Manual de Procedimientos - 12!09!2014

UNIVERSIDAD TCNICA PARTICULAR DE
LOJA
DEPARTAMENTO CIENCIAS DE LA SALUD
LABORATORIO BIOQUIMICA CLNICA E

INMUNOLOGA
MANUAL DE PROCEDIMIENTO
LOJA- ECUADOR
2014
DEPARTAMENTO CIENCIAS DE
LA SALUD
LABORATORIO DE BIOQUIMICA
CLNICA E INMUNOLOGA
CODIGO:
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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
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NDICE
Elaborado: Andrea Vintimilla

Cargo: Responsable de
Laboratorio
Fecha: 01/06/2013
Custodio: Andrea Vintimilla
Revisin tcnica: Natalia

Bailon
Seccin
Fecha: 27/07/2013
Aprob: Jana Bobokova

Cargo: Director del
Departamento
Fecha: 01/08/2013
LA SALUD
CLNICA E INMUNOLOGA
CODIGO:
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NDICE
1. INTRODUCCIN
2. OBJETIVOS
3. DISPOSICIONES GENERALES
5
6
4. MEDIDAS GENERALES PARA LOS PROFESIONALES
EN FORMACIN
5. NORMAS GENERALES PARA EL USO DE QUIPOS
6. PROCEDIMIENTO DE PRACTICAS
7. TEMAS DE PRACTICAS DE LABORATORIO
8. DILUCIONES
9. ANTGENOS DE SUPERFICIE DE GRUPOS
11
17
SISTEMA ABO.
10.
PRUEBA
RPIDA
DE
AGLUTINACIN
22
PLACA. AGLUTINACIONES FEBRILES
11.
TCNICAS
DE
AGLUTINACIN
30
11.1 Determinacin de la Protena C-Reactiva Prueba
en porta. (PCR- Ltex)
11.2 Determinacin de Factores reumatoideos Prueba
en porta. (FR Ltex)
11.3 Determinacin de Anti- Estreptolisina O. Prueba
en porta. (ASLO-Ltex)
12.
DIAGNOSTICO SEROLGICO DEL ANTGENO
13.
VDRL DETERMINACIN DE REAGINAS
Laboratorio
Fecha: 01/06/2013

Bailon
Seccin
Fecha: 27/07/2013
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46

Cargo: Director del
Departamento
Fecha: 01/08/2013
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PLASMTICAS. PRUEBA EN PORTA

INMUNOCROMATOGRAFIA ANTGENOS DE
SUPERFICIE DE HEPATITIS B
15.
DETERMINACIN DE BHCG.
16.
ELISA. HELICOBACTER PYLORI IGM
17.
ELISA. HELICOBACTER PYLORI IGG
14.

Laboratorio
Fecha: 01/06/2013

Bailon
Seccin
Fecha: 27/07/2013
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Cargo: Director del
Departamento
Fecha: 01/08/2013
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CLNICA E INMUNOLOGA
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1. INTRODUCCIN
El correcto desarrollo de cualquier tipo de prcticas de laboratorio, implica la
necesidad de contar con elementos apropiados que permitan establecer los
fundamentos y metodologas sobre el trabajo a realizar. As mismo es
necesario marcar algunas consideraciones sobre las reglas de seguridad,
condiciones para trabajar dentro del laboratorio.
La prctica de laboratorio es el tipo de clase que tiene como objetivos
instructivos fundamentales que los estudiantes adquieran las habilidades
propias de los mtodos de la investigacin cientfica, amplen, profundicen,
consoliden, realicen, y comprueben los fundamentos tericos de la asignatura
mediante la experimentacin empleando los medios de enseanza necesarios,
garantizando el trabajo individual en la ejecucin de la prctica.
El laboratorio debe estar dotado de una serie de infraestructuras que ayuden al
desarrollo de las actividades, garanticen su adecuado funcionamiento, y la
minimizacin de riesgos.
OBJETIVO
Brindar a los alumnos a establecer la aplicacin de los fundamentos tericos de
los programas docentes, y a encontrar en este conjunto de conocimientos una
herramienta de apoyo.

Laboratorio
Fecha: 01/06/2013

Bailon
Seccin
Fecha: 27/07/2013

Cargo: Director del
Departamento
Fecha: 01/08/2013
1.
2.
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CODIGO:
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2. DISPOSICIONES GENERALES
Todos los docentes, se acogern a los horarios establecidos.
Todos los docentes, reportarn de manera obligatoria al responsable
del laboratorio,
todas las incidencias o desperfectos que se hayan
producido o detectado durante el uso del Laboratorio,

3.
6 de 88
de manera
verbal o escrita.
Est prohibida la salida de accesorios y/o partes de los instrumentos
depositados en el Laboratorio, as como la apertura del mismo sin un
4.
5.
docente responsable.
Queda prohibido el consumo de bebidas y alimentos en el Laboratorio.
El material corto punzante debe ser depositado en el recipiente rojo
(guardianes), que se encuentra justo a lava manos; la basura generada
en cada clase, deber quedar lista para su eliminacin de acuerdo con
la normativa vigente y colocados en sus bolsas respectivas de acuerdo
6.
a las guas de desechos infecciosos y comunes del laboratorio.

La colaboracin en el cuidado y la organizacin del Laboratorio
redundar en una mayor eficiencia en el uso del mismo.
MEDIDAS GENERALES PARA LOS PROFESIONALES EN FORMACIN:

Laboratorio
Fecha: 01/06/2013

Bailon
Seccin
Fecha: 27/07/2013

Cargo: Director del
Departamento
Fecha: 01/08/2013
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Son indispensables para el uso del laboratorio el conocimiento de
las normas de bioseguridad.

Mantener el cabello limpio y recogido
No utilizar joyas.
Mantener las uas cortas y limpias
No fumar, ni comer, ni maquillarse en reas de trabajo.
Mantener el lugar limpio y en orden.
Lavado clnico de manos.
Utilizar los elementos de proteccin (gorro, guantes, bata, botas,
mascarillas, lentes de proteccin) para el uso del laboratorio de
anatoma manera nica y exclusiva.
NORMAS GENERALES PARA EL USO DE EQUIPOS

Para el uso de los equipos de laboratorio se debe tener en cuenta los
catlogos existentes, para evitar cualquier tipo de accidente o de mal
manejo de los de los mismos, en los manuales consta de manera
detallada el encendido y el apagado adecuado de cada uno de los
equipos que se encuentran en el laboratorio de Inmunologa.
PROCEDIMIENTOS DE PRCTICAS
Los protocolos de las prcticas son de gran ayuda para los estudiantes
que visitan el laboratorio de inmunologa ya que permiten tener un
conocimiento bsico de lo que se realiza en el laboratorio.
2. TEMAS DE PRCTICAS DE LABORATORIO

Nro Ord.
CODIGO

Laboratorio
Fecha: 01/06/2013
PRCTICA
Bailon
Seccin
Fecha: 27/07/2013

Cargo: Director del
Departamento
Fecha: 01/08/2013
01
02
03
04
05
06
07
08
IMN001
IMN002
IMN003
IMN004
IMN005
IMN006
IMN007
IMN008
LA SALUD
CLNICA E INMUNOLOGA
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Diluciones
Antgenos de superficie de grupos sanguneos. Sistema ABO
Prueba rpida de aglutinacin o placa. Aglutinaciones febriles
Tcnicas aglutinacin. Determinacin de FR, ASTO y PCR
Diagnstico serolgico. VDRL
Inmunocromatografia Antgenos de superficie de Hepatitis B
Determinacin de BHCG
ELISA. Helicobacter Pylori IgM, Helicobacter Pylori IgG
PRCTICA N 1 (CDIGO: IMN001)

DILUCIONES
AUTORES
B.F. Vintimilla Andrea, Angamarca Gloria
Laboratorio
Fecha: 01/06/2013

Bailon
Seccin
Fecha: 27/07/2013

Cargo: Director del
Departamento
Fecha: 01/08/2013
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OBJETIVOS
Conocer el principio de las diluciones y realizar algunos ensayos de

prctica.
TIPO
Terica
ACTIVIDAD
INTRODUCCION
La dilucin es la reduccin de la concentracin de una sustancia en una
disolucin. Consiste en rebajar la cantidad de soluto por unidad de volumen de
disolucin. Se logra adicionando ms diluyente a la misma cantidad de soluto:
se toma una poca porcin de una solucin alicuota y despus esta misma se
introduce en ms disolvente.
Adems consiste en aadir a un volumen de muestra biolgica tantos
volmenes de diluyente (agua destilada, solucin salina, buffer) como sean
necesarios para obtener la dilucin deseada, la misma tiene como
consecuencia inmediata la disminucin de la concentracin de los diferentes
componentes de la muestra.
Las diluciones son las soluciones con concentracin menor obtenidas al
agregar volmenes conocidos de diluyente a una solucin de concentracin
conocida. Las diluciones se expresan en forma de una proporcin, por ejemplo
1/10 (1:10) donde la primera cifra o numerador (1) corresponde al volumen de

Laboratorio
Fecha: 01/06/2013

Bailon
Seccin
Fecha: 27/07/2013

Cargo: Director del
Departamento
Fecha: 01/08/2013
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lo que se est diluyendo y la segunda cifra o denominador (10) al volumen total

en que se encuentra.
As, una dilucin 1/10 indica que se tiene un volumen de la solucin original
contenido o diluido en 10 volmenes totales, de los cuales 9 corresponden al
diluyente.
Factor de dilucin: El factor de dilucin es el nmero total de volmenes al
que se lleva un volumen dado de muestra original
Si vas a hacer una dilucin en serie (n veces), el Fd se calcula de la siguiente
forma:
Fd1= 100ml/10ml = 10
Fd2 = 50ml/2ml = 25
MATERIALES Y MTODOS
MATERIALES
Portaobjetos
placa
EQUIPOS
Micropipetas
de
REACTIVOS
Diluyente (agua destilada,
volumen variable
solucin salina, buffer
translucida
MATERIAL BIOLGICO
Muestra: suero (claro, reciente).
Toma de muestras
Lo realiza personal entrenado.

Es necesario estar en ayunas.
Transporte
Laboratorio
Fecha: 01/06/2013

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Seccin
Fecha: 27/07/2013

Cargo: Director del
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Fecha: 01/08/2013
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Se debe separar el suero, mantenerlo refrigerado (4 C), y congelar su

envo se demora.
METODOLOGA
DILUCIN SIMPLE
Para preparar una dilucin, mezcle un volumen especfico de la muestra o
espcimen (ej. Suero) con un cierto volumen de un diluyente. Recuerde que
para preparar la dilucin siempre agregue primero el diluyente y seguidamente
la muestra (ej. Suero), finalmente mezcle en forma adecuada.
En un caso simple, una parte de suero una parte igual de diluyente producirn
una dilucin de (o 1:2). La expresin 1:2 representa la relacin de la
cantidad de partes de suero con el nmero total de partes, en este caso
representa una parte de suero y una parte de diluyente para un total de dos (2)
partes. Una muestra pura de suero, es decir, que no contenga ninguna parte de
diluyente se representara por la relacin 1/1 (o1:1), es decir el total de partes
es una (1) y est representada nicamente por la muestra.
Dado que en una dilucin lo que se indica es la relacin entre el volumen de la
solucin original y el volumen total en que se encuentra, una dilucin 1/10
puede prepararse de diferentes maneras:
Por ejemplo:
1 ml de muestra en 9 ml de diluyente
0.1 ml de muestra en 0.9 ml de diluyente
0.5 ml de muestra en 4.5 ml de diluyente
Laboratorio
Fecha: 01/06/2013

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Seccin
Fecha: 27/07/2013

Cargo: Director del
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Fecha: 01/08/2013
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En la prctica el clculo de las diluciones se puede efectuar de dos maneras

diferentes que cumplen ciertas expectativas, la dilucin directa y la dilucin en
serie.
DILUCIN DIRECTA
Para realizar una dilucin directa se puede hacer uso de la siguiente expresin:
1/d=Vm/Vt donde 1/d= dilucin
Vm= volumen de muestra
Vt = volumen total (volumen de diluyente + volumen de muestra).
Ejemplo N1
Lleve 5 ml de muestra a una dilucin 1/10.
Sustituyendo los valores conocidos tenemos:
1/d=1/10
Vm=5 ml
Vt = ?
As:
1/10=5 ml/Vt
despejando Vt tenemos que Vt=10 x 5/1=50 ml
volumen de diluyente = volumen total-volumen de muestra
volumen de muestra = 50-5 = 45 ml
Laboratorio
Fecha: 01/06/2013

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Seccin
Fecha: 27/07/2013

Cargo: Director del
Departamento
Fecha: 01/08/2013
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Ejemplo N2
Prepare exactamente 200 ml de una dilucin 1/50.
Sustituyendo los valores conocidos tenemos:
1/d=1/50
Vm=?
Vt= 200 ml
As:
1/50=Vm/200
despejando Vm tenemos que Vm=200 x 1/50=4 ml
volumen de diluyente = volumen total-volumen de muestra
volumen de diluyente = 200-4=196 ml
Sin embargo, las diluciones directas tienen el inconveniente de que cuando es
necesario hacer una dilucin alta por ejemplo 1/ 10 000, se desperdicia mucho
reactivo o se incurre en un error de medicin. As, una dilucin 1/ 10 000 se
preparara con 1 ml de muestra y 9 999 ml de diluyente o bien 9.999 ml de
diluyente y 0.001 ml de muestra.
DILUCIN SERIADA
Este tipo de dilucin soluciona los inconvenientes que presenta el clculo
directo de las diluciones altas. La diferencia entre la dilucin de dos tubos
consecutivo se conoce como factor de dilucin, siendo 2, 4 y 10 los ms
usados. En el ejemplo de la dilucin 1/ 10 000, la muestra se puede diluir 1/
Laboratorio
Fecha: 01/06/2013

Bailon
Seccin
Fecha: 27/07/2013

Cargo: Director del
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Fecha: 01/08/2013
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100 (Vm= 0.1 ml + Vt= 10 ml) en un primer tubo y colocar 0.1 ml de esta
dilucin en un segundo tubo con 9.9 de diluyente. El segundo tubo tendr una
dilucin 1/ 100, sin embargo como la muestra ya se encuentra diluda
previamente 1/ 100, multiplicando sus denominadores tenemos:
1/ 100 x 1/ 100= 1/ 10 000
En este caso el factor de dilucin es de 100. Debe insistirse en que solo el
primer tubo lleva la alcuota de la muestra sin diluir, los dems tubos toman la
alcuota ya diluida del tubo previo.
El nmero de tubos y las diluciones intermedias se plantean considerando el
volumen de los tubos as como el volumen mnimo que se puede medir fcil y
exactamente con las pipetas disponibles.
Cmo lograr exactamente 30 ml de una dilucin 1:2000?
REPORTE DE LA PRCTICA
UNIDADES DE MEDIDA (VOLUMEN)
En la mayora de los casos en las precipitaciones de las diluciones se utilizan
pequeos volmenes tanto del espcimen como del diluyente, estos volmenes
generalmente se encuentran en el orden de los microlitros (l). Recuerde que 1
ml es igual a 1000ul y que 1 l es igual a 0,001ml, trate de familiarizarse con
las conversiones de ml a l y viceversa.

