Microbiologa I

Nombre del trabajo:

Prctica # 6
Identificacin de Staphyloccus aureus

Campus: UVM Coyoacn

Carrera: QFBT
Semestre: 3 Semestre

Grupo: 02

Fecha de entrega: 19 de Noviembre de 2013

.

Objetivo
Aplicar las pruebas bioqumicas de la coagulasa y catalasa como medios para
identificacin para la identificacin de Staphyloccus aureus.

Hiptesis
Se podr indentificar Staphyloccos aureus utilizando pruebas bioqumicas como
coagulasa y catalasa. Sera positiva a la prueba de catalasa al liberar agua y oxgeno y la
de coagulasa formando grnulos blancos.

Introduccin
Staphyloccus aureus causa enfermedad mediante la produccin de toxina o a travs de la
invasin directa y la destruccin del tejido. Las manifestaciones clnicas de algunas
enfermedades estafiloccicas se deben casi exclusivamente a la actividad de la toxina,
intoxicacin, mientras que otras afecciones son consecuencia de la proliferacin de los
microorganismos, la cual da lugar a la formacin de abscesos y la destruccin tisular, por
ejemplo las infecciones cutneas, endocarditis, neumona, empiema, osteomielitis y artritis
sptica.2
Los estafilococos pueden producir enfermedad a travs de su capacidad para
multiplicarse y diseminarse ampliamente en los tejidos y a travs de su produccin de
muchas sustancias extracelulares. Algunas de estas sustancias son enzimas; otras se
consideran toxinas, aunque pueden funcionar como enzimas.
Muchas de las toxinas estn sujetas al control gentico de los plsmidos; algunas pueden
estar sujetas a control cromosmico y extracromosmico; en el caso de otras no est bien
definido el mecanismo de control gentico.3
Coagulasa y factor de aglutinacin
S. aureus produce coagulasa, una protena semejante a una enzima que coagula el
plasma oxalado o citratado. La coagulasa se une a la protrombina; en conjunto pueden
volverse enzimticamente activas e iniciar la polimerizacin de fibrina. La coagulasa
puede depositar fibrina en la superficie de los estafilococos, alterando tal vez su ingestin
por las clulas fagocticas o su destruccin dentro de tales clulas. La produccin de
coagulasa se considera sinnimo del potencial patgeno invasor.
Adems que acta en conjunto con una serie de factores sanguneos para coagular el
plasma. La coagulasa contribuye a la formacin de paredes de fibrina alrededor de las
lesiones estafiloccicas, lo que les ayuda a persistir en los tejidos. Asimismo, la
coagulasa provoca depsito de fibrina en la superficie de los estreptococos, lo que ayuda
a protegerlos de la fagocitosis o de la destruccin dentro de las clulas fagociticas.3
Catalasa
Los aerobios y los anaerobios facultativos a menudo cuentan con los sistemas
metablicos enumerados ms adelante, en tanto por lo comn las bacterias anaerobias
no lo hacen, se protegen de estos productos por la presencia de superxido dismutasa.

1) Sistemas de citocromo para el metabolismo de O2.

2) Superxido dismutasa, que cataliza la siguiente reaccin:
O 2 + O2 + 2H+ H2O2 + O2
3) Catalasa, que cataliza la siguiente reaccin:
2H2O2 2H2O + O2
Los estafilococos producen catalasa, la cual convierte el perxido de hidrgeno en agua y
oxgeno. La prueba de catalasa diferencia los estafilococos, que son positivos, de los
estreptococos, que son negativos.3
Pruebas diagnsticas de laboratorio
Prueba de la catalasa
Esta prueba se utiliza para detectar la presencia de enzimas citocromo oxidasa. Se coloca
una gota de una solucin de perxido de hidrgeno al 3% en un portaobjetos y se aplica
una pequea cantidad del crecimiento bacteriano en la solucin. La formacin
de burbujas (liberacin de oxgeno) indica una prueba positiva.3
Prueba de la coagulasa
El plasma de conejo (o humano) citratado diluido 1:5 se mezcla con un volumen igual de
caldo de cultivo o del cultivo proveniente de colonias crecidas en agar y se incuba a una
temperatura de 37C. Se incluye como control un tubo de ensayo con plasma mezclado
con caldo estril. Si se forman cogulos en un lapso de 1 a 4 h, la prueba es positiva.3

Mtodo
Preparacin de Medio de Cultivo

Se prepar medio de
culivo estafilococos
110, se pus a
ebullicin.

