LABORATORIO No.

1
ESTUDIO Y MANEJO DEL MICROSCOPIO
INTRODUCCIN
Desde
los
inicios
de
la
microscopia, los investigadores
vienen
desarrollando
mtodos
cada vez ms sensibles, eficaces y
con mejor resolucin. Al principio
ellos debieron enfrentarse a los
problemas
de
aberraciones
pticas, imgenes borrosas y
pobre desarrollo de lentes, los
cuales se mantuvieron hasta
mediados del siglo XIX que
aparecieron los lentes objetivos
que
reducan
la
aberracin
cromtica
con
una
apertura
numrica entre 0.65 y 1.25. Estos
avances se iniciaron con los
reportes sobre los mtodos de
iluminacin
que
propuso
el
profesor August Klher, en 1893, y
que sentaron las bases de la
microfotografa moderna. En las
ltimas
dcadas
se
ha
incrementado la aplicacin de la
microscopa
ptica
en
los
laboratorios de investigacin de
una amplia variedad de disciplinas
como
la
biologa
celular
y
molecular,
microbiologa,
inmunologa y virologa. El rpido
desarrollo de diferentes mtodos
como
los
de
fluorescencia,
contraste de fases, confocal y de
campo oscuro entre otros, que
sumados a los avances en la
digitalizacin
y
anlisis
de
imgenes, han permitido a los
microscopistas obtener resultados
rpidos, cuantificables y confiables
de
una
gran
variedad
de
especmenes biolgicos. Al margen
de estos avances, las bases del
funcionamiento de los distintos
tipos de microscopios pticos
siguen siendo los mismos que se
presentan en esta prctica y con
los cuales el estudiante deber
familiarizarse.

BREVE
HISTORIA
DEL
MICROSCOPIO
Tres eminentes holandeses, Antn
Van
Leeuwenhoek,
Hans
y
Zaccharias Janssen, fabricantes de
lentes, contribuyeron al desarrollo
de la microscopa. El museo de
Middleburg, en Holanda, conserva
uno de los primeros microscopios
conocidos,
probablemente
fabricado por uno de los hermanos
Janssen. Estos aparatos, eran
extremadamente simples, por lo
que solo permitan el examen de
cuerpos opacos.
A fines del siglo XVII el italiano
Camping construy un microscopio
que hizo posible la observacin de
preparaciones transparentes. Las
imgenes obtenidas por estos
microscopios
eran
muy
deficientes.
En Inglaterra el cientfico Robert
Hooke, trat de construir lentes
ms eficaces, pero sus resultados
no
fueron
satisfactorios;
sin
embargo,
sus
observaciones
contribuyeron al establecimiento
de la microscopa como ciencia.
Mientras, en el siglo XVII Jonh
Marshall y otros fabricantes de
microscopios,
perfeccionaron
mucho el diseo mecnico, pero
no la calidad de los lentes. Pero
fue, durante el siglo XIX, que se
realizaron grandes progresos en
los sistemas pticos y en la
microscopa en general; aun as,
fue imposible evitar la dispersin
de
la
luz
en
sus
colores
componentes en la fabricacin de
microscopios.
Este
fenmeno
conocido
como
aberracin
cromtica, produca una imagen
borrosa y coloreada.
Las
primeras
lentes
adecuadamente corregidas para
microscopios,
denominadas

acromticas, hicieron su aparicin

alrededor de 1830; pero la
aberracin
esfrica,
tambin
produca una imagen desenfocada.
En 1886, Ernot Abbe y Caol Zeiss
en Alemania fabricaron unas
lentes
apocromticas
que
corrigieron ambas aberraciones.

Identificar las diferentes partes

que constituyen el microscopio y
reconocer las funciones de cada
una de ellas
Adquirir habilidad en el uso y
manejo correcto del microscopio,
siguiendo las indicaciones de las
guas de laboratorio.

A finales del siglo XIX, los

microscopios
comenzaron
a
adquirir la forma que tienen
actualmente, con los aportes de
Khler.

