Optativa III Hongos

Prctica de Laboratorio No. 4

AISLAMIENTO DE HONGOS FITOPATOGENOS
INTRODUCCION
Para el control de una enfermedad, es indispensable conocer el agente causal,
de lo contrario cualquier tipo de control que se implemente ser infructuoso y
por el contrario podra agravar el estado de la enfermedad original.
Un diagnstico preciso se inicia siempre con una muestra representativa y la
observacin apropiada del entorno de la planta. Esto ayudara al momento de
observarla lesin y decidir qu tipo de microorganismo o agente externo podra
estar causando los sntomas de la enfermedad.
En el laboratorio la muestra es sometida a diferentes anlisis en busca de
evidencias o pistas para la identificacin definitiva del agente causal. En el
procedimiento se incluyen exmenes macroscpicos, microscpicos, cultivo,
pruebas serolgicas, bioqumicas de acuerdo al tipo de espcimen, al
microorganismo en sospecha y a las disponibilidades de materiales del
laboratorio. En algunos casos los simples exmenes preliminares responden a la
incgnita, de acuerdo a la experiencia del observador, pero a veces se requiere
procedimientos ms especficos para lograr un diagnstico ms preciso.
OBJETIVO:
Realizar el diagnstico del agente causal de enfermedades de hongos en
plantas.
MATERIALES
-

Muestras de rganos de plantas con lesiones, deformaciones de tejido,

decoloraciones pudriciones:
o Tallos de plantas con manchas, depresiones o pudriciones secas
o Frutillas con pudricin y moho gris
o Bulbos de cebolla con pudricin y moho blanco, que se vea la
decoloracin
o Hojas y tallos de plantas con lesiones de coloracin caf obscura

Platos Petri con medios de cultivo PDA para el crecimiento de hongos en

general
Bisturs con hojas, pinzas, platos Petri vacos, papel absorbente estril
Alcohol 70%, Clorox, Agua estril.
Hipoclorito de Sodio 1%
Cinta adhesiva transparente
Porta y cubreobjetos
Agujas de diseccin
Azul de lactofenol, azul de metileno u otros colorantes
Incubadora

Microscopio compuesto y estereoscopio

Mechero

METODOS
Observacin directa por presencia de signos en el tejido
-

Examine el ejemplar que le toc. Mire el tipo de lesin, tamao color,

consistencia
Si encuentra abultamientos, rizomorfos o alguna otra estructura
sospechosa que no pertenezca a la planta proceda a mirar en el estreomicroscopio y luego retirar un poco de tejido con el bistur y a observar en
el microscopio, utilizando tincin simple
Describa el posible agente causal
Si no es posible la identificacin proceder con el siguiente paso

Cmara hmeda
-

Lavar bien la muestra en agua corriente

Lavar despus con agua estril
Seque con un pedacito de papel toalla estril
Retire todo el material muy descompuesto dejando un poquito de tejido
daado, la zona decolorada y la sana
Colocar la muestra preparada en las tarrinas sobre una cama de papel
toalla humedecido
Tapar y esperar hasta la prxima clase para buscar estructuras de hongos
para su identificacin.

Se pueden hacer cmara hmeda y aislamiento el mismo da.

Aislamiento del agente causal
-

Lavar bien la muestra en agua corriente

Seque con un pedacito de papel toalla
Retire todo el material descompuesto dejando un poquito de tejido
daado, la zona decolorada y la sana
Realizar pequeos cortes (de 2 a 3 mm) de la zona de avance de la
infeccin donde el patgeno esta activo e invadiendo nuevo tejido
Colocar los trocitos en un plato Petri limpio
Desinfectar los trozos aadiendo directamente etanol al 70% hasta
cubrirlos
Dejar por uno o 2 minutos y eliminar el alcohol
Enjuagar con agua destilada estril, botar el agua
Aadir solucin de hipoclorito de sodio al 1%
Dejar actuar por 2 minutos y eliminar
Enjuagar dos o tres veces con agua destilada estril
Sacar las muestras del agua con una pinza estril y depositar en papel
filtro estril
Utilizando un par de pinzas flameadas y fras, transportar cada pedacito a
la superficie del medio de cultivo contenido en cajas Petri. Poner cinco
pedacitos por plato
Incubar en 24 a 28C por 4 a 8 das.

Identificacin microscpica de los aislamientos

-

Hacer montajes en el portaobjetos con agujas de diseccin

Observar al microscopio buscando por estructuras que nos indiquen el
gnero del hongo
Anotar en su bitcora