Se esteriliz al
autoclave por 30
minutos a 121C.
Se pas a cajas
petri y se esper a
que solodifique y se
guardo en
refrigeracin.

Se dej incubar por 48

horas a 37C.
Se realizan
observaciones .

Se tomaron muestras
realizando un frotis de
la cavidad nasales,
oreja, piel, garganta,
mano, cuello.

Se realiz el sembrado
en las cjas, de la
siguiente manera. Se
empiez del contorno
de la caja de manera
circular y
posteriormente se
realiz un estriado
uniforme en la caja.

Prueba catalasa
Se transfiri una porcin con
la asa bacteriologica la colonia
aislada en la superficie de un
porta objetos.

Se aadieron 2 gotas de
peroxido de hidrogeno al 3%.

Se anotaron las observaciones

Prueba Coagulasa
Prueba en porta objetos

Se coloc una gota

de agua destilada o
solucin salina
fisiolgica estril
sobre un
portaobjetos.

Se emulsion
suavemente
utilizando el asa
bacteriologica.

Se inclin el
portaobjetos hacia
uno y otro lado.

Se realizaron las
observaciones.

Se coloc una gota

de suero junto a la
suspensin
bacteriana.

Prueba coagulasa en tubo

Se coloc 1ml de
suero sanguine en
un tubo estril.

Se aadi 0.5mL de
la colonia obtenida.

Se mezcl suavente.

Se hicieron las
observaciones.

Se colocaron los
tubos en bao de
agua a 37C.

Resultados
Resultado obtenido

Figura 1

Figura 2

Descripcin
En la figura 1 se obtuvo una colonia
abundante que present las siguiente
caractersticas:
Coloracin: amarilla
Consistencia: cremosa
Morfologa: circular
Superficie: convexa
Margen: redondo
Esta muestra fue tomada de la nariz.
Medio Estafilococo 110: el color del medio
es mbar claro.
En la figura 2 se observa el crecimiento
colonias muy parecidas a las de la figura 1,
solo que en menor cantidad.
Este resultado se present en la mayora
de las muestras tomadas de oreja, piel,
garganta, manos y cuello.

Cuadro 1- Caractersticas de la colonia obtenida.

Pruebas Bioqumicas
Prueba catalasa

Figura 3

Observaciones
Se tom una porcin de la colonia amarilla
en la figura 3, se observ que al momento
de agregar el perxido de hidrogeno,
inmediatamente haba la aparicin y
produccin de burbuja de gas habiendo
una efervescencia.

Cuadro 2- Resultados obtenidos de la prueba catalasa

Prueba Coagulasa

Figura 4

Observaciones
Despus de haber estado en el bao
mara.
Figura 4, se observa una precipitacin
blanca con pequeos cogulos blancos en
el suero.
Se confirm la prueba de coagulasa en
porta objetos y se obtuvo el mismo
resultado. Con la formacin de pequeos
cogulos blancos.

Cuadro 3- Resultados obtenidos de la prueba coagulasa.