1.2 MATERIALES
Microscopios
Porta-objetos y cubre-objetos
Papel limpia lentes (papel
arroz)
Goteros o Pipetas Pasteur
Hilos de lana y algodn
Flores con polen
Agua de charca
Partes de insecto
Pinzas de diseccin

Desde
el
ao
1900,
los
microscopios se han modificado
poco
en
sus
principios
fundamentales, pero mucho en sus
detalles. Estos perfeccionamientos
incluyen, la incorporacin de
varios objetivos, cada uno de
aumento diferente y roscado a un
tambor giratorio o revolver.
En 1935, Frizt Zenique invento la
tcnica de contraste de fase que
hace posible la observacin de
especmenes antes invisibles.
El
microscopio
electrnico,
desarrollado en vsperas de la
segunda guerra mundial, ha sido
de gran utilidad para el estudio de
molculas
qumica,
virus
y
organelas celulares.
Existe un tipo de microscopio
electrnico, llamado de barrido,
que
ha
adquirido
una
extraordinaria utilidad, ya que
ofrece
representaciones
tridimensionales muy reales de las
clulas y las estructuras celulares.
1.1

OBJETIVOS:

1.1.1 OBJETIVO GENERAL:

Valorar la importancia del
microscopio como instrumento
bsico
para
el
estudio
e
investigacin en las Ciencias
Biolgicas.
1.1.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS:

de

1.3 CLASES DE MICROSCOPIOS:

Existen dos tipos de microscopios:
simples y compuestos

Microscopios
simples:
Consta de un solo sistema de
lente

Microscopios
compuestos:
Constan de dos (2) sistemas de
lentes: el objetivo y el ocular. El
microscopio compuesto es un
instrumento
que
aumenta
considerablemente la imagen
de los objetivos que en l se
observan. Entre las variedades
de
ste
microscopio
encontramos el electrnico y el
fotnico u ptico. Este ltimo
tipo
de
microscopio
est
formado
por
una
parte
mecnica y una parte ptica.
(Figura No.1.1)

Parte Mecnica:
a. Pie o Base: Generalmente en
forma
de
herradura
o
rectangular, es el apoyo de las
dems piezas del microscopio.
El pie debe ser slido y pesado
para asegurar su estabilidad.

b. Columna o Brazo: Este

elemento relaciona el tubo del
microscopio con el pie; sostiene la
platina y el condensador y de ella
se agarrar el microscopio cuando
se traslada durante los trabajos.
En
algunos
microscopios
la
columna es mvil.

sujetar y mover la placa que se va

a estudiar. Posee dos tornillos que
permiten
movimientos
horizontales y verticales (hacia
adelante, hacia atrs, hacia la
izquierda y hacia la derecha) del
portaobjetos. Cuando la platina
carece del anterior dispositivo,
lleva dos soportes para fijar las
placas llamadas ganchos o uas.
g. Mecanismos de Movimiento:
Est integrado por el tornillo
Macromtrico y el Micromtrico.

Figura No.1.1 Microscopio ptico

c.
Tubo
del
Ocular:
Est
colocado en la parte superior del
microscopio,
donde
estn
acoplados
los
oculares,
que
pueden tener movimiento vertical,
con ayuda de una cremallera sobre
la
columna.
En
algunos
microscopios el tubo ocular es
inclinado y se mantiene fijo, en
este caso se mueve la platina.
d. Revlver o Disco Giratorio:
Est debajo del tubo ocular donde
estn acoplados los objetivos,
presenta
movimiento
giratorio
para facilitar el cambio de un
objetivo a otro.
e. Platina: Es una placa que
puede ser cuadrada, circular o
rectangular, con un orificio central
que permite el paso de la luz a
travs de ella. Su funcin es
sostener las placas con los
preparados biolgicos que se van
a observar.
f. Carro: Es un dispositivo ubicado
sobre la platina, cuya funcin es

Tornillo

Macromtrico:

Acerca o aleja rpidamente el

objetivo
del
preparado
a
observar; su funcin es lograr
un enfoque ms o menos claro
o aproximado del objeto.
Tornillo Micromtrico: Acerca
o
aleja
el
objetivo
del
preparado, pero lentamente,
casi
imperceptiblemente,
permite desplazamientos muy
finos de la platina o del tubo
del
ocular.
Durante
la
observacin y enfoque este
tornillo debe estarse moviendo
permanentemente; su funcin
es darle nitidez al enfoque.

