Tema 9 Proteinas PDF

CFGS LABORATORIO DE DIAGNSTICO CLINICO. TECNICAS DE ANALISIS BIOQUIMICO.
TEMA 9. PROTEINAS EN EL LABORATORIO.
TEMA 9. AMINOCIDOS Y PROTENAS EN EL LABORATORIO CLNICO.
1.
GENERALIDADES.
1.1.
Concepto
Son las molculas orgnicas ms abundantes de las clulas (50% de su

peso seco) y estn en todas las partes de las mismas.
Estn formados por Carbono, Hidrgeno, Oxgeno y Nitrgeno cada forma
de vida se define por las protenas que produce.
Las protenas de todos los seres vivos estn determinadas mayoritariamente
por su gentica, es decir, la informacin gentica determina en gran medida
qu protenas tiene una clula, un tejido y un organismo.
Son macromolculas constituidas por la polimerizacin de unas unidades
estructurales bsicas, denominadas aminocidos, que se unen entre s por
medio de unos enlaces especiales denominados enlaces peptdicos.
Los aminocidos son compuestos qumicos caracterizados por poseer en su
estructura un grupo funcional amino (-NH2), y otro carboxilo (cidos) (-COOH),
unidos a una cadena lateral (-R) caracterstica de cada aminocido.
Los radicales confieren al aminocido unas caractersticas propias. Por ello,
estos radicales se utilizan como criterio de clasificacin de los aminocidos.
1.2.
Funciones
Desempean papeles cruciales en prcticamente todos los procesos

biolgicos, pudiendo destacar las siguientes funciones:
IES Ponce de Len - Utrera

Catlisis enzimtica: casi todas las reacciones qumicas en los sistemas

biolgicos, estn catalizadas por macromolculas especficas denominadas
enzimas que incrementan la velocidad d las reacciones en al menos un
milln de veces y todos los enzimas conocidos son protenas.
Transporte y almacenamiento: muchos iones y molculas pequeas son
transportados por protenas especficas, por ej el O2 en la Hb o el Fe en la
transferrina.
Movimiento coordinado: las protenas son el componente principal del
msculo; la contraccin muscular se lleva a cabo por el movimiento
deslizante de 2 clases de filamentos proteicos.
Tambin la propulsin del espermatozoide por flagelos proteicos o los
movimientos de los cromosomas durante la mitosis.
Soporte mecnico: la enorme fuerza de tensin de la piel y el hueso, se
debe al colgeno, una protena fibrosa.
Proteccin inmune: los anticuerpos son protenas altamente especficas
que reconocen y se combinan con sustancias extraas jugando el papel
vital de distinguir lo propio de lo extrao.
Generacin y transmisin del impulso nervioso: la respuesta de las clulas
nerviosas a estmulos especficos depende de receptores proteicos en la
sinapsis (unin intercelular entre neuronas), en los que se ensamblan los
neurotransmisores (protenas), desencadenando la respuesta al estmulo
nervioso.
Control del crecimiento y diferenciacin: el control de la expresin de la
informacin gentica es imprescindible para el crecimiento y diferenciacin
de las clulas; este proceso est controlado por protenas.
Coordinacin de rganos y sistemas: por medio de las hormonas.


1.3.
Caractersticas:
De todos los aminocidos conocidos (ms de un centenar) nicamente 20 son

componentes naturales de las protenas (el resto son productos intermedios o
finales del metabolismo, no se asocian formando macromolculas).
Bsicamente se diferencian entre s por la naturaleza de la cadena lateral (R),
debida a ella cada aminocido tiene propiedades nicas y caractersticas.
De entre los 20 aminocidos naturales algunos de ellos no pueden ser
sintetizados en el organismo y por tanto deben ser incorporados en la dieta. A
estos aminocidos se les denomina esenciales.
Los aminocidos no esenciales pueden ser sintetizados mediante una reaccin
de transaminacin (transferencia reversible del grupo amino).
Su eliminacin renal es inapreciable pues aunque debido a su pequeo
tamao, filtran a travs del glomrulo, son reabsorbidos a nivel del tbulo
proximal.
Su catabolismo (mediante transaminacin o por desaminacin oxidativa)
tiene lugar en el hgado y en el msculo. El destino de la cadena
hidrocarbonada es la sntesis de glucosa o el ingreso en el ciclo de Krebs para
la obtencin de energa. El grupo amino, cuando no es utilizado para la
transaminacin es degradado hasta amoniaco que el hgado transforma en
urea y glutamina. Algunos aminocidos son utilizados en la sntesis de
productos de gran inters biolgicos (algunas hormonas y neurotransmisores).

