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ACTIVIDAD PRCTICA N 1
RECONOCIMEINTO DEL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA.
TECNICAS DE ESTERILIZACION
1.1.- OBJETIVOS:
Familiarizar al alumno con los materiales y equipos empleados en el
laboratorio de Microbiologa, su importancia, la utilidad que prestan, y el
cuidado que debe proporcionrseles para su buen funcionamiento.
Desarrollar el concepto de esterilizacin.
Conocer los fundamentos de los diferentes mtodos de esterilizacin
aplicados en el laboratorio de microbiologa.
Agrupar los materiales de acuerdo al mtodo de esterilizacin aplicado.
Aplicar el mtodo de esterilizacin
1.2.- MATERIALES Y REACTIVOS:
Materiales: Tubos de ensayos, pipetas, matraces, beakers, placas de petri,
tubos de fermentacin, Cilindros graduados, porta objetos, cubre objetos,
mecheros esptulas, kitasatos, pizetas, asas de inoculacin, agujas de
inoculacin, pinzas, jarras de anaerobios.
Equipos: Autoclave, microscopios, estufas, balanzas, cabinas de inoculacin,
incubadoras, bomba de vaco, horno, refrigeradores.
Reactivos: Medios de cultivo
1.3. - INTRODUCCIN.
PRINCIPALES UTILES E INSTRUMENTOS EMPLEADOS EN EL
LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA.
El laboratorio de microbiologa es un espacio destinado para realizar
anlisis que permitan determinar la calidad microbiologa del alimento, este
debe estar ubicado en una zona de poca contaminacin ambiental y poseer
un rea amplia, para permitir el desarrollo de las diferentes labores y para
ubicar adecuadamente los equipos y mobiliario.
A diferencia de un laboratorio de anlisis general de alimentos en el
laboratorio de microbiologa se encuentran equipos y materiales de uso
especfico que son necesarios para realizar dicho anlisis, entre esos
materiales se encuentran:
Porta objetos: Son laminas de vidrio rectangulares de 70 mm de largo, por
26mm de ancho y de 1mm de espesor, los bordes estn generalmente
biselados, los excavados en gota pendiente.
Cubre objetos: Son delgadas laminas de vidrio de forma cuadrada o
redonda de medidas variables, comprendidas generalmente entre 15mm a
22mm, o ms de dimetro o lado, por 0.17 a 0.20mm de espesor.
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Limpieza: Los porta objetos y cubre objetos generalmente se encuentran

engrasados por el contacto de las manos, antes de usarlos convienen
desengrasarlos, por el cual se lavan con agua y se sumergen en alcohol o en
una mezcla sulfocromica.
Tubos de ensayo: Existen de varios tamaos, el tipo utilizado
habitualmente mide 16cms de largo por 18mm de dimetro, los de tamao
pequeo miden 11cms. Tiene mltiple aplicaciones en el Laboratorio
especialmente como recipiente de medios de cultivos. Este debe obturarse
su boca con un tapn de algodn, al fin de conservar su esterilizacin.
Placas de petri: Son recipientes en forma cilndrica, compuesto de caja y de
tapa de vidrio, los hay de varios tamaos, las de uso mas corriente miden
10cm, de dimetro por 20mm de altura y de menos tamao 8cms por 15 mm
o de 6cms por 15mm. Se utiliza para obtener una amplia superficie de
siembra en los medios slidos.
Tubos de fermentacin durham: Son pequeos tubos de 70 x 10 mm, que
se coloca al fondo de un tubo de ensayo y que se utiliza para evidenciar la
produccion de gas de una bacteria al fermentar determinados azucares.
Tubos de centrifuga: Se emplean para contener lquidos de los que quiere
separar por la fuerza centrifuga, partculas, clulas o microbios que se
encuentren en suspensin. Son de diversos tamaos, formas y medidas, las
cuales desde 5ml de capacidad hasta 300ml.
Frascos kitasato: Son matraces de forma igual a los Erlen Meyer, de vidrio
ms grueso y con una tubuladora lateral. Se utiliza para filtrar al vaco.
Vasos cnicos: Son probetas de forma cnica con el vrtice truncado hacia
abajo. Las hay graduales y sin graduar.
Asa de platino, agujas de inoculacin, mangos de kolle: Estos son
instrumentos muy usados en microbiologa. Los primeros son alambres de
platino o de niquel-cromo, de unos 6 a9cm de longitud por 1mm mas o
menos de grosor, que van insertadas en el extremo de una varilla con
dispositivo de rosca en el extremo. MANGO KOLLE. Se llama asa cuando el
extremo libre se dobla en forma de anillo bien cerrado y con el dimetro de
mas o menos 4mm /asa normal y se utiliza para sembrar en la superficie de
los medios slidos o para tomar pequeas porciones de cultivo liquido para
su traspaso a otro medio o para su examen microscpico.