Parte ptica:
Est integrada por los objetivos,
oculares
y
el
aparato
de
iluminacin (espejo, diafragma,
condensador y filtros). Estos
elementos son los que permiten la
iluminacin, ampliacin y la visin
aumentada del objetivo.
a. Objetivo: Es la pieza ms
importante del microscopio. Ellos
se
acoplan
mediante
roscas
estndar al revlver y pueden ser

cambiados de posicin con slo

rotarlos.
Reciben el nombre de objetivos
porque son los lentes que estn
ms cerca del objeto.
La mayora de los microscopios
tienen tres o cuatro objetivos. Las
lentes de los objetivos son de
aumentos
diversos,
los
ms
usados
son:
Objetivos
de
pequeos aumentos 3.5x; 4x, 5x,
6x, 8x y 10x; objetivos de grandes
aumentos 40x, 45x, 50x y
objetivos de inmersin 90x, 95x y
100x.
Las lentes de inmersin se
emplean con aceite de cedro para
conectar la lente frontal (lente
inferior del objetivo) al portaobjeto. Entre el objetivo y el objeto
se produce una prdida de luz por
reflexin
que
se
corrige
adicionando al preparado unas
gotas de aceite de cedro (aceite
de inmersin) cuyo ndice de
refraccin 1.515, es prximo al
cristal. Este aceite tambin reduce
o suprime por completo la
refraccin de los rayos de luz
provenientes
de
la
fuente
luminosa.

Figura No. 1.2 Especificaciones de

los objetivos.
b. Ocular: Estn colocados en la
parte superior del tubo ocular. Est
formado por dos sistemas de
lentes dispuestos en un cilindro.
Su finalidad es aumentar la
imagen dada por el objetivo y
eventualmente corregir algunos
defectos de la misma. Reciben
dicho nombre porque son las
lentes que se encuentran ms
cerca del ojo. Hay oculares de
3.5x; 5x; 6.3x; 10x; 12.5x; 15x;
20x y 25x.
El aumento de la imagen de un
objeto observado a travs de un

microscopio,
se
calcula
multiplicando
el
nmero
de
aumento del objetivo con el cual
se est trabajando por el nmero
de aumento del ocular que se est
utilizando.
c. Aparato de iluminacin: Est
conformado por la fuente de luz, el
diafragma, el condensador y los
filtros.
d. Fuente de Luz: Puede ser
natural o artificial, cuando es
natural (solar) o procede de un
foco luminoso situado fuera del
microscopio, un espejo recoge la
luz del medio y la refleja a travs
del objeto y del sistema de lentes.
La luz artificial la constituye un
bombillo en el microscopio y
conectado a un circuito elctrico
de bajo voltaje.
e. Diafragma: Est ubicado entre
la fuente de luz y el condensador,
inmediatamente debajo de la
platina, su funcin es regular la
intensidad de luz que atraviesa el
objeto. El diafragma tiene una
palanquita que al moverla hacia
adelante o hacia atrs agranda o
achica el orificio central, dejando
pasar mayor o menor cantidad de
luz respectivamente.
f. Condensador: Es un elemento
cnico que posee un sistema de
dos lentes convergentes que
recogen o concretan los rayos
luminosos
para
enviarlos
al
objetivo por el agujero de la
platina.
Existe un tornillo manual que
permite graduar la altura del
condensador. Esta graduacin es
importante cuando se trabaja con
objetivos de gran aumento (40x y
100x), debido a que en la medida
que se trabaja con estos objetivos
el condensador debe subirse. Lo
contrario
sucede
cuando
se
trabaja con objetivos de menor
aumento (4x y 10x).

g. Filtros: Entre la fuente de luz y

el
condensador
de
algunos
microscopios existe un portafiltros
en el cual se pueden colocar filtros
a voluntad del observador. Los
filtros son elementos de cuarzo o
de vidrio, pueden ser de color azul,
amarillo o verde. Ellos interceptan
el haz de rayos luminosos antes de
entrar al condensador, esto se
hace con el objeto de seleccionar
un tipo de luz determinada para
una experiencia dada.
1.4 LA LUZ:
La luz es una forma de energa
transportada continuamente por el
espacio
a
velocidades
muy
elevadas (330.000 Km/s en el
vaco). La luz est formada por
pequeos corpsculos que salen
de un foco luminoso en forma de
ondas. El brillo de la luz es
proporcional a la altura o amplitud
de la onda y su color depende de
la longitud de sta. La luz blanca
est constituida por una gama de
colores del espectro visible, estos
colores son: rojo, anaranjado,
amarillo, verde, azul y violeta.
Cada color corresponde a una
longitud de onda determinada, por
consiguiente, la luz blanca se
compone de muchos rayos de luz,
todos vibrando con diferentes
longitudes de onda. (Figuras 1.3 y
1.4)

mayora de las lentes modernas

estn diseadas para el uso de luz
monocromtica
verde.

