Estrs de la replicacin y el cncer : Se necesitan dos para el tango

Resumen
Problemas que surgen durante la replicacin del ADN requieren la activacin de la va
ATR-CHK1 para asegurar la estabilizacin y reparacin de las horquillas, y para prevenir
la entrada en mitosis con genomas no replicados. Considerando que la va es esencial
en el nivel celular, lo que limita su actividad es particularmente perjudicial para
algunas clulas cancerosas. En este artculo revisamos los vnculos entre el estrs
replicacin (RS) y el cncer, que proporcionan una Justificacin para el uso de los
inhibidores de ATR y Chk1 en la quimioterapia. En primer lugar, se describe la forma en
la activacin
de inducida por oncogenes RS promueve reordenamientos del genoma y la
inestabilidad cromosmica, ambos de los cuales potencialmente podra alimentar la
carcinognesis. A continuacin, se revisan las diversas vas que contribuyen a la
supresin de RS, y cmo las mutaciones en estos componentes conducen a un
aumento de la incidencia de cncer y / o envejecimiento acelerado. Por ltimo, se
resume la evidencia muestra que los tumores con altos niveles de RS son dependtes de
un dominio del RS-respuesta, y por lo tanto vulnerables a los inhibidores de ATR o
Chk1.
Introduccin
La fiel transmisin de la informacin gentica es desafiada en cada divisin celular
debido al dao del ADN causado por tanto fuentes endgenas y las fuentes exgenas
que pueden obstaculizar la reproduccin correcta
del ADN . La presencia de las modificaciones del ADN , estructuras difcil de replicar o
el agotamiento en la piscina de nucletidos , entre otros, todos como resultado el
estancamiento de las horquillas de replicacin y acumulacin de ADN de una sola de
hebra ( ssDNA ) que est recubierto rpidamente por unin al ADNmc
protenas como la RPA . La presencia de RPA obligado a ssDNA prximo a una unin
ssDNA - dsDNA conduce a la activacin de la ATR quinasa, que posteriormente fosforila
la quinasa Chk1 el llamado respuesta del estrs replicacin ( RS ) . La actividad de esta
va es necesaria para estabilizar las horquillas estancadas, y para activar los puntos de
control que limitan la entrada en mitosis en presencia de ADN no replicado.
Tanto ATR y Chk1 son esenciales para el desarrollo de los mamferos. En su ausencia,
las horquillas estancadas persisten y los orgenes de una copia de seguridad adicional
son despedidos, que conduce a un agotamiento de los focos de dNTP y una una mayor
acumulacin de horquillas no progresivas. Cuando la cantidad de ssDNA excede la
piscina de RPA disponible, y por mecanismos an no completamente entendidas,
horquillas colapsan que conduciendo a la generacin de la ruptura del
ADN de doble filamento ( OSD ). La falta de puesto de control
la activacin de estas clulas les permite progresar a la mitosis con
cromosomas no replicados que conducen a la muerte por catstrofe mittica . Ya sea
que el colapso de las horquillas que ya se produce en la fase S o es mediada por la
estructura especfica endonucleasas que se activan ms adelante en mitosis
permanece para ser completamente resuelto. Mientras que la deficiencia de ATR no es
viable , una mutacin sinnima que compromete ATR mRNA de empalme conduce a
una severa reduccin de los niveles de ATR y un sndrome hereditario humano
conocido como Seckel , asociado al enanismo y la microcefalia.
Un modelo humanizado de ratn de la ATR- Seckel recapitula
los sntomas de los pacientes humanos , y revelaron que ATR
hypomorphism limita la vida til de los mamferos debido a una generalizada