Laboratorio
Fecha: 01/06/2013

Bailon
Seccin
Fecha: 27/07/2013

Cargo: Director del
Departamento
Fecha: 01/08/2013
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01/06/201
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Clculo
Una dilucin de 1/100 puede prepararse mezclando 1 parte de suero con 99
partes de diluyente. Por ejemplo 1 ml + 99ml (total de partes: 100; volumen
final 100 ml). Ahora bien, si mantenemos la relacin de volumen de suero y la
del diluyente necesaria para preparar una determinada dilucin (como en este
ejemplo; dilucin 1/100:1+99). Podemos variar los volmenes de cada uno de
ellos y se obtendr la misma dilucin.
CUESTIONARIO
1.
2.
3.
4.
5.
Cul es el principio de las diluciones?

Por qu son tan tiles las diluciones?
Qu tipo de diluyentes se pueden utilizar en una dilucin?
Qu son las diluciones simples y las seriadas?
A las diluciones en que unidades se las expresa?
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
1. Abbas, A., Lichtman, A. y Pober, J. (1999). INMUNOLOGA CELULAR Y
MOLECULAR. 3 Edicin. Interamericana- McGRAWHILL.
2. Roitt, I. (1998). IMUNOLOGIA FUNDAMENTOS. 9 Edicin. Editorial
Mdica Panamericana. Espaa.
3. Roitt, I., Brostoff, J. y Male, David. (2000). INMUNOLOGIA. 5 Edicin.
Ediciones Harcourt. Espaa.
4. http://es.scribd.com/doc/79773831/Practica-1-Guia-de-Diluciones-2

Laboratorio
Fecha: 01/06/2013

Bailon
Seccin
Fecha: 27/07/2013

Cargo: Director del
Departamento
Fecha: 01/08/2013
LA SALUD
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CODIGO:
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01/06/201
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ANTGENOS DE SUPERFICIE DE GRUPOS
SANGUNEOS SISTEMA ABO
AUTORES
OBJETIVOS
Comprender y observar la aglutinacin de la reaccin antgeno
anticuerpo.
Conocer los tipos sanguneos ms importantes y discutir la importancia
de la identificacin del grupo sanguneo en la prctica clnica.
TIPO
Laboratorio
Fecha: 01/06/2013

Bailon
Seccin
Fecha: 27/07/2013

Cargo: Director del
Departamento
Fecha: 01/08/2013
LA SALUD
CLNICA E INMUNOLOGA
CODIGO:
LAB_BCI_v01_2014
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01/06/201
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Experimental
ACTIVIDAD
INTRODUCCION
Los eritrocitos poseen en su membrana sustancias antignicas determinadas
genticamente,
las
cuales
pueden
identificarse
mediante
anticuerpos
especficos. El primer grupo de estas sustancias fue identificado por

Landsteiner en 1901, y le llam sistema ABO, el cual consiste en que un
individuo tiene en sus glbulos rojos uno, dos o ninguno de los dos antgenos
(A y/o B) pertenecientes a este sistema. As, los individuos pueden ser del tipo
A, si solamente poseen el antgeno A; del tipo B, si nicamente tienen el
antgeno B; del tipo AB si poseen ambas, o del tipo 0 si no tienen ninguno de
los dos. La naturaleza qumica de los determinantes antignicos es
polisacardica.
Aproximadamente el 85% de la poblacin posee sustancias con caractersticas
antignicas y estructurales similares a las presentes sobre las membranas de
los eritrocitos en prcticamente todas las secreciones corporales. A estos
individuos se les llama secretores.
Un
grupo
sanguneo
es
una
forma
de
agrupar
ciertas
c a r a c t e r s t i c a s d e l a sangre que dependen de los antgenos presentes en la

superficie de los glbulos rojos y en el suero de la sangre.
La determinacin de grupo sanguneo se basa en la reaccin antgeno
anticuerpo, la cual se puede llevar a cabo de forma directa (determinando los
antgenos presentes en la superficie del eritrocito del paciente al contacto del
reactivo anti A, B, AB o D) o indirecta (determinando los anticuerpos presentes
en el suero del paciente y enfrentndolo a eritrocitos conocidos (A, B o AB).
Laboratorio
Fecha: 01/06/2013

Bailon
Seccin
Fecha: 27/07/2013

Cargo: Director del
Departamento
Fecha: 01/08/2013
LA SALUD
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01/06/201
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MATERIALES Y METODOS
MATERIALES
EQUIPOS
Micropipetas de 50l
Microscopio
Palillos
Agitador
Portaobjetos o placa
mecnico
translucida
REACTIVOS
Suero anti-A (grupo B)
Suero anti-B (grupo A)
Suero anti-D (grupo O)
MATERIAL BIOLGICO
Muestra de sangre anticoagulada con EDTA.
METODOLOGIA
1. Obtener aproximadamente 3mL de sangre venosa y colocarla en un tubo
sin anticoagulante EDTA.
2. Rotular un portaobjetos de la siguiente manera A, B y O. Sobre el
portaobjetos se depositaran 3 gotas de sangre (25ul o gotas de
aproximadamente 0,5 cm de dimetro) bien separadas.
3. Sobre cada gota se pipetean 25ul de antisuero. El orden recomendado
es A, B, D.
4. Homogenizar mezclando suavemente con los palillos y despus con
movimientos rotatorios en el agitador mecnico, durante 3 minutos.
5. Determinar la aglutinacin e interpretar el resultado. Puede utilizarse el
microscopio en caso de reaccin muy dbil.
Grupo A
Si aglutina a los 3 minutos con el Y no aglutina con el suero anti-B.
Grupo B
suero anti-A.
Si aglutina a los 3 minutos con el Y no aglutina con el suero anti-A.
Grupo AB
suero anti-B.
Si aglutina con el suero anti-A.

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Fecha: 01/06/2013
Y con el suero anti-B.

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Seccin
Fecha: 27/07/2013

Cargo: Director del
Departamento
Fecha: 01/08/2013
Grupo 0
LA SALUD
CLNICA E INMUNOLOGA
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Si no aglutina ni con el suero anti-A.
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Ni con el suero anti-B.
CUESTIONARIO
1. Cul es antgeno y anticuerpo? Qu funcin cumple cada uno de
ellos?
2. Por qu el tipo de sangre O se le considera donador universal, y al
AB, receptor universal?
3. Cul es la importancia de la determinacin de los grupos sanguneos y
su factor Rh, en una transfusin?
4. Cul es su grupo de sangre y su factor Rh?
5. Cuntos grupos sanguneos existen y cules son los ms conocidos?
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
1. Bird,
G.
W.G.
and
Cunningham,
J.
1977.
Agglutination
and
agglutinationinhibition. Techniques in Clinical Immunology. R.A. Ed.

Thompson, Black Scientific Publications. Oxford.
2. Dodd, B.E. and Lincoln, P.J. 1975. Blood Group Topics. John Turk Editor.
Year
3. Book Medical Publishers, Inc.Chicago.
4. Bryan, N. (1982). An introduction to immunohematology. 2a. ed.
Filadelfia: Saunders.
5. Roitt, I., Brostoff, J. y Male, David. (2000). INMUNOLOGIA. 5 Edicin.
Ediciones Harcourt. Espaa.
6. Stites, D. (1991). Inmunologa bsica y clnica. 7a. ed. Mxico: Editorial
El Manual Moderno.
7. Weir, D. (1990). Inmunologa. Mxico: Editorial El Manual Moderno.
8. Correa, D., Mandujano A., (2000) Manual de tcnicas modernas en
Inmunologa.
9. Teora y prctica. 1. Edicin. INDRE-SSA. Mxico .

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Fecha: 01/06/2013

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Seccin
Fecha: 27/07/2013

Cargo: Director del
Departamento
Fecha: 01/08/2013
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01/06/201
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ESQUEMA
METODOLOGA
1
Tubo tapa
lila con
EDTA
Rotular
Rotular
Depositar
Obtener
sangre
venosa
A, B, O
3 gotas
de sangre
Total:
Total: 3
3 ml
ml
4
Depositar
Depositar
3 gotas de
Antisuero A, B y
D
Homogeniz
ar
Con
palillos
Colocar
Determinar
Agitador
mecnic
o
Aglutinaci
n
REPORTAR

Laboratorio
Fecha: 01/06/2013

Bailon
Seccin
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Fecha: 01/08/2013
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01/06/201
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Pgina
s:
21 de 88
PRCTICA N 3 CDIGO: (IMN003)

PRUEBA RPIDA DE AGLUTINACIN O PLACA:
AGLUTINACIONES FEBRILES
AUTORES

OBJETIVOS
Determinar y cuantificar a travs de pruebas serolgicas, los ttulos de

anticuerpos contra antgenos bacterianos para evaluar la presencia de
enfermedades como fiebre tifoidea, brucelosis, entre otras; que se
caracterizan por provocar en el paciente un sndrome febril.
TIPO
Experimental
ACTIVIDAD
INTRODUCCION
Son un conjunto de pruebas que sirven para diagnosticar enfermedades que
causan fiebre. Se basan en que el suero del paciente se pone en contacto con
antgenos especficos. En este caso se utilizan suspensiones de Salmonellas o
Brucellas muertos. Si la muestra contiene los anticuerpos correspondientes se
producir una aglutinacin visible macroscpicamente.
Antgenos Febriles es un trmino referido a un grupo de suspensiones
bacterianas, representativo de un nmero de bacterias patgenas para la
especie humana y responsables de la aparicin de infecciones (brucelosis,
Laboratorio
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22 de 88
salmonelosis y ciertas rickettsiosis) que cursan con un cuadro febril en el

husped infectado. La mejor forma para establecer la etiologa de una
enfermedad infecciosa es el aislamiento e identificacin del agente causal de la
misma. Sin embargo, estos medios de diagnstico no son siempre de fcil
aplicacin y es ah donde radica la importancia del uso de las suspensiones
bacterianas en la deteccin de los anticuerpos presentes en el suero del
paciente (mtodo indirecto de diagnstico).
En el diagnstico clnico, los resultados obtenidos con el uso de los Antgenos
Febriles deben ser considerados siempre en relacin a los hallazgos clnicos y
otras pruebas de laboratorio.
Los antgenos febriles son:
Antgeno O (somtico) de Salmonella typhi.
Antgeno H (flagelar) de Salmonella paratyphi.
Antgeno flagelar de S. Paratyphi A.
Antgeno flagelar de S. Paratyphi B (b, 1 y 2).
MATERIALES
EQUIPOS
REACTIVOS
Palillos de madera
Agitador mecnico
Solucin salina (NaCl
Portas o placas de
rotatorio
de
0,9%)
Kit
de
antgenos
vidrio
velocidad variable
Pipetas de volumen
Bao
febriles
variable.
termorregulable
MATERIAL BIOLGICO
Muestra: suero claro, reciente.

