BIOLIXIVIACIN DE METALES PESADOS DE AGUAS RESIDUALES POR

ACIDITHIOBACILLUS THIOOXIDANS UN ESTUDIO COMPARATIVO

Propsito: Para entender la biolixiviacin de metales desde lodos por

Acidithiobacillus thioxidans, los objetivos de este estudio fueron evaluar
como afectan las condiciones experimentales la eficiencia de la remocin de
metales, incluyendo concentracin de slidos, ph inicial, concentracin de
azufre y nivel de inoculacin fueron examinados y fue propuesto un
mecanismo de biolixiviacin.
Materiales y mtodos.
A. Thiooxidans fue aislado de muestras de lodos que contienen bacterias de
la planta de aguas residuales Fuzhou Jingshan y la identificacin de las
bacterias fue realizada mediante la secuenciacin de las secuencias del gen
de ADNr 16s. Las condiciones que afectan la biolixiviacin y la aplicacin
fueron realizadas por experimentos por lotes. Los anlisis de Cr, Cu, Pb y Zn
fueron llevados a cabo usando un espectrmetro de absorcin atmica y el
ph y el potencial de xido reduccin ORP fueron medidos usando un
medidor de ph y un medidor de ORP.
Resultados y discusin Los resultados muestran que una alta eficiencia de la
lixiviacin de metal se logr a concentraciones de slidos bajas debido a la
disminucin de capacidad de almacenamiento en bfer. Adems, las
mejores condiciones de la biolixiviacin incluyen 2% (w / v) de
concentracin de slidos, 5,0 gL-1 concentracin de azufre, y 10% (v / v) de
concentracin del inculo, donde las eficacias de eliminacin de Cr, Cu, Pb,
y Zn en lodos de aguas residuales era 43,6%, 96,2%, 41,6%, y 96,5%,
respectivamente. Conclusiones Encontramos que la biolixiviacin de Zn se
rega por mecanismos directos e indirectos, mientras que la biolixiviacin de
Cu, Pb y Cr estaba dominada principalmente por el mecanismo indirecto de
biolixiviacin. Una vez procesados con las tcnicas propuestas, los metales
pesados en los lodos de aguas residuales cumplieron con el requisito de las
normas nacionales.
Introduccin
En aos recientes, la cantidad total de los lodos generados en todo el
mundo ha aumentado de manera dramtica. El depsito de estos es un
problema medioambiental grave. El origen de las aguas residuales y su
tratamiento desde las plantas de tratamiento es variable. Los lodos
residuales contienen altas concentraciones de metales txicos. La
eliminacin de los lodos sin tratar a la tierra muestra un peligro potencial
para la salud humana y para el medio ambiente. Por esta razn es necesario
eliminar los metales pesados de los lodos antes de ser utilizados en la tierra.
Varios productos qumicos tales como
agentes quelantes ( es una
sustancia que forma complejos con iones de metales pesados) como el etileno

diamina cido tetraactico y cido nitrilothiactico han sido usados para la

extraccin de metales a partir de lodos. Sin embargo, la aplicacin prctica
de los procesos qumicos es todava limitada debido a la necesidad de gran
cantidad de productos qumicos, el costo de operacin alto, las dificultades
operativas, y los problemas de contaminacin secundarios asociados con
ellos. Como tal, el mtodo microbiano es una de las opciones que se pueden
utilizar para eliminar los metales pesados en el lodo debido a su bajo costo
y bajo requerimiento de energa.
La biolixiviacin que se basa en la capacidad de los microorganismos para
transformar los metales de los residuos slidos en formas solubles y
extrables, ha sido reportada como un eficiente y econmico mtodo para la
eliminacin de metales pesados de los lodos.
En el proceso de biolixiviacin, Acidithiobacillus thiooxidans puede ser usado
en la biolixiviacin de metales desde aguas residuales donde A. thiooxidans
oxida el azufre a cido sulfrico para obtener energa desde el proceso de la
oxidacin, lo que lleva a producir la acidificacin de los lodos y la
solubilizacin de los metales pesados. Un nmero de estudios de
biolixiviacin de metales pesados usando A. thiooxidans ha sido
recientemente reportado, donde los reportes se interesan solo en
condiciones de impacto sobre la biolixiviacin como el ph, concentracin de
slidos, fuente de energa y los microorganismos lixiviantes. Sin embargo, la
comprensin de los mecanismos de biolixiviacin est limitada debido a su
falta de evidencia.
Por ejemplo, el efecto del azufre en la biolixiviacin de metales pesados
desde desechos de minera ha sido recientemente reportado, los resultados
indican que 2% de concentracin de sustrato de azufre es ptima para la
actividad bacteriana y la sulubilizacin del metal. La influencia del ph inicial
del sistema en la biolixiviacin de metales pesados de los suelos
contaminados del metal tambin se ha reportado, lo cual muestra que el ph
juega un papel importante en la solubilizacion del metal y que el
microorganismo puede utilizar azufre elemental como una fuente de
energa. Se ha informado que los efectos de la concentracin de slidos en
los lodos en el proceso de biolixiviacin en un biorreactor por lotes en donde
una disminucin en el ph, un incremento en el potencial de oxido reduccin
ORP y la reduccin del metal fueron asociados con incrementos en la
concentracin y la capacidad de almacenamiento de slidos en el lodo. Sin
embargo las diferentes formas de metal pesado en el lodo varan de
acuerdo al tipo de lodo, las caractersticas del metal y el mtodo empleado
para el tratamiento del lodo. Para ententer el proceso de biolixiviacin es
necesario investigar sistemticamente carias condiciones que afectan a la
biolixiviacin de los metales pesados del lodo. Por estas razones este
estudio investig sistemticamente la biolixiviacin de Cr,Cu,Pb y Zn desde
aguas residuales usando A. thiooxidans. Las condiciones experimentales
afectan la eficiencia de la remocin de metales, incluyendo concentracin
de slidos, ph inicial, concentracin de azufre y nivel de inoculacin fueron

