Dra.

Margarita Arana
Facultad de Ciencias y Filosofa
Alberto Cazorla Talleri
Cultivos celulares
Fraccionamiento celular
Crecimiento y mantenimiento de clulas vegetales y animales bajo
condiciones estriles
Requerimientos bsicos
Medio de cultivo
Condiciones estriles
1. Suplemento continuo de material celular homogneo
2. Fcil manipulacin
3. Criopreservacin sin alterar composicin gentica
4. Ms econmico que criar y experimentar animales intactos
5. Salvan la vida de animales
Cuando el cultivo proviene de clulas que han sido disgregadas
de un tejido original tomado de un rgano de un animal recin
sacrificado recibe el nombre de Cultivo primario.
Cultivos primarios
Cultivos secundarios
Cuando uno o varios tipos de
clulas de un cultivo primario se
re-siembran (sub-cultivo), el
cultivo obtenido se denomina
Cultivo secundario. La
heterogeneidad celular ser
menor y el medio utilizado
determinar qu clulas se
desarrollarn.
Fibroblasto
humano
Cuando el cultivo primario o
secundario es sometido a
procesos de transformacin que
le confiere capacidad ilimitada de
multiplicacin, recibe el nombre
de Lneas celulares.
COS1. Rin. African Green Monkey
(Cercopithecus aethiops). SV40
transfected
Anticuerpos
monoclonales
Virus Sendai o
polietilenglicol
http://glencoe.mcgraw-
hill.com/sites/0011042009/student_view0/chapter17/monoclonal_antibody_production.html
Clonacin
https://www.youtube.com/watch?v=q0B9Bn1WW_4
https://www.youtube.com/watch?v=tELZEPcgKkE
Clulas no especializadas
Capaces de dividirse y
producir copias de s mismas
Tienen el potencial de
producir otros tipos de
clulas en el organismo
Multipotentes
S= Autorenovacin de
clulas madre
D=Diferenciacin
terminal
Trofoblasto
(placenta)
Tipos de clulas madre
Totipotentes: Mrula.
Un individuo completo.
Pluripotentes: (embrionarias) Clulas masa interna
blastocisto.
Todos los tejidos excepto placenta
Multipotentes: (adultas). Varios tipos de tejidos.
cordn umbilical
mesenquimales:
mdula sea
pulpa dental
Unipotentes: Slo un tipo de tejido
Piel, msculo, cel. Nerviosas.
Clulas madre embrionarias
(Pluripotentes)
Blastocisto antes (a) y despus (b) de ser
seccionado con lser y sin zona pelcida (c)
En (d) el fragmento pequeo corresponde a la masa
interna de clulas y el ms grande al trofoblasto
Trofoblasto
Clulas de
la masa
interna
http://www.sumanasinc.com/webcontent/animations/content/stemcells.html
Origenes de clulas madre pluripotentes de ratn
129X1/SvJ
Clulas madre pluripotentes
teratocarcinomas
Clulas madre multipotentes (adultas
mesenquimales): Clulas madre
hematopoyticas y de la pulpa dental
Clulas madre multipotentes (adultas)
Clulas madre de cordn umbilical
Existen diferencias significativas entre la sangre de
cordn umbilical y la mdula sea:
1. Las clulas de la mdula sea son difciles
de compatibilizar entre dador y receptor,
porque usualmente se requiere una
compatibilidad perfecta.
2. La sangre del cordn umbilical se obtiene
de forma simple y menos traumtica que la
de la mdula sea.
3. La recoleccin de la sangre de cordn no
es invasiva.
4. Los transplantes de clulas madre del cordn umbilical son
menos costosos de realizar que los transplantes de mdula
sea.
5. Las clulas madre de cordn umbilical tienen
mayor capacidad proliferativa.
6. La disponibilidad es ms rpida
Clulas madre epidermales formando colonias
en el laboratorio
Clulas madre unipotentes: piel
BL = Capa basal; SL = capa espinosa;
GL = capa granular; SC= estrato corneo.