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Toma de muestras

Transporte

envo si demora.
METODOLOGA
PRUEBA CUALITATIVA
1. Obtenga sangre venosa y separe el suero evitando la hemlisis.
2. Atemperar los reactivos.
3. Marcar en una placa de vidrio correctamente indicando el antgeno que
se est usando.
4. Colocar en una placa una gota (50 ul) de suero y agregar una gota (50
ul) de suspensin de Antgeno. Homogenizar con palillos. Luego con un

agitador mecnico durante 2 minutos.
5. Observar de inmediato con la ayuda de una luz adecuada, la aparicin
de cualquier signo de aglutinacin.
Reaccin positiva: Aglutinacin dbil o intensa, fcilmente visible
macroscpicamente.
Reaccin negativa: Suspensin uniforme sin cambio visible alguno, tal
como se presenta en el control negativo.
PRUEBA CUANTITATIVA
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1. Para cada muestra a analizar, pipetear 80, 40, 20, 10 y 5 l de suero en

cada uno de los crculos de la placa visualizadora.
80 l
40 l
PIPETEAR
20 l
10 l
5 l
2. Colocar 1 gota de Antgeno previamente agitado sobre cada gota de

suero.
3. Mezclar el suero y el Antgeno utilizando un palillo.
4. Debe emplearse un palillo distinto para cada dilucin de suero.
5. Colocar la placa sobre un agitador mecnico durante 2 minutos.
Como en la Prueba Cualitativa, el ttulo de la muestra corresponde a la mxima
dilucin que presenta reactividad.
Titulacin rpida en placa.- El ttulo se considerar la ltima dilucin que da
aglutinacin del 50% (++).
La interpretacin es la siguiente:
Paratfico A
1:40
Paratfico B
1:40
Tifico O
1:80
Tifico H
1:160
Brucella abortus
1:40
Proteus Ox-19
1:80

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25 de 88
FIEBRE TIFOIDEA: Ttulos de Ac. Mayores de 1:320 para Ag. Tfico O

y ms de 1:80 para Ag. Tfico H, ms los signos y sntomas clnicos
sugestivos de esta enfermedad.
SALMONELOSIS: Ttulos de Ac. Mayores de 1:320 para Ag. O y ms

de 1:80 en Ag. Paratfico A B, ms los signos y sntomas clnicos
sugestivos de esta enfermedad.
RICKETSIOSIS: Ttulos mayores de 1:320 para proteus ox 19, en este

caso se sugiere solicitar los Ac. Anti Ricketsia.
BRUCELOSIS: Cualquier Ttulo Huddleson, con Rosa de Bengala

positivo y los sntomas sugestivos.
VALORES DE REFERENCIA
Generalmente ttulos de 1:4 1:8 son sospechosos de enfermedad.

Slo ttulos mayores de 1:8 pueden considerarse probatorios de
diagnstico
de
enfermedad
cuando
estn
acompaados
de
la
sintomatologa clnica.
Ttulos mayores de 1:32, son concluyentes.
ALTERNATIVAS
Es importante considerar siempre algunos estudios de laboratorio adicionales
que aporten elementos de juicio con los cuales elaborar un diagnstico ms
slido.
CUESTIONARO
1. En qu se basa la prueba de reacciones febriles
2. Para qu nos sirve la prueba de reacciones febriles?
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26 de 88
3. Describir brevemente las enfermedades: fiebre tifoidea, paratifoidea, brucelosis,

infeccin por Rickettsias.
4. Por qu se dice que las reacciones febriles son poco especficas?
5. Qu otras pruebas se puede realizar en el paciente para verificar estas
enfermedades, y que adems sean pruebas ms especficas?
1. Bennett, C. (1998). CLINICAL SEROLOGY, pg. 145, Charles Thomas
Co.
2. Hamilton, M. y Rose, B. (1985). MANUAL DE DIAGNSTICO CLNICO.
Editorial Interamericana. Vol. 2 pp 362.
3. Linch, M., Mellor, D., Spare, M. e Inwood, H. (1997). MTODOS DE
LABORATORIO. Editorial Interamericana. Vol. 2 pp. 995-996.
4. REGLAS PRCTICAS PARA INTERPRETAR LOS RESULTADOS DE
LAS REACCIONES FEBRILES DE AGLUTINACIN. CLNICA Y
LABORATORIO. BOLETN DE LOS LABORATORIOS CLNICOS DE
PUEBLA. Vol. 13 No. 9, Septiembre 1995.
5. Zavala, Y., Nava, A., Guerra, J. y Quiroz, C. (1994). BRUCELOSIS.
INFECTIOUS DISEASE CLINICS OF NORTH AMERICA. Vol. 8 No. 1,
March.
6. http://www.linear.es/ficheros/archivos/318_2199300cas.pdf

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27 de 88
ESQUEMA PRUEBA CUALITATIVA

1
Atempera
rr
Obtener
sangre
venosa
Centrifuga
rr
Separar el
suero
Tubo tapa
roja sin
anticoagulant
e
Reactivos
Total: 3 ml
Homogeniz
Homogeniz
ar
Colocar
Marcar el
antgeno que se
usa
50l de
suero
50l de
antgeno
Con
palillos
11
10
Colocar
Colocar
Observar
REPORTAR
Agitador mecnico
Aglutinaci
n
2 minutos

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Fecha: 01/06/2013

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28 de 88
ESQUEMA
PRUEBA CUANTITATIVA
Para
c/muestra:
pipetear
80, 40, 20 y 5
ul SUERO
Homogeniz
ar
1 gota de
ANTIGENO
en c/muestra
Palillos
Colocar
Agitador
mecnic
o
Observa
r
2
minutos
REPORTAR
Aglutinaci
n

Laboratorio
Fecha: 01/06/2013

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Fecha: 27/07/2013

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s:
29 de 88

PCR- LTEX: DETERMINACIN DE LA PROTENA CREACTIVA PRUEBA EN PORTA
AUTORES
OBJETIVOS
Realizar la determinacin serolgica, para la identificacin de Protena C- Reactiva,
tanto cualitativa como cuantitativamente.

Aplicar correctamente la tcnica y tener la capacidad de interpretar el resultado
obtenido.
TIPO:
Experimental
ACTIVIDAD
INTRODUCCION:
La prueba de PCR ltex se basa en una reaccin de aglutinacin de las
molculas biolgicamente inertes de poliestireno ltex
sensibilizadas con
anticuerpos altamente purificados de anti-protena C-reactiva, obtenida de

animales por medio de inmunizaciones. La PCR presente en el suero del
paciente sirve como antgeno y cuando este suero se mezcla con el ltex
sensibilizado se produce una aglutinacin detectable macroscpicamente. La
aglutinacin es visible a una concentracin de PCR en suero igual o superior a
6 mg/L.
Laboratorio
Fecha: 01/06/2013

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Seccin
Fecha: 27/07/2013

Cargo: Director del
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Fecha: 01/08/2013
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CODIGO:
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01/06/201
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s:
30 de 88
La protena C-reactiva es una protena de fase aguda presente normalmente en

el suero, que aumenta significativamente en una gran diversidad de lesiones
malignas. La PCR contribuye a la defensa
PCR Aumentada
Fiebre reumtica
Espondilitis anquilosante
Infarto de miocardio
inmunolgica inespecfica de varias formas,
Carcinomas
entre
Inflamaciones agudas
Artritis reumatoide
tisulares, infecciones bacterianas y vricas,

inflamaciones, as como en las neoplasias
ellas,
mediante
complemento
la
la
activacin
aceleracin
de
del
la
fagocitosis.
En el diagnstico clnico, el resultado de la
Infecciones bacterianas
Tras cirugas
determinacin de la PCR debe ser considerado siempre en relacin a los

hallazgos clnicos y otras pruebas de laboratorio.
MATERIALES
Micropipetas
de
volumen variable
Palillos
Placa con fondo
oscuro
de
EQUIPOS
Agitador
REACTIVOS
mecnico Kit para PCR
rotatorio de velocidad
0,9%, para tcnica
variable
Cronmetro
semi-cuantitativa)
seis
divisiones
MATERIAL BIOLGICO
Toma de muestras


Laboratorio
Fecha: 01/06/2013

Bailon
Seccin
Fecha: 27/07/2013

Cargo: Director del
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Fecha: 01/08/2013
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01/06/201
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s:
31 de 88
Transporte

envo se demora.
METODOLOGA
Preparacin de los reactivos
Mezclar con suave agitacin antes de usar. El ltex debe presentar aspecto
uniforme.
PRUEBA CUALITATIVA
1. Equilibrar reactivos y muestras a temperatura ambiente.
2. Resuspender el vial de ltex con suavidad. Aspirar y vaciar varias veces
el cuentagotas para asegurar su homogeneidad antes del ensayo.
3. Depositar 1 gota (50 L) de suero problema en uno de los crculos de la
tarjeta visualizadora. En crculos adicionales, depositar 1 gota de control
positivo y 1 gota de control negativo.
4. Aadir a cada crculo 1 gota del Reactivo PCR-Ltex, prxima a la
muestra a analizar.
5. Efectuar la mezcla con ayuda de un palillo desechable, extendindola de
forma que cubra por completo la superficie interior de cada anillo.
Emplear palillos distintos para cada mezcla.
6. Mover la tarjeta con agitador rotatorio (100 r.p.m.) durante 2 minutos.
Reaccin
Aglutinacin

Laboratorio
Fecha: 01/06/2013
dbil
intensa, Nivel

Bailon
Seccin
Fecha: 27/07/2013
de
PCR
igual

Cargo: Director del
Departamento
Fecha: 01/08/2013
positiva
LA SALUD
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CODIGO:
LAB_BCI_v01_2014
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01/06/201
desde: 3
Pgina
s:
fcilmente
32 de 88
visible superior a 6 mg/L en la
macroscpicamente.
muestra.
Reaccin
Suspensin uniforme sin cambio Nivel de PCR inferior a 6
negativa
visible alguno, tal como se presenta mg/L en la muestra.

en el control negativo.
Resultados
PRUEBA CUANTITATIVA
1. Para cada muestra a analizar se utilizan 6 crculos de una tarjeta
pipeteando 50 L de solucin salina (0,9%) en cada uno de ellos.
2. Pipetear sobre el diluyente del primer crculo 50 L de muestra, y
empleando
la
misma
punta,
mezclar
mediante
aspiraciones
expulsiones repetidas, transfiriendo 50 L de la mezcla resultante sobre

el diluyente del segundo crculo.

Laboratorio
Fecha: 01/06/2013

Bailon
Seccin
Fecha: 27/07/2013

Cargo: Director del
Departamento
Fecha: 01/08/2013
LA SALUD
CLNICA E INMUNOLOGA
CODIGO:
LAB_BCI_v01_2014
Vlido
01/06/201
desde: 3
Pgina
s:
33 de 88
3. Continuar con la serie de dobles diluciones hasta el sexto crculo,
desechando los 50 L provenientes del mismo. Las diluciones finales

obtenidas sern:
DILUCIONES
1:2 1:4 1:8
1:16
1:32
1:64
4. Ensayar cada una de las diluciones tal como se describe en los pasos 47 de la Prueba cualitativa.
En el mtodo semicuantitativo se define el ttulo como la dilucin mayor que da
resultado positivo.
La concentracin aproximada de PCR en la muestra del paciente se obtiene
aplicando la siguiente frmula:
6 mg/l x Ttulo de PCR = PCR mg/L
Ejemplo: la muestra presenta un ttulo de 1:2.
Su concentracin de PCR es de 2 x 6 = 12 mg/l.
Valores de Ttulos de PCR
Hasta 6 mg/L
CUESTIONARIO
1. Cul es la base del prueba de PCR ltex y para qu sirve?
2. Qu es la artritis reumatoide y que relacin guarda con la PCR?
Laboratorio
Fecha: 01/06/2013

Bailon
Seccin
Fecha: 27/07/2013

Cargo: Director del
Departamento
Fecha: 01/08/2013
LA SALUD
CLNICA E INMUNOLOGA
CODIGO:
LAB_BCI_v01_2014
Vlido
01/06/201
desde: 3
Pgina
s:
34 de 88
3. Explique la relacin existente entre la PCR y el corazn.

4. En qu tipo de enfermedades la Protena C Reactiva se encuentra
elevada?
5. Cul es la funcin de la Protena C Reactiva dentro de nuestro
organismo?
1. Young,
D.S.
(1995).
EFFECTS
OF
DRUGS
ON
CLINICAL
LABORATORY TESTS. 4th Edition. AACC Press.