acumulacin de RS durante la embriognesis . En contraste con otros sndromes de

inestabilidad genmica que muestran predisposicin al cncer , los ratones ATR- Seckel
no desarrollan tumores espontneos . De hecho, los niveles reducidos de ATR
prevenienen la aparicin de ciertos tumores , tales como linfomas de clulas B
inducidas -Myc o MLL- ENL leucemias mieloides agudas accionadas. Creemos que el
aumento de la sensibilidad de las clulas cancerosas hacia la actividad limitada de ATR
est vinculada a los niveles aumentados de RS que estn asociados con la expresin
de oncogenes , que hace que estas clulas altamente dependientes de un dominio del
RS- puesto de control . Cmo RS surge y se trata , su impacto en la inestabilidad
genmica durante la carcinognesis , y la posibilidad de explotarla para el tratamiento
del cncer
son el foco de la presente revisin.
Fuentes de la replicacin del estress durante la transformacin
La activacin de oncogenes altera la replicacin del ADN dando lugar a un aumento de
RS, rupturas en el ADN y la activacin de la respuesta al dao del ADN (DDR). Hay
varios mecanismos propuestos para la induccin de RS tras la activacin de oncogenes.
Dos de los mecanismos propuestos estn relacionados con
AN-uso excesivo-inapropiado insuficiente o de la replicacin de
orgenes. La sobreexpresin de ciclina E reduce el nmero de orgenes de replicacin
que tienen licencia durante G1. Como consecuencia, aumentos de RS en
La fase S debido a la escasez de los orgenes de respaldo para hacer frente a las
horquillas estancadas. Este efecto es similar a la observada en
Mutantes hipomorficos de los componentes de la helicasa MCM. La mutacin de
MCM4 o MCM2 reduce la actividad del complejo MCM, limitando la cantidad de orgenes
de copia de seguridad disponibles, lo que resulta en un aumento de RS, la inestabilidad
genmica y un fenotipo propensa al cncer. En contraste, la sobreexpresin de ciertos
oncogenes (Myc, Ras, etc.) tiene el efecto opuesto y aumenta el disparo de orgenes de
replicacin, que conduce a un agotamiento de la reserva celular de nucletidos
(dNTPs). El nivel reducido de dNTPs vuelve ms lenta la progresin de la
los tenedores y aumenta la probabilidad de tenedor estancamiento per se . De nota,
otros informes indican que el agotamiento de nucletidos durante la transformacin es
debido a la reduccin en la expresin de la subunidad pequea de la ribonucletido
reductasa ( RNR ), la enzima que cataliza el ltimo y el paso limitante de la velocidad
en la generacin de dNTPs. La enzima RNR Se compone de la protena RRM1 expresado
constitutivamente y el ciclo celular regulado RRM2 . La transformacin inducida Ras
de fibroblastos humanos disminuye la transcripcin del gen RRM2 antes de la salida del
ciclo celular . Sin embargo , estos resultados estn en desacuerdo con el hecho de que
RRM2 es una protena regulada por el ciclo celular con la expresin mxima durante la
fase S , y un objetivo de los factores de transcripcin E2F y Myc . Por otra parte, la
sobreexpresin de RNR , en lugar de su prdida, es encontrado frecuentemente en los
cnceres humanos.
Independientemente del mecanismo, la suplementacin con nuclesidos se ha
demostrado que limitar RS - oncogn inducidas in vitro, apoyando la idea de que una
disponibilidad limitada de nucletidos puede ser una fuente de oncogenes impulsada
por RS. Adems de cualquier efecto en la piscina de nucletidos, el mayor nmero de
orgenes activos genera ms colisiones de replicacin de transcripcin que conducen a
las horquillas de replicacin atascadas, expresin de comn sitios frgiles y la
inestabilidad del genoma . Cada vez hay ms pruebas que demuestran que la
formacin de hbridos ADN- ARN llamado R-bucles es fundamental para las colisiones
de replicacin de transcripcin. R-bucles son observados frecuentemente en genes
altamente transcritas con GC rica en promotores, vinculados a las estructuras del Gquadruplex y limitaciones de torsin durante la transcripcin.

La generacin de R-bucles es limitado por el complejo THO que se dirige a la ARN

naciente a la maquinaria de procesamiento del ARN y al poro nuclear. Adems, hay
varios factores que cooperan en la resolucin de R-bucles, incluyendo enzimas RNasa H
y RNA helicases como senataxina. La mutacin de cualquiera de estos factores
aumenta la inestabilidad del genoma secundaria a colisiones de replicacin de
transcripcin. Adems de las enzimas de la metabolizacin del ARN, oncogenes y
supresores de tumor puede tambin conocidos combustible inestabilidad genmica a
travs de la modulacin de la R-bucles. Por ejemplo, la deficiencia de BRCA2 conduce a
un aumento en R-bucles; queda por ver si esto se debe a los roles conocidos de BRCA2
en la replicacin horquillas o si BRCA2 tambin tiene un papel activo en la disolucin de
los hbridos de ADN- ARN.
En lo que respecta a los oncogenes, Next Generation Sequencing ( NGS ) de los
cnceres ha revelado que una gran parte de ellos son factores de transcripcin o
reguladores de cromatina que anulan el control transcripcional en las clulas
transformadas. Teniendo en cuenta que los tiempos de replicacin son de tipo celular
especfico, es posible que el disparo de origen en cada uno clulas ha sido
seleccionada para minimizar las colisiones con la maquinaria transcripcional. Por lo
tanto, R- bucles podra ser una importante fuente de inestabilidad genmica en la
presencia de mutaciones que alteran el paisaje de la transcripcin.

