ALTERACIONES CAUSADAS POR UN ANTIBITICO EN LA MOSCA

Drosophila melanogaster.

RESUMEN:
La mosca de la fruta Drosophila melanogaster presenta una serie de
caractersticas que la hacen un material biolgico para ser utilizada como
modelo experimental, ya que tiene un ciclo de vida muy corto, distincin clara
entre cada una de sus fases de desarrollo, gran cantidad de descendientes, su
mantenimiento requiere poco espacio y es de costo reducido.
De tal manera que esta mosca es un material ideal para poder experimentar a
nivel bachillerato, ya que presenta diferentes etapas de desarrollo (huevo, tres
estadios larvales, pupa e imago) las cuales pueden ser expuestas a distintos
tratamientos experimentales por parte de los estudiantes.
En el presente trabajo la mosca fue sometida al antibitico de amplio espectro;
Trimetropina

+ Sulfametoxazol

utilizado contra

la

Bronquitis y otras

enfermedades infecciosas de las vas respiratorias y del aparato digestivo. La

Trimetropina es una base dbil lipfilia bacteriosttica, interviene en la
reduccin del fosfato, lo que afecta la produccin de ADN y protenas. El
Sulfametaxazol es un antibacteriano sistmico anti protazoo que inhibe de
manera competitiva una enzima bacteriana cofactor en la sntesis de purinas
del ADN.
Este antibitico fue suministrado en diferentes concentraciones a las larvas de
las moscas que se encuentran en su tercer estadio, que corresponde a los tres
das despus de su eclosin.
Los resultados obtenidos indican

el ndice de sobrevivencia (IS) como el

principal indicador de efecto para evidenciar el dao causado por el antibitico,

as como la obtencin del error estndar y la desviacin estndar, por ltimo se
llev acabo una revisin morfolgica externa del organismo para identificar los
tipos de alteraciones presentadas, observndose varias alteraciones.

MARCO TERICO:
Drosophila melanogaster ( literalmente amante del rocio de vientre negro),
tambin llamada mosca del vinagre o mosca de la fruta, es una especie de
dptero braqucero de la familia Drosophilidae. Recibe este nombre debido a
que se lo encuentra alimentndose de frutas en proceso de fermentacin tales
como la manzana, pltano, uva etc. Es una especie utilizada frecuentemente
en experimentacin gentica, dado que posee un reducido nmero de
cromosomas ( 4 pares), breve ciclo de vida ( 15-21 das) y aproximadamente el
61% de los genes de enfermedades humanas que se conocen tiene una
contrapartida identificable en el genoma de las moscas de la fruta, y el 50% de
las secuencias protenicas de la mosca tiene anlogos en los mamferos.
Para propsitos de investigacin, fcilmente pueden reemplazar a los
humanos. Se reproducen rpidamente y presenta diferentes etapas de
desarrollo (huevo, tres estadios larvales, pupa e imago) las cuales pueden ser
expuestas a diferentes frmacos, de modo que se pueden estudiar muchas
generaciones en un corto espacio de tiempo y observar sus alteraciones, ya se
conoce el mapa completo de su genoma. Fue adoptado como animal de
experimentacin gentica por Thomas Morgan a principios del siglo XX. Sus
165 Mb de genoma ( 1 Mb= 1 milln de pares de bases) fueron publicados en
marzo 2000 gracias al consorcio pblico y la compaa Celera Genomies.
Alberga alrededor de 13.600 genes.
La metodologa utilizada (tratamiento de un frmaco) es una herramienta que
permite evaluar el dao ocasionado por agentes extraos en poco tiempo y a
bajo costo. La prueba se basa en exponer a larvas de tercer estadio por va de
alimentacin al compuesto a probar ( antibitico de amplio espectro;
trimetropina + sulfametoxazol), de manera que la actividad txica de ste,
interfiera con los procesos de regulacin de la fase de metamorfosis (pupa) del
organismo ocasionando alteraciones evidentes en la fase adulta.
El antibitico Sulfametoxazol + Trimetropina es un antibacteriano sistmico anti
protazoo de amplio espectro, el sulfametoxazol es anlogo estructural del acido
amino benzoico