2. Lothar, T. (1998). CLINICAL LABORATORY DIAGNOSTICS: USE AND
ASSESSMENT OF CLINICAL LABORATORY RESULTS, English edition.
3. Mandel., Bennett. and Dolin. (1997). ENFERMEDADES INFECCIOSAS
PRINCIPIOS Y PRCTICAS. Editorial Panamericana, 4 edicin; Madrid,
Tubo tapa
roja sin
Espaa.
anticoagulant
4. http://www.cromatest.mx/Insertos/Serodiagnostico%20Reumatoide/PCR
e
%20LATEX.pdf
Obtener
5. sangre
http://www.linear.es/ficheros/archivos/2410025_cas_.pdf
sangre
venosa
Pipeta
Pasteur
Total: 3
ml
ml
Control positivo
Micropipe
ta
40l (1
gota)
Control
negativo
negativo
Homogeniz
ar
PCR
Ltex
40l
40l de
de
suero
Reactivo
PCR
PCR
Ltex
Centrifuga
rr

Laboratorio
Fecha: 01/06/2013

Bailon
Seccin
40l (1
Fecha: 27/07/2013
gota)
Atempera
r
Reactivos
Homogeniz
Homogeniz
ar
Colocar
Cargo: Director del

Departamento
Fecha: 01/08/2013
Con
Palillos
En cada
una de las
muestras
Recoger
el suero
suero
el
Agitador mecnico
80-100rpm por 2
min
LA SALUD
CLNICA E INMUNOLOGA
CODIGO:
LAB_BCI_v01_2014
Vlido
01/06/201
desde: 3
Pgina
s:
40l (1
gota)
35 de 88
Observar
REPORTAR
Aglutinaci
n
Microscopio en caso
de reaccin dbil
ESQUEMA PRUEBA CUANTITATIVA

1
Para c/muestra: 6
crculos de
tarjeta
Pipetear 50 l
(sol. salina
0,9%)
Pipetear sobre el
diluyente del 1
crculo 50 L de
muestra
Transferir 50 L
de la mezcla
resultante sobre
el diluyente del
2 crculo
50 l
muestra
Elaborado: Andrea
Con la misma
Mediante
aspiraciones
Vintimilla Revisin
y
Bailon
expulsiones
Laboratorio
Fecha: 01/06/2013
50 l mezcla
resultante
tcnica: Natalia
Seccin
Fecha: 27/07/2013

Cargo: Director del
Departamento
Fecha: 01/08/2013
LA SALUD
CLNICA E INMUNOLOGA
CODIGO:
LAB_BCI_v01_2014
Vlido
01/06/201
desde: 3
Pgina
s:
36 de 88
Continuar dobles
diluciones hasta el
sexto crculo,
desechando los 50
L del mismo
Diluciones finales:
1:2, 1:4, 1:8, 1:16,
1:32, 1:64.
Reactivo
Reactivo
PCR
Ltex
Ltex
Aadir a c/
crculo 40l
(1 gota)
Coloca
2
minutos
Homogeniz
ar
Agitador
mecnic
o
Observa
r
REPORT
AR
Aglutinaci
n
Palillos

FR-LTEX: DETERMINACIN DE FACTORES
REUMATOIDEOS PRUEBA EN PORTA
AUTORES
OBJETIVOS

Laboratorio
Fecha: 01/06/2013

Bailon
Seccin
Fecha: 27/07/2013

Cargo: Director del
Departamento
Fecha: 01/08/2013
LA SALUD
CLNICA E INMUNOLOGA
CODIGO:
LAB_BCI_v01_2014
Vlido
01/06/201
desde: 3
Pgina
s:
37 de 88
Realizar la determinacin serolgica, para la identificacin de Factor Reumatoideo,

obtenido.
TIPO
Experimental
ACTIVIDAD
INTRODUCCION
El FR-Ltex Test es una prueba rpida de aglutinacin, que se basa en la
determinacin que se efecta ensayando una suspensin de partculas de ltex
recubiertos con gamma globulina humana frente a los sueros problema. La
presencia o ausencia de aglutinacin visible es indicativa de la presencia o
ausencia de FR en las muestras ensayadas.
Los factores reumatoideos son un grupo de anticuerpos, mayoritariamente de
la clase IgM, dirigidos contra determinantes de la porcin Fc de la
inmunoglobulina
IgG
del
paciente.
Aunque
presentes
en
diversas
enfermedades se hallan elevados principalmente en pacientes con artritis

reumatoidea.
En el diagnstico clnico, los resultados de la determinacin de los factores
reumatoideos deben ser considerados siempre en relacin a los hallazgos
clnicos y otras pruebas de laboratorio.
MATERIALES Y MTODOS

Laboratorio
Fecha: 01/06/2013

Bailon
Seccin
Fecha: 27/07/2013

Cargo: Director del
Departamento
Fecha: 01/08/2013
MATERIALES
Palillos
Placa con
oscuro
Pgina
s:
mecnico
rotatorio
de
seis
divisiones
Micropipetas
CODIGO:
LAB_BCI_v01_2014
Vlido
01/06/201
desde: 3
EQUIPOS
Agitador
fondo
de
LA SALUD
CLNICA E INMUNOLOGA
38 de 88
REACTIVOS
Kit para FR
velocidad variable
Cronmetro
0,9%, para tcnica semicuantitativa)
de
volumen variable
MATERIAL BIOLGICO
1. Muestra (suero claro, reciente)
Toma de muestras

Transporte
envo se demora.
METODOLOGA
Mezclar el reactivo con suave agitacin antes de usar. El ltex debe presentar
aspecto uniforme.
PRUEBA CUALITATIVA
1. Equilibrar reactivos y muestras a temperatura ambiente.
2. Resuspender el antgeno con suavidad. Aspirar y vaciar varias veces el
cuentagotas para asegurar su homogeneidad antes del ensayo.
Laboratorio
Fecha: 01/06/2013

Bailon
Seccin
Fecha: 27/07/2013

Cargo: Director del
Departamento
Fecha: 01/08/2013
LA SALUD
CLNICA E INMUNOLOGA
CODIGO:
LAB_BCI_v01_2014
Vlido
01/06/201
desde: 3
Pgina
s:
39 de 88
3. Depositar 1 gota (50 L) de suero problema en uno de los crculos de la

4. Aadir a cada crculo 1 gota de Reactivo FR-Ltex, prxima a la muestra
a analizar.
5. Efectuar la mezcla con ayuda de un palillo desechable, extendindola de
6. Mover la tarjeta con agitador rotatorio (100 r.p.m.) durante 2 minutos.
Reaccin negativa: Suspensin uniforme sin cambio visible alguno, tal como se
presenta en el control negativo.
Reaccin
positiva:
Aglutinacin
dbil
intensa,
fcilmente
visible
macroscpicamente.
RESULTADOS
PRUEBA CUANTITATIVA

Laboratorio
Fecha: 01/06/2013

Bailon
Seccin
Fecha: 27/07/2013

Cargo: Director del
Departamento
Fecha: 01/08/2013
LA SALUD
CLNICA E INMUNOLOGA
CODIGO:
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Vlido
01/06/201
desde: 3
Pgina
s:
40 de 88
1. Para cada muestra a analizar se utilizan 6 crculos de una tarjeta

empleando la misma punta, mezclar mediante aspiraciones y expulsiones
repetidas, transfiriendo 50 L de la mezcla resultante sobre el diluyente
del segundo crculo.
3. Continuar con la serie de dobles diluciones hasta el sexto crculo,
obtenidas sern: 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64.
DILUCIONES
1:2 1:4
1:8 1:16
1:32 1:64
4. Ensayar cada una de las diluciones tal como se describe en los pasos 4-7
de la Prueba cualitativa.
El titulo se expresa como el reciproco de la dilucin ms alta que conduzca a
una aglutinacin macroscpica.
La tasa aproximada (UI/mL) de FR presentes en la muestra puede obtenerse
multiplicando la unidad mnima detectable (sensibilidad analtica) por el ttulo de
la ltima dilucin positiva.
La concentracin aproximada de FR en la muestra del paciente se obtiene

Laboratorio
Fecha: 01/06/2013
8 x Ttulo de FR =
UI/mL

Bailon
Seccin
Fecha: 27/07/2013

Cargo: Director del
Departamento
Fecha: 01/08/2013
LA SALUD
CLNICA E INMUNOLOGA
CODIGO:
LAB_BCI_v01_2014
Vlido
01/06/201
desde: 3
Pgina
s:
41 de 88
Ej. Si se trata de la titulacin 1/4, el titulo se estima a 4 x 8= 32 Ul/mL

Valores de Ttulos de FR
Personas sanas
Hasta 8 UI/mL
CUESTIONARIO
1.
2.
3.
4.
5.
Cul es el fundamento de la prueba FR Ltex?

Para qu nos sirve la prueba de FR Ltex?
Qu son los factores reumatoideos?
Es suficiente un anlisis de FR Ltex para diagnosticar a un paciente?
Qu tipo de muestra se utiliza para el ensayo de FR Ltex?
BIBLIOGRAFIA
1. Christian, C. RHEUMATOID FACTORS IN: LABORATORY DIAGNOSTIC
PROCEDURES IN THE RHEUMATIC DISEASES. 2nd ed. Cohen AS
(ed).
2. Evan, D. (1975). RHEUMATOID ARTHRITIS-A REVIEW. ASCP, Chicago.
p.21.
3. Waaler, M. y Toone, E. (1998). ARTHRITIS RHEUM. 4: 47.
4. Young, D. (1995). EFFECTS OF DRUGS ON CLINICAL LABORATORY
TESTS. 4th Edition. AACC Press.

Laboratorio
Fecha: 01/06/2013

Bailon
Seccin
Fecha: 27/07/2013

Cargo: Director del
Departamento
Fecha: 01/08/2013
LA SALUD
CLNICA E INMUNOLOGA
CODIGO:
LAB_BCI_v01_2014
Vlido
01/06/201
desde: 3
Pgina
s:
42 de 88
Tubo tapa
roja sin
anticoagulant
e
Obtener
sangre
sangre
venosa

Pipeta
Pasteur
Total: 3 ml
Control
Control positivo
positivo
Micropipet
a
FR Ltex
40l (1
gota)
Control
Control negativo
negativo
Homogeniz
Homogeniz
ar
Atempera
Atempera
r
Recoger el
suero
Reactivos
40l
40l de
de
suero
Reactivo
FR Ltex
Ltex
FR

40l (1Bailon
gota) Cargo: Responsable de
Laboratorio
Seccin
Fecha: 01/06/2013
Fecha: 27/07/2013
En cada
una de las
muestras
Homogeniz
Homogeniz
ar
Colocar

Palillo
Cargo:
s
Director
delmecnico
Agitador
80-100rpm por 2
Departamento
min
Fecha: 01/08/2013
LA SALUD
CLNICA E INMUNOLOGA
CODIGO:
LAB_BCI_v01_2014
Vlido
01/06/201
desde: 3
Pgina
s:
43 de 88
Observar
REPORTAR
Aglutinaci
n
En caso de
reaccin dbil
ESQUEMA
PRUEBA CUANTITATIVA
1
2
Pipetear 50 l
(sol. salina
0,9%)
Para
Para c/muestra:
c/muestra: 6
6
crculos de
tarjeta
tarjeta
3
Pipetear sobre el
diluyente del 1
crculo 50 L de
muestra

Laboratorio
Fecha: 01/06/2013
50 l
muestra
4
Con la misma
punta
Transferir 50 L
de la mezcla
resultante sobre
el diluyente del
segundo crculo
Mediante
aspiraciones y
expulsiones Aprob:
Natalia
repetidas
Revisin tcnica:
Bailon
Seccin
Fecha: 27/07/2013
Jana Bobokova
Cargo: Director del

Departamento
Fecha: 01/08/2013
LA SALUD
CLNICA E INMUNOLOGA
CODIGO:
LAB_BCI_v01_2014
Vlido
01/06/201
desde: 3
Pgina
s:
Continuar dobles
diluciones hasta el
sexto crculo,
desechando los 50
L del mismo
Homogeniz
ar
Palillos
Diluciones finales:
1:2, 1:4, 1:8, 1:16,
1:32, 1:64.
8
Colocar
Agitador
mecnic
o
44 de 88
En cada
una de las
muestras
Reactivo
FR Ltex
40l (1
gota)
2
minutos
Observa
r
REPORT
AR
Aglutinaci
n

ASLO-LTEX: DETERMINACIN DE ANTIESTREPTOLISINA O PRUEBA EN PORTA
AUTORES
OBJETIVOS
Realizar la determinacin serolgica, para la identificacin de Anti estreptolisina O,


Laboratorio
Fecha: 01/06/2013

Bailon
Seccin
Fecha: 27/07/2013

Cargo: Director del
Departamento
Fecha: 01/08/2013
LA SALUD
CLNICA E INMUNOLOGA
CODIGO:
LAB_BCI_v01_2014
Vlido
01/06/201
desde: 3
Pgina
s:
45 de 88

obtenido.
TIPO
Experimental
ACTIVIDAD
INTRODUCCION
El ASLO-Ltex Test es una prueba rpida de aglutinacin en porta para la
deteccin directa y la semi-cuantificacin de niveles clnicamente significativos
de anticuerpos anti-estreptolisina O (ASLO) en suero.
La determinacin se efecta ensayando una suspensin de partculas de ltex
recubiertos con estreptolisina frente a los sueros problema. La presencia o
ausencia de aglutinacin visible es indicativa de la presencia o ausencia de
ASLO en las muestras ensayadas a niveles significativos.
Las estreptolisinas son enzimas hemolticas producidas por la mayora de los
estreptococos del grupo A, destruyen la membrana de los eritrocitos
ocasionando la hemlisis.
Como respuesta a la infeccin por estreptococos hemolticos de los grupos A,
C y G, productores de estreptolisina O (SLO), una protena extracelular de
carcter enzimtico y con acusadas propiedades antignicas, se produce una
elevacin de la tasa de anticuerpos anti-estreptolisina O (ASLO) que pueden
ser determinados en el laboratorio. La investigacin inmunoqumica de estos
anticuerpos especficos contra los productos metablicos de los estreptococos
proporciona una informacin valiosa para el diagnstico de infecciones
provocadas por estreptococos (fiebre reumtica, glomrulonefritis).
Laboratorio
Fecha: 01/06/2013

Bailon
Seccin
Fecha: 27/07/2013

Cargo: Director del
Departamento
Fecha: 01/08/2013
LA SALUD
CLNICA E INMUNOLOGA
CODIGO:
LAB_BCI_v01_2014
Vlido
01/06/201
desde: 3
Pgina
s:
46 de 88
En el diagnstico clnico, los resultados de la determinacin de los anticuerpos

anti-estreptolisina O deben ser considerados siempre en relacin a los
hallazgos clnicos y otras pruebas de laboratorio.
MATERIALES Y MTODOS
MATERIALES
Palillos
Placa con
oscuro
EQUIPOS
REACTIVOS
Agitador mecnico Kit para ASLO
fondo
rotatorio
de Solucin salina (NaCl
de
seis
divisiones
Micropipetas
de
velocidad variable
Cronmetro
0,9%, para tcnica semicuantitativa)
volumen variable
MATERIAL BIOLGICO
2. Muestra (suero claro, reciente)
Toma de muestras

