Estructura qumica de las microcistinas

Dentro de las hepatotoxinas, las ms conocidas y estudiadas son las microcistinas (MC) debido a
que son las toxinas que se sintetizan con mayor frecuencia. Las microcistinas son heptapptidos
cclicos producidas por algunas cepas de los gneros Microcystis, Planktothrix, Oscillatoria, Anabaena,
Nostoc, Anabaenopsis y Hapalosiphon, entre otros.
Las microcistinas estn formadas por cinco aminocidos invariables: d-alanina , cido
d-metilasprtico , Adda cido 3-amino-9-metoxy-2,6,8-trimetil-10-fenil-4,6-dienoico, cido dglutmico y N-metildihidroalanina ; y dos L-aminocidos.
Actualmente, se han caracterizado ms de 70 variantes de microcistina que difieren en su toxicidad
La MC-LR es la ms comn, sin embargo, se sabe que en una cepa de cianobacteria se puede
encontrar ms de una variable de microcistina
Algunos mtodos para la deteccin de microcistinas son: HPLC, bioensayos con invertebrados,
inhibicin de las protenas fosfatasas (PP1A) e inmunoensayos con anticuerpos monoclonales y
policlonales y el uso de diversas tcnicas moleculares (PCR, RT-PCR)

Toxicidad de las microcistinas

Las microcistinas actan como potentes inhibidores de las protenas fosfatasas tipo 1 y 2A (PP1 y
PP2A).La fraccin Adda tambin es necesaria en la unin de la toxina a la protena fosfatasa, esta
Union es a travs de enlaces covalentes y es altamente especfica.
Se ha propuesto que la subunidad -ATP-sintasa acta como nuevo blanco intracelular de la
microcistina-LR y se sugiere que es secundario, debido a que solamente se unen cuando las clulas
son expuestas a altas concentraciones de microcistina y que esto promovera la sealizacin apopttica
por la va mitocondrial .
As mismo, las microcistinas inhiben el crecimiento y el metabolismo normal de algunas plantas y se
ha documentado que stas toxinas puede acumularse en los tejidos de la planta y pueden ser
consumidas y acumuladas en la cadena alimentaria .

Biosntesis de las microcistinas

Las microcistinas se sintetizan por va no ribosomal de pptidos (NRPS), ste tipo de sntesis se da
por una familia de enzimas modulares multifuncionales, en donde cada mdulo es responsable de la
activacin, modificacin y condensacin de un solo aminocido. Estas enzimas forman complejos que

sirven como plantillas para la biosntesis de pptidos siendo una va alterna en la formacin de
polipptidos en los ribosomas .
El locus gentico responsable de la biosntesis de microcistinas fue identificado y secuenciado en
Microcystis aeruginosa. ste consiste en un cluster de genes y tiene una estructura combinada, un
polictido sintasa (PKS), un pptido sintetasa (NRPS) y un transportador putativo ABC

Determinacin de microcistinas por diferentes mtodos

De manera natural en los blooms se pueden encontrar cianobacterias toxignicas y no toxignicas,
la identificacin de dichos microorganismos a menudo resulta imposible nicamente por observacin al
microscopio ya que no presentan diferencias morfolgicas aparentes . Ante
esto surge la necesidad de usar otros mtodos para determinara las cepas toxignicas productoras de
microcistinas e identificar la estructura qumica de dicho compuesto.
Existen diversos mtodos usados para detectar e identificar microcistinas en el agua y en el
contenido intracelular; varan mucho en el costo, tiempo de preparacin de la muestra, complejidad del
equipo y de la tcnica, grado de deteccin y precisin, entre otros .
Actualmente para determinar la toxicidad de cianobacterias, principalmente de las cepas
productoras de microcistinas se usan mtodos analticos con gran precisin dentro de los que se puede
mencionar: la cromatografa lquida (LC), la espectroscopia de masas (MS) y la cromatografa lquida de
alta resolucin (HPLC), stos mtodos permiten la separacin e identificacin de microcistinas en una
mezcla. Otro mtodo fisicoqumico es el MMPB, el cual se basa en la identificacin del cido 2-metil3metoxi-4-fenilbutrico (MMPB) como un producto de la oxidacin de microcistinas y su grado de
deteccin es de picomoles. Dentro de los ensayos enzimticos, se encuentra la inhibicin de fosfatasas,
que utiliza los procesos bioqumicos afectados por las toxinas a nivel celular y molecular; su lmite de
deteccin es de nanogramos. Tambin se puede realizar sin marcaje radiactivo mediante un mtodo
colorimtrico .
As mismo, se han desarrollado ensayos inmunolgicos que emplean anticuerpos mono- o
policlonales, el mas conocido es el ensayo de ELISA, es capaz de detectar microcistinas en los niveles
estipulados por la Organizacin Mundial de la Salud (OMS), del orden de los microgramos .
Se han producido anticuerpos monoclonales para distintos tipos de microcistinas como la LR,
RR, YR, LY y LA.

Tambin para el monitoreo de blooms de cianobacterias, se han utilizado mtodos moleculares

como son la deteccin y caracterizacin de cidos nucledos, extraccin, hibridacin, secuenciacin de
DNA y la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR). Por otro lado la amplificacin polimrfica al azar
de DNA (RAPD) y el polimorfismo en la longitud de los fragmentos de restriccin (RFLP)-PCR son tiles
para distinguir genotipos en las comunidades de cianobacterias es decir se
puede discriminar entre cepas toxignicas y no toxignicas, empleando un patrn de toxicidad.