Inestabilidad cromosmica como resultado de la replicacin del estrs.

Adems del impacto localizado de RS en las horquillas de replicacin, varias lneas de
evidencia apoyan ahora que RS tambin pueden conducir a una amplia gama de
aberraciones cromosmicas durante la transformacin maligna. En primer lugar, un
anlisis in silico de deleciones focales homocigotos y heterocigotos en muestras de
cncer y lneas celulares revelaron que la mayora de las deleciones heterocigticas en
clulas transformadas se encuentran en comn ya definidos sitios frgiles ( SFC ) o en
grandes genes. Deleciones similares pueden ser inducidas por el tratamiento de clulas
con afidicolina, un inhibidor de la polimerasa de ADN que induce estrs replicacin.
Estos datos indican que RS probable es la fuente de la mayora de las supresiones de
pasajeros durante la transformacin y sugiere un papel importante para la RS en la
evolucin del genoma del cncer. Adems de CFS, RS tambin induce la rotura de los
sitios recientemente identificados como sitios replicantes frgiles tempranos ( ERFS ) ,
que se encuentran en los puntos de interrupcin de algunas de las translocaciones ms
comunes observadas en B- linfoma. Digno de mencin, y en contraste con CFS, estos
sitios estn asociados con la cromatina " abierta " y presentan altos niveles de
transcripcin, lo que sugiere que las RS se planteen a ERFS podran estar vinculados a
la R-bucles.
En segundo lugar, RS tambin podran conducir a la inestabilidad cromosmica ( CIN )
a travs de un aumento de defectos en la segregacin cromosmica. Consistentemente
, el anlisis de cinth frente a las clulas de adenocarcinoma de colon CIN revel la
presencia de RS slo en las clulas cinth , junto con defectos de la segregacin
cromosmica correspondiente . Este estudio identific una serie de genes comnmente
eliminados en lneas celulares cinth .La reduccin de cualquiera de estos genes en
clulas CIN resultados en RS y alteraciones en los cromosomas similares a los
observados en las clulas cinth debido a la segregacin aberrante durante la mitosis.
Adems demostrando el papel causal de RS en la generacin de CIN, la adicin de
nuclesidos limita los defectos de segregacin que surgen debido a la supresin de
genes supresores de CIN. A nivel molecular, el vnculo entre la RS y CIN podra estar