1.4.
Propiedades:
Son compuestos anfteros ya que, en funcin del pH del medio, pueden

comportarse como cidos o como bases. El grupo amino de un aminocidos es
lo suficientemente bsico como para reaccionar con el grupo carboxilo, y esta
reaccin de neutralizacin forma parte de una sal interna o zwitterion (ion
doble es decir dipolar con carga 0). En disolucin acuosa, va a existir un
equilibrio entre el ion dipolar y la forma catinica y aninica del aminocido.
La posicin de equilibrio depende del pH de la disolucin y de la

naturaleza del aminocido. El pH al que un aminocido no se comporta ni como
cido ni como base se denomina punto isoelctrico. El pI es caracterstico de
cada aminocido. En soluciones muy cidas todos los aminocidos estn

presentes como cationes mientras en soluciones muy bsicas los aminocidos

se encuentran en forma aninica.
A pH 7.4 (fisiolgico) el COOH pierde con facilidad el ion H y se
transforma en COO y el NH2 gana con facilidad el ion H y se transforma en
NH3 +.
Con un pH idntico a su punto isoelctrico, los aminocidos se
encuentran en forma de iones dipolares y son elctricamente neutros; no hay
ningn pH en el que los 20 aminocidos sean neutros a la vez. Esta propiedad
es la que va a causar la precipitacin aninica o catinica de las protenas de
los lquidos biolgicos al tratarlos con sustancias como el cido triclorocetico,
cido fosfotungstico y cido pcrico (precipitantes aninicos), zinc, cadmio,
bario, etc (precipitantes catinicos).
Los pptidos son compuestos de dos o ms aa unidos por enlaces amida o
peptdico:
Este enlace se forma entre el grupo carboxilo de un aa y el grupo alfa amino

de otro, con la liberacin de una molcula de agua; los pptidos formados por
dos, tres aa, se llaman respectivamente dipptido, tripptidos, etc; los de
menos de 10 oligopptidos, y entre 10 y 100 aa se llaman polipptidos. La
mayor parte de los pptidos se hallan integrados en las protenas, pero existen
algunos libres en la naturaleza con funciones especializadas. Por ejemplo, las
hormonas peptidicas como la insulina, formada por dos pptidos de 21 aa y de
32 aa unidos por enlaces disulfuro; tambin la oxitocina que posee 9 aa, el
glucagn etc.
Se consideran protenas a los polipptidos con un nmero de aa igual o
superior a 100. Algunas estn formadas por una sola cadena polipeptdica y
otras por varias cadenas asociadas. Algunas pueden contener algn
fragmento no peptdico llamado grupo prosttico y entonces la protena se
llama conjugada; el grupo puede ser lpido (LDL), glcido (IgG), hierro
(ferritina), etc.
La alternancia entre los enlaces rgidos (enlaces peptdicos) y los enlaces
mviles (enlaces intraaminocido) hace que estas molculas adquieran una
estructura bastante compleja.

1.5.
Estructura:
Primaria: viene determinada por la secuencia de aa de la cadena

polipeptdica (es decir cuantos aa hay de cada clase y como estn
alineados; es una descripcin de todos sus enlaces). Es responsable de su
funcin biolgica y las posibles secuencias diferentes son prcticamente
infinitas. Cualquier cambio en la secuencia de los aa de una protena puede
producir modificaciones en su actividad biolgica.
Secundaria: hace referencia a la disposicin espacial de los distintos
fragmentos o zonas de la cadena peptdica: Disposicin al azar, en - hlice
y en hoja plegada. Los enlaces que estabilizan esta estructura son puentes
de H. Dan lugar a patrones estructurales repetitivos.
Terciaria: las estructuras anteriores pueden doblarse o plegarse sobre si
mismas dando lugar a la estructura terciaria. Las interacciones entre las
cadenas laterales de los aa son las responsables de la misma. Los pptidos
de acuerdo a esta estructura terciaria se clasifican en fibrosos o globulares.
Los enlaces que la estabilizan son fuerzas polares y electrostticas, puentes
de H, puentes disulfuro etc.
Cuaternaria: Cuando varias protenas se unen entre s, forman una
organizacin superior, denominada estructura cuaternaria. Cada protena
componente de la asociacin, conserva su estructura terciaria, (la mayora
de las protenas estn formadas por varias cadenas polipeptdicas, llamadas
subunidades, se unen entre s para formar la protena y recibe el nombre de
estructura cuaternaria).
La rotura de los enlaces que mantienen la estructura secundaria, terciaria y
cuaternaria (prdida de la conformacin estructural natural) (por cambios en el
pH o temperatura de la disolucin en que se encuentre) se denomina
desnaturalizacin o inactivacin de las protenas.

1.6.
Clasificacin:
Segn su composicin:
o Protenas simples: Al ser hidrolizadas solo originan aa, ejemplo la
albmina.
o Protenas conjugadas: Son las que por hidrlisis producen
aminocidos y un componente no peptdico (orgnico o inorgnico)
llamado grupo prosttico.
Segn la naturaleza qumica del grupo prosttico, las protenas se
dividen
en:
glucoproteinas,
fosfoprotenas,
lipoprotenas,
nucleoprotenas, cromoprotenas etc.
Segn su forma:
o Protenas fibrosas: formadas por cadenas polipeptdicas dispuestas
paralelamente a un eje por ejemplo el colgeno; no son activas y
realizan funciones estructurales.
o Protenas globulares: formadas por unas o ms hlices
enrolladas formando una esfera. Suelen ser solubles en agua. Son

activas y participan en la dinmica celular en la que desempean
funciones de todo tipo; son capaces de reconocer a otras
sustancias denominadas ligandos a las que pueden unirse; la
mayora de las enzimas hormonas y anticuerpos pertenecen a este
grupo.