Transporte
envo se demora.
METODOLOGA

Laboratorio
Fecha: 01/06/2013

Bailon
Seccin
Fecha: 27/07/2013

Cargo: Director del
Departamento
Fecha: 01/08/2013
LA SALUD
CLNICA E INMUNOLOGA
CODIGO:
LAB_BCI_v01_2014
Vlido
01/06/201
desde: 3
Pgina
s:
47 de 88
Mezclar el reactivo con suave agitacin antes de usar. El ltex debe presentar
aspecto uniforme.
PRUEBA CUALITATIVA
1) Equilibrar reactivos y muestras a temperatura ambiente.
2) Resuspender el antgeno con suavidad. Aspirar y vaciar varias veces el
cuentagotas para asegurar su homogeneidad antes del ensayo.
3) Depositar 1 gota (50 L) de suero problema en uno de los crculos de la
4) Aadir a cada crculo 1 gota de Antgeno ASLO-Ltex, prxima a la
muestra a analizar.
5) Efectuar la mezcla con ayuda de un palillo desechable, extendindola de
6) Mover la tarjeta con agitador rotatorio (100 r.p.m.) durante 2 minutos.
7) Observar de inmediato con la ayuda de una luz adecuada, la aparicin
Reaccin negativa: Suspensin uniforme sin cambio visible alguno, tal como se
presenta en el control negativo.
Reaccin
positiva:
Aglutinacin
dbil
intensa,
fcilmente
visible
macroscpicamente.
PRUEBA CUANTITATIVA

Laboratorio
Fecha: 01/06/2013

Bailon
Seccin
Fecha: 27/07/2013

Cargo: Director del
Departamento
Fecha: 01/08/2013
LA SALUD
CLNICA E INMUNOLOGA
CODIGO:
LAB_BCI_v01_2014
Vlido
01/06/201
desde: 3
Pgina
s:
48 de 88
1) Para cada muestra a analizar se utilizan 4 crculos de una tarjeta

pipeteando 50 L de solucin salina (0,9%) en los tres primeros y 25 L
en el cuarto.
2) Pipetear sobre el diluyente del primer crculo 50 L de muestra, y
empleando
la
misma
punta,
mezclar
mediante
aspiraciones
expulsiones repetidas, transfiriendo 50 L de la mezcla resultante al

tercer crculo. Mezclar de nuevo y desechar 50L.
3) Pipetear sobre el segundo crculo 25 L de muestra y empleando la
misma punta, mezclar con el diluyente en la forma indicada. Transferir
25 L de la mezcla sobre el diluyente del cuarto crculo y mezclar. Las
diluciones finales obtenidas sern: 1:2, 1:3, 1:4, 1:6.
DILUCIONES
1:2
1:3
1:4 1:6
4) Ensayar cada una de las diluciones tal como se describe en los pasos 47 de la Prueba cualitativa.
Como en la Prueba cualitativa. El ttulo de la muestra corresponde a la mxima
dilucin que presenta reactividad. La dilucin siguiente debe ser negativa.
La concentracin aproximada de ASO en la muestra del paciente se obtiene
200 x Ttulo de ASO =
En el mtodo semicuantitativo se define el ttulo como la dilucin mayor que da
resultado positivo.

Laboratorio
Fecha: 01/06/2013

Bailon
Seccin
Fecha: 27/07/2013

Cargo: Director del
Departamento
Fecha: 01/08/2013
LA SALUD
CLNICA E INMUNOLOGA
CODIGO:
LAB_BCI_v01_2014
Vlido
01/06/201
desde: 3
Pgina
s:
49 de 88
Valores de Ttulos de ASLO
Persona adulta sana
200 Ul/mL
Nios de edad escolar o adultos Hasta 250 UI/mL

jvenes
CUESTIONARIO
1. En qu se basa la prueba de antiestreptolisina y para qu sirve sta?
2. Frente a qu infeccin se produce estrptolisina O?
3. Para el diagnostico de qu enfermedades se utiliza la prueba
Antiestreptolisina O?
4. Cul es el valor normal de antiestrptolisina O en personas sanas?
5. Qu tipo de muestra se debe utilizar para realizar la determinacin de
Antiestreptolisina O?
BIBLIOGRAFIA:
1. Bisno, A. (1990). PRINCIPLES AND PRACTICE OF INFECTIOUS
DISEASES. 3rd ed. (Mandell GL et al. eds.), Churchill Livingstone, NY,
176-177.
2. Klein, G. (1976). MANUAL OF CLINICAL IMMUNOLOGY. Chapter 33,
American Society for Microbiology, Washington D.C.
3. Young, D. (1995). Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests. 4 th
Edition. AACC Press.
4. Schmidt, K., Mueller, C. y Beckmann, A. (1970). RHEUMATOL. 29.
5. http://www.cromatest.mx/Insertos/Serodiagnostico
%20Reumatoide/ASLO%20LATEX.pdf

Laboratorio
Fecha: 01/06/2013

Bailon
Seccin
Fecha: 27/07/2013

Cargo: Director del
Departamento
Fecha: 01/08/2013
LA SALUD
CLNICA E INMUNOLOGA
CODIGO:
LAB_BCI_v01_2014
Vlido
01/06/201
desde: 3
Pgina
s:
50 de 88
ESQUEMA
PRUEBA CUALITATIVA
1
Atempera
r
Reactivos
y
muestras
2
Resuspend
er
er
4
Control positivo
Micropipet
a
50l (1
gota)
ASLO
Ltex
50l
50l de
de
suero
7
Reactivo ASLO
Ltex
Ltex
Control
Control negativo
negativo
Homogeniz
Homogeniz
ar
50l (1
gota)

Laboratorio
Fecha: 01/06/2013

Bailon
Seccin
Fecha: 27/07/2013
50l (1Aprob:
gota)
Jana Bobokova
Palillos
Cargo: Director del

Departamento
Fecha: 01/08/2013
LA SALUD
CLNICA E INMUNOLOGA
CODIGO:
LAB_BCI_v01_2014
Vlido
01/06/201
desde: 3
Pgina
s:
51 de 88
9
Colocar
Observar
Observar
10
REPORTAR
Agitador
mecnico
100rpm por 2
min
Aglutinaci
n
En caso de
reaccin
dbil
ESQUEMA
PRUEBA CUANTITATIVA
2
Pipetear 50 l
(sol. salina
0,9%) en los 3
primeros y 25
L en el cuarto
Para c/muestra: 4
crculos de
tarjeta
3
Transferir 50 L
de la mezcla
resultante sobre
el tercer crculo
50 l
muestra
Mezclar de
nuevo y
desechar 50
ul

Laboratorio
Fecha: 01/06/2013
Pipetear sobre el
2 25 ul de
muestra y
Mezclar

Bailon
Seccin
Fecha: 27/07/2013
Pipetear 50
L de
muestra
Con la misma
punta
Mediante
aspiraciones y
expulsiones
repetidas
5
Transferir 25 L
de la mezcla
resultante sobre
el 4 crculo y
mezclar
Diluciones finales:
1:2, 1:3, 1:4, 1:6

Cargo: Director del
Departamento
Fecha: 01/08/2013
LA SALUD
CLNICA E INMUNOLOGA
CODIGO:
LAB_BCI_v01_2014
Vlido
01/06/201
desde: 3
Pgina
s:
Homogeniz
ar
Colocar
Reactivo
ASLO
Ltex
Palillos
40l (1
gota)
8
6
Colocar
Agitador
mecnic
o
52 de 88
9
Observa
r
10
REPORT
AR
Aglutinaci
n
2
minutos

DIAGNOSTICO SEROLGICO DEL ANTGENO VRDL
DETERMINACIN DE REAGINAS PLASMATICAS
PRUEBA EN PORTA
AUTORES
OBJETIVOS
Realizar la determinacin serolgica, para la identificacin de anticuerpos contra
Treponema pallidum.
obtenido.

Laboratorio
Fecha: 01/06/2013

Bailon
Seccin
Fecha: 27/07/2013

Cargo: Director del
Departamento
Fecha: 01/08/2013
LA SALUD
CLNICA E INMUNOLOGA
CODIGO:
LAB_BCI_v01_2014
Vlido
01/06/201
desde: 3
Pgina
s:
53 de 88
TIPO
Experimental
ACTIVIDAD
INTRODUCCION
La prueba de VDR es una prueba de deteccin para sfilis. Se basa en que las
"reaginas", presentes en individuos infectados por T. pallidum se detectan en
suero por la reaccin con un antgeno cardiolipnico purificado y estabilizado. Si
la muestra contiene reagina, sta se unir al antgeno produciendo una
floculacin visible en el microscopio.
La sfilis es una enfermedad causada por la infeccin con la bacteria
Treponema pallidum y que puede ser transmitida congnitamente o por
contacto sexual. Ensayos no treponmicos, como la prueba del VDRL
(Venereal Disease Research Laboratory), permiten un rpido muestreo de
poblaciones y el inmediato tratamiento de pacientes con signos de positividad.
Las
pruebas
No
Treponemales
incluyen
precipitacin,
floculacin
combinacin de mtodos complementarios que utilizan antgenos derivados de

una extraccin animal (por ejemplo, cardiolipina, lecitina colesterol) en
solucin de alcohol.
MATERIALES Y MTODOS
MATERIALES

Laboratorio
Fecha: 01/06/2013
EQUIPOS
REACTIVOS

Bailon
Seccin
Fecha: 27/07/2013

Cargo: Director del
Departamento
Fecha: 01/08/2013
LA SALUD
CLNICA E INMUNOLOGA
CODIGO:
LAB_BCI_v01_2014
Vlido
01/06/201
desde: 3
Pgina
s:
Placa para reaccin Agitador mecnico

Palillos de madera
rotatorio
de
Micropipetas
de
velocidad variable
volumen variable
Cronmetro
Microscopio (100x)
Kit para VDRL

Solucin salina
54 de 88
(NaCl
0,9%).
MATERIAL BIOLGICO
Muestra (suero claro, reciente)
Toma de muestras

Transporte

envo se demora.
PROCEDIMIENTO
PRUEBA CUALITATIVA
1.
2.
3.
4.
5.
Obtener 3.0 mL de sangre por puncin venosa.

Centrifugar y separar el suero.
Equilibrar reactivos y muestras a temperatura ambiente.
En un anillo de la placa cncava deposite 5 L de suero problema.
En anillos diferentes colocar una gota de suero control positivo y otra por
separado una gota de control negativo, extender sobre la superficie del
anillo.
6. Aadir una gota del antgeno en suspensin estabilizado previamente
resuspendido,
(resuspender
con
suavidad
para
asegurar
su
homogeneidad) en cada una de las muestras.

Laboratorio
Fecha: 01/06/2013

Bailon
Seccin
Fecha: 27/07/2013

Cargo: Director del
Departamento
Fecha: 01/08/2013
LA SALUD
CLNICA E INMUNOLOGA
CODIGO:
LAB_BCI_v01_2014
Vlido
01/06/201
desde: 3
Pgina
s:
55 de 88
7. Homogenizar con palillos diferentes cada pocillo.

8. Colocar la placa sobre un agitador mecnico a 180 rpm durante 4
minutos.
9. Observar visualmente y confirmar con la ayuda de un microscopio
(100x), la aparicin de cualquier signo de floculacin en las muestras
ensayadas.
Reaccin negativa: Las partculas permanecen en suspensin homognea,
sin presencia visible de agregados.
Reaccin positiva: Un resultado positivo se manifiesta por la evidencia de un
fenmeno de floculacin, que puede variar entre una ligera pero claramente
definida agregacin y una marcada e intensa.
El examen con resultado positivo puede indicar sfilis. Si el examen es positivo,
el siguiente paso es confirmar los resultados con examen FTA-ABS, que es un
examen ms especfico para la sfilis.
La capacidad del examen VDRL para detectar sfilis depende de la etapa de la
enfermedad. La sensibilidad del examen para detectar la sfilis se acerca al
100% durante las etapas intermedias y es menos sensible durante las etapas
ms tempranas y tardas.
PRUEBA CUANTITATIVA
Las muestras positivas pueden ser tituladas. El ttulo se define como la dilucin
mayor que da resultado positivo.