ntimamente relacionada con la observacin de que la RS puede promover la formacin

de puentes anafase ( ver ms abajo) .
Por ltimo, otro de los mecanismos por los cuales RS podran estar involucrados en la
generacin de copia alteraciones numricas tambin se ha descrito recientemente.
Este trabajo revel que la inducida ruptura replicacin (BIR) es esencial para las clulas
para hacer frente a RS inducidos por la sobreexpresin de ciclinaE. BIR es un sistema
especializado de la recombinacin homloga que se puede utilizar cuando la homologa
se limita a un lado de la ruptura, que es el caso en un tenedor de replicacin
colapsado. El uso de BIR puede generar amplificaciones con micro homologa en las
uniones, lo que se asemeja a muchos de los
copiar variaciones en el nmero que se encuentran en las clulas cancerosas. Para la
sntesis de DNA, BIR emplea la maquinaria bsica de replicacin de ADN, pero adems,
depende especficamente de las subunidades accesorias ADN polimerasa POLD3 y
POLD4. La reduccin en los niveles de cualquiera de estas protenas en las clulas que
sobreexpresan ciclina E reduce la velocidad de la horquilla, aumenta colapso de la
horquilla, bloquea la generacin de pequeos amplificaciones y en ltima instancia,
limita la proliferacin de estas clulas. Hasta qu punto POLD3 o POLD4 no son
esenciales en el contexto de clulas primarias exige ms estudio. Sin embargo, este
trabajo ha abierto la posibilidad atractiva de la focalizacin BIR en el cncer.
RS como combustible de la tumorogenesis
Como se mencion anteriormente, RS ha surgido como una fuente importante de las
deleciones, translocaciones, amplificaciones y aneuploidas que son abundantes en el
cncer. Los datos recogidos en los ltimos aos muestra que los problemas generados
durante la replicacin , especialmente en los sitios frgiles , se pueden llevar a la
mitosis y dan lugar a puentes anafase . Despus de la induccin de RS , el nmero de
la anafase puentes aumenta. Si no se resuelve , estos puentes pueden conducir a
aberraciones cromosmicas y formacin de microncleos que se encuentran a menudo
en el cncer (Fig. 1 ) . En este contexto, han surgido varias vas para limitar la
inestabilidad genmica replicacin transmitidas , las mutaciones en los que a menudo
derivan en una mayor incidencia de tumores. Anemia de Fanconi ( FA ) es una
propensos al cncer diseas hereditarios que es causada por mutaciones en las
protenas que reparan entrecruzamientos entre cadenas de ADN ( ICL ) . Cuando una
horquilla de replicacin se encuentra con un entrecruzamiento , la
va FA se activa y el complejo FANCD2 - FANCI se ubiquitina. Este recluta la SLX4
andamio de protenas , que a su vez trae nucleasas especficas varios estructura a la
horquilla para liberar a los filamentos unidos por la escisin y permitir la posterior
reparacin a travs recombinacin homloga. Se han propuesto diferentes mecanismos
para explicar la predisposicin al cncer observado sobre la mutacin de protenas FA.
Por un lado, la ausencia de FA puede favorecer la reparacin del ADN a travs de
recombinacin no homloga, un mecanismo errorprone. Por otro lado, cuando las
actividades FA faltan ICL o ADN conjunta molculas acumular, que podran ser otra
fuente de inestabilidad genmica que impulsa la carcinognesis. Esta ltima idea es
apoyada por el fenotipo propensos a cncer observada en SLX4 o MUS81 ratones
deficientes [44,46]. Adems de su papel en el tratamiento de ICL, la evidencia reciente
ha demostrado que la va de la FA tambin podra estar implicado en la salvaguarda de
la integridad de las horquillas de replicacin. Por ejemplo, el anlisis de la composicin
de la replisoma despus del tratamiento con hidroxiurea revelado la contratacin de
FANCD2 a travs de la interaccin con fosforilada MCM2, donde sera frenar la
replicacin para permitir la estabilizacin de la horquilla. FANCD2 tambin ha estado
involucrado en la proteccin de las horquillas invertidas en cooperacin con BRCA2 y
Rad51. Obstculos tales como voluminoso aductos pueden requerir la regresin del