Segn su funcin biolgica:

o Estructurales: constituyen partes de nuestro cuerpo.
o De transporte.
o Catalizadores biolgicos: enzimas
o Mensajeros qumicos: hormonas.
o Defensa inmunolgica: anticuerpos.
Por ltimo en funcin de su localizacin las protenas pueden

ser:
o Hsticas: son las protenas de los tejidos.
o Hemticas son las protenas de la sangre.
Aunque las protenas hsticas son de una importancia vital para el
organismo, las localizadas en la sangre por su gran accesibilidad, nos
proporcionan fcilmente gran cantidad de informacin y por lo tanto son
las ms importantes en el laboratorio de anlisis clnico.
1.7.
Digestin y absorcin de las protenas.
Las protenas de los alimentos son la fuente principal de aminocidos

para la sntesis endgena de protenas (tambin procede de las protenas
internas degradadas durante el proceso de recambio proteico).
La digestin de las protenas se inicia en el estmago donde el ClH
desnaturaliza las protenas (rompe los enlaces que constituyen las estructuras
secundaria, terciaria y cuaternaria) y la pepsina (enzima proteoltica secretada
como pepsingeno) rompe los enlaces peptdicos entre los aminocidos.
La digestin contina en el duodeno por la accin de diversas proteasas
pancreticas: tripsina, quimiotripsina, elastasa, carboxipeptidasa que conducen
a la formacin de oligopptidos y aminocidos libres.
El resultado de la digestin son pptidos (fundamentalmente di y
tripptidos) y aminocidos los cuales se absorben con facilidad en yeyuno. La
hidrlisis de los pptidos se completa en los enterocitos en cuya membrana
existen peptidasas.
Los aminocidos absorbidos pasan a la sangre y se incorporan al
conjunto de aminocidos del cuerpo.
1.8.
Metabolismo.
Una pequea parte de la energa oxidativa en los seres humanos,

proviene del catabolismo de los aa; al igual que para glcidos y cidos grasos,
los procesos de degradacin de aa convergen en rutas metablicas centrales.
La mayora de las protenas se eliminan en forma de urea; las de la masa
muscular (formadas por aminocidos del tipo de la glicina, arginina y
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metionina), se excretan como creatinina; por ltimo la excrecin de las purinas

se hacen en forma de cido rico.
Un paso clave en esta degradacin es separar el grupo amino del esqueleto

carbonado, siguiendo cada uno su ruta.
Grupo amino: puede llegar al hepatocito desde tres destinos:
1. De la dieta a travs de la circulacin portal llegan cada uno de los aa.
2. En forma de glutamina que proviene del exceso de amoniaco en otros
tejidos (por accin de la glutamina sintetasa) y que es la forma de
transporte no txico del amoniaco en sangre.
3. En el msculo, los grupos amino en exceso se transfieren al piruvato y
forman alanina (por accin de la alanina aminotransferasa), que se
transporta al hgado.
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Ya en el citosol del hepatocito suceden 2 procesos:

1. Transaminacin: es una reaccin en la que el grupo amino es transferido al
-cetoglutarato (por accin de aminotransferasas) formando glutamato.
2. Desaminacin oxidativa en la que el glutamato transportado a la
mitocondria, elimina el grupo amino para formar NH4+.
El NH4+ es muy txico para los animales y es depositado en la mitocondria de
los hepatocitos, donde es convertido en urea, mediante el ciclo de la urea, que
pasa a la sangre y de all a los riones donde se excreta con la orina.
Esqueleto carbonado: en todas las circunstancias, los a.a. una vez han perdido
sus grupos amino, forman los -cetocidos, esqueletos carbonados de los aa.
Las 20 rutas catablicas, convergen para formar solo 5 productos que
entran todos en el ciclo del cido ctrico; de ah, los esqueletos carbonados se
pueden desviar hacia la gluconeognesis, la cetognesis, o se pueden oxidar
completamente a CO2 y H2O.
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2. METODOS DE ESTUDIO DE LOS AMINOACIDOS.