Laboratorio
Fecha: 01/06/2013

Bailon
Seccin
Fecha: 27/07/2013

Cargo: Director del
Departamento
Fecha: 01/08/2013
LA SALUD
CLNICA E INMUNOLOGA
CODIGO:
LAB_BCI_v01_2014
Vlido
01/06/201
desde: 3
Pgina
s:
56 de 88
1. Para cada muestra a analizar se utilizan 5 crculos de una placa

empleando
la
misma
punta,
mezclar
mediante
aspiraciones
expulsiones repetidas, transfiriendo 50 L de la mezcla resultante sobre

el diluyente del segundo crculo.
3. Continuar con la serie de dobles diluciones hasta el quinto crculo,
obtenidas sern: 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32.
DILUCIONES
1:4 1:8 1:16
1:2
1:32
4. Ensayar cada una de las diluciones tal como se describe en La prueba

cualitativa.
Examinar mediante microscopio ptico (100 x) la presencia o ausencia de
aglutinacin inmediatamente despus de retirar el porta del agitador.
Tipo de aglutinacin
Lectura
Resultado
Agregados grandes o
Reactivo
Agregados pequeos
Reactivo dbil
Ningn agregado o ligera
No reactivo
medianos
rugosidad

Laboratorio
Fecha: 01/06/2013

Bailon
Seccin
Fecha: 27/07/2013

Cargo: Director del
Departamento
Fecha: 01/08/2013
LA SALUD
CLNICA E INMUNOLOGA
CODIGO:
LAB_BCI_v01_2014
Vlido
01/06/201
desde: 3
Pgina
s:
57 de 88
Durante la sfilis primaria y terciaria, el resultado del examen puede ser falso
negativo.
Un examen negativo es normal y significa que no se detectaron anticuerpos
contra la sfilis. La prueba de deteccin es ms probable que sea positiva en la
sfilis secundaria y latente.
Valores de VDRL
Resultado normal
Negativo
CUESTIONARIO
1.
2.
3.
4.
5.
En qu se basa la prueba para VDRL?

Qu enfermedad se puede determinar con la prueba VDRL?
Describa la bacteria que produce la infeccin de sfilis.
Cul es la diferencia entre aglutinacin y floculacin?
La etapa de la enfermedad de sfilis tiene que ver con los resultados
de la prueba de VDRL?
BIBLIOGRAFIA
1. Centers for Disease Control and Prevention, Workowski KA, Berman
SM. Diseases characterized by genital ulcers. Sexually transmitted
diseases treatment guidelines 2006. MMWR Morb Mortal Wkly Rep.
2006 Aug 4;55(RR-11):14-30.
2. Hook EW III. Syphilis. In: Goldman L, Ausiello D, eds. Cecil Medicine.
23rd ed. Philadelphia, Pa: Saunders Elsevier; 2007:chap 340.
3. Tramont EC. Treponema pallidum (syphilis). In: Mandell GL, Bennett JE,
Dolin R, eds. Principles and Practice of Infectious Diseases. 7th ed.
Philadelphia, Pa: Elsevier Churchill Livingstone; 2009:chap 238.
Laboratorio
Fecha: 01/06/2013

Bailon
Seccin
Fecha: 27/07/2013

Cargo: Director del
Departamento
Fecha: 01/08/2013
LA SALUD
CLNICA E INMUNOLOGA
CODIGO:
LAB_BCI_v01_2014
Vlido
01/06/201
desde: 3
Pgina
s:
58 de 88
4. Workowski KA, Berman S; Centers for Disease Control and Prevention

(CDC). Sexually transmitted diseases treatment guidelines, 2010.
MMWR Recomm Rep. 2010;59:1-110.
5. http://www.wiener-lab.com.ar/wiener/catalogo/archivos/6396_vdrl_sp.pdf

Laboratorio
Fecha: 01/06/2013

Bailon
Seccin
Fecha: 27/07/2013

Cargo: Director del
Departamento
Fecha: 01/08/2013
Control negativo
LA SALUD
CLNICA E INMUNOLOGA
CODIGO:
LAB_BCI_v01_2014
Vlido
01/06/201
desde: 3
Pgina
s:
59 de 88
1
gota
Tubo tapa
roja sin
anticoagulant
e
Obtener
Obtener
sangre
venosa
venosa
Pipeta
Pasteur
Total: 3 ml
Centrifuga
r
Control positivo
Recoger el
suero
suero
Micropipet
a
Observar
Observar
0,05
0,05 ml
ml
Suero
1
gota
Previament
e
resuspendid
o
Colocar
Colocar
Agitador
mecnico 180
rpm
Homogeniz
ar
ar
4 minutos
Palillo
s
Antgeno
en
en
suspensin
En cada
una de
las
muestras
Floculaci
n
REPORTAR

Laboratorio
Fecha: 01/06/2013

Bailon
Seccin
Fecha: 27/07/2013
1
gota

Cargo: Director del
Departamento
Fecha: 01/08/2013
LA SALUD
CLNICA E INMUNOLOGA
CODIGO:
LAB_BCI_v01_2014
Vlido
01/06/201
desde: 3
Pgina
s:
60 de 88
ESQUEMA PRUEBA CUANTITATIVA

MUESTRA
S
POSITIVA
S
Titulo.dilucin
mayor que da
resultado +
TITULADA
S
2
5
crculos de
5 crculos
de
placa
Recoger
Recoger el
el
suero
Pipetear
Pipetear sobre
sobre el
el
diluyente del 1
crculo
crculo
Usar la misma
punta
punta
50 l Sol. Salina en
c/u
c/u
Transferir 50 L
sobre
sobre el
el 2
2
diluyente
Continuar
dobles
diluciones
Dilucion
es
finales
Hasta el
5
5
crculo
1:2, 1:4,
1:8, 1:16,
1:32
Colocar
Mezclar
Mezclar por
por
aspiraciones y
expulsiones
expulsiones
50
50 l
l Muestra
Muestra
Homogeniz
Homogeniz
ar
Palillo
s
10
Observar
Agitador
mecnico 180
rpm
4 minutos

Laboratorio
Fecha: 01/06/2013
REPORTAR
Floculaci
n

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Fecha: 27/07/2013

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Fecha: 01/08/2013
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INMUNOCROMATOGRAFA ANTGENOS DE
SUPERFICIE DE HEPATITIS B (HBsAg)
AUTORES

OBJETIVOS
Determinar mediante inmunocromatografa antgenos de superficie de
Hepatitis B, y comprender el fundamento para poder interpretar los
resultados.
TIPO
Experimental
ACTIVIDAD
INTRODUCCION
La prueba est basada en un mtodo inmunocromatogrfico. El HBsAg
presente en el suero o plasma reacciona con las partculas de oro coloidal las
cuales han sido cubiertas con anticuerpos monoclonales (ratn) contra HBsAg.
Los resultantes inmunocomplejos migran a travs de la membrana y se unen
en la zona de prueba con un segundo anticuerpo monoclonal anti-HBsAg (de
ratn) los cuales son fijados y forman una lnea horizontal (lnea de prueba). El
exceso de inmunocomplejos y/o
Laboratorio
Fecha: 01/06/2013
las partculas de oro coloidal que no

Bailon
Seccin
Fecha: 27/07/2013

Cargo: Director del
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Fecha: 01/08/2013
LA SALUD
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reaccionaron con anticuerpos anti ratn IgG (conejo), formando la lnea control.
2 lneas visibles aparecern con la presencia de HBsAg (HBsAg > 1 U/ml) en la
muestra. Si no hay HBsAg en la muestra, o si la concentracin de HBsAg est
debajo 1 U/ml, solo aparecer la lnea de control. La segunda lnea sirve como
control del adecuado manejo y condicin intacta de los reactivos. Si no hay
lneas visibles en la zona de reaccin indica una inadecuada ejecucin o
deterioro de los reactivos.
La hepatitis B es una infeccin heptica potencialmente mortal causada por el
virus de la hepatitis B (VHB). Constituye un importante problema de salud a
nivel mundial y es el tipo ms grave de hepatitis viral. Puede causar
hepatopata crnica y conlleva un alto riesgo de muerte por cirrosis y cncer
heptico.
MATERIALES
EQUIPOS
REACTIVOS
Placa para reaccin
Agitador
mecnico
Tiras para prueba
Micropipetas
de
rotatorio de velocidad
de HBsAg.
volumen variable
variable
Palillos
Cronometro
Microscopio (100x)
MATERIAL BIOLOGICO
Muestra clara y reciente (suero o plasma con EDTA, citrato o heparina)
METODOLOGA
EL TEST y las muestras deben ser llevadas a temperatura ambiente antes de
usarse.
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Fecha: 01/06/2013

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1. Saque el nmero apropiado de EL TEST del tubo. Tenga cuidado de

tocar EL TEST solamente por la parte superior con las flechas
apuntando hacia abajo. Cierre el tubo inmediatamente luego de remover
el TEST a usar.
2. Introduzca EL TEST con las flechas apuntando hacia abajo en un tubo
con 0,25 a 0,5 ml de muestra. La muestra debe tocar la parte azul del
TEST. No mueva el TEST mientras el proceso cromatogrfico est
incompleto.
3. Lea el resultado 20 30 minutos luego de introducir dentro de la
muestra.
NEGATIVO: Solo una lnea roja-violeta en la lnea de control (C) aparecer en
la parte superior de la ventana rectangular de resultados mostrando que la
prueba ha sido llevado a cabo correctamente, que las reactivos funcionan y que
la concentracin de HBsAg est de < 1 U/ml. An si la lnea de control est
dbil, la prueba debe considerarse como vlido.
POSITIVO: Una segunda lnea roja-violeta de test (T) apareciendo en la parte
baja de la ventana rectangular de resultados indica que el resultado es positivo
(HBsAg >2 U/ml).
An una lnea dbil indica un resultado positivo.
1. Diferentes intensidades entre las lneas de prueba (T) y control (C)
pueden ocurrir, pero no tienen efecto en la interpretacin del resultado.
INVLIDO: Si no aparece ninguna lnea de control (C), aun si parece una lnea
de test, el test debe repartirse con un test nuevo.
CUESTIONARIO
Laboratorio
Fecha: 01/06/2013

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Fecha: 27/07/2013

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1. En qu se basa la prueba de inmunocrmatografia para antgenos de

superficie de Hepatitis B?
2. Qu es la hepatitis B?
3. Qu tipo de muestras se debe utilizar para este tipo de determinacin
de Hepatitis B?
4. A qu se refiere cuando se habla de inmunocromatografa?
5. En qu se diferencia la hepatitis B aguda de la crnica?
1. ISO 15223 Medical devices Symbols to used with medical device
labels, labelling and information to be supplied.
2. http://biokit.com.ve/tecnicas/tests_control_rapido/1i-hbsag.pdf

Laboratorio
Fecha: 01/06/2013

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Fecha: 27/07/2013

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ESQUEMA
METODOLOGA
1
TEST Y
MUESTRA
2
Tubo
3
1
Introducir
test en el
tubo
Leer
resultado
Luego de
20 -30 min
Temperatur
a ambiente
0,25 a
0,5 ml
muestra
(Suero)

Laboratorio
Fecha: 01/06/2013
La muestra
debe tocar la
parte azul del
test

Bailon
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Fecha: 27/07/2013

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LA SALUD
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B-HCG (TIRILLA)
PRUEBA RPIDA PARA LA DETECCIN CUALITATIVA
DE GONADOTROPINA CORINICA HUMANA (HCG) EN
SUERO
EN UN PASO
AUTORES
OBJETIVOS
Determinar la presencia de gonadotropina corinica humana en la sangre.
TIPO
Experimental
ACTIVIDAD
INTRODUCCION
La prueba de un solo paso B-hCG (tirilla) es una prueba de inmunoensayo
cromatogrfico para la deteccin cualitativa de gondadotropina corinica
humana (hCG) en orina o suero, que ayuda para la deteccin precoz del
embarazo. La prueba utiliza una combinacin de anticuerpos, incluyendo un
anticuerpo hCG monoclonal para selectivamente detectar incrementos de hCG.
La prueba es realizada por sumersin de la tira en la muestra y mediante la
observacin de la formacin de lneas con coloracin. La muestra emigra por
Laboratorio
Fecha: 01/06/2013

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va de accin capilar a travs de una membrana para reaccionar con un

conjugado de color.
Las muestras positivas reaccionan con un anticuerpo especfico de un
conjugado de hCG con color, para formar una lnea en la regin de prueba de
la membrana. La ausencia de esta lnea de color sugiere un resultado negativo.
Para efectos de control del procedimiento, siempre aparecer una lnea de
color en la regin de control, si la prueba fue realizada correctamente.
La gonadotropina corinica humana hCG es una hormona glicoprotica
producida por la placenta en desarrollo, poco tiempo despus de la fertilizacin.
En un embarazo normal, la hCG puede ser detectada, tanto en orina como en
suero, a los 7 o 10 das posterior a la concepcin. Los niveles de hCG
continan aumentando rpidamente, excediendo las 100 mIU/mL al momento
del primer perodo menstrual ausente, llegando a su mximo en 100,000200,000 mIU/mL en un rango de 10-12 semanas de embarazo. La aparicin de
hCG en orina y/o suero, luego de la concepcin y su subsiguiente incremento
rpido en concentracin durante el crecimiento gestacional incipiente, lo hace
un excelente indicador para la deteccin temprana de del embarazo.
MATERIALES Y MTODOS
MATERIALES
Tubo para
colocar
EQUIPOS
la Cronmetro
REACTIVOS
Tirilla para prueba
muestra
MATERIAL BIOLGICO
Laboratorio
Fecha: 01/06/2013

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Toma de muestras

METODOLOGA
Atemperar, a temperatura ambiente (20-30C) el dispositivo, la muestra y/o
controles antes de su uso.
1. Sacar la tira de la bolsa sellada y usarla lo antes posible.
2. Con las flechas dirigidas hacia la muestra de suero, sumerja la tira
verticalmente en el suero por lo menos durante 5 segundos. No
sobrepase la lnea de nivel mximo (MAX) en la tira cuando la sumerja.
3. Coloque la tira en una superficie plana y limpia.
4. Espere a que la lnea(s) de color rojo aparezca. Lea los resultados a los
3-5 minutos de iniciar la prueba.
Nota: Despus de 15 minutos la sensibilidad de la prueba se incrementa a 10
mIU/mL. Este incremento tiene el riesgo de dar falsos resultados positivos
debido al riesgo de abortos naturales, niveles fisiolgicos elevados de hCG en
mujeres no embarazadas o toma de medicamentos que contienen hCG. Por lo
que se recomienda interpretar el resultado a los 5 minutos de la adicin de la
muestra para pruebas de rutina.
POSITIVO: Embarazo. Dos lneas rojas distintivas aparecen en la tira. Una
lnea en el rea de control (C) y la otra en el rea de prueba (T).
NOTA: La lnea de color rojo en la zona del ensayo (T) puede variar
dependiendo de la concentracin de hCG presente. Sin embargo, ni el valor
Laboratorio
Fecha: 01/06/2013

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Fecha: 27/07/2013

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cuantitativo ni la tasa de aumento de hCG puede determinarse por esta prueba

cualitativa.
NEGATIVO: No embarazo. Una lnea roja aparece en el rea de control (C). No
aparece una lnea roja o rosada en el rea de prueba (T).
INVALIDO: La lnea de control no aparece. Las razones ms comunes para
una prueba invlida son utilizar cantidad insuficiente de muestra o no seguir los
pasos debidos del procedimiento. Revise el procedimiento y repita la prueba
con una tira nueva. Si el problema persiste, no continu utilizando la prueba y
consulte a su distribuidor local.
CUESTIONARIO
1.
2.
3.
4.
5.
En qu se fundamenta la prueba de un solo paso de B-hCG?