Localizacin de las microcistinas en las clulas

Las microcistinas se localizan en un 90% en el interior de las clulas de las cianobacterias y se ha
detectado la presencia de microcistina preferentemente asociada al rea de los tilacoides en un 69%,
incluyendo la membrana externa de stos; en el nucleoplasma en un 19% y en la periferia de los
grnulos de polifosfato en un 3% .
La afinidad de las microcistinas por el fierro y otros cationes, como el cobre y zinc hacen suponer
que estas molculas actan en la bsqueda de dichos nutrientes. Los siderforos extracelulares atrapan
el Fe2+ del ambiente para uso de las clulas en condiciones de baja disponibilidad de fierro, es decir, a
bajas concentraciones hay una gran cantidad del complejo de microcistina / siderforo .
Intracelularmente, las propiedades de los siderforos pueden tener un impacto negativo en las
funciones celulares, debido a la competencia con los metabolitos primarios cuando el fierro es limitado;
por el contrario, en condiciones de alta concentracin, un siderforo intracelular puede tener una funcin
protectora contra los iones ferrosos, formando complejos de fierro / microcistina y, por lo tanto,
mantener un nivel bajo de los radicales libres celulares (Kaebernick y Neilan, 2001).
Se cree que la fraccin Adda de la toxina se une a los tilacoides (donde se encuentra la mayor
proporcin de microcistina), dejando libre el anillo polar del pptido para unirse a los metales del
citoplasma. Esta asociacin con el aparato fotosinttico de la clula, puede indicar una supuesta funcin
en la cosecha de luz y el mecanismo de adaptacin cromtica de algunas cianobacterias. Estudios de
regulacin gentica demostraron el incremento de la transcripcin de los genes en la produccin de
microcistinas en niveles altos de luz .

Estabilidad, degradacin y remocin de microcistinas

Las microcistinas son extremadamente estables a la hidrlisis enzimtica, pH extremos, a
temperaturas hasta los 300C y no son destruidas por oxidantes comunes. Su vida media es
aproximadamente 10 semanas a 40C y pH 10 . Para su
remocin se debe eliminar la estratificacin, minimizar la incorporacin de nutrientes, reducir los
tiempos de residencia y no usar alguicidas como el sulfato de cobre ya que al provocar la lisis de las
cianobacterias se liberan las toxinas. La degradacin completa de las microcistinas requiere de un
tratamiento a reflujo con cido hidroxiclrico 6 N y cido trifluoroactico .
Los sistemas de potabilizacin del agua no son los adecuados para retener las cianotoxinas ,
el uso de algunas sustancias como el Reglone A, NaOCl, KMnO4, Simazina y CuSO4,
pueden ser tiles para el control de cianobacterias, debido a que impiden la sntesis de la pared celular,
reacciones enzimticas y la fotosntesis .Sin embargo, hay que tener cuidado
al elegir el tratamiento para el control de cianobacterias, ya que como se ha mencionado anteriormente
las microcistinas se localizan dentro de la clula y una liberacin repentina de estas toxinas en el cuerpo
de agua puede representar un riesgo potencial para los animales y los seres humanos principalmente
cuando se utiliza como fuente de agua potable

Mtodos para la degradacin de Microcistinas

Las aguas contaminadas por la actividad humana pueden, en general, ser procesadas eficientemente por
plantas de tratamiento biolgico, por adsorcin con carbn activado u otros adsorbentes, o por
tratamientos qumicos convencionales (oxidacin trmica, cloracin, ozonizacin, permanganato de
potasio).
Fenton
El proceso Fenton ha resultado efectivo para degradar compuestos alifticos y aromticos clorados,
PCBs, nitroaromticos, colorantes azo, clorobenceno, PCP, fenoles, fenoles clorados, octacloro-p-dioxina
y formaldehdo. Los compuestos que no pueden ser atacados por este reactivo son pocos, entre ellos la
acetona, el cido actico, el cido oxlico, las parafinas y los compuestos organoclorados (Bigda, 1995).
Es un buen oxidante de herbicidas y otros contaminantes de suelos tales como hexadecano o Dieldrin.
Las ventajas del mtodo son varias: el Fe (II) es abundante y no txico, el perxido de hidrgeno es fcil
de manejar y ambientalmente benigno. No se forman compuestos clorados como en otras tcnicas
oxidantes.

La reaccin de Fenton es conocida como un mtodo alternativo de generacin de especies muy

reactivas. Sales de metales de transicin, tales como Fierro pueden activar H2O2 en las reacciones
subsecuentes:

El radical hidrxilo HO. y el radical superoxido HO2 convierten el sustrato a la forma del radical, el cual
subsecuentemente es oxidado y dimerizado. Los procesos de activacin empleados de H2O2 por sales
de fierro tienen un uso efectivo al tratar aguas contaminadas con varios compuestos orgnicos,
incluyendo contaminantes nitroaromaticos.
Foto-Fenton
La reaccin de Fenton aumenta su eficiencia por iluminacin debido a varios factores:
La fotlisis de hidroxicomplejos de Fe3+ es una fuente adicional de HO.

El Fe(II) foto generado de esta manera produce grupos HO. a travs de la ecuacin, y contina el ciclo.
Permite el uso de longitudes de onda desde 300 nm hasta el campo visible. Las concentraciones de Fe
(II) a emplearse pueden ser de rdenes de magnitud menores, que en la reaccin de Fenton
convencional. Si se usan radiaciones menores que 360nm, se puede aprovechar la produccin de HO.
generada por fotlisis del H2O2.
El mtodo es eficiente pero tiene la desventaja de que debe agregarse H2O2 continuamente y mantener
condiciones cidas. Trata con xito compuestos nitroaromticos, fenoles policlorados, herbicidas (2,4D y
2,4,5-T) y plaguicidas.