El estudio de los aa en el laboratorio clnico se dirige fundamentalmente, al
diagnstico de aminoacidoapatas congnitas mediante programas de
deteccin precoz en los que se realiza su anlisis cualitativo y cuantitativo en
los fluidos corporales, que los contienen, as como para el diagnstico y
seguimiento de la evolucin de situaciones metablicas anormales.
En nuestro entorno la aminoacidopata ms frecuente es la fenilcetonuria, con
una incidencia aproximada de 1/12.000 nacimientos.
Las tcnicas ms utilizadas son electroforticas y/o cromatogrficas.
Tambin existen tcnicas fluorimtricas y colorimtricas especificas para el
anlisis de a.a. concretos, que se pueden aplicar tanto a los screening de la
poblacin como a la confirmacin de una aminoacidopata concreta.
Muestras:
Sangre: los aa sricos son relativamente constantes en el adulto normal.
Sufren modificaciones fisiolgicas con la edad y despus de la ingestin de
alimentos, por lo que, para su estudio en el laboratorio, es necesario mantener
a los pacientes en ayuno previo a la extraccin durante un mnimo de 12
horas.
Para el anlisis de aa en sangre se puede utilizar suero o plasma, ya que la
naturaleza del anticoagulante que se emplee no afecta las determinaciones.
En los programas de deteccin precoz de aminoacidopatas en los que se
realiza un screening de la poblacin, se puede emplear sangre secada en papel
de filtro, que es estable para su envo y manipulacin a temperatura ambiente.
Cuando se va a realizar el anlisis, se corta un disco de 6 mm de dimetro, se
introduce en un tubo de ensayo y se eluye con 0,1 ml de etanol: agua (3:2).
De aqu se toma la muestra a depositar para el anlisis.
Orina: la cuantificacin de aa en orina requiere la recogida de muestras de 24
h. Como la obtencin de este tipo de muestras en bebs resulta difcil y, en
muchos casos, errnea, se prefiere hacer una determinacin de creatinina (en
mg/dl) de una muestra al azar.
Diagnstico de las aminoacidopatas ms frecuentes:
Se pueden dividir en dos grandes grupos:
1. Primarias: en ellas no se conoce la causa y en el laboratorio puede cursar
con aumento en sangre y en orina ya que los aa tienen dintel renal.
2. Secundarias: generalmente a fallo renal o heptico.
Las ms importantes son la fenilcetonuria, la cistinuria y la homocistinuria.
FENILCETONURIA o enfermedad de Folling.
Se hereda de forma autosmica recesiva. Esta causada por un defecto en la
conversin de fenilalanina en tirosina por dficit de la enzima heptica
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fenilalanina hidroxilasa, lo que produce un aumento del nivel plasmtico de

fenilalanina y de ciertos cetocidos como el cido fenilpirvico.
Si no se diagnostica a tiempo provoca un retraso mental grave, epilepsia, etc.
Por tanto, su diagnstico precoz es fundamental dado que la restriccin
diettica de fenilalinina evita el retraso mental.
Diagnstico:
Anlisis de orina: prueba de cloruro frrico o reaccin de Gerhard.
Anlisis cualitativo. La orina conteniendo el cido fenilpirvico adquiere un
color azul oscuro-verde al contacto con el cloruro frrico.
Prueba de Guthrie (anlisis microbiolgico semicuantitivo): la muestra de
sangre se deposita sobre una placa de agar que contiene tienilalanina (ismero
de fenilalanina). A continuacin, se inocula Bacillus subtilis cuyo crecimiento
es inhibido por la tienilalanina. Sin embargo, si el disco de sangre contiene un
elevado contenido de fenilalanina, se promueve el crecimiento de las bacterias
alrededor del disco, ya que la fenilalanina evita la inhibicin de la -2tienilalanina. Si comparamos las zonas de crecimiento con discos de control
que contienen cantidades conocidas de fenilalanina, el anlisis resulta
semicuantitativo. Si la prueba de Guthrie indica un aumento del nivel de
fenilalanina en la sangre del nio, se realiza una prueba de confirmacin.
CISTINURIA.
Tiene una incidencia de 1 cada 7000 a 20000 individuos. Son sujetos que
excretan en orina mayores cantidades de cisteina, lisina, arginina, y ornitina.
Esta afeccin no es del metabolismo, sino que se cree se trata de un defecto
en el mecanismo de reabsorcin del tbulo renal (aminoaciduria renal).
La nica manifestacin de la enfermedad es la formacin de clculos renales de
cistina de color blanco amarillento. La deteccin de cristales de cistina en el
sedimento urinario nos hace sospechar la enfermedad.
La prueba cualitativa (colorimtrica) con cianuro/nitroprusiato (se tie de rojo
en contacto con la orina), confirma la presencia de los cristales en el
sedimento de orina.
HOMOCISTUNURIA.
Su incidencia es de 1 cada 200.000 recin nacidos. Es diagnosticada,
generalmente en la infancia tarda, por la aparicin de anormalidades fsicas
(defectos retinianos, dislocacin del cristalino, trombosis, etc.) acompaada o
no de retraso mental.
La homocisteina es un aa intermediario en el metabolismo de la metioninacisteina. La deficiencia de la cistationina sintetasa produce elevacin de los
niveles plasmticos y urinarios de homocisteina. La elevacin de la misma
provoca la conversin de la mayor parte de esta sustancia en metionina. Por
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tanto es posible detectar la enfermedad mediante la determinacin de los