tenedor para dar acceso a la maquinaria de reparacin adecuada. Esto genera una
estructura del pie de pollo que est protegido por filamentos Rad51, y se estabiliza por
BRCA1 / 2 y FANCD2. En la ausencia de estas protenas una actividad nucleasa que
implica Mre11 degrada el tenedor retrocedido que conduce a la generacin de
extremos rotos y la inestabilidad genmica. Finalmente, FA protenas tambin se
localizan en los puentes anafase, donde cooperar con el ADN helicasa BLM en la
resolucin de estos estructuras. Todo lo anterior indican un papel clave para la va de
FA en la supresin de la replicacin de inestabilidad genmica RS.
Adems de BRCA1 / 2 y las protenas FA, la reparacin de las horquillas estancadas
exigen una serie de actividades adicionales, algunos de los cuales tambin estn
vinculados a enfermedades humanas. Una de esas actividades es el de helicasas de
ADN que reconocen y estructuras txicos procesos especficos generados durante la
replicacin. La familia RecQ de helicasas se ha visto especialmente vinculado a RS y
enfermedad. Los diferentes miembros de la familia muestran mltiples funciones en la
replicacin durante la iniciacin, elongacin, retraso de procesamiento de cadena y
reparacin tenedor. BLM y WRN median la disolucin de las estructuras complejas tales
como G-quadruplexes para facilitar la replicacin y evitar tenedor estancamiento
durante la fase S. De hecho, la ausencia de estas protenas aumenta la expresin de
sitios frgiles comunes asociados con la presencia de estas estructuras. Adems de
prevenir estancamiento de la horquilla, BLM, WRN, RECQL1 y RECQL4 son importantes
en la reparacin y el reinicio de las horquillas estancadas. En primer lugar, que median
los pasos de recombinacin requeridos para saltar lesiones voluminosas que sern
procesados posteriormente por los mecanismos de reparacin especficos.
Adems, trabajan en la regresin tenedor y la restauracin de las estructuras del pie de
pollo para horquillas normales que pueden ser generados por lesiones tales como ICL.
De hecho, la ausencia de estas protenas aumenta la inestabilidad del genoma tal
como se refleja por la expresin sitios frgiles de comunes, junto con el aumento de
cromtidas hermanas los intercambios y la anafase puentes. Los defectos en BLM, WRN
y RECQL4 causan Bloom, Werner y Rothmund-Thomson sndromes, respectivamente,
que estn asociados con el cncer y acelerado fenotipos de envejecimiento. En
contraste con las funciones compartidas de BLM, WRN y RECQL4, RECQL5 se asocia
especficamente con la RNA polimerasa II. Sin embargo, similar a los otros miembros de
la familia, la delecin de RECQL5 tambin resulta en un fenotipo propenso al cncer. Un
trabajo reciente ha demostrado que RECQL5 ralentiza la ARN polimerasa II
alargamiento y aumenta la robustez de la transcripcin. El agotamiento de RECQL5
aumenta pausa polimerasa y conduce a la inestabilidad genmica con ganancias y
prdidas en sitios frgiles comunes y genes largos, apoyando, adems, que se estanc
horquillas, independientemente de la causa, puede derivar en ltima instancia en las
mutaciones pro-tumorales.
Estos datos sugieren que RECQL5 puede limitar la generacin de bucles-R, pero anlisis
posteriores deberan abordar este punto. Adems de la familia RecQ , helicasas SNF2
tambin funciones presentes en la respuesta RS . En primer lugar, la helicasa PICH
tiene un papel en el procesamiento de los puentes de la anafase. Aunque PICH podra
no estar directamente implicada en la disolucin del puente , se requiere para
estabilizar el ADN y reclutar BLM para permitir su reparacin. En segundo lugar, la
helicasa SMARCAL1 es reclutado para bifurca en punto muerto , interacta con WRN y
el EPR , y es esencial para el reinicio de las horquillas despus de estrs. Los defectos
en SMARCAL1 son la causa de la displasia immunoosseous Schimke ( SIOD) que se
caracteriza por retraso del crecimiento, anomalas esquelticas y severa
inmunodeficiencia . Considerando que se ha propuesto que los pacientes que sufren de
SIOD han aumentado la susceptibilidad al cncer, la severidad del fenotipo opone a

que un anlisis ms profundo, ya que la mayora de los pacientes sucumben a

infecciones a una edad muy temprana.
RS es una fuente directa de molculas de ADN conjunta ( JM ) , donde las cromtidas
hermanas o incluso diferentes cromosomas permanecen vinculados por el ADN . JM se
puede generar en las horquillas de replicacin en punto muerto a travs de cromtidas
hermanas de vinculacin al ADN no replicadas, o por la reparacin de recombinacin
de las horquillas que generan estructuras de unin de Holliday y promover an ms
puentes entre hermanas. La persistencia de la JM en mitosis puede dar cuenta de los
problemas de segregacin derivados de la acumulacin de RS . La accin de helicasas
de ADN tales como BLM es particularmente relevante para la disolucin de JM travs de
una va que no implica la generacin de roturas cromosmicas.
En ausencia de disolucin BLM-dependiente, se activa una va genotxico de copia de
seguridad (resolucin) que implica la escisin de la JM por endonucleasas de estructura
especfica y la reparacin de recombinacin. En contraste con la accin de helicasas,
resolucin por las nucleasas genera un fuerte incremento en el nmero de
aberraciones cromosmicas observado en la mitosis, tales como intercambios de
cromtidas hermanas. SLX1-SLX4, MUS81-EME1 y GEN1 son las estructuras nucleasas
especificas principales que participan en el procesamiento de replicacin en punto
muerto horquillas travs de la va resolucin. Su actividad es restringido a los G2 / M
fases del ciclo celular donde se encuentran en carga de la resolucin de las uniones
Holliday persistentes que no se han disuelto por el sistema de helicasa (Fig. 1). La
resolucin por endonucleasas implica la generacin de doble filamento se rompe y
favorece su reparacin a travs de recombinacin no homloga, una va propenso a
errores que pueden aumentar la inestabilidad del genoma. Curiosamente, un informe
reciente indica que la inactivacin de estas endonucleasas tambin reduce la
replicacin velocidad la horquilla, destacando su mecanismo importante como un
sistema de reparacin de respaldo. Adems de sus funciones mitticas, MUS81 - EME2
ha sido descrito como una nucleasa especfica nueva fase S con un papel en el reinicio
de la horquilla despus de dao, lo que indica que las helicasas y nucleasas pueden
trabajar juntos para minimizar los efectos perjudiciales de horquillas daadas durante
la replicacin ADN. Independientemente de su regulacin temporal, la JMresolution y / o
actividades de reparacin de helicasas son necesarios para prevenir la carcinognesis,
ms el apoyo a la funcin de la RS como motor de la tumorignesis .
Por ltimo, tambin podemos hablar de los papeles emergentes de poli (ADP)
ribosilacin (PAR) mediada por protenas PARP, que estn recibiendo considerable
atencin como objetivos para la terapia del cncer. PARP1 es rpidamente reclutado a
los sitios de dao para iniciar PARylation, un fenmeno que tambin se observa en las
horquillas de replicacin en punto muerto. El papel principal propuesto para PARylation
en la estabilidad del genoma est vinculada a la contratacin de protenas especficas
a travs de dominios de unin PAR tal como el dominio macro. En las horquillas de
replicacin, el establecimiento de un andamio PAR es necesario para la reversin de
horquillas generadas por la inhibicin Topi. Adems, PAR protege horquillas invertidas
de MRE11 degradacin mediada por cualquiera de impedir fsicamente el acceso al
tenedor o cooperando en la contratacin del BRCA2 y RAD51. Adems, PARylation
tambin bloquea el acceso de la helicasa RECQL1 y evita el reinicio del tenedor antes
de que haya sido reparado. Por ltimo, PARylation en las horquillas de las estancadas
tambin recluta transitoriamente la SAFB1 protenas andamio. Este reclutamiento es
esencial para amplificar la seal de ATR y provocar una fuerte fosforilacin de H2AX su
principal sustrato. Es importante destacar que, SAFB1 es recurrentemente la prdida
en los tumores humanos, lo que subraya el papel de este va en el cncer humano.