Fig. No. 1.4 Espectro de luz visible.

1.5 LENTES:
Las lentes son el componente ms
importante del microscopio; se
fabrican
de
vidrio
u
otros
materiales transparentes.
Pueden ser convexas o cncavas
en ambas superficies, planas en
una cara o tener cualquier
combinacin de stas dos formas
en su superficie.
Las lentes son de
positivas y negativas.

dos

tipos:

Lentes
Positivas:
Hacen
converger los rayos de luz, es
decir,
los
concentra
para
formar una imagen real.

Lentes
Negativas:
Hacen
divergir los rayos de luz, sin
formar ninguna imagen real.

1.6
PREPARACIONES
MICROSCPICAS:

Fig. No. 1.3 Naturaleza ondulatoria

de la luz
La luz de una sola longitud de
onda se llama monocromtica. Si
bien
se
utilizan
casi
solo
microscopios de luz blanca, la

Debemos tener en cuenta que a

travs del microscopio solamente
se pueden observar objetos que
dejan pasar rayos de luz, por esta
razn el preparado debe ser lo
ms
delgado
y
transparente
posible, pues un preparado grueso
solo nos permite observar una
mancha negra. Los detalles solo se
observan si la preparacin es lo
suficientemente delgada para que
sea transparente con la luz que

recibe. Para realizar preparaciones

microscpicas la porta y la cubreobjetos deben limpiarse antes de
usarse. Un buen mtodo es
guardarlos en alcohol y antes de
utilizarlos secarlos con un pao
limpio y libre de grasa. Los cubreobjetos
deben
limpiarse
con
mucho
cuidado
porque
son
frgiles.

poco de blsamo de Canad sobre

el objeto y se coloca el cubreobjeto.

Las preparaciones microscpicas

pueden ser acuosas o en seco. Las
preparaciones acuosas son las
ms simples y fciles usadas para
examinar cualquier objeto fluido,
como agua de estanque o sangre.
Se deposita una gotita del lquido
que se desea observar en el centro
del porta-objeto, se coloca el
cubre-objeto sobre el porta, forme
con las dos lminas un ngulo de
45 grados y luego deje caer
suavemente la laminilla (cubreobjeto)
sobre
el
preparado,
evitando la formacin de burbujas.

Fig. No. 1.5 Preparaciones Acuosas

El lquido no debe rebosar los

bordes del cubre-objeto, en caso
de
que
suceda
seque
cuidadosamente
el
lquido
sobrante usando papel absorbente
o papel toalla. La preparacin
queda
as
lista
para
la
observacin. Estas preparaciones
son de corta duracin porque se
secan rpidamente; para hacerlas
ms duraderas debe cerrarse
hermticamente los bordes del
cubre objeto; la duracin de sta
preparacin no es indefinida. Los
bordes se pueden cerrar con
vaselina o esmalte. Un cierre ms
hermtico se consigue cerrando
con blsamo de Canad (Euparal).
Las preparaciones en seco como lo
ndica su nombre, se hacen para
observar objetos secos, tales como
alas de insectos. Aqu se utiliza
goma arbiga, la cual se extiende
sobre el porta, luego se deposita el
objeto sobre la superficie y se deja
endurecer la goma. Una vez
endurecida la goma se pone un