niveles plasmticos de metionina.
Tcnicas ms utilizadas:
ELECTROFORESIS
CROMATOGRAFA DE INTERCAMBIO INICO:
El anlisis de los aa libres en fluidos biolgicos se realiza con
analizadores de aa.
La tcnica consiste en hacer pasar la mezcla de aa a pH 3,0 por una columna
rellena de resina de poliestireno sulfonatado (cambiador catinico). Los aa
catinicos desplazan los iones Na+ de la columna y quedan unidos a la resina.
Los aa bsicos quedan ms fuertemente unidos que los cidos.
Despus se pasan por la columna tampones de pH y fuerza inica creciente,
con lo que se neutraliza la carga positiva de los aa y se debilita su enlace con
la resina. Por ello, a medida que se lava la columna, los aa dicarboxlico se
desprenden de la resina, mantenindose todava unidos a ella los neutros y los
bsicos. Estos se separan posteriormente, de forma fraccionada.
Una vez que termina el proceso de elucin, se hace reaccionar con ninhidrina*
y se valora el color resultante en un fotmetro. La intensidad del color se
registra de forma automtica en una grfica.
En los analizadores actuales hay una calculadora acoplada que proporciona el
porcentaje de cada aa, calculado por triangulacin de los picos.
Esta reaccin se produce cuando participan simultneamente un grupo amino y
uno carboxilo que, en presencia de la ninhidrina se oxidan formando un
compuesto azul violeta, conocido como prpura de Ruherman, para la mayor
parte de los aa, y de color amarillo para la prolina y la hidroxiprolina.
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OTRAS TCNICAS: El anlisis de aa en fluidos biolgicos tambin puede

realizarse con HPLC. En los screening metablicos la determinacin de aa
concretos, si la frecuencia de la aminoacidopata lo justifica. As por ejemplo,
en nuestro entorno se suele determinar los niveles de fenilalanina en suero y/o
en orina de los recin nacidos. La tcnica habitual es de Mc Camans y Robins
automatizada que determina por fluorimetra el contenido de este aa.
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3. PROTEINAS EN EL LABORATORIO CLINICO.

3.1. INTRODUCCIN:
Las protenas presentes en el plasma (mas de 125 distintas) forman
parte de un sistema metablico altamente dinmico, con caractersticas y
funciones muy diversas.
La suma de las concentraciones de todas y cada una de las protenas
presentes en el plasma, se conoce como protenas totales y en condiciones
normales oscila entre 6,4 y 8,2 g/100 mL.
La mayor parte de las protenas se sintetiza en el hgado; la principal
excepcin la constituyen las Ig que se sintetizan por las clulass plasmticas;
el suero contiene las mismas protenas que el plasma, excepto el fibringeno
que se consume durante el proceso de la coagulacin.
Aparte de la determinacin de la proteinemia total, resulta de una gran
importancia clnica, la determinacin cualitativa y cuantitativa de todos los
diferentes tipos de protenas presentes en el plasma: fracciones proteicas.
Los procedimientos mas utilizados actualmente para el estudio de las
distintas fracciones de protenas plasmticas, son bsicamente:
- La electroforesis.
- La inmunoelectroforesis.
- La inmunodifusin radial.
La electroforesis es una tcnica fsico-qumica relativamente sencilla que
va permitir separar y posteriormente cuantificar las fracciones ms
importantes de protenas presentes en el plasma, obtenindose as lo que se
conoce como patrn electrofortico.
Respecto al proteinograma habra que decir que no esta justificado su
empleo como tcnica de rutina, por una serie de razones, y que puede
prescindirse de l la mayora de los casos, valorando en su lugar algunas
protenas especificas.
Sin embargo tiene como principal indicacin y posiblemente la nica el
diagnostico y seguimiento de las paraproteinemias o gammapatias
monoclonales.
Mediante una electroforesis normal, es posible separar aquellas
fracciones de protenas plasmticas cuyo peso molecular oscila entre 66.000 y
700.000. Cuando el soporte utilizado para llevar a cabo el desarrollo
electrofortico es acetato de celulosa las principales fracciones proteicas
obtenidas son:
- La fraccin albmina.
- Las fracciones alfa1, alfa 2, beta y gamma, todas ellas globulinas.
Cada fraccin, esta formada por un conjunto de protenas con una
movilidad electrofortica semejante aunque distintas en cuanto a su estructura
y funcin.
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3.2. FRACCIONES PROTEICAS:

1. Protenas totales: La funcin de la protena srica total, es mantener la
presin osmtica coloidal del plasma, que evita prdidas de lquidos hacia
los tejidos.
El contenido de protenas totales en suero depende:
Del estado nutricional.
Del funcionamiento heptico.
Del funcionamiento renal.
De errores metablicos y afecciones como el mieloma mltiple.
La deshidratacin hace que todas las fracciones proteicas aumenten en
igual porcentaje; puede ser resultado de reduccin del consumo o aumento
de las prdidas (diarrea grave); el mieloma mltiple es la principal
enfermedad en la que el aumento de una fraccin provoca aumento de las
protenas sricas totales.
La hipoproteinemia se debe al aumento de las prdidas (sndrome nefrtico,
hemorragias o quemaduras extensas) o a un bajo consumo por inanicin o
malabsorcin.
2. Albmina: Constituye ms de la mitad de todas las protenas sricas y
gran parte de la presin osmtica depende de ella; tambin sirve como
molcula de transporte para sustancias menos solubles como cidos grasos,
calcio, bilirrubina, hormonas, metales, frmacos y vitaminas. Su
concentraccin: 3,4 a 5 g/ 100 ml.
Se reduce en enfermedades del hgado (reduccin de la produccin),
glomerulonefritis o nefrosis (aumento de las prdidas), afecciones
gastrointestinales (malaabsorcin) e inanicin y en quemaduras. El
aumento de la albmina indica por lo general deshidratacin.
3. Prealbmina: Su principal funcin es transportar tiroxina y
triyodotironina. Es un indicador muy sensible del estado nutricional porque
tiene una vida media muy corta, reducindose su nivel con rapidez cuando
los niveles de consumo proteico y de caloras descienden, tambin en
enfermedades del hgado. Migra con ms rapidez que la albmina.
4. Protenas 1 y 2: Son un 15% del total. Su concentracin normal es de
03-07 gr/dl.
Tienden a aumentar cuando hay dao hstico activo. Su hallazgo en plasma
es inespecfico ya que aparece en traumatismos, procesos
malignos,
inflamatorios,...
a. Alfa-1-antitripsina (AAT): Es un grupo de inhibidores de las
sern proteasas que se sintetiza en el hgado; su funcin es
inactivar proteasas tales como la elastasa y colagenasa, evitando
la descomposicin del tejido conjuntivo cuando los neutrfilos las
liberan en una zona inflamada; es un reactante de fase aguda.
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Los reactivos de fase aguda, son protenas que aumentan de

concentracin como respuesta a la inflamacin aguda; todos ellos
tienen una misin de defensa del husped, son inespecficos y se
utilizan para vigilar el progreso o tratamiento de la enfermedad.
b. Glucoprotena cida 1 (AAG): Se produce en el hgado y su
funcin primaria, es inactivar la progesterona, es RFA y se une a
frmacos; aumenta en casos de inflamacin aguda, durante
neoplasias malignas y despus de traumatismos y quemaduras;
su descenso se correlaciona sobre todo con anticonceptivos
orales.
c. Protrombina ( 1): es un factor de la coagulacin precursor de
la trombina.
d. Macroglobulina 2 (AMG): Es una de las principales molculas
proteicas y es un inhibidor de la proteasa; tambin participa en la
coagulacin y en el proceso fibrinoltico porque inhibe la actividad
proteoltica de la tripsina, quimotripsina, trombina, elastasa,
calicrena y plasmina.
e. Haptoglobina 2 : Su funcin es transportar la Hb plasmtica
libre al sistema retculo endotelial, en donde se degrada; la Hb
que no est enlazada a la Haptoglobina, se filtra por el glomrulo
y precipita en los tbulos originando daos renales graves; sin
embargo, la Hb-Hp es demasiado grande para filtrarse, por lo que
el adecuado nivel de Hp evita daos renales y retiene las reservas
de hierro de la Hb que de lo contrario, se perderan. Todo el
complejo Hb-Hp se degrada en el hgado. La Hp es una proteina
de fase aguda.
f. Ceruloplasmina ( 2): Es la globulina alfa-2 de transporte que
contiene cobre (90% del Cu plasmtico); un 10% del Cu de la
sangre es transportado por la albmina. Es un RFA y su ausencia
causa la enfermedad de Wilson.
g. Eritropoyetina ( 2): interviene en la formacin de los
eritrocitos; se produce en el rin, en el aparato yuxtaglomerular
y vehiculada por la sangre se dirige al Hgado donde estimula la
produccin de eritrogenina, que es la encargada de ir a la mdula
sea y estimular la produccin de GR.
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5. globulinas:
Representan un 12% de las globulinas totales. Su concentracin normal es
de 04-08 gr/dl. Esta fraccin no suele aparecer alterada
a. Hemopexina: Es una globulina beta-1, que funciona como
protena enlazante del hemo libre que resulta de la degradacin
de la Hb. Este complejo es transportado al hgado, donde el hemes degradado a bilirrubina.
b. Transferrina: Es una glucoprotenabeta que transporta hierro
en sangre; los iones frricos resultan de la degradacin del hem
en el hgado y los que se absorben en la pared del tubo digestivo
son transportados por la transferrina y llevados a la mdula sea
para la formacin de GR; su aumento gua el diagnstico hacia la
deficiencia de hierro.
c. Protena C reactiva (PCR): Se denomina as porque reacciona
con el polisacrido C de la pared celular de los neumococos; es
un RFA que se sintetiza en el hgado y que de manera inespecfica
se eleva durante la respuesta inmune a las infecciones, daos a
los tejidos o necrosis asociada a infarto y enfermedades
malignas. Las mediciones repetidas son tiles para valorar el
curso de una enfermedad. Participa en la respuesta inmune
activando el complemento, en la fagocitosis y en la liberacin de
linfoquinas.
d. Fibringeno: Es una glucoprotena soluble que fabrica el hgado
y que acta como sustrato para la trombina. Es tambin un RFA.
En la electroforesis, migra a la regin beta.
e. Microglobulina- 2 ( 2M): Es una cadena ligera asociada a los
antgenos del sistema HLA que se encuentra en todas las clulas
nucleadas. Se libera B2M a la sangre cuando la clula muere o se
regenera; este producto es filtrado por el glomrulo y se absorbe
y degrada en los tbulos proximales; su tasa en sangre refleja su
tasa de produccin y el funcionamiento renal; se emplea como
marcador de tumores.
6. Inmunoglobulinas: Los Ac son el principal grupo de protenas no
fabricadas por el hgado; se producen en la mdula sea por los linfocitos
B. La reduccin de las Ig puede ser adquirida o gentica; el aumento se
clasifica como policlonal si proceden de lneas celulares mltiples y
monoclonal si proceden de una sola lnea celular; los Ac procedentes de la
misma clula son idnticos y su aumento desmesurado en enfermadades
malignas, da lugar a un pico en la electroforesis que se denomina
paraproteina monoclonal.
21