RS como freno de la tumorigenesis

Todas las observaciones mencionadas anteriormente sugieren que los niveles leves de
RS permiten la acumulacin de inestabilidad del genoma que puede conducir
tumorignesis. Sin embargo, si ATR y Chk1, las principales quinasas de la RS-respuesta,
operar como supresores tumorales en cncer humano sigue siendo poco clara. En
primer lugar, la supresin heterocigotos de ATR o Chk1 en ratones aumenta slo
ligeramente la incidencia de tumores. En segundo lugar, el amplio anlisis de los
genomas del cncer no ha logrado encontrar una significativa incidencia de mutaciones
en ATR o Chk1 en tumores humanos (http: //
cancergenome.broadinstitute.org), y no hay ejemplos de homozy mutaciones Gous
nunca se han encontrado. Por el contrario, ATR y Expresin Chk1 es upregulated
frecuencia en el cncer, en parte porque son del ciclo celular genes regulados y
tumores tienen altos ndices proliferativos. Por otra parte, la expresin de Chk1 est
bajo el control de oncogenes tales como Myc o E2F, lo que podra ser responsable de
sus niveles mejorados en ciertos tumores. Por qu los tumores seleccionar para
mayores niveles de ATR y Chk1? Creemos que los niveles excesivos RS son
perjudiciales incluso en el contexto de una clula transformada. Las clulas no pueden
completar la mitosis con regiones no replicadas de su genoma, y sern sometidos a la
catstrofe mittica o poliploidizacin si RS persiste en la mitosis (Fig. 1)
En este contexto, los tumores necesitan para mantener un dominio del RS- respuesta
para hacer frente a la
Altos niveles de RS que son inducidos por los oncogenes y asegurar su supervivencia.
En apoyo de estas ideas, un leve aumento de los niveles de Chk1 facilita la
transformacin con Ras y E1A mediante la reduccin de la cantidad de RS- inducidos
por los oncogenes y limitando as la toxicidad del proceso de transformacin. En este
contexto, creemos que los oncogenes que promueven la replicacin del ADN, tales
como E2F
o Myc , se upregulate factores que son necesarios para hacer frente a las mayores
tasas de replicacin ( RS- tampones ) como parte de su respuesta transcripcional . Por
ejemplo, y adems del control de Chk1 por Myc y E2F , Myc tambin promueve la
expresin de RRM2 , que sera tampn RS mediante el aumento de los focos de dNTP .
En esta lnea, recientemente hemos demostrado que la expresin de Chk1 es tambin
bajo el control del oncogn c-fos , lo que podra facilitar la Transformacin limitando
fos-inducida por RS. En conjunto, estos resultados respaldan que, en lugar de perder
ATR y Chk1 , tumores que teniendo altos niveles de RS se vuelven adictas a una hbil
respuesta ATR- Chk1 , que necesitan para limitar las consecuencias perjudiciales de la
RS y constituye la base para el uso de ATR y Chk1 inhibidores en la quimioterapia del
cncer .
Localizando RS en el tratamiento de cncer
El fundamento para la orientacin ATR en el cncer se deriva a partir del estudio de
modelos de ratones con actividad reducida de ATR que mostr un sinttico
efecto letal entre delecin ATR o hipomorfismo y la prdida de p53 lo que sugiere que
la inhibicin de la ATR podra ser particularmente til para el tratamiento de tumores
deficientes en p53. El anlisis de los tejidos deficientes en ATR y p53 revel que la
ausencia de p53 promueve an ms la acumulacin de RS en ATR las clulas mutantes,
probablemente debido a una entrada de S-fase ms promiscuos
impulsado por la deficiencia de p53. Estos resultados sugieren que bajos niveles de ATR
tambin podran ser particularmente txicos en el contexto de otra mutaciones que
promueven la replicacin del ADN. Por consiguiente, los estudios posteriores mostraron
que los bajos niveles de ATR prevenirse la aparicin de Mycinduced Burkitt linfomas en
ratones, un tipo de tumor que presenta alto nivel de RS. Adems de Myc, tambin se
mostraron niveles reducidos de ATR ser particularmente limitante para leucemias

