HEMOSTASIA Y GRUPOS SANGUNEOS.

Temas de estudio.
- Composicin de la sangre.
- Concepto de hemostasia
- Fases de la hemostasia.
- Vas de la coagulacin.
- Qu es un anticoagulante. Ejemplos de anticoagulantes.
- Qu es la Hemofilia.
- Concepto de antgenos y anticuerpos.
- Sistemas AB0 (cero) y Rh para la determinacin de los grupos sanguneos en el humano.
- Cules son los aglutingenos y las aglutininas en los sistemas AB0 y Rh,
- Otros sistemas para la determinacin de los grupos sanguneos.
- Eritroblastosis fetal.
INTRODUCCIN.
La hemostasia es el conjunto de mecanismos que evitan la hemorragia o extravasacin sangunea.
La hemostasia consta de tres fases:
1) Fase vascular.
2) Fase plaquetaria.
3) Fase plasmtica.
La fase vascular consiste a su vez de dos etapas: una vasoconstriccin inicial y una
vasodilatacin tarda. La vasoconstriccin inicial que limita el flujo de sangre, reduciendo el
dimetro del vaso lesionado y con ello la prdida de sangre., Es inducida por agentes tales como la
noradrenalina liberada por las terminaciones nerviosas, el tromboxano A2 y la serotonina, liberados
por las plaquetas que entran en contacto con el colgeno expuesto en el sitio de la lesin. Las
clulas endoteliales que forman la pared del vaso sanguneo liberan endotelina 1 potente
vasoconstrictor as como prostaciclina y bradicinina, que posteriormente inducen vasodilatacin; lo
que favorece la llegada de las plaquetas que participan en la siguiente fase de la hemostasia.
La fase plaquetaria de la hemostasia es resultado de la accin de las plaquetas, fragmentos
celulares producidos por gemacin de los megacariocitos de la mdula sea. Esta fase consta de las
siguientes etapas:
1.- Adherencia. Consiste en la formacin de una monocapa plaquetaria a lo largo del sitio de la
lesin vascular inducida por el factor von Willebrand producido por las clulas endoteliales. Este
factor forma un puente de unin entre las clulas endoteliales y las plaquetas .
2.- Secrecin. Corresponde a la reaccin de liberacin plaquetaria de mediadores qumicos
vasoactivos y agentes proagregantes contenidos en sus grnulos secretores (ADP, serotonina,
tromboxano A2, catecolaminas, y calcio entre otros).
3.- Agregacin. El ADP y el tromboxano atraen ms plaquetas y las hacen adhesivas. La segunda
capa de plaquetas libera ms agentes proagregantes. El ciclo se repite hasta la formacin de un
tapn plaquetario multicelular formado por varias capas,.
4.- Fusin. Est dada por la fusin de las membranas de las plaquetas para formar un tapn
unicelular que proporcione la mxima resistencia a la zona lesionada y mantenga unido el
endotelio de la misma. Las plaquetas activadas tambin activan los factores plasmticos de
coagulacin.
La fase plasmtica est representada por un grupo de protenas plasmticas y otros factores
que participan en la coagulacin sangunea, fenmeno que consiste en el cambio de estado coloidal
de la sangre, de predominantemente sol a predominantemente gel. Las protenas que intervienen en
la coagulacin son, en su mayora, sintetizadas en el hgado.

La reaccin fundamental en la coagulacin de la sangre es la conversin del fibringeno en