3.3. PROTENAS EN OTROS LQUIDOS CORPORALES:

1. Orina: Normalmente, no se observan protenas en la orina; cuando se
detectan son por lo generalral albminas y si persisten indican afeccin
renal.
2. LCR: Los niveles proteicos en LCR son por lo generalral muy bajos,
aproximadamente 15 a 45 mg/dl. Los niveles elevados de protenas
pueden deberse a daos en la barrera entre sangre y cerebro durante la
enfermedad o tras algn traumatismo; tambin puede estar ocasionado por
un aumento de la produccin de protenas por un tumor cerebral,
infecciones o esclerosis mltiple ( IgG).
La protena bsica mielina (MBP) es un componente estructural del
recubrimiento de mielina de los axones del nervio; cuando existe
desmielinizacin o necrosis del nervio, aparece en LCR.
3. Otras protenas:
Como marcadores del dao de miocardio, se estn evaluando la miosina
ventricular humana de cadena ligera y la mioglobina cardiaca; estas protenas
se liberan a la sangre poco despus del infarto, antes que la enzima
creatncinasa.
La alfa-feto protena (AFP) est presente en fetos y lactantes en cantidades
muy abundantes, pero en adultos normales, se detecta en cantidades muy
bajas, inferiores a 15 ng/mL; se utiliza sobre todo como marcador de tumores
y para detectar defectos neurales en el feto.
3.4. MTODOS GENERALES DE DETERMINACIN DE PROTENAS:

1. Determinacin de las protenas totales en suero.
Para analizar las protenas totales presentes en la sangre, se puede
utilizar indistintamente suero o plasma ya que los resultados son similares. Sin
embargo, es ms frecuente utilizar suero. En estas muestras, las protenas son
estables durante una semana a temperatura ambiente y por lo menos un mes
cuando se refrigeran, en ausencia de contaminacin bacteriana significativa.
Congeladas duran aos.
Hay que guardar las muestras bien tapadas para evitar la evaporacin,
que concentrara las protenas en la muestra.
MTODOS COLIRIMTRICOS:
Mtodo del Biuret: Se basa en la reaccin de los iones cobre con los enlaces
peptdicos
(-CO-NH-) de las protenas en medio alcalino, formando un
complejo de color azul violeta que presenta un mximo de absorcin a 540
nm.
22

El color obtenido se lee en el espectrofotmetro a esa longitud de onda.

La intensidad del color es directamente proporcional al numero de enlaces
peptdicos presentes en la muestra.
Es el mtodo mas empleado en la actualidad, ya que posee buena
especificidad, exactitud y precisin, aunque no es muy sensible.
Las interferencias son escasas y fciles de eliminar. Utiliza un solo
reactivo muy estable, por lo que se puede automatizar con facilidad.
Es el mtodo de referencia.
MTODOS FSICO-QUMICOS.
Absorcin en el ultravioleta: Las soluciones de protenas presentan
mximos de absorcin entre 270-290 nm y entre 200-225 nm. La absorbancia
de un suero a estas longitudes de onda se debe, casi por completo, a las
protenas que contiene. Segn se elija para determinar la concentracin de
protenas totales en el suero una longitud de onda perteneciente a uno u otro
intervalo, se obtendrn dos procedimientos diferentes.
La absorbancia en el intervalo 270-290 nm se debe a los anillos
aromticos presentes en la tirosina, triptfano y fenilalanina, mientras que la
detectada en el intervalo de 200-225 nm es mucho ms intensa y se debe a
los enlaces peptdicos.
Necesitan espectrofotmetros especiales con lmparas ultravioletas que
proporcionen radiaciones de las longitudes de onda requeridas con buena
intensidad.
Refractometra: La refraccin que experimenta la luz al atravesar un suero
sanguneo se debe, casi exclusivamente, a la cantidad de protenas que
contiene, por ser stas los solutos presentes en mayor concentracin, con
diferencia.
Para la determinacin de protenas sricas se utiliza un refractmetro
calibrado para informar directamente de la concentracin de protenas.
Presenta aceptable exactitud, precisin y sensibilidad para protenas
sricas de sujetos sin anomalas que alteren el aspecto del suero.
Los sueros lipmicos, azomicos, hiperbilirrubinmicos, hemolizados
presentan valores falsamente elevados, por lo que en estos casos, las
protenas totales deben determinarse por otros mtodos.
2. Determinacin de las protenas totales en orina.
En condiciones normales, la orina contiene pequesimas cantidades de
protenas porque la membrana del glomrulo renal solo permite el paso de
algunas protenas de bajo peso molecular.
La cantidad de protenas excretadas normalmente por un individuo sano
es de 100 mg/24 horas. Esta cantidad no se detecta normalmente con los
mtodos que se utilizan en laboratorio.
La determinacin de protenas totales en orina es ms difcil que en
suero por varias razones:
- Porque la concentracin es muy pequea.
23