(Hipodermis)
Tipo de clula
madre
Ventajas Desventajas
Embrionaria
Flexibles: Poseen potencial de formar
cualquier clula del cuerpo
Pueden ser difciles de controlar
Inmortales: Un linaje celular puede
aportar indefinidamente clulas
cuidadosamente definidas
Pueden producir rechazo
inmunolgico
Fcilmente obtenidas del interior de
embriones humanos
Origina frecuentemente tumores en el
tejido receptor
Controversiales por motivos de tica y
moral
Adulta
Ya se encuentran parcialmente inducidas
y especializadas
Estar disponibles en cantidades
reducidas
No producen rechazo inmunolgico por
ser de implante autlogo
Finitas: No se dividen por tiempos tan
largos como las embrionarias
Son flexibles, pueden ser usadas para
formar otro tipo de tejido
Son susceptibles de transdiferenciarse
APLICACIONES
(Ratones
Knockout)
Desarrollo de
medicamentos
APLICACIONES
(Ratones
Knockout)
Las aplicaciones de las clulas madre en
terapia
Actualmente se pueden usar en el tratamiento de enfermedades como:
Algunos tipos de leucemias (linfoctica aguda, mieloctica crnica, mielgena aguda),
linfoma de tipo no Hodgkin, Mieloma mltiple, Neuroblastoma, anemias (aplstica,
Fanconi, Falciforme), osteoporosis, Lupus, sndrome de Wiskott Aldrich, sndrome de
Hunter, Tay Sachs, Beta Talasemia.
Actualmente se estn realizando estudios de terapia celular aplicada en:
La reparacin de dao cerebral luego de una embolia, daos en la mdula espinal,
tratamientos de enfermedades cardiovalculares, diabetes, cncer (ovarios, testculos,
mama, pulmn), melanoma, regeneracin de tejidos, sida, alzheimer, parkinson, artritis
reumatoide, cirrosis, etc. Tambin se realizan estudios en la terapia gentica.
Importante: Esta terapia es prometedora pero an est en proceso de investigacin. Las
investigaciones se deben realizar con un consentimiento informado del paciente.
Clonamiento teraputico
Dolly
Ej: clula epitelial
Solter Nature Reviews Genetics advance online publication;
published online 14 March 2006 | doi:10.1038/nrg1827
Reprogramacin nuclear de clulas
diferenciadas
iPS: "induced Pluripotent Stem
ES: Embryonic stem
Clulas madre unipotentes: piel
http://channel.nationalgeographic.com/channel/explorer/videos/the-skin-gun/
APLICACIONES
(Ratones
Knockout)
http://nobelprize.org/nobel_prizes/medicine/laureates/2007/illpres/index.html
Introduccin de cambios genticos
utilizando clulas madre (Ratones
Knockout)
neo
r
: resistencia a
neomicina
Clulas
recombinantes
HSV-tk: gen
timidina quinasa del
herpes virus.
Cultivos tejidos vegetales
Referencias
Molecular Biology of the Cell. 4th edition. Alberts B, Johnson A, Lewis J, et al.
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK21054/
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK26851/
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK26851/
Videos clulas madre
http://www.youtube.com/watch?v=EQTdhhplyeI&feature=related
http://www.youtube.com/watch?v=BVsaPKlC2DE&feature=related
http://www.youtube.com/watch?v=_TLwdHtaaAg&feature=related
http://www.youtube.com/watch?v=BlUe1wroNb0&feature=related
http://www.youtube.com/watch?v=ZyuiJhh7PUQ
http://media.invitrogen.com.edgesuite.net/Cell-
Culture/videos/CellCultureBasics.html?CID=ccbvid1
http://media.invitrogen.com.edgesuite.net/Cell-
Culture/videos/SterileTechnique.html?CID=ccbvid2
http://media.invitrogen.com.edgesuite.net/Cell-
Culture/videos/4CellPassagingCells.html?CID=ccbvid3
http://media.invitrogen.com.edgesuite.net/Cell-
Culture/videos/FreezingCells.html?CID=ccbvid4
http://media.invitrogen.com.edgesuite.net/Cell-
Culture/videos/ThawingCells.html?CID=ccbvid5
Videos cultivo de clulas
http://www.cellsalive.com/cam1.htm
http://stemcells.nih.gov/info/basics/pages/basics1.aspx
http://www.youtube.com/watch
?v=u54bRpbSOgs
http://www.ehu.es/biofisica/jua
nma/mbb/pdf/cultivo_celular.pdf