examinados y fue propuesto un mecanismo de biolixiviacin. La factibilidad

de la eliminacin de iones metlicos tales como Cu,Cr, Pb, y Zn en los lodos
de aguas residuales utilizando A. thiooxidans se demostr en las condiciones
ptimas.

Materiales y mtodos
Fuente de aguas residuales y su caracterizacin.
La muestra de lodo que contiene las bacterias se recogi de la planta de
tratamiento de aguas residuales Fuzhou Jingshan. La muestra de lodo fue
transportada de regreso al laboratorio y se almacen a 4C antes de su uso.
La muestra se dividi en dos partes. Una parte fue usada para aislar A.
thiooxidans, otra parte se utiliz para los experimentos de biolixiviacin. La
sumbuestra se esteriliz por tratamiento en autoclave (30 min a 120C) y
fue caracterizada. Las caractersticas medidas de la muestra de lodo se
enumeran en la Tabla 1.

Aislamiento e identificacin de bacterias autctonas oxidantes de

azufre.
Para el enriquecimiento de bacterias oxidantes del azufre, se utiliz el medio
lquido Waksman de la siguiente composicin: 0.2g/L (NH4)2SO4, 3g/L
K2HPO4, 0.5 g/L de MgSO4.7H2O, 0.25g/L CaCl2.2H2O,10g/L SO como una
fuente de energa. El ph inicial de l medio lquido Waksman era 4.0. Los
lodos de prueba ( 10 ml con una concentracin de slidos de 4 % ( w / v ) )
fueron tomados en un matraz de 250 ml que contena 100 ml del medio
lquido Waksman. Los matraces se montan en una incubadora de agitacin y
se agitaron a 150 rpm a 30C; el ph del medio se control. Cuando el ph
alcanz 2, 10 ml de lodo acidificado se transfieren al segundo matraz que
contena 100 ml del medio lquido Waksman en las mismas condiciones.
Despus de tres generaciones de enriquecimiento, el aislado se inocul en
el medio slido Waksman, y el cultivo puro para su uso posterior fue