fibrina. El fibringeno es una protena globular soluble del plasma, mientras que la fibrina es un
polmero fibrilar insoluble. La conversin del fibringeno es catalizada por la trombina, que resulta
de la activacin de su precursor inactivo circulante, la protrombina, por la accin de un complejo de
protenas (factor X, factor V), por calcio y por el factor plaquetario III (una mezcla de fosfolpidos y
protenas de superficie plaquetaria), llamado Complejo Activador de la Protrombina (CAP). El CAP
puede ser activado por dos diferentes secuencias de reacciones que reciben el nombre de va
intrnseca y va extrnseca.
La activacin de la va intrnseca ocurre cuando la sangre hace contacto con las fibras de
colgena de la membrana basal subendotelial de los vasos sanguneos o con superficies hmedas
con carga elctrica, lo cual induce la activacin del factor XII. La liberacin de tromboplastina
tisular o factor III (mezcla de protenas y de fosfolpidos) desde las clulas endoteliales, activa al
factor VII, con lo que se da inicio a la va extrnseca. El inicio de estas dos vas, a su vez, produce
activacin secuencial de un sistema de proteasas (factores XI, X, IX, VIII, V) hasta la formacin del
CAP; muchos de estos pasos requieren la presencia de calcio inico, por lo que los quelantes de los
iones divalentes pueden tener efecto anticoagulante.
Una vez reparada la pared de los vasos lesionados, el factor XII activado promueve la
activacin de una molcula plasmtica denominada calicrena; sta a su vez, cataliza la conversin
de plasmingeno en plasmina, la cual digiere la fibrina y, por lo tanto, promueve la disolucin del
cogulo.
Grupos sanguneos. La membrana de los eritrocitos contiene diversos antgenos llamados
aglutingenos. Los ms importantes son el A y el B. Los individuos se dividen en cuatro grupos
sanguneos dependiendo de la presencia o ausencia de estos antgenos en la superficie de la
membrana de sus eritrocitos, estos grupos son: A, B, AB y 0 (cero). Adems de los antgenos del
sistema AB0 (es un sistema de alelos en un mismo locus del material gentico el que codifica para
estas protenas), existen los del sistema Rh, llamados as porque fue estudiado por primera vez en
los monos del gnero Rhesus. Es en realidad un sistema compuesto por muchos antgenos, dentro
de los cuales el D es el ms antignico.
Los anticuerpos para los aglutingenos se llaman aglutininas; stas pueden existir
naturalmente (esto es, hereditariamente) o ser producidos por exposicin a los eritrocitos de otro
individuo. Los anticuerpos circulan en el plasma a diferencia de los antgenos que estn en la
membrana de los eritrocitos.
Objetivos.
Obtener y manejar adecuadamente las muestras de sangre humana.
Valorar, en el laboratorio, las diversas etapas del proceso de hemostasia mediante tcnicas
in vitro e in vivo.
Desencadenar e inhibir in vitro el proceso de la coagulacin sangunea, modificando
variables fisiolgicas como la temperatura y la concentracin de calcio en el medio.
Observar en el microscopio al polmero de fibrina.
Observar la reaccin de aglutinacin en muestras de sangre al mezclarlas con antisueros del
sistema AB0 y del sistema Rh.
Determinar los diferentes tipos sanguneos de muestras obtenidas de los alumnos.
Determinar la frecuencia de los grupos sanguneos en la poblacin estudiada y compararla
con otras poblaciones ya reportadas.
MATERIAL Y MTODO
1 Papel filtro de forma circular.
1 cronmetro.
2

Torundas de algodn.
Alcohol.
5 tubos de ensaye de 1 x 10 cm
1 gradilla.
1 recipiente para hielo.
1 termmetro.
1 liga para torniquete.
2 vasos de precipitados de 250 ml
Hielo.
Solucin de citrato de sodio al 4%.
Solucin de cloruro de calcio al 4%.
6 portaobjetos.
1 cubreobjetos.
1 tringulo de vidrio o 3 varillas cortas.
1 caja de Petri.
1 microscopio ptico
Agua destilada.
Solucin de azul de metileno al 1%.
Lancetas estriles (una por cada integrante del equipo).
Palillos.
Suero anti-A.
Suero anti-AB.
Suero anti-B.
Suero anti-D.
Antes de iniciar cualquier maniobra experimental, el alumno debe contar con todo el
material necesario y tener muy claro el procedimiento a seguir en cada etapa de la prctica. Es
importante iniciar preparando una cmara hmeda que se usar para la formacin de fibrina (punto
3 de la parte B) ya que la cmara debe estar lista desde el momento de obtener la sangre. Revise el
punto mencionado para preparar la cmara.
A. FASE VASCULAR Y PLAQUETARIA.
Limpie cuidadosamente con alcohol la parte interna del dedo medio de cualquier mano
mantenga la mano por debajo de la cintura de 1 a 2 minutos y perfore la piel con una lanceta.
Conviene que sea un alumno el que ejecute las maniobras para la obtencin de la muestra y que otro
sea el donador, ya que uno mismo no se logra perforar adecuadamente la piel.
Si es necesario presione el dedo algunas veces para aumentar el flujo de sangre hasta que
aparezca una gota de tamao mediano y despus depostela haciendo contacto con la superficie en
algn punto de la periferia del papel filtro; en este momento ponga a funcionar el cronmetro. Cada
diez segundos deber repetir esta maniobra, pero sin hacer presin sobre el dedo, depositando las
gotas obtenidas hacia la derecha de la primera mancha recolectada y dejando una distancia entre las
gotas de 0.5 cm siguiendo el permetro del papel filtro y si es necesario, proseguir en espiral hacia el
centro del crculo. El experimento termina cuando ya no aparece ninguna mancha de sangre sobre el
papel filtro y en ese momento se debe detener el cronmetro.
B. FASE PLASMTICA.
1. Efecto de la temperatura.
Se empieza a cronometrar el tiempo a partir del momento en el que a tres tubos de ensaye
perfectamente limpios y secos se les coloca, a cada uno, un mililitro de sangre recin extrada. Uno
de los tubos se coloca en bao mara a una temperatura constante de 37C. El segundo tubo se
coloca en hielo. El tercer tubo se deja en contacto externo con agua caliente a una temperatura de
3