1.7 COLORANTES:
Los
colorantes
son
sales
compuestas por un cido y una
base. Se clasifican en cidos,
bsicos y neutros, segn la parte
de los mismos que imparta el
color. En los colorantes cidos el
grupo cromforo, el que imparte el
color, es el componente cido, el
componente bsico es incoloro. Lo
contrario
sucede
con
los
colorantes bsicos. Los colorantes
neutros
tienen
coloreado
el
componente cido y el bsico.
La mayora de los colorantes son
sintticos, aunque se emplean
todava algunos naturales. La
hematoxilina y el carmn son los
colorantes
naturales
ms
importantes para la tincin de
tejidos. El carmn es producido por
la conchinilla (Coccus cacti). La
hematoxilina se extrae de la
madera de un rbol de Mxico, el
palo Campeche. Otro colorante es
la orcena que se extrae de
lquenes. Existen tres tcnicas de
tincin
de
uso
general:
la
coloracin seca o de tejidos
muertos, la coloracin vital o de
tejidos vivos y la histoqumica, en
la cual se utilizan las reacciones de
los colores para hacer visible los
elementos estructurales de las
clulas y de los tejidos. Una
reaccin
histoqumica
muy
conocida es la de Feulgen, en la
que se emplea el reactivo incoloro
de Schiff para teir el DNA en
tonos rojizos purpreos.

encienda la bombilla. Mire por el

ocular.
5. Una vez lograda una correcta
iluminacin coloque el preparado
sobre la platina. Mirando de lado,
asegrese que el objeto a observar
est centrado justo debajo del
objetivo de menor aumento.
Fig. No. 1.6 Colorantes.
1.8
MANEJO
MICROSCOPIO:

DEL

Antes de iniciar una observacin

microscpica se debe iluminar
completamente el campo visual,
para lo cual se procede de la
siguiente manera:
1. Gire el revlver hasta que el
objetivo de menor aumento quede
en posicin de trabajo, o sea que
quede alineado con los oculares.
Usted sentir un golpecito (como
un clic) cuando el objetivo llegue a
su posicin de uso.
2. Lleve el condensador a su
posicin ms alta.
3. Accione el tornillo macromtrico
hasta que el objetivo de menor
aumento descienda lo mximo
posible o hasta que la mesa
ascienda lo mximo posible, segn
sea el modelo del microscopio.
Esta operacin se hace llegar
hasta un punto de parada (tope).
4. Mire a travs del ocular o gire el
espejo hacia la fuente de luz hasta
obtener
un
mximo
de
iluminacin. Si el campo visual no
queda uniformemente iluminado,
baje lentamente el condensador
hasta obtener una iluminacin
uniforme. Si su microscopio es
elctrico siga los pasos 1, 2 y 3.
Enchufe el cable del transformador
a la fuente de energa.
Conecte el cable del microscopio
al transformador y luego accione
el botn de este para que

6. Mirando a travs del ocular

mueva suavemente el tornillo
Macromtrico, si el objeto est
bien
centrado
aparecer
su
imagen en el campo visual. Dele
nitidez al enfoque accionando el
tornillo micromtrico. Mueva el
carro en diferentes direcciones
para seleccionar el mejor campo
posible.
Puede
controlar
la
intensidad de la luz, mediante el
diafragma o el regulador de la
intensidad de la luz de la bombilla.
Para hacer un mayor enfoque con
mayor aumento debe seguir las
indicaciones anteriores. Una vez
obtenido el enfoque correcto con
menor
aumento,
mueva
el
revlver y coloque en posicin de
trabajo el objetivo de mayor
aumento. Si su microscopio est
bien calibrado debe aparecer
enfocada la imagen del objeto.
Este enfoque se refina accionando
el tornillo micromtrico.
Cuando
el
microscopio
es
monocular debe acostumbrarse a
mantener tambin abierto el ojo
que no utilice en la observacin
microscpica,
esto
le
evita
cansancio.
1.9 RECOMENDACIONES QUE
DEBEN TENERSE EN CUENTA
PARA EL BUEN USO Y CUIDADO
DEL MICROSCOPIO:
1.
El
microscopio
es
un
instrumento
costoso
y
de
precisin, con muchas partes
delicadas, por lo tanto, debemos
darle le mejor cuidado posible.

2. Si su microscopio presenta
algn defecto, consulte con su
Profesor o Tcnico de Laboratorio.
No trate de arreglarlo Usted.

9.3 Desenchufar el microscopio y

colocarle la funda protectora.

3. Las lentes del microscopio

cuestan casi tanto como todas las
dems partes juntas. Mantenga las
lentes limpias. No toque las lentes
con los dedos, debido a que el
sudor las daa. Nunca limpie las
lentes con otra cosa que no sea
papel especial para lentes.