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Aguja de inoculacin: Cuando es recta sin anillo y se usa par sembrar en

picadura en la profundidad de un medio slido de tubo o para tomar
pequeas porciones de un cultivo sobre medio slido como por ejemplo para
tomar con precisin un fragmento de colonia en la superficie de un medio de
cultivo. Se usa para sembrar o tomar picadura pequeas porciones de un
cultivo sobre medio slido.
Esptulas de Drigalsky: Se utiliza para la diseminacin del material sobre
la superficie de los medios de cultivo, corrientemente se fabrican en el
mismo laboratorio.
Pipetas: Son tubos que terminan en una extremidad afilada, se emplean en
el trasvase de lquidos y se cargan aspirando por el extremo romo. Las hay
graduadas indicando el volumen que contienen.
Pipetas Pasteur: Tienen dimetro de 4 a 8 mm, una de sus extremidades
est muy alargada y de calibre muy disminuido. Se utilizan cuando hay que
manejar una cantidad de medio cultivo que resulta grande para el asa de
platino. Toda pipeta lleva cerca del extremo por donde se absorbe un trozo de
algodn que impide que los lquidos puedan llegar a la boca del operador
adems asegura la esterilidad en su interior.
Autoclave: Es esencial en cualquier laboratorio de microbiologa, la mayora
de los medios de cultivo y materiales contaminados son rutinariamente
esterilizados en l.
Adems de estos materiales tambin se utilizan instrumentos y equipos
que son de uso general en un laboratorio tales como: Balones, balones
aforados, matraces erlenmeyers o fiolas, frascos lavadores o picetas,
cilindros graduados, beakers, embudos, morteros
ESTERILIZACION: Este concepto denota la destruccin o eliminacin
de todos los organismos vivientes y sus esporas en un determinado material
o producto. El mtodo para alcanzar la esterilidad esta determinado por las
caractersticas del producto. La eleccin del proceso de esterilizacin mas
adecuado requiere un conocimiento del equipo usado y de la estabilidad del
material a utilizar.
METODOS DE ESTERILIZACION:
A.-AGENTES FISICOS
1.- CALOR
1.A.- Calor Hmedo:
a.- Vapor a presin: uso de autoclave a 15 lb de presin a 121C
por 15 minutos
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b.- Tindalizacin.
c.- Agua Hirviendo
d.- Pasteurizacin
1.B.- Calor Seco:
a.- Aire Caliente.
b.- Incineracin
2.-RADIACIONES:
Rayos Ultravioletas
Rayos X
Rayos Catdicos
Rayos Gamma
B.- AGENTES MECANICOS:
1.- Filtracin
a.- Filtros de Profundidad
b.- Filtros de Superficie (membranas filtrantes)
C.- AGENTES QUIMICOS:
1.- Gaseosos: Oxido de etileno, betapropio lactona, formaldehido
2.- No Gaseosos:
a.- Derivados de mercurio
b.- Cuaternaria de Amonio
c.- Compuestos Fenlicos
Antes de la actividad prctica investigue:
Caractersticas de los mtodos de esterilizacin indicados en la
introduccin de la prctica.
Caractersticas generales que debe tener un laboratorio de
Microbiologa de Alimentos.
1.4 DESARROLLO EXPERIMENTAL
TRABAJO PRACTICO N1. RECONOCIMIENTO DE MATERIALES Y
EQUIPOS UTILIZADOS EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA.
1.- Observe e identifique los materiales presentados.
2.-Elabore una lista con los materiales especficos que se utilicen en el
laboratorio de microbiologa, la lista debe contener:
Tabla 1: Materiales utilizados en el laboratorio de microbiologa
INSTRUMENTO
DESCRIPCION
FUNCION

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TRABAJO PRACTICO N 2: PREPARACION Y ESTERILIZACION DE

MATERIAL.
El proceso de esterilizacin se aplica dependiendo del material a
esterilizar, el procedimiento a seguir es el siguiente:
Pipetas: Con un alambre de grosor adecuado, se les coloca en la
boquilla un trozo pequeo de algodn que acta como filtro, impidiendo la
contaminacin del material absorbido con los microbios del operador, y a la
vez acta como protector de este evitando la llegada del liquido a la boca. A
estas pipetas para ser esterilizadas se les coloca dentro de cajas o estuches
metlicos, o envueltas en papel aluminio, y se les esterilizas por calor seco a
160 C durante 2 horas.
Tubos de ensayo: Se tapan uno a uno con algodn, y se envuelven en
grupos o se colocan en cestas para ser esterilizados. El tapn debe quedar
introducido en el tubo no debe quedar ni muy flojo ni muy apretado.
Placas de Petri: Se envuelven individualmente en papel aluminio o
se colocan en los porta placas.
Otros Materiales: Los matraces, balones, cilindros graduados, fiolas y
frascos se tamponan como los tubos (con algodn) y se cubre el algodn con

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papel aluminio antes de ser esterilizados por calor seco a 160- 180C por 2
horas.
Esterilizacin en autoclave:
1.- Coloque los tubos de ensayo contenido cada uno medio de cultivo
en cestas metlicas. Protjalos con una cubierta de papel aluminio.
2.- Esterilizar en autoclave a 15 lbs de presin, 121C por 15 minutos.
Nota: Siga las indicaciones de su profesor.
El REPORTE DE DATOS debe presentar:
Portada
Contenido:
1.-. Desarrolle una analoga entre el laboratorio de microbiologa
visitado y las caractersticas generales que debe tener un laboratorio de
Microbiologa de Alimentos segn la bibliografa.
2.- Presente la Tabla 1: Materiales utilizados en el laboratorio de
microbiologa, con la respectiva informacin solicitada. Destaque los
materiales ms resaltantes utilizados en el anlisis microbiolgico.
3.- Describa el principio de los mtodos de esterilizacin observados
durante la actividad prctica e indique la importancia de su utilizacin en el
anlisis microbiolgico de alimentos.
Conclusiones
Bibliografa

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