TECNICAS DE MICROSCOPIA OPTICA:

Microscopa ptica normal (de campo brillante coloreado): El

material a observar se colorea con colorantes especficos que aumentan el
contraste y revelan detalles que no aprecian de otra manera.
Microscopa de campo brillante: El material se observa sin coloracin.
La luz pasa directamente y se aprecian detalles que estn naturalmente
coloreados. El microscopio en campo oscuro utiliza una luz muy intensa en
forma de un cono hueco concentrado sobre el espcimen. El campo de
visin del objetivo se encuentra en la zona hueca del cono de luz y slo
recoge la luz que se refleja en el objeto. Por ello las porciones claras del
espcimen aparecen como un fondo oscuro y los objetos minsculos que se
estn analizando aparecen como una luz brillante sobre el fondo. Esta forma
de iluminacin se utiliza para analizar elementos biolgicos transparentes y
sin manchas, invisibles con iluminacin normal.
Microscopa en contraste de fase: Se usa principalmente para aumentar
el contraste entre las partes claras y oscuras de las clulas sin colorear. Es
ideal para especimenes delgados, o clulas aisladas. El microscopio de fase
ilumina el espcimen con un cono hueco de luz, como en el microscopio en
campo oscuro. Sin embargo en el microscopio de fase el cono de luz es ms
estrecho y entra en el campo de visin del objetivo, que contiene un
dispositivo en forma de anillo que reduce la intensidad de la luz y provoca
un cambio de fase de un cuarto de la longitud de onda. Este tipo de
iluminacin provoca variaciones minsculas en el ndice de refraccin de un
espcimen transparente, hacindolo visible. Este tipo de microscopio es
muy til a la hora de examinar tejidos vivos, por lo que se utiliza con
frecuencia en biologa y medicina
Microscopa diferencial de contraste de interferencia (DIC) : Utiliza
dos rayos de luz polarizada y las imgenes combinadas aparecen como si la
clula estuviera proyectando sombras hacia un lado. Fue diseado para
observar relieves de especmenes muy difciles de manejar, es muy utilizado
en los tratamientos de fertilizacin in-vitro actuales. DIC se usa cuando el
espcimen es muy grueso para usar contraste de fases
Fijacin: tratamiento qumico para matar a las clulas de modo que
quedan como eran in vivo, y que las molculas queden fijadas, que no se
eliminen/ laven en manipulaciones posteriores.
Seccionado: se corta el tejido muy fino, de forma que lo atraviese la luz.
Para ello se emplean los microtomos, estos pueden ser:
De mano: la muestra debe incluirse en un medio, la mdula de saco (de
sauce, Salix).
De parafina: incluir la muestra en parafina, una especie de cera. Antes la
muestra tiene que pasar un proceso: deshidratacin, se impregna con
disolvente Xilol/Xileno) de parafina, este junto a la parafina, y parafina
nicamente.

De congelacin: la muestra se impregna de nitrgeno lquido, y luego se

corta con cuchilla de acero. Es el procedimiento ms rpido.
Tincin: si el tejido es casi transparente hay que aadirle colorantes para
permitir la visin. Normalmente se emplean ms de un colorante de
diferente color y tambin qumicamente distintos. Esta es una sustancia
qumica que reacciona con unas molculas determinadas del tejido,
quedndose fijado, as se obtiene el contraste.
Montaje de la preparacin: se montan los diferentes cortes en el
portaobjetos. Habitualmente se emplea el cubreobjetos, entre porta y cubre
no debe haber aire. Dependiendo de la duracin, la preparacin puede ser:
Temporales: se emplea agua y otras substancias.
Permanentes: indefinidas, se emplean blsamo de Canad y resinas.
El orden entre montaje de la preparacin y tincin, puede variar.

USOS

Obtencin y anlisis de imgenes para estudios morfolgicos e

histoqumicos de preparaciones de microorganismos, clulas aisladas,
cultivos celulares, cortes histolgicos, etc.
La microscopa de luz polarizada se utiliza en una amplia gama de
disciplinas, incluida la medicina, la biologa, la geologa, ciencia de
materiales y en la industria alimentaria. Este tipo de microscopio se
usa para poder examinar una amplia variedad de muestras naturales
o sintticas, entre las que se pueden citar los cristales slidos o
lquidos, los minerales, las fibras, los vidrios, la sustancia amiloidea,
las grasas, pigmentos, lpidos, protenas, depsitos seos, asbesto,
colgeno, cristales de uratos, queratina, slice, polen, entre otros.
Las tcnicas que ofrece el laboratorio permiten la observacin y
obtencin de imgenes o videos, aplicables en todas las reas de las
ciencias biomdicas, cultivos celulares; en la ciencia de los materiales
en estudios de geologa, metalurgia, anlisis de polmeros, en la
industria, por ejemplo, en las industrias cosmtica y de alimentos.