obtenido despus de tres subcultivos sucesivos. Identificacin molecular del

cultivo aislado fue hecha mediante secuenciacin de las secuencias del gen
de ANDr 16s
Condiciones experimentales que afectan la biolixiviacin y la
aplicacin
Experimentos de biolixiviacin a escala de laboratorio se llevaron a cabo en
matraces de Erlenmeyer de 250 ml que contienen 150 ml de las muestras
de lodos, los cuales se agitaron a 150 rpm a una temperatura de 30C sobre
un agitador giratorio por 24 horas para elevar su temperatura y su ORP
inicial el cual proporcion las condiciones adecuadas para el crecimiento de
A.thiooxidans. Los factores que afectan la lixiviacin del metal usando A.
thiooxidans incluyen cinco concentraciones de slidos (2%, 4%, 6%, 8%, y
10% (w / v)), 5 ph iniciales (2, 3, 4, 5, y 6) los cuales fueron conseguidos
mediante ajuste usando 2N de H2SO4, cinco niveles de azufre (2,5,10,15 y
2 g/L)y cinco concentraciones de inoculo 108~109 clulas /Ml (2 %, 5 %, 10
%, 15 %, and 20 %) Todos los experimentos fueron realizados por duplicado
y fueron incubados en un incubador giratorio a 30C y 150 rpm. Durante el
proceso de biolixiviacin, la prdida de agua por evaporacin se reabastece
con agua destilada diariamente.
Para probar la eficacia de eliminacin de metales en las condiciones
ptimas, una suspensin de lodos (concentracin de slidos, 2% (w / v)) de
135 ml contenidos en un matraz de 250 ml se agit a 30 C, 150 rpm
durante 24 h. Se aadi un volumen de 10% de suspensin de bacteria
activa a la suspensin de lodos con una concentracin inicial de clulas de
108 ~ 109 clulas por mililitro y seguido por la adicin de 0,75 g de azufre
elemental. Una prueba de control sin inculo de bacterias tambin se llev a
cabo con el fin de comparar los resultados. El conjunto entero se pes y se
incub como se describi anteriormente.
Mtodos Analticos
El ph y el ORP fueron medidos usando un medidor de ph y un medidor de
ORP respectivamente. Muestras de 15mL fueron recogidas en intervalos de
dos das de los matraces para anlisis de metales pesados. Las muestras
fueron centrifugadas a 7000 rpm por 10 minutos y el flotante fue filtrado a
travs de una membrana de filtro de 0.45 micrmetros. El anlisis de Cr, Cu,
Pb y Zn fue llevado a cabo usando un espectrmetro de absorcin atmica.
Resultados y discusin.
Identificacin de A. Thiooxidans
A. Thiooxidans fue aislada a partir de lodos de aguas residuales, crecieron
bien en un medio que contiene azufre elemental como fuente de energa.
Como se muestra en la fig.1, el emmen microscpico del cultiv revel la
presencia de bacterias gram negativas, en forma de barra y bacterias
mviles. Los datos mostraron que el microorganismo aislado se relaciona

estrechamente con las bacterias acidfilas sulfurooxidantes. A.Thiooxidans

con 99% de similitud en la clasificacin que se basa en la homologa de sus
16 S rDNA secuencias de genes del banco de datos del Centro Nacional de
Informacin biotecnolgica.

Cambios en el ph y ORP durante la biolixiviacin

Los cambios en el ph y ORP durante la biolixiviacin fueron mostrados en la
figura 2, cuando la concentracin de lodos era 2% la concentracin de
azufre era 5g/L y la concentracin de inculo fue de 10%. Los A.Thiooxidans
activados en el lodo fueron capaces de alterar el azufre oxidado a cido
sulfrico durante su crecimiento. En consecuencia el Ph del lodo disminuy
al aumentar el tiempo de biolixiviacin como se muestra en la figura 2.a. Un
rpido descenso del ph se obsrv en los primeros 6 das en el que el ph se
redujo desde 5.30 hasta 1.07 debido a la oxidacin microbiana del azufre y
la produccin de cido sulfrico en base a sus mecanismos de biolixiviacin.
Esto tambin indica que el azufre se puede utilizar como la fuente de
energa para el crecimiento de A.Thiooxidans. Sin embargo, en el medio de
control, el ph disminuye gradualmente a 4.62 en los primeros 6 das, luego
increment a 5.42 en los siguientes 2 das , el ph final se estabiliz en cerca
de 4.98. Un ligero aumento en el ph observado en el control indica que no
se produjo la oxidacin qumica de azufre y su rango alcalino observado en
el control, se puede atribuir a la accin amortiguadora y liberacin de la
sustancia de carbonato de los lodos de aguas resiguales con naturaleza
bsica. Despus de 12 das de biolixiviacin, el ph del control fue mayor que
el de los tratamientos de prueba. Resultados similares fueron reportados en
el estudio del perfil de ph durante la biolixiviacin de metales resultado de
la digestin anaerobia por la bacteria oxidante del azufre.
En contraste con la tendencia de cambio en el ph, como se muestra en la
figura 2.b ORP aument rpidamente desde 300 hasta 445mV en los
primero 4 das de biolixiviacin, aument ligeramente a 505 mV en los
siguientes 10 das y luego se mantuvo hasta el final de la biolixivaicin. Esto
es debido a que el azufre elemental se oxida a sulfato soluble, lo que lleva a
la disminucin de la concentracin de azufre seguido por aumentos en la

PARA. Sin embargo, el ORP del control se mantuvo alrededor de 295 Mv

durante el mismo periodo de bilixiviacin. Estos resultados muestran que la
inoculacin de A. thiooxidans aceler la acidificacin de los lodos como
resultado de la oxidacin de azufre a cido sulfrico y un aumento en el
potencial redox, debido a una actividad microbiana estimulada. Los altos
valores de ORP junto con el bajo pH son responsables de la solubilizacin de
metales. Estos resultados proporcionan la evidencia para el mecanismo de
biolixiviacin indirecta por A. Thiooxidans donde el azufre en el lodo se oxida
en cido sulfrico y conduce a la acidificacin de los lodos del medio.