(PABA) que inhibe de manera competitiva una enzima

bacteriana, la dihidrop-teroato sintetasa, que es responsable de bloquear la

2

sntesis de purinas, timidina del DNA, las bacterias sensibles son aquellas que
han de sintetizar cido flico. La accin de la sulfamida es antagonizada por el
PABA y sus derivados (procaina y tetracaina) y por la presencia de pus o
detritos celulares, componentes necesarios para el crecimiento bacteriano.
La Trimetropina es una base dbil lipfilia bacteriosttica, estructuralmente
relacionada con la primetamina, se une a la enzima bacteriana dihidrofolato
reductasa inhibindola. De esta manera bloquea en forma selectiva la
conversin del cido dihidroflico a su forma funcional, cido tetrahidroflico.
Esto agota el folato, lo que interfiere en la produccin del cido nucleico y
protenas bacterianas. La Trimetropina ejerce su efecto en un estado de la
biosntesis de folato inmediatamente posterior al estado en el que acta el
sulfametoxazol. Se produce una accin sinrgica entre ambos por la inhibicin
de la produccin de tetrahidrofolato en dos pasos secuenciales de su
biosntesis. Se distribuye ampliamente en tejidos y liquidos y atraviesa la
placenta con facilidad. Su unin a las protenas es variable, compitiendo con la
bilirrubina por la unin a la albmina. Slo tiene actividad antibacteriana el
medicamento libre, no unido. Se metaboliza en el hgado, sobre todo por
acetilacin a meta bolitos inactivos que refieren la toxicidad del producto
original. Se elimina por va renal por filtracin glomerular con secrecin tubular
y reabsorcin del producto activo y de los metabolitos.
Este proyecto fue asesorado por la Dra. Patricia Ramos Morales y el Biol. Hugo
Rivas Martnez del Banco de Moscas del Laboratorio de Gentica y Toxicologa
ambiental de la Facultad de Ciencias, UNAM.

PROBLEMA:
Existen diversas sustancias qumicas que producen alteraciones morfolgicas y
genticas en los organismos vivos, una de ellas es el antibitico
Sulfametoxazol + Trimetropina, se han descrito diversos ensayos utilizando una
gran variedad de organismos los cuales han mostrado diversos niveles de
sensibilidad. Dentro de estos modelos, la mosca de la fruta Drosophila
melanogaster ha sido el organismo por excelencia para estudiar a travs de
3

distintas metodologas el dao en el material gentico inducido por estas

sustancias.

OBJETIVO:
Utilizar la metodologa y las tcnicas de cultivo de la mosca de la fruta
Drosophila melanogaster para mantenerla en el laboratorio controlando todas
sus variables y llevar acabo investigaciones experimentales sometindola a la
accin de un antibitico de amplio espectro para observar las alteraciones
producidas por este frmaco.

HIPTESIS:
Cuando la mosca de la fruta Drosophila melanogaster en su estado larvario es
expuesta

la

accin

de

diferentes

concentraciones

del

antibitico

Sulfametoxazol + Trimetropina se observara la presencia de diversas

alteraciones morfolgicas as como en el ndice de Sobrevivencia (IS).

DESARROLLO:
Se acondicion un espacio en el SILADIN del CCH Naucalpan para
realizar el trabajo experimental, teniendo cuidado de contar con todos
los materiales y equipo adecuado.
Los alumnos realizaron investigaciones bibliogrficas y en internet sobre
el desarrollo de la mosca de la fruta Drosophila melanogaster y sobre las
diversas sustancias txicas que puedan provocar alguna alteracin
morfolgica, de manera especifica sobre el

antibitico de amplio

espectro Sulfametoxazol + Trimetropina.

Se preparar el medio de cultivo para que se desarrollen las moscas
silvestres controlando todas las variables y observar en el microscopio
cada una de las etapas de su desarrollo.

Se realiza la sincronizacin de las moscas para que se desarrollen las

larvas de tercer estadio (se presentan a los tres das despus de la
fecundacin de las moscas) que sern utilizadas para someterlas a la
accin del antibitico.
Preparar tubos de ensayo con un medio nutritivo instantneo en hojuelas
en donde se coloca el antibitico en diferentes concentraciones
utilizando de manera inicial 0.82 mg. Que corresponden a 41 ppm. Se
preparan

dos

tubos

para

cada

una

de

las

concentraciones

representados en las serie 1 y serie 2.

Se agregan a cada tubo aproximadamente 100 larvas las cuales se
separan del medio nutritivo con una solucin de agua con azcar y
utilizando un embudo de separacin, posteriormente se mantienen a una
temperatura de 210 C.
Despus de 10 das aparecen los adultos, los cuales se fijan en alcohol
al 70 y se observan al microscopio de diseccin para detectar la
presencia de alguna alteracin morfolgica.
Se obtiene el ndice de Sobrevivencia, el error estndar y la desviacin
estndar, los cuales se presentan en tablas y grficas.

RESULTADOS:
Una vez realizado el desarrollo experimental, se procedi a la
observacin de las moscas que se obtuvieron en cada una de las
concentraciones

utilizadas

del

antibitico

de

amplio

espectro

Sulfametoxazol + Trimetropina, contando el nmero de moscas machos

y hembras del tubo 1 y del tubo 2 obteniendo el ndice de Sobrevivencia
(IS) cuyos datos se encuentran en la tabla 1.