Para qu sirve la prueba de un solo paso de B-hCG?
Qu es la hormona gonadotropina corinica humana?
Qu tipo de muestra se debe utilizar para este tipo de ensayo?
Este ensayo qu otras utilidades tiene?
1. Batzer FR. Fertility y Sterility 1980; 34:1.
2. Catt KJ, Dufan ML, Vaitukaitis JL. J. Clin. Endocrinol. Metab. 1975;
40:537.
3. Baunstein GD, Rasor J, Adler D, Danzer H, Wade ME. Am. J. Obstet.
4.
5.
6.
7.
Gynecol. 1976; 126:678.

Lenton EA, NealLM, Sulaiman R. Fertility y Sterility 1982; 37:773.
Uotila M, Ruoslahti E, Engvall EJ. E. J. Immunol. Methods 1981; 42:11.
Steier JA, Bergsjo P, Myking OL. Am. J. Obstet. Gynecol. 1984; 64:391.
Dawood MY, Saxena BB, Lyesman R. Am. J. Obstet. Gynecol. 1977;
50:172.
8. http://www.linear.es/ficheros/archivos/361_4120050hCGstrip50t
%28orinayplasma%29cas.pdf
Laboratorio
Fecha: 01/06/2013

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Fecha: 27/07/2013

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ESQUEMA METODOLOGA
1
Sacar el test
de la bolsa
DISPOSITIVO,
MUESTRA,
CONTROLES
Usar lo antes
posible
Temperatura
ambiente
No sobrepasar
la lnea Max
cuando se
sumerja
3
Las flechas
dirigidas
abajo
Sumerja la
tira en el
suero
5
Colocar
Esperar 5
min
La tirilla en una
superficie plana
y limpia
6
LEER
RESULTADOS
Esperar a
que la lnea
de color
rojo
aparezca

Laboratorio
Fecha: 01/06/2013

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Fecha: 27/07/2013

Cargo: Director del
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Fecha: 01/08/2013
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HELYCOBACTER PYLORI IgM
PRUEBA DE ELISA PARA LA DETECCIN DE
ANTICUERPOS IgM CONTRA EL HELYCOBACTER
PYLORI
EN SUERO
AUTORES
OBJETIVOS
Determinar mediante prueba de ELISA anticuerpos IgM contra el
Helicobacter pylori en suero y comprender el fundamento para poder
interpretar los resultados.
TIPO
Experimental
ACTIVIDAD
INTRODUCCION
Una de las tcnicas ms empleadas en el campo de la inmunologa con fines
diagnsticos y deinvestigacin lo constituye el ELISA (del ingls Enzyme
Linked Immunosorb Assay
Esta tcnica nos permite evidenciar la presencia de anticuerpos o antgenos en
una muestra biolgicamediante una reaccin Ag-Ac sobre un soporte slido de
Laboratorio
Fecha: 01/06/2013

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Seccin
Fecha: 27/07/2013

Cargo: Director del
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Fecha: 01/08/2013
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72 de 88
poliestireno (placa de microtitulacin),puesta en evidencia mediante la actividad

de una enzima sobre su sustrato
El inmunoensayo enzimtico sobre fase slida (ELISA) est basado en el
principio del sndwich. Los pocillos estn recubiertos con un antgeno. Los
anticuerpos especficos de la muestra que se unen a los pocillos recubiertos
con el antgeno son detectados por un conjugado enzimtico del segundo
anticuerpo (E-Ab) especfico para el antgeno humano IgM. La intensidad del
color desarrollado por la reaccin del substrato es proporcional a la cantidad de
anticuerpos especficos IgM detectados. Los resultados son ledos por un lector
de micro comparados de una manera paralela con un calibrador y controles.
Helicobacter pylori, es una bacteria gran negativa de 2.5 a 3 m de largo
retorcido helicoidal, responsable del 80 % - 90 % de los casos de B-gastritis y
se sospecha sea un importante cofactor para el desarrollo de lceras gstricas
y duodenales. Los clsicos mtodos de deteccin de Helicobacter pylori, como
el cultivo de las biopsias de mucosa o un ensayo de ureasa, tienen xito solo
en el caso de contar con un nmero relativamente alto de bacterias y require su
identificacin inmediata despus de la biopsia. Para la deteccin de la infeccin
por Helicobacter pylori, tambin se usa la Inmunoflurescencia Indirecta (IIF). La
colonizacin de la mucosa gstrica y duodenal con Helicobacter pylori, puede
tambin ser detectado serolgicamente mediante un inmunoensayo enzimtico
(ELISA).
MATERIALES Y MTODOS
MATERIALES
Laboratorio
Fecha: 01/06/2013
EQUIPOS
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Fecha: 27/07/2013
REACTIVOS
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Pgina
s:
Toalla de papel
Papel
Pipetas
cuadriculado
precisin
Cronometro
ELISA capaz
de Kit
para
73 de 88
ELISA
Helicobacter pylori IgM

destilada
o
Agua
de
desionizada
leer la absorbancia
a 450 nm.
MATERIAL BIOLGICO
Muestra suero. No usar muestras altamente lipmicas o hemolticas.
Las muestras pueden almacenarse hasta 7 das de 28C o por ms largo

tiempo a -20 C. Congelar y descongelar solamente una vez. Al descongelar
una muestra debe ser homogenizada. Eliminar el material particulado por
centrifugacin o filtracin.
METODOLOGA
Traer las muestras y reactivos del kit a temperatura ambiente (18-26 C) y
mezcle suavemente.
1. Colocar el nmero deseado de tiras en el soporte.
2. El control negativo, control positivo y calibrador estn listos para usar.
Prepare la dilucin 1:21 de prueba muestras, mediante la adicin de 10
l de la muestra a 200 l de diluyente de muestra. Mezclar bien.
3. Agregue 100 l de suero diluido, calibrador, y controles en los pozos
apropiados. Para el reactivo blanco, dispensar 100l de diluyente de la
muestra en la posicin del pozo 1A. Toque el soporte para remover las
burbujas de aire del lquido y mezclar bien. Incubar durante 20 minutos a
temperatura ambiente.
Laboratorio
Fecha: 01/06/2013

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Seccin
Fecha: 27/07/2013

Cargo: Director del
Departamento
Fecha: 01/08/2013
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CODIGO:
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Vlido
01/06/201
desde: 3
Pgina
s:
74 de 88
4. Retire el lquido de todos los pozos. Lavar los pocillos tres veces con
300 ll de tampn de lavado 1X. Seque con absorbancia de papel o una
toalla de papel.
Dispensar 100 l de conjugado de enzima a cada pocillo e incubar
durante 20 minutos a temperatura ambiente.
Retire la enzima conjugada de todos los pozos. Lavar los pocillos tres
veces con 300 l de tampn de lavado 1X. Secar en el papel de
absorbancia o toalla de papel.
Dispensar 100 l de sustrato TMB y se incuba durante 10 minutos a
temperatura ambiente.
5. Aadir 100 l de solucin de parada. Leer Densidad ptica a 450 nm
utilizando un lector de ELISA dentro de 15 min. Una longitud de onda
dual se recomienda con filtro de referencia de 600-650 nm.
Evaluacin Cualitativa
El Valor de Corte est dado por la densidad ptica (DO) del Estndar B (Nivel
de Corte). El ndice de Corte (COI) se calcula a partir de la media de densidad
ptica de la muestra y el Valor de Corte. Si la densidad ptica de la muestra
est dentro de un rango de 20 % de todo el Valor de Corte (Zona gris) la
muestra tiene que ser considerada como lmite. Las muestras con mayor DOs
son positivas, las muestras con menos Dos son negativas.
El ndice de Corte de las muestras puede ser calculado de la
siguiente
manera:
La Interpretacin del ndice de anticuerpo:

Laboratorio
Fecha: 01/06/2013

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Fecha: 27/07/2013

Cargo: Director del
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Fecha: 01/08/2013
NEGATIVO
LA SALUD
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Pgina
s:
< 8 U/ml
75 de 88
Ningn anticuerpo perceptible a H.
pylori IgM por ELISA.

12 Resultados equvocos. Es necesario
EQUIVOCO
POSITIVO
U/ml
>12 U/ml
realizar una nueva prueba.

Indicativo de infeccin por H. pylori.
Los resultados por si solos no deben ser la nica razn para un tratamiento
teraputico, sino que deben correlacionarse con observaciones clnicas y
ensayos de diagnstico.
CUESTIONARIO
1.
2.
3.
4.
5.
Cul es el principio del ensayo de ELISA?

Describa la bacteria Helicobacter pylori.
Qu tipo de muestra se debe utilizar para realizar este tipo de ensayo?
La inmunoglobulina IgM cundo se produce?
Qu otro tipo de pruebas se puede realizar para determinar
Helicobacter pylori?
1. Ansari, M., Rasmi, Y., Manafi, M., Rahimipour, A. y Ghadermarzi, E.
(2010). THE EVALUATION OF HELICOBACTER PYLORI INFECTION
AND
CARDIOVASCULAR
DISEASE
RISK
FACTORS
WITH
ARTHERIOSCLEROSIS, Urmia Medical J 14(9): 788-791.

2. Ansari, M., Omrani, M., Sayyah, B. y Ansari, S. (2010). EFFECT OF
HELICOBACTER PYLORI INFECTION ON THE LIPID, LIPOPROTEINS,
APOLIPOPROTEIN-A1, LIPOPROTEIN (A) AND APOLIPOPROTEIN-B IN
PATIENTS WITH GASTRITIS, African J Microb Research 4(1): 84-87.
Laboratorio
Fecha: 01/06/2013

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Fecha: 27/07/2013

Cargo: Director del
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Fecha: 01/08/2013
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76 de 88
3. Cutler, A. (1998). ACCURACY AND ECONOMICS OF HELICOBACTER

PYLORI DIAGNOSIS, Yale J Biol Med 71(2): 75-9.
4. http://www.rapidtest.com/pdf/H%20Pylori%20IgM_1504Z%2802-052013%29.pdf
5. http://www.iblinternational.com/magento/media/catalog/product/R/E/RE56
391_IFU_es_Helicobacter_IgM_ELISA_V2012_08_sym3.pdf

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Fecha: 01/06/2013

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Seccin
Fecha: 27/07/2013

Cargo: Director del
Departamento
Fecha: 01/08/2013
LA SALUD
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s:
77 de 88
ESQUEMA METODOLOGA
Mezclar
suavemente
Temperatura
ambiente
MUESTRAS Y
REACTIVOS
2
Control +, y
calibrador
estn listos
para usar
COLOCAR
N de tiras
en el
soporte
Dilucin 1:21 de
prueba
muestras
Mediante
la
adicin de 10 l
de la muestra a
200
l
de
diluyente
de
muestra.
Agregue 100 l
de suero diluido,
calibrador,
y
controles en los
pozos
apropiados.
Mezclar bien
Para el reactivo
blanco,
dispensar 100l
de diluyente de
la muestra en la
posicin
del
pozo 1A
9
1
Toque el soporte
para
remover
las burbujas de
aire del lquido y
mezclar
Retire el lquido
de todos los
pozos
Incubar
Por 20 min
T`
Ambiente
10
Lavar
los
pocillos
tres
veces con 300
ll de tampn de
lavado 1X.
12
11
Secar con una
toalla de papel
Dispensar 100 l
de conjugado de
enzima a cada
pocillo
13
Incubar
Retire la enzima
conjugada
de
todos los pozos
Por 20 min
T`
Ambiente

Laboratorio
Fecha: 01/06/2013

Bailon
Seccin
Fecha: 27/07/2013

Cargo: Director del
Departamento
Fecha: 01/08/2013
14
Lavar los pocillos
tres veces con
300 l de tampn
de lavado 1X.
LA SALUD
CLNICA E INMUNOLOGA
CODIGO:
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Pgina
s:
15
16
Secar con una

toalla de papel
Dispensar 100
l de sustrato
TMB
78 de 88
17
Incubar
Por 10 min
T`
Ambiente
18
Aadir 100 l de
solucin
de
parada
19
9
Despus
de 15
min.
Leer
densidad
ptica a 450 nm
utilizando
un
lector de ELISA