Porque hay una gran variacin de unas muestras de orina a otras o bien
de la composicin de las protenas presentes en ellas. Por ejemplo, puede
haber una albuminuria o una proteinuria de Bence-Jones. Esto debe ser
tenido en cuenta al elegir el mtodo de determinacin, ya que no todos los
mtodos tienen la misma sensibilidad para detectar todos los tipos de
protenas.
- Porque la concentracin de sustancias interferentes es mayor en la orina
que en el suero.
Todos estos factores afectan a la precisin y exactitud de los distintos
mtodos. El estudio de las protenas totales en orina sigue, generalmente, el
siguiente protocolo: se analiza de manera semicuantitativa; si el resultado es
positivo, se realiza el cuantitativo y el especfico.
Generalmente este proceso se lleva acabo por medio de un programa
informatizado que realiza un screening inicial de las muestras de orina,
conectado con un sistema de anlisis automatizado.
-
Muestras
Para el anlisis cualitativo es preferible emplear muestras recientes de la
primera orina de la maana, por ser ms concentrada que la obtenida de una
muestra cualquiera a lo largo del da y porque evita las proteiunurias
ortostticas.
Si la orina no se analiza inmediatamente, se guarda refrigerada; la
determinacin, en todo caso, debe hacerse antes de que pasen 48 h. Si hay
contaminacin bacteriana, se analizar inmediatamente.
El anlisis cuantitativo se debe realizar en muestras de 24 h, aunque a
veces son representativas muestras de 8 o de 12 h.
La orina ha de recogerse en recipientes con un inhibidor del crecimiento
bacteriano
(timol, por ejemplo.)
Anlisis semicuantitativo: empleo de tiras reactivas
Los mtodos cualitativos que se emplean para detectar proteinurias deben
cumplir dos condiciones:
1. Dar resultados negativos cuando las protenas se encuentran presentes en
concentraciones normales.
2. Dar resultados positivos a partir de una concentracin de protenas de, por
lo menos, 20-25 mg/dl.
Actualmente, el mtodo cualitativo ms utilizado para la proteinuria es el
empleo de tiras reactivas formadas por un papel especial absorbente tratado
con un tampn de citrato a pH 3.0, que contiene azul de bromofenol. Este
indicador es de color amarillo cuando se encuentra a pH 3,0 y de color azul a
pH 4,2.
Anlisis cuantitativo
Mtodos turbidimtricos: utilizan un reactivo que precipitan las protenas
(generalmente, el cido tricloroactico o sulfosaliclico) y se hace una lectura
de turbidez resultante en un espectrofotmetro, seleccionando una en la que
ni las protenas ni otros componentes de la orina absorban de forma apreciable
(500-650 nm) La concentracin de protenas totales en orina se calcula por
medio de una curva de calibracin de albmina.
24

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De todos los aminocidos conocidos (ms de un centenar) nicamente 20 son

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Son compuestos anfteros ya que, en funcin del pH del medio, pueden

La posicin de equilibrio depende del pH de la disolucin y de la

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presentes como cationes mientras en soluciones muy bsicas los aminocidos

Este enlace se forma entre el grupo carboxilo de un aa y el grupo alfa amino

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Primaria: viene determinada por la secuencia de aa de la cadena

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enrolladas formando una esfera. Suelen ser solubles en agua. Son

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Segn su funcin biolgica:

Por ltimo en funcin de su localizacin las protenas pueden

Digestin y absorcin de las protenas.

Las protenas de los alimentos son la fuente principal de aminocidos

Una pequea parte de la energa oxidativa en los seres humanos,

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metionina), se excretan como creatinina; por ltimo la excrecin de las purinas

Un paso clave en esta degradacin es separar el grupo amino del esqueleto

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Ya en el citosol del hepatocito suceden 2 procesos:

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fenilalanina hidroxilasa, lo que produce un aumento del nivel plasmtico de

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tanto es posible detectar la enfermedad mediante la determinacin de los

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3. PROTEINAS EN EL LABORATORIO CLINICO.

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