60C. Cada 30 segundos se debe verificar si ha habido coagulacin en alguno de los tubos, anotar el
tiempo que pas antes de observar la coagulacin.
Se espera que la sangre coagule en el tubo que se encuentra a 37C en el bao mara pero
no en los otros dos tubos. Despus de un tiempo prolongado; por ejemplo, tres veces el tiempo que
tardo en observarse la coagulacin en el tubo a 37C, colocar los tubos en donde no se ha observado
la coagulacin en el bao mara y empezar a contar el tiempo de coagulacin en esta situacin.
2. Accin del calcio.
En un tubo de ensaye se coloca una gota de la solucin de citrato de sodio (quelante de
calcio), se agrega un mililitro de la sangre extrada, se agita suavemente y se deja reposar 15
minutos en el bao mara a 37C. Despus de ese tiempo se observa que no hay coagulacin y se
procede a colocar 3 gotas de la solucin de cloruro de calcio, se agita ligeramente el tubo y se
regresa al bao mara. Hacer observaciones cada 30 segundos hasta observar la coagulacin.
3. Formacin de fibrina.
Prepare una cmara hmeda, colocando un tringulo de vidrio (o unas varillas) en el fondo
de una caja de Petri, y agregando agua de la llave sin cubrir completamente el tringulo; dicha caja
se tapa para permitir que el ambiente se sature de vapor de agua durante 15 minutos. Despus,
deposite una gota de sangre fresca en un portaobjetos y coloque sobre ella un cubreobjetos. Coloque
el portaobjetos sobre el tringulo dentro de la caja de Petri.
Despus de 30 minutos saque el portaobjetos de la caja y escurra unas gotas de agua
destilada sobre el borde del cubreobjetos para aflojarlo y poderlo retirar. Lave cuidadosamente la
pelcula con gotas de agua destilada y drene el exceso de agua con un papel absorbente. Haga una
tincin de la preparacin colocando unas gotas de una solucin acuosa de Azul de metileno al 1%
sobre el portaobjetos. Deje el colorante durante tres minutos y despus lave y deje secar. Observe en
el microscopio con el objetivo de 10 aumentos y dibuje las fibras de fibrina.
C. GRUPO SANGUNEO.
En un portaobjetos limpio, marcado en uno de sus extremos, coloque dos gotas de sangre
obtenidas por la puncin de un dedo utilizando una lanceta estril. Las gotas deben colocarse por
separado, una en cada extremo del portaobjetos. En otro portaobjetos coloque otras dos gotas de
sangre de la misma manera en que se hizo con el primer portaobjetos. A cada gota de sangre se le
debe agregar una gota de suero, procure que las gotas de sangre y de suero sean aproximadamente
iguales. Una gota de sangre debe mezclarse con el suero anti-A, otra con el suero anti-B otra con el
suero anti-AB y la ltima con el anti-D. Para mezclar la sangre con el suero correspondiente utilice
un palillo el cual debe ser diferente para cada muestra. Despus de un minuto observe si en las
muestras hay o no hay aglutinacin; con base en lo anterior, determine el tipo sanguneo del
individuo. La determinacin del tipo sanguneo se debe hacer para todos los miembros del equipo
teniendo cuidado de utilizar siempre una lanceta estril para cada persona y palillos nuevos.
RESULTADOS
A.- FASE VASCULAR Y FASE PLAQUETARIA.
Cuntas marcas de sangre se lograron hacer sobre el papel filtro? Todas son iguales?
Cul fue el tiempo necesario para que se completaran estas fases de la hemostasia?
B.- FASE PLASMTICA.
1.- Efecto de la temperatura.

Cules de los tres tubos de ensaye presentaron coagulacin de la sangre? Cunto tiempo pas
para que se llevara a cabo la coagulacin? Qu sucedi con los tubos que fueron colocados
inicialmente en las temperaturas extremas cuando se colocaron en el bao a 37C? El proceso de
coagulacin fue ms rpido o ms lento, por qu?
2.- Efecto del calcio.
Cul fue el efecto observado en la coagulacin al utilizar un quelante de calcio (citrato de sodio)?
Qu sucedi al agregar cloruro de calcio? Se observ alguna diferencia en el proceso de
coagulacin con respecto a lo observado en el tubo a 37C de la parte 1?
3.- Formacin de fibrina.
Haz un esquema de la preparacin observada en el microscopio conteniendo las fibras de fibrina.
C.- GRUPO SANGUNEO.
Haz un esquema representando lo que se observ al mezclar las gotas de sangre con las gotas de los
diferentes sueros. Cul es tu grupo sanguneo?