Laboratorio
Fecha: 01/06/2013

Bailon
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Fecha: 27/07/2013

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Fecha: 01/08/2013
LA SALUD
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HELYCOBACTER PYLORI IgG
PRUEBA RPIDA PARA LA DETECCIN DE
ANTICUERPOS IgG CONTRA EL HELICOBACTER
PYLORI
EN SUERO
AUTORES
OBJETIVOS
Determinar mediante prueba de ELISA anticuerpos IgG contra el
Helicobacter pylori en suero y comprender el fundamento para poder
interpretar los resultados.
TIPO
Experimental
ACTIVIDAD
INTRODUCCION
Helicobacter pylori es una bacteria espiral gram negativa que coloniza la
mucosa gstrica y del intestino delgado de los humanos. Esta bacteria puede
causar varias enfermedades gastrointestinales. Ms del 90% de pacientes con
Laboratorio
Fecha: 01/06/2013

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gastritis crnica (tipo B), pacientes con ulcera y pacientes con carcinoma
gstrico estn infectados con Helicobacter pylori. La temprana deteccin y
tratamiento pueden erradicar esta bacteria.
La prueba de Elisa IgG e IgM es de preferencia como una prueba inicial en el
caso de una infeccin crnica.
La prueba Helicobacter pylori IgG ELISA est basada en la tcnica ELISA
sndwich. Los micropocillos ELISA son recubiertos con antgenos de H. pylori
(H. pylori- Ag) derivados de cultivo celular. En la primera etapa de inoculacin,
los anticuerpos contra el H. pylori IgG (Ac anti- H. pylori-IgG) contenidos en la
prueba o el control se fijan especficamente a los antgenos inmovilizados.
Al final de la incubacin, los componentes excesivos son eliminados por
lavado. En la segunda etapa de incubacin, se aade un conjugado anti-IgG
(anticuerpos anti- IgG- humana, marcados con peroxidasa) que se fija
especficamente a los anticuerpos IgG. Se forman inmunocomplejos tpicos.
Despus de eliminar el conjugado excesivo por lavado (segunda etapa de
lavado) y aadir TMB/Substrato (etapa 3), se forma un color azul que se
transforma a amarillo despus de detener la reaccin. La intensidad de este
color es directamente proporcional a la cantidad de anticuerpos anti-H. pyloriIgG en la muestra.
MATERIALES Y MTODOS
MATERIALES
Pipetas
EQUIPOS
REACTIVOS
de Cronmetro
Kit
para
ELISA
ELISA capaz de leer
precisin
Helicobacter pylori IgG
Toalla de papel
destilada
o
la absorbancia a 450 Agua
Papel
nm.
desionizada
cuadriculado

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MATERIAL BIOLGICO
Muestra: suero o plasma. No usar muestras altamente lipmicas o

hemolticas.
Las muestras pueden almacenarse hasta 7 das de 2 a 8C o por ms largo

tiempo a -20 C. Congelar y descongelar solamente una vez. Al descongelar
una muestra debe ser homogenizada. Eliminar el material particulado por
centrifugacin o filtracin.
METODOLOGA
Preparacin de la Prueba
Poner todos los reactivos y las muestras a temperatura ambiente y realice la
prueba a temperatura ambiente (22 a 26C).
Preparacin de la bandeja de desarrollo
1. Incubar la bandeja de desarrollo en una incubadora a 37 C por 20
minutos; o deje a temperatura ambiente (22 a 26C) por 3 horas.
2. Cubra la mesa de trabajo con papel absorbente, para ser desechado
como desecho biocontaminante al finalizar la prueba.
3. Mezclar los reactivos sacudiendo suavemente la bandeja de desarrollo.
Preparacin del Peine
Para asegurar el funcionamiento apropiado de la prueba, no toque los dientes
del peine.
1. Abra el empaque de aluminio por el borde perforado. Retire el Peine.
2. Es posible utilizar todo el Peine y la bandeja de desarrollo o una parte.
Para utilizar parte del Peine:
a) Determine cuantos dientes va a necesitar para analizar las
muestras y los controles. Se necesita un diente para cada prueba.
Cada diente tiene impreso el nmero del cdigo del kit, 25, para
permitir la identificacin de los dientes sueltos.
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b) Doble y rompa verticalmente el peine, o crtelo con tijeras para

separar el nmero requerido para las pruebas (nro. De pruebas
ms 2 controles).
c) Vuelva a meter la porcin no utilizada del peine en el empaque de
aluminio (con la bolsa desecante). Cierre bien el empaque para
mantenerlo seco. Almacene el peine en la caja original del kit a
temperaturas de 2 a 8 C para su uso posterior.
Instrucciones de la Prueba
Pre disolucin de muestras y controles.
1. Para cada muestra y control, vierta 100 l de diluyente para la muestra
en un microtubo o micropocillos de titulacin.
2. A cada microtubo agregue 10 l de una muestra o del Control positivo o
control negativo suministrados con el kit.
Mezcle vaciando y rellenando repetidamente la solucin.
3. Pipetee 25 l de una muestra prediluida. Perfore la cubierta de aluminio
de un pocillo de la fila A con la punta de la pipeta o el perforador y vaci
la muestra en el fondo del pocillo.
Mezcle la solucin vaciando y rellenando el pocillo. Deseche la punta de
la pipeta.
4. Repita el paso 3 para las otras muestras prediluidas y los 2 controles
prediluidos. Use un nuevo pocillo en la fila A y cambie la punta de la
pipeta para cada muestra o control.
5. a) Inserte el peine (con el lado impreso hacia Ud.) en los pocillos de la
fila A que contienen las muestras y los controles. Mezcle: retire e inserte
el peine en los pocillos varias veces.
b) Deje el peine en la fila A por exactamente 30 minutos.
Programe el reloj. Hacia el final de los 30 minutos, perfore el papel de
aluminio de la fila B usando el perforador. No abra ms pocillos de los
necesarios.
d) Al cumplirse los 30 minutos, saque el peine de la fila A.
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Absorba el lquido adherido a las puntas de los dientes

apoyndolos sobre un papel absorbente limpio. No toque la
superficie frontal del diente.
Primer lavado (Fila B)
6. Inserte el peine en los pocillos en la fila B. Agite: retire e inserte
vigorosamente el peine en los pocillos por lo menos 10 segundos para
quede bien lavado. Repita el lavado varias veces agitando en el
transcurso de 2 minutos, mientas tanto perfore el papel aluminio de la
fila C. Despus de 2 minutos, retire el peine y absorba el lquido
adherido como en el paso 5c.
Unin del conjugado (Fila C)
7. Inserte el peine en los pocillos de las fila C. Mezcle como en el paso 5a.
Programe el reloj para 20 minutos. Perfore el papel de aluminio de la fila
D. Despus de 20 minutos, retire el peine y absorba el lquido
adherido.
Segundo lavado (Fila D)
8. Inserte el peine en los pocillos de la fila D. Agite repetidamente durante
2 minutos como en el paso 6. Mientras tanto, perfore el papel de
aluminio de la fila E. Despus de 2 minutos, retire el peine y absorba el
lquido adherido.
Tercer lavado (Fila E)
9. Inserte el peine en los pocillos de la fila E. Agite repetidamente durante
2 minutos. Mientras tanto, perfore el papel de aluminio de la fila F.
Despus de 2 minutos, retire el peine y absorba el lquido adherido.
Reaccin de color (Fila F)
10. Inserte el peine en los pocillos de la fila F. Mezcle. Incube la bandeja de
desarrollo con el peine por exactamente 10 minutos (programe el
cronometro). Despus de 10 minutos retire el peine.
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Deteccin de la reaccin (Fila E)

11. Inserte el peine de nuevo en la fila E. Despus de 1 minuto, retire el
peine y djelo secar al aire.
RESULTADOS DE LA RUEBA
Validacin
Al final de confirmar el funcionamiento correcto de la prueba y demostrar que
los resultados son vlidos, deben cumplirse las siguientes tres condiciones:
1. El control positivo debe producir dos puntos en el diente del
Peine.
2. El Control Negativo debe producir un punto superior (Control
Interno). El punto inferior debe no aparecer o aparecer
tenuemente, sin afectar la interpretacin delos resultados.
3. Cada muestra analizada debe producir un punto superior (Control
interno).
Si cualquiera de las tres condiciones no se cumple, los resultados no son
vlidos y las muestras y controles deben ser reexaminados.
LECTURA E INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS

Lectura cualitativa

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Compare la intensidad del punto inferior de cada diente de la muestra con la

del punto inferior del diente del control positivo.
Un punto con una intensidad mayor que o igual a la del Control Positivo
indica la presencia de anticuerpos IgG contra H. pylori a un ttulo bajo.

Un punto con una intensidad menor que la del Control Positivo es
considerado como un resultado negativo.
Lectura Visual de los Resultados

El nivel de IgG anti-H.pylori en cada muestra puede ser evaluado comparando
con la intensidad del punto inferior en cada diente, con la escala de color en el
CombScale TM proporcionado por el kit. Esto se llevara a cabo como sigue.
1. Calibre en el CombScale
TM
. Coloque el punto inferior en el diente del
Control Positivo bajo la intensidad de color ms parecida de la escala

de color. Ajuste la regla para que 20 ;C+ aparezca en la ventana sobre
2.
la intensidad de color seleccionada.

Lea los resultados sin cambiar la posicin calibrada de la regla.
Compare la intensidad de color de cada punto inferior con la intensidad
de color ms parecida en la escala de color.
Registre el valor que aparezca en la ventana sobre intensidad como un
ttulo aproximado de anticuerpos IgG contra H.pylori para la muestra
correspondiente.

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Fecha: 01/06/2013

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Documentacin de los Resultados

Debido a que el color que aparece en el Peine es estable, los Peines pueden
ser archivados para consulta posterior.
Unidades de Anticuerpos Anti- H. Pylori IgG
Los resultados encontrados en los sueros de pacientes pueden expresarse en
unidades por ml (U/ml).
La Interpretacin del ndice de anticuerpo:
NEGATIVO
EQUIVOCO
POSITIVO
< 8U/mL
Ningn anticuerpo perceptible a H.
8-12
pylori IgG por ELISA.

Resultados equvocos. Es
U/mL
necesario realizar una nueva
>12
prueba.
Indicativo de infeccin por H.
U/mL
pylori.
CUESTIONARIO
1.
2.
3.
4.
5.
Cul es el principio del ensayo de ELISA?

Describa que es la bacteria Helicobacter pylori.
Qu tipo de muestra se debe utilizar para realizar este tipo de ensayo?
La inmunoglobulina IgG en qu casos se produce?
Preferentemente para qu se utiliza la prueba de ELISA IgG?
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
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http://www.bqkits.com/shopcart/images/product/BQ%20015M%20%20H.
%20Pylori%20IgM.pdf
http://biokit.com.ve/tecnicas/elisa/el-hpylg.pdf

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ESQUEMA
PRINCIPALES PROCEDIMIENTOS DE LA PRUEBA

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UNIVERSIDAD TCNICA PARTICULAR DE

DEPARTAMENTO CIENCIAS DE LA SALUD

LABORATORIO BIOQUIMICA CLNICA E

Elaborado: Andrea Vintimilla

Revisin tcnica: Natalia

Aprob: Jana Bobokova

4. MEDIDAS GENERALES PARA LOS PROFESIONALES

5. NORMAS GENERALES PARA EL USO DE QUIPOS

7. TEMAS DE PRACTICAS DE LABORATORIO

Revisin tcnica: Natalia

Aprob: Jana Bobokova

PLASMTICAS. PRUEBA EN PORTA

Elaborado: Andrea Vintimilla

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todas las incidencias o desperfectos que se hayan

producido o detectado durante el uso del Laboratorio,

a las guas de desechos infecciosos y comunes del laboratorio.

MEDIDAS GENERALES PARA LOS PROFESIONALES EN FORMACIN:

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Aprob: Jana Bobokova

Son indispensables para el uso del laboratorio el conocimiento de

las normas de bioseguridad.

NORMAS GENERALES PARA EL USO DE EQUIPOS

2. TEMAS DE PRCTICAS DE LABORATORIO

Elaborado: Andrea Vintimilla

Aprob: Jana Bobokova

PRCTICA N 1 (CDIGO: IMN001)

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Aprob: Jana Bobokova

Conocer el principio de las diluciones y realizar algunos ensayos de

Elaborado: Andrea Vintimilla

Revisin tcnica: Natalia

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lo que se est diluyendo y la segunda cifra o denominador (10) al volumen total

solucin salina, buffer

Muestra: suero (claro, reciente).

Lo realiza personal entrenado.

Revisin tcnica: Natalia

Aprob: Jana Bobokova

Se debe separar el suero, mantenerlo refrigerado (4 C), y congelar su

Revisin tcnica: Natalia

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En la prctica el clculo de las diluciones se puede efectuar de dos maneras

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Aprob: Jana Bobokova

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Revisin tcnica: Natalia

Aprob: Jana Bobokova

Cul es el principio de las diluciones?

Elaborado: Andrea Vintimilla

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PRCTICA N 2 (CDIGO: IMN002)

Comprender y observar la aglutinacin de la reaccin antgeno

Revisin tcnica: Natalia

Aprob: Jana Bobokova

especficos. El primer grupo de estas sustancias fue identificado por