Discusin
De la colonia obtenida de la muestra fue tomada de la nariz al compararla con
Staphyloccos aureus, cuadro 4, podemos observar las siguientes semejanzas: en su
coloracin amarilla, la consistencia que presenta la colonia siendo cremosa, morfologa
circular con una superficie convexa, teniendo un margen redondo, adems que
Staphyloccos aureus es selectivo en medios Baird Parker Medio, Manitol Salado Agar, o
Estafilococo Medio 110. (prescoot).5 Por las caractersticas mencionas podemos decir que
existe una gran posibilidad que sea Staphyloccos. Adems que esta bacteria la podemos
encontrar en las mucosas, piel, lesiones, cavidad nasal, brazos, manos, cara, tracto
intestinal y en alimentos.2
Colonia obtenida

Colonia Comparativa

Medio :Staph 110

Staphyloccos aureus
Medio: Staph 110

Cuadro 4 - Comparacin de la colonia obtenida con S. aureus.

Para poder afirmar de que realmente que sea Staphyloccos aureus, fue necesario
realizar pruebas bioqumicas como coagulasa y catalasa, que se presentan en el cuadro 2
y 3.
En la prueba catalasa, al presentar efervescencia la colonia, se dice que es catalasa
positiva. Es sucedi porque dicha bacteria contiene una enzima llamada catalasa que es
una hemoprotena que se descompone con el perxido de hidrogeno produciendo una
efervescencia que es el desprendimiento de oxgeno y agua. Adems la catalasa es
importante, ya que la mayora de las bacterias anaerobias y aerobias descomponen el
perxido de hidrogeno y al acumularse en grandes cantidades mata a las clulas
bacterianas.1 La determinacin de presencia o ausencia de catalasa resulta til en el rea
de bacteriologa, para diferenciar colonias de estreptococos, que son catalasa negativos,
de estafilococos o micrococos.
En la prueba coagulasa, por los resultados obtenidos de cuadro 3, al obtener cogulos, es
positiva. Esto ocurre debido a la composicin de la bacteriana que contiene una protena,
que se une al fibringeno y lo convierte en fibrina insoluble. Lo que ocurre que
Staphyloccus aureus, se agreguen y formen grupos. Es importante sealar que esta
prueba funciona in vivo produciendo una barrera en el sitio de la infeccin estafiloccica.
La deteccin de la protena constituye la prueba de identificacin principal de
Staphyloccus aureus. 2
Con los resultados obtenidos de las pruebas bioqumicas podemos afirmar, que
efectivamente obtuvimos Staphyloccos aureus, ya que las caractersticas de esta bacteria
es que son cocos grampositivos, catalasa- positivos dispuestos en cmulos, y que estn
caracterizadas por presentar coagulasa. Vemos que por su componente estructural, se
adhieren a los tejidos del husped como la piel y la mucosa.3 La informacin confirma, ya
que las muestras hechas fueron de estas reas de cuerpo.
Las enfermedades que ocasiona S. areus es por las toxinas que la producen. Es de
importancia clnica, debido a que causan infecciones como infecciones cutneas,
foliculitis, carbunco, artritis sptica, neumona2
Conclusin
Se pud indentificar Staphyloccos aureus por las caractersticas que present la colonia
como su coloracin, consistencia y morfologa. Adems que el medio de cultivo es
selectivo para Staphyloccos aureus, al realizar las pruebas bioqumicas como coagulasa
y catalasa fueron positivas, si confirmando la bacteria Staphyloccos aureus.

Referencias
1. Romero C. R. (2007). Microbiologa y Parasitologa humana, 3a Edicin, Editorial
Panamericana. Pg. 428-429, 432,433-434.
2. Murray R.P, Rosenthal K.S. (2009). Microbiologa Mdica, 6a Edicin, Editorial
ELSEVIER MOSBY, Pg. 209-215.
3. Jawetz, Melnick y Adelberg (2011), Microbiologa mdica, 25 Edicin, Editorial Mc
Graw Hill, Pg. 12, 69 154,187-189, 273, 296.
4. Recuperado el 18 de Noviembre de 2013:
http://microbelibrary.org/home
5. Recuperado el 18 de Noviembre de 2013:
http://britanialab.com.ar/esp/productos/b02/estafilococomedio110.htm