Prueba Positiva Negativa Reactivos adicionados indicador Fundamento KOH al 3% Formacin de un hilo viscoso Sin cambios, no hay ormacin del hilo viscoso !"# al $% &&&&& La 'rueba de !"# es una 'rueba de con(rmacin de la tincin de )ram. Se utili*a !"# con el (n de disolver las clulas. Las )ram + 'oseen 'aredes celulares gruesas de 'e'tidoglicano y 'or tanto no se lisan. La )ram & con sus 'aredes celulares m,s delgadas y m,s 'orosas se lisan, 'or lo que el -./ sale de las clulas, y la mancha bacteriana se convierte en una masa 'ega0osa o viscosa. Catalasa Formacin de burbu0as1 eervescencia Sin cambios 'er2ido de hidrogeno al $% Se utili*a 'ara com'robar la 'resencia del en*ima catalasa que se encuentra en la mayora de las bacterias aerobias y anaerobias acultativas que contienen citocromo. Oxidasa "bservar si la *ona im'regnada vira a un color a*ul 3 violeta. Sin cambios 4etrametil&'& enildiamina &&&& La en*ima citocromoo2idasa en 'resencia de o2geno o2ida el reactivo 5tetrametil&'& enildiamina6 ormando un com'uesto coloreado llamado indoenol. Medio de glucosa en base rojo de fenol La 'resencia de un color amarillo indica la una reaccin 'ositiva 'ara la ermentacin de la glucosa. Produccin de gas7 burbu0a en la cam'ana de -urham. Sin cambios en el medio, conserva su color original 5ro0o6. &&&& 8o0o de enol 9l medio 'rovee los requerimientos nutricionales 'ara el crecimiento de los microorganismos y contiene 8o0o de Fenol como indicador de '#, virando de color ro0o& naran0a a amarillo en 'resencia del ,cido 'roducido 'or la ermentacin del a*:car. Pruebas Bioqumicas Lab. Bacteriologa Mdica OF Medio !asal de Hug" # $eifson% Microorganismos o2idativos de carbohidratos7 'roducen una reaccin ,cida solo en el tubo ;abierto<. Presentan 'oco o nulo desarrollo y ausencia de 'roduccin de ,cido en el tubo ;cerrado<. Microorganismos ermentadores de carbohidratos7 'roducen una reaccin ,cida en ambos tubos. Microorganismos que no utili*an los carbohidratos7 no se 'roducen cambios en ninguno de los = tubos, los cuales 'ermanecen verdes. &&&&&& /*ul de bromotimol Medio de cultivo, que al ser su'lementado con hidratos de carbono, se usa 'ara determinar el metabolismo o2idativo& ermentativo de las bacterias )ram negativas. Medio de movilidad 9nturbiamiento homogneo del medio >recimiento sobre la lnea de 'icadura &&&&& &&&&&& Sirve 'ara determinar si un organismo es mvil o inmvil. 9l medio de movilidad 'ermite la reali*acin de esta 'rueba debido a que es semislido, 'or lo que las bacterias mviles 'roducir,n un enturbiamiento homogneo del medio debido a la distribucin aleatoria de los microorganismos. Por el contrario, las bacterias inmviles 'ermanecer,n en la misma lnea de la 'icadura en que se sembraron. Medio &'( )*gar de +erro tri,le a-.car/% ?Su'er(cie alcalina1'roundidad ,cida 5'ico ro0o1ondo amarillo67 el microorganismo solamente ermenta la glucosa. !1/ ?Su'er(cie ,cida1Proundidad ,cida 5'ico amarillo1ondo amarillo67 el microorganismo ermenta glucosa, lactosa y1o sacarosa. /1/ ?Su'er(cie alcalina1Proundidad alcalina 5'ico ro0o1ondo ro0o67 el microorganismo es no ermentador de a*:cares. !1! ?La 'resencia de burbu0as o la ru'tura del medio de cultivo indican que el microorganismo 'roduce gas. ?9l ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo 'roduce ,cido sulhdrico. &&&&& 8o0o de enol 9s una 'rueba usada 'ara la ermentacin de la glucosa, lactosa y sacarosa y la 'roduccin de #=S 'or 'arte de la bacteria sum,ndole 'roduccin de gas. Pruebas Bioqumicas Lab. Bacteriologa Mdica Rojo de metilo 0 de 1oges Pros2auer Prueba del ro0o de metilo7 >olor ro0o. >olor amarillo. 8.M 7ro0o de metilo 8o0o de metilo Se 'uede evidenciar la ermentacin mi2ta, en la cual se obtiene como 'roductos (nales ,cidos org,nicos como el ac. actico, lactato , etc. /s como la ermentacin butilen glicolica , en la cual 'or medio del @& natol y del !"# creatina se identi(ca a la acetoina como intermediario. Prueba de Aoges ProsBauer7 -esarrollo de un color ro0o en 'ocos minutos des'us de una com'leta agitacin del tubo. /usencia de color ro0o. A.P7 @&natol y !"