[ ]
Testigo H2O
0.0025
0.005
0.01
0.02
0.04
0.08
0.16
0.32
0.64
1.28
2.56
5.125
10.25
20.5
41

11
12
25
11
10
16
8
18
4
7
3
6
14
9
0
10

SERIE 1

9
12
31
16
12
18
9
14
3
11
2
4
9
12
0
8

TOTAL
20
24
56
27
22
34
17
32
7
18
5
10
23
21
0
18

2
26
23
15
13
14
14
3
17
11
6
2
3
7
19
6
2

SERIE 2
2
31
17
14
11
14
16
11
13
11
6
1
2
16
24
3
3

TOTAL2
57
40
29
24
28
30
14
30
22
12
3
5
23
43
9
5

Tabla 1. Se presenta el nmero de moscas que sobrevivieron a las

concentraciones utilizadas del antibitico (primera columna), la primera fila
presenta los datos del grupo testigo y la ltima columna presenta el total de
cada serie. El experimento se realizo por duplicado (serie 1 y 2).

[ ]
Testigo H2O
0.0025
0.005
0.01
0.02
0.04
0.08
0.16
0.32
0.64
1.28
2.56
5.125
10.25
20.5
41

IS promedio
1
0.951
1.654
0.886
0.796
1.113
0.548
1.063
0.368
0.555
0.151
0.294
0.777
0.902
0.079
0.494

Error estandar
1
0.249
1.146
0.464
0.304
0.587
0.302
0.537
0.018
0.345
0.099
0.206
0.373
0.148
0.079
0.406

Tabla 2. Representa el ndice de Sobrevivencia (IS) en promedio de cada una

de las series con las diferentes concentraciones del antibitico, tambin se
6

presenta el error estndar. Con estos datos se elaboraron las grficas

correspondientes.

ndice de Sobrevivencia promedio para D. melanogaster tratadas con

Trimetropina y Sulfametoxazol
1.8

1.6

ndice de Sobrevivencia

1.4

1.2

0.8

IS prom

0.6

0.4

0.2

0
0.0001

0.001

0.01

0.1

10

[ mM ]

Grfica 1. Obtenida con los datos promedio del ndice de Sobrevivencia de

cada una de las diferentes concentraciones del antibitico.

Grfica 2. Representa el promedio del ndice de Sobrevivencia y el error

estndar de las diferentes concentraciones del antibitico.

Figura 1. Placa Genital alterada.

Figura 2. Placa Genital alterada.

Figura 3. Hembras de diferente tamao.

Figura 4. Una de las hembras presenta el color oscuro del cuerpo

Figura 5. Un macho presenta alteraciones en la placa genital

10

Figura 6. La hembra del centro presenta alteraciones en la placa genital y las

que se encuentran en los extremos presentan una coloracin caf en la placa
genital

ANLISIS:
De acurdo con los resultados presentado en la tabla 1 y 2 podemos mencionar
que existe una diferencia del ndice de Sobrevivencia en relacin con las
diferentes concentraciones de la Trimetropina+Sulfametoxazol lo que indica
que existe una respuesta de las moscas a este compuesto y que puede existir
una variabilidad gentica cuando las larvas se alimentan de este antibitico.
As mismo se puede observar la existencia de alteraciones morfolgicas, las
cuales fueron ocasionadas por la sustancia experimentada, demostrando que
el uso de metodologas experimentales son muy tiles para evaluar el dao o
las alteraciones que se presentan en los organismos.
Tambin se comprueba la utilidad de la mosca de la fruta Drosophila
melanogaster ya que presenta diversas ventajas como organismo modelo para
estudios de diversos frmacos fcil de disolverse en el alimento de las larvas,
11

ya que presenta varias etapas de desarrollo, es de fcil manejo

y muy

econmico su mantenimiento.

CONCLUSIONES
Tomando en cuenta los resultados obtenidos en este trabajo, podemos concluir
que el antibitico de amplio espectro Trimetropina+Sulfametoxazol causa
alteraciones morfolgicas en la mosca de la fruta Drosophila melanogaster
debido a sus componentes qumicos que alteran las bases nitrogenadas del
ADN.

BIBLIOGRAFA:
Barahona, A. (2009). Morgan y la teora cromosmica de la herencia. Filosofa
e historia de la biologa. Facultad de Ciencias. UNAM. Mxico.
Duffus, J. H. (1983). Toxicologa Ambiental. Ediciones Omega S. A. Espaa.
Castaeda, P. L. (2008). Drosophila melanogaster, un modelo experimental.
FES Iztacala, UNAM. Mxico.
Ramos, M. P. y Col. (1999). Manual de laboratorio de Gentica para Drosophila
melanogaster. McGraw-Hill. Mxico.
Tamarin, H. R. (2004). Principios de Gentica. Revert. Mxico.
Weimer.C.R. (2005). Estadstica. CECSA. Mxico,

12