Con las siguientes prcticas se

ejercitar
inicialmente
al
estudiante en el uso y manejo del
microscopio.

4. No permita que lquidos,

especialmente cidos o alcoholes,
se pongan en contacto con su
microscopio.
5. Use siempre cobre-objetos
cuando observe en agua u otros
lquidos.
6. Localice siempre el objeto con
el objetivo de menor aumento.
7. Los sedimentos de grasa, el
aceite de inmersin y los residuos
de
estos
productos
deben
eliminarse inmediatamente con un
poco de disolvente como ter o
xilol. Nunca debe emplearse
alcohol, debido a que disuelve el
cemento utilizado en la fabricacin
de los lentes. La limpieza final es
ms efectiva usando un poco de
agua destilada.
8. Cuando no se est usando el
microscopio, debe mantenerse
siempre cubierto con una funda.
9. Al finalizar sus actividades de
laboratorio, tenga en cuenta lo
siguiente:
9.1 Antes de apagar la fuente de
luz, llevar el dispositivo que regula
la intensidad luminosa a cero.
9.2 Dejar el microscopio con el
objetivo de menor aumento en la
posicin de enfoque y la platina en
su mxima posicin superior.

2.0 EJERCICIO DE APLICACIN:

1. Fibra de lana o algodn:

Coloca varias fibras de lana o
algodn de diferentes colores
sobre un portaobjetos, coloque el
cubre-objetos, enfoque con menor
y mayor aumento. Esquematice
sus observaciones.
2. Granos de polen: Coloque los
granos de polen del estigma de
una flor en un porta-objetos, luego
con ayuda de un gotero ponga una
gota de agua, ubique el cubreobjetos y observe con menor y
mayor
aumento.
Haga
un
esquema de lo observado.
3. Agua de charca: Con ayuda
de una pipeta Pasteur, tomar una
o dos gotas del agua de charca y
colocarla en la porta-objeto, luego
ubique el cubre-objeto y observe
con menor y mayor aumento.
Esquematice lo observado.
4. Insecto Tome la parte del
insecto que desee observar (pata,
cabeza, torso, etc.) con ayuda de
la pinza de diseccin, colquela en
la porta-objeto y se le adiciona una
o dos gotas de Blsamo de
Canad, ubique encima el cubreobjeto y observe con menor y
mayor aumento. Realice esquemas
de lo observado.
3.0 CUESTIONARIO:
1. Coloque los nombres a las
diferentes partes del microscopio
numeradas en la figura No. 1.6 e
investigue las funciones de cada
una de ellas.

2.
Qu
otros
tipos
de
microscopios se utilizan en la
investigacin biolgica?
3. Qu son objetivos secos?
4.
Qu
inmersin?

son

objetivos

de

1.3 PLATINA Y CARRO

5. Para qu se utiliza el aceite de

cedro cuando usamos el objetivo
de inmersin?
Cuando se utiliza un microscopio
de espejo:
6. Qu importancia tiene utilizar
la parte cncava del espejo?
7. Qu importancia tiene utilizar
la parte plana del espejo?

1.4 DIAFRAGMA
1.5 CONDENSADOR
1.6. TORNILLOS

8.
Investigue
sobre
en
funcionamiento de los diferentes
microscopios
electrnicos
y
establezca diferencias entre ellos.
9. Describa las principales tcnicas
de
preparacin
de
muestras
empleadas en microscopa ptica.

1.7. BRAZO

10.
Qu
son
los
colores
complementarios y que utilidad
tendran en microscopa ptica?
1.

LAS

PARTES

DEL

1.8 LA IMAGEN
2. FILTROS
MICROSCOPIO
1.1 OCULARES

2.1 FILTROS POLARIZADORES

1.2 OBJETIVOS Y REVOLVER

2.2

FILTROS

MONOCROMATICOS

A) Cabeza; B) Trax y C) Abdomen.

2.3 UBICACIN DE LOS FILTROS

2.4
COMPLEMENTARIOS

COLORES

3. TINCION DE MUESTRAS

4. ESTRUCTURA INTERNA DE
UN INSECTO

5. MICROORGANISMOS (AGUA
DE
CHARCA)