# Medio de base de Moeller con lisina3 arginina 0 ornitina 4ubo color 'ur'ura o gris,ceo 4ubo color amarillo P:r'ura de bromocreso l y el ro0o de cresol son indicadores del '#. >uando el medio se inocula con una bacteria ca'a* de ermentar glucosa, se 'roduce ,cido que disminuye el '# y cambia el color del medio del ':r'ura al amarillo. La condicin ,cida estimula la actividad decarbo2ilasa. Si el organismo 'roduce la en*ima a'ro'iada, es degradado el amino,cido a su corres'ondiente amina. La 'resencia de estas aminas, eleva el '# del medio, cambiando el color del indicador del amarillo al ':r'ura o violeta. Si el organismo en estudio, no 'roduce la en*ima decarbo2ilasa o dehidrolasa, el medio 'ermanece ,cido 5amarillo6 'or ermentacin de la glucosa. Caldo urea de 'tuart Cn cambio de color 8o0o ucsia indica que la urea ue hidroli*ada 'or la ureasa del /usencia de cambio de color indica reacciona negativa 8o0o enol Los microorganismos que 'oseen la en*ima Creasa tienen la ca'acidad de hidroli*ar la urea contenida en el medio con 'roduccin de amoniaco, 'ara esta 'rueba se utili*a el Pruebas Bioqumicas Lab. Bacteriologa Mdica microorganismo. caldo urea de stuart o agar urea de christensen. 9l caldo sturat est, estabili*ado con sales de osato a un '# de D.E. el microorganismo en estudio debe 'roducir cantidades relativamente grandes a (n de su'erar el sistema estabili*ador del medio y elevar el '# del medio los su(ciente como 'ara virar el indicador 5'or encima de E.F6 '(M )'ulfuro4 indol4 movilidad/ ?8o0o 5anillo6 3 'resencia de indol 5tri'tano ue degradado6. ?.egro 5'reci'itado6, 'roduccin de #=S ?4urbide* ?/marillo, la bacteria no 'uede degradar el tri'tano ?.o hay 'reci'itado negro ?La bacteria slo crece en la lnea de inoculacin 8eactivo de !ovacs 5'& dimetilamino ben*aldehdo6 &&&&&&& 9l indol, es uno de los 'roductos de la degradacin metablicas del amino acido tri'toano. Las bacterias que 'roducen la en*ima tri'toanasa son ca'aces de hidroli*ar y desaminar el tri'toano con 'roduccin de Gndol, acido 'iruvico y amoniaco. La 'rueba del indol est, basada en la ormacin de un com'le0o ro0o cuando el Gndol reacciona con el gru'o aldehdo '& dimetilaminoben*aldehido. 9ste es el 'rinci'io activo del reactivo de !ovacs. Fenilalanina La 'resencia de ,cido enil'ir:vico 5'rueba 'ositiva6 se mani(esta 'or la a'aricin de un color caracterstico verde oscuro o verde&a*ulado. Sin cambios solucin de cloruro rrico al HF% &&&&& 9sta 'rueba determina la ca'acidad de un organismo 'ara desaminar el amino,cido enilalanina en ,cido enil'ir:vico 'or su actividad en*im,tica de enilalanina desaminasa, con la consiguiente acide* resultante. Citrato de simmons >recimiento y vire del indicador a color a*ul .o hay crecimiento ni vire &&&& /*ul de bromotimol Se basa en la ca'acidad de algunos microorganismos ca'aces de utili*ar el citrato como :nica uente de carbono y las sales de amonio como :nica uente de nitrgeno. ONP5 o4nitrofenil4 6474 galact8sido Formacin de una coloracin amarilla Sin cambios 5trans'arente6 &&&&& &&&& 9l o&nitroenil&I&-&galactsido 5".P)6 es un com'uesto incoloro estructuralmente similar a la lactosa. 9n 'resencia de I& galactosidasa, el ".P) se rom'e en Pruebas Bioqumicas Lab. Bacteriologa Mdica galactosa y o&nitroenil, un com'uesto color amarillo. Prueba del mucato Aire de a*ul&verdoso a amarillo 9l tubo 'ermanece a*ul&verdoso &&&&& /*ul de bromotimol Se utili*a 'ara determinar la ca'acidad de los microorganismos de metaboli*ar el ,cido m:cico como uente de carbono. KCN >recimiento 5turbide*6 en el caldo 'e'etona. Sin crecimiento &&&&&& &&&&&& 9l !>. inhibe la cadena de trans'orte de electrones unindose a los citocromos im'idiendo el crecimiento microbiano. Sin embargo, algunas bacterias no son inactivadas y 'ueden crecer. $(* -escarbo2ilacin 5+67 Pico violeta1ondo violeta. 5!1!6 -esaminacin 5+67Pico ro0i*o1ondo amarillo 581/6 Produccin de #=S 7 9nnegrecimiento del medio 5es'ecialmente en el lmite del 'ico y ondo6 -escarbo2ilacin 5&67 Pico violeta1ondo amarillo. 5!1/6 -esaminacin 5&67 sin cambio en la su'er(cie. &&&&&& Pur'ura de bromocreso l Basada en la evidenciacin de las en*imas que 'uede 'oseer un microorganismo 'ara 'oder descarbo2ilar o desaminar un amino,cido, as como la 'roduccin de #=S. M(O )Movilidad3 indol 0 ornitina/ Movilidad7 Presencia de turbide* o crecimiento m,s all, de la lnea de siembra. "rnitina decarbo2ilasa7 >olor ':r'ura. Prueba del indol7 >olor ro0o al agregar el reactivo revelador. &8esultado negativo7 el color del reactivo revelador 'ermanece incoloro&amarillento. Movilidad7 >recimiento solamente en la lnea de siembra. