naturaleza inmunosupresora y de tipo basicamente celular, la poblacin celular
especificamente abatida, es la de los linfocitos T cooperador C4, la perdida de las celulas T4
daa seriamente la habilidad del organismo para contrarrestar a la mayor parte de
microorganismos invasores, observando que este dao es particularmente severo, sobre la
defensa en contra de virus, hongos, parasitos y ciertas bacteras.
Metodos de laboratorio: Una vez que la infeccin ha ocurrido, el individuo podra permanecer
totalmente asintomatico durante un lapso que puede fluctuar desde 10 meses hasta 89 aos, un
individuo infectado o infectante por el hecho de sentirse bien, continuar su conducta habitual,
con el consiguiente riesgo para si y para los demas, dentro de este lapso asintomatico, la unica
manera de conocer si una persona est o no infectada, es mediante la busqueda de los
antgenos virales a los anticuerpos producidos en respuesta a aquellos, en suero sanguineo o
bien el aislamiento del virus a partir de algn tejido, las pruebas de laboratorios que se disponen
son las que permiten detectar aticuerpos contra VIH y se dividen en dos categorias:
1. Prueba de tamizaje o escrutinio inicial (presuntivas)

2. Pruebas confirmatorias
Pruehas presuntivas:

Actualmente existen varias pruebas para la deteccin de aticuerpos contra VIH estas pruebas
difieren en suprincipio funcional, lo cual da lugar a diferencias en tiempo de proceso, necesidad
de instrumentacin analtica, necesidad de adies tramiento y experiencias del personal analista,
entre otras, ELISA (Eenzyme Linked Inmuno Sorbent Assay)
Fundamento: Se trata de un anlisis inmunoenzimatico heterogneo, existen dos tipos
competitivo y no competitivo, emplean una fase slida la cual ha sido recubierta con antgenos
de VIH si el suero problema contiene anticuerpos contra VIH, estos reaccionan con el antgeno
quedando por lo tanto unidos a la fase slida, el revelado de la presencia de estos anticuerpos
unidos se hace medianteun conjugado formado por un anticuerpo Anti IgG o Anti IgM unido a una
enzima, la unin del conjugado se pone de manifiesto adicionando el substrato de la enzima, en
los ELISA de tipo no competitivo, la produccin de color es directamente proporcional a la
cantidad de anticuerpos contra VIH presentes en el suero problema, dentro de ciertos lmites,
enlos ELISA de tipo competitivo, la produccin de color es inversamente proporcional.
Material requerido:

Micropipetas

Sistema de lavado de pozos

Espectofotmetro para placas de Elisa

Tiempo de proceso:

Elisa competitivo: Aproximadamente 2, 5

Elisa no competitivo: Aproximadamente 4

Elisa rapido: Aproximadamente 15 minutos

Aglutinacin:
Fundamento: Estos mtodos hace uso de particulas, ya sea de ltex, gelatina o bien
hematies, sensibilizados con antgeno de VIH, el contacto con un suero que contenga
anticuerpos contra VIH produce la aglutinacin indirecta de las partculas, observable a simple
vista.
Material:
Todo el material viene con el equipo de reactivos
Tiempo de proceso:
Latex 5 minutos
Gelatina 2 horas

Hemates 2 a 3 horas.
Citoinmunoenzimatica.
Fundamento:
Este mtodo emplea clulas infectada con VIH, colocadas en un pozo de un porta objetos, al
reaccionar con un suero quecontenga anticuerpos contra VIH estos se uniran a los antgenos de
VIH presentes en las clulas, dicha unin se pone de manifiesto mediante un conjugado de
proteina A estafilococica y el substrato correspondiente, produciendose coloracin de la
membrana y citoplasma celular.
Material:

Micropipetas

Microscopio

Tiempo de proceso: 2 horas

Membrana sensibiltzada.
Fundamento: Eeste anlisis hace uso de una membtana porosa sensibilizada con antgenos de
VIH, al depositar el suero problema sobre la membrana, la reaccin ocurre instantaneamente,
drenandose rpidamente el lquido los anticuerpos unidos se ponen de rnanifiesto mediante un
conjugado especial que provoca la aparicin de un punto rojo apreciable a simple vista.
Material: ninguno.
Tiempo de proceso: 5 minutos.
De los metodos mencionados, el ms ampliamente utilizado es el ELISA, muy confiable y
razonablemente rpido. Los mtodos de aglutinacin, en general pueden ser considerados como
una buena alternativa sobre todo aquellos cuyos resultados se obtienen en pocos minutos, sin
embargo, todos ellos quedan sujetos a la objetividad de la lectura visual del resultado,
particularmente al tratarse de un suero debilmente positivo.
En todos los casos de pruebas presuntivas, un primer resulta dopositivo deber verificarse
repitiendo el analisis con los mismos reactivos o preferentemente con reactivos de otro tipo.
Resultados repetidamente positivos en pruebas de esta calidad, debern calificarse como
presuntivamente positivos y procederse a su confirmacin mediante los metodos
correspondientes.
Existe tambin un ELISA que permite detectar las proteinas constitutivas del VIH
(antigenemia) esta prueba es til en la deteccin muy temprana de la infeccin (2-4 semanas
despus del contagio), cuando aun no es posible detectar anticuerpos circulantes.
Pruebas confirmatorias actualmente en uso son:

Western Blot o Inmunoelectrotransferencia

Inmunofluorescencia

Radio-inmuno-precipitacion

Wester Bloto o Inmuno electro transferencia.

Mtodo que hace uso de tiras de papel, las cuales han sido impregnadas con las
diferentes proteinas constitutivas del virus, mediante un proceso previo de
inmunoelectrotransferencia. Las proteinas se encuentran distribuidas a lo largo de la tira de
papel en orden decreciente de peso molecular, en espacios discretos y bien definidos.
La tira asi preparada se coloca en un canal de plastico y se sumerge en una dilucin del suero
problema; en caso de existir anticuerpos contra VIH, estos se unirn a la tira de papel en el
punto correspondiente a la localizacin de la proteina para la cual sean especificos. Tal unin se
pondr de manifiesto mediante un conjugado enzimtico Anti-inmunoglobulnico y el substrato
correspondiente, que dar lugar a la aparicin de bandas obscuras sobre la tira.
Este mtodo permite detectar la presencia de anticuerpos especificos contra las
siguientes proteinas de VIH; gp160, gpl20, p55 p51, gp41, p31, p24 y p217, se han utilizado
varios criterios de interpretacin de la lectura de las tiras, los dos ms usuales son:
Interpretacion

Criterio 1

Criterio 2

Negativo

Ausencia total de bandas

Indeterminado

Presencia de bandas que

No cumplen con el
criterio de positividad

Positivo

Al menos 1 banda
Correspondiente a c/uno

De los 3 genes principales

de VIH (ENV, GAG,)

Aparicin de la
Banda gp160 y al
menos una GAG

Atualmente se cuenta con reactivs comercialmente disponibles tanto para VIH 1,

como para VIH 2.
Inmunofluorescencia
Este mtodo consiste en utilizar clulas infectadas por VIH depositadas en pozos de
un porta objeto, el suero problema se coloca encima de un pozo con clulas infectadas y de
otro con clulas no infectadas, en caso de tener anticuerpos especficos contra el VIH, estos se
uniran a las clulas infectadas, mientras que las no infectadas no presentaran unin alguna, la
reaccin antigeno-anticuerpo se pone de manifiesto por medio de un Antisuero Anti
inmunoglobulnico conjugado con fluoresceina, al ser observado en un microscopio de
fluorescencia.
El criterio de asignacin de positividad, estar dado por la presencia de un patrn de
fluroescencia perifrico (de membrana caracterstico) y ocasionalmente por cierto patrn
citoplsmico, si bien este mtodo es considerado de calidad confirmatoria, es menos sensible
que el Western Blot, esta tcnica aunque sencilla presenta problemas de interpretacin, por lo
que solo puede ser realizada por tcnico altamente capacitados.

Recomendaciones para el personal de laboratorio.

Por el trabajo que se realize en el laboratorio, el personal que se desempea en el
mismo, corre un riesgo al estar en contacto con sangre, secresiones, as como con agujas e
instrumentos contaminados con sangre de personas en riesgo de infeccin por SIDA, ya hemos
puntualizado que el riesgo de transmisin ocupacional es muy bajo, y ha sucedido que personal
que labora en el laboratorio, la exposicin parenteral a sangre contaminada, pocos casos se
han reportado y demostrado seroconversin para el VIH.
No se ha demostrado la contaminacin en los lugares de trabajo por contacto fortuito a travs de
agua o alimentos contaminados, insectos que actuan como vectores o por via aergena el
personal de laboratorio, as como los que manejan y atienden a pacientes, se deben tomar y
extremar precauciones para evitar el contacto directo con la piel o las mucosas con sangre,
hemoderivados, excresiones, secresiones y tejidos de pacientes con SIDA o de personas con
infeccin presumible del padecimiento.
Todo el personal de salud, incluso estudiantes, que se encuentran dentro de instalaciones
hospitalarias, debe conocer la epidemiologia, manifestaciones clnicas, forma de transmisin y
precauciones para prevenir la contaminacin de la infeccin del SIDA.
Precauciones: Deben aplicarse en los laboratorios clnicos, como los de investigacin; se
puntualiza en el personal que efecta estudios con especmenes u otros materiales
potencialmente infectados cultivos tisulares inoculados, huevos embrionados o tejidos animales
procedente de individuos con sospecha o certeza de VIH.
En el laboratorio se utilizarn pipetas mecnicas para el transvase de todos los
lquidos no se permitir el pipeteo con la boca. Las agujas y jeringas que se utilicen sern
desechables y una vez utilizadas se colocaran en recipientes irrompibles de boca ancha, no
deben taparse con su guarda para prevenir pinchazos, ni se doblaran, romperan o desacoplarse
de la jeringa, se incinerar
el recipiente.
Debe usarse bata o uniforme de laboratorio, de manga larga. Se utilizarn guantes
para evitar el contacto de la piel con la sangre, muestras que contienen sangre, articulos
contaminados con sangre, lquidos corporales, excresiones y secresiones, as como superficies,
materiales u objetos expuestos a ellos.
El material potencialmente infeccioso debe tratarse y ma nipularse cuidadosamente
para reducir al mnimo la formacin de aerosoles. Se recomienda usar cabinas de seguridad
biolgica y otros dispositivos de contencin primaria por ejemplo cubierta de seguridad para la
centrfuga.
Cuando se realizan procedimientos de general aerosoles como en el caso de centrifugacin,
mezclas, aplicacin de ultrasonido, mezclas vigorosas y obtencin de tejidos infectados de
animales o huevos embrionados.

Despus de cualquier salpicadura de material que pueda ser infeccioso y al terminar

la jornada, las superficies de trabajo de las mesas de laboratorios, se limpiarn con un
desinfectante como la solucin de hipoclorito de sodio (dilucin de 1:1 en agua fria). Ttodos los

materiales potencialmente contaminados que seanutilizados en las pruebas de laboratorio se

estetilizaran en autoclave, antes de desecharlos o reutilizarlos.
El personal no debe tomar alimentos ni fumar dentro del laboratorio. El personal
debe lavarse las manos con agua y jabon despus de quitarse los guantes y quitarse la bata
antes de salirdel laboratorio. Comentario adicional se recomienda a laboratorios y bancos de
sangre, a el personal se le practique, semestralmente investigacin de Hepatitis B y VIH

La hepatitis es una inflamacin del hgado. La afeccin puede remitir espontneamente o

evolucionar hacia una fibrosis (cicatrizacin), una cirrosis o un cncer de hgado. Los virus de la
hepatitis son la causa ms frecuente de las hepatitis, que tambin pueden deberse a otras
infecciones, sustancias txicas (por ejemplo, el alcohol o determinadas drogas) o enfermedades
autoinmunitarias.
La hepatitis A y la E son causadas generalmente por la ingestin de agua o alimentos
contaminados. Las hepatitis B, C y D se producen de ordinario por el contacto con humores
corporales infectados. Son formas comunes de transmisin de estos ltimos la transfusin de
sangre o productos sanguneos contaminados, los procedimientos mdicos invasores en que se
usa equipo contaminado y, en el caso de la hepatitis B, la transmisin de la madre a la criatura
en el parto o de un miembro de la familia al nio, y tambin el contacto sexual.
La infeccin aguda puede acompaarse de pocos sntomas o de ninguno; tambin puede
producir manifestaciones como la ictericia (coloracin amarillenta de la piel y los ojos), orina
oscura, fatiga intensa, nuseas, vmitos y dolor abdominal.