iniciados por una translocacin MLL-ENL o para H-Ras fibrosarcomas-p53 nula

impulsadas. Todo lo anterior indica que la orientacin ATR podra ser particularmente
txico para ciertos tumores, particularmente aquellos con altos niveles de RS, y
provoc el desarrollo de inhibidores de ATR. Una limitacin de esta estrategia es la falta
de biomarcadores adecuados de RS que trabajan en muestras clnicamente relevantes.
Hasta ahora, la histona H2AX pan-nuclear fosforilacion se ha utilizado como un
marcador sustituto, dado que se restringe a clulas en fase S y se detecta en las
clulas que muestran focos RPA. Una alternativa interesante es la deteccin de cuerpos
53BP1, grandes focos 53BP1 nuclear que se acumulan preferentemente en sitios
frgiles en las clulas G1 despus de la exposicin a RS. Sin embargo, ambas
estrategias tienen sus limitaciones y mejor
Se necesitan biomarcadores para una identificacin precisa de RS.
Los inhibidores selectivos de ATR slo se empezaron a surgir en 2011 y se derivaron
mediante estrategias independientes. En nuestro caso, hemos empleado una
proyeccin basada en un modelo celular de "a voluntad" activacin ATR tras la adicin
de un derivado inerte de tamoxifeno. De acuerdo con los datos anteriores de ratn,
Inhibidores de ATR eran particularmente txico para las clulas que expresan la fase S
promoviendo oncogenes como la ciclina E, especialmente en el contexto de la
deficiencia de p53. Adems, la inhibicin ATR era txico para las clulas deficientes en
ATM, un efecto letal sinttica que ya haba sido descrito con modelos de ratn. La
disponibilidad de estos compuestos ha permitido el descubrimiento de nuevas
interacciones letales sintticos que confieren sensibilidad a los inhibidores de ATR y
que hasta ahora incluyen mutaciones en XRCC1, ERCC1-XPF o BRCA1. Estos estudios
ayudarn a dirigir el uso de inhibidores de ATR hacia mutaciones especficas. Se espera
que la mayora de mutaciones que sensibilizan a los inhibidores de ATR estarn
relacionados con el metabolismo de las horquillas de replicacin y estos estudios
ayudar en el diseo de tratamientos combinados de medicamentos que se
beneficiaran de la utilizacin de estos compuestos. De hecho, nuestros primeros
trabajos revelaron que ATR
Inhibidores de mejorar la toxicidad de los inhibidores de Chk1 [81]. Dado que
medicamentos nunca lograr una inhibicin completa de sus objetivos, creemos que la
adicin de inhibidores de ATR disminuye an ms la actividad de Chk1 en clulas
tratadas con inhibidor, lo que resulta en una mayor acumulacin de estrs replicativo
que con cualquiera de los tratamientos individuales.
Mientras que algunos estudios reportan un efecto radiosensibilizacin de stos las
drogas, los datos genticos no son compatibles con un papel importante de esta va en
la sensibilizacin contra la radiacin ionizante y los posibles efectos de los inhibidores
offtarget en otras vas de reparacin del ADN podran ser responsables de estos
efectos. En contraste, ambos inhibidores de ATR y Chk1 sinergia fuertemente con
frmacos que promueven el estancamiento de la horquilla de replicacin tales como
gemcitabina, etopsido o cisplatino. Aunque la mayora de los datos con los inhibidores
de ATR hasta ahora se refiere a estudios in vitro debido a la limitada disponibilidad de
inhibidores de ATR que pueden funcionar in vivo, algunas de las observaciones de ATR
mutante modelos de ratones podan ser validados con inhibidores de Chk1. En primer
lugar, Chk1inhibidores mostraron eficacia en el tratamiento de Myc-linfoma
xenoinjertos. Adems, los altos niveles de Chk1 son inducidos por N-Myc en un modelo
de xenoinjerto de neuroblastoma, haciendo que el
tumores altamente sensibles al tratamiento con inhibidores de Chk1. Resultados
prometedores con inhibidores de ATR en vivo son tambin empezado a surgir. Por
ejemplo, estos compuestos limitan el crecimiento de modelos de xenoinjerto de cncer
de colon con altos niveles basales de RS.

Cabe sealar que un trabajo reciente ha identificado que ATR es tambin esencial para
la activacin de un punto de control que responde a la tensin mecnica y osmtica, y
que coordina condensacin de la cromatina con el desglose de la nuclear sobre. En
qu medida el efecto de los inhibidores de ATR en clulas de cncer tambin se ve
influida por esta novela puesto de control permanece desconocido. En cualquier caso,
con la primera serie de inhibidores de ATR ahora entrar en los primeros ensayos
clnicos, los prximos aos deberan dar una imagen ms clara de la posibilidad de
utilizar RS -respuesta orientacin compuestos en el tratamiento del cncer (Fig. 1 ) .
Adems de los inhibidores de ATR o Chk1, una estrategia alternativa podra ser la de
orientar la disponibilidad de nucletidos que, como se mencion, en particular se
convierte en limitantes para las clulas que sufren de RS. Varios compuestos dirigidas a
la reductasa ribonucletide se han utilizado para el tratamiento del cncer o estn
actualmente en ensayos clnicos. La hidroxiurea es el ms conocido de los inhibidores
RRM2 aunque su eficacia se reduce en la clnica debido a sus pobres propiedades
farmacocinticas. La gemcitabina es un anlogo de nuclesido que afecta a la
replicacin del ADN e inhibe RRM1, y que es ampliamente utilizado en la clnica. La
contribucin del agotamiento de la piscina dNTP a la accin de gemcitabina no est
clara, pero los informes recientes muestran que el empleo de inhibidores de CHK1
puede mejorar los efectos del tratamiento con gemcitabina. La interrupcin de la
interaccin de RRM1 con RRM2 tambin agota la piscina dNTP, inhibir el crecimiento de
clulas de cncer in vitro e in vivo, y la superacin de la resistencia a la gemcitabina.
Sin embargo, es importante tener en cuenta que las clulas no slo sintetizan
nucletidos, pero tambin pueden compactar ellos desde el medio ambiente. De
hecho, un estudio reciente revel que la eficiencia de estrategias dirigidas a la
biosntesis de nucletidos quimioteraputicos se ha mejorado en gran medida por la
orientacin simultneamente la va salvaje de nucletidos. La necesidad de las clulas
cancerosas para mantener una piscina saludable de dNTPs se pone de relieve por el
reciente descubrimiento de inhibidores de la enzima MTH1, responsables de
desinfeccin de nucletidos oxidados en las clulas. MTH1 inhibicin conduce a un
aumento en el dao del ADN, y es preferentemente txico para las clulas de cncer
debido a la aumento de los niveles de estrs oxidativo. Curiosamente, los estudios en
la levadura sugieren que ATR podra suprimir RS modulando
nucletidos vas metablicas, que une an ms la conexin entre las estrategias RSfocalizacin. En 1948, un joven Sidney Farber mostr que antifolatos podran promover
remisiones en nios con leucemia, proporcionando uno de los primeros ejemplos de la
quimioterapia del cncer . Ms de medio siglo de investigacin despus parece que la
orientacin metabolismo de nucletidos an podra proporcionar una de las rutas ms
beneficiosos para la sensibilizacin de las clulas cancerosas , y los inhibidores de ATR
ahora traen una nueva ruta prometedora para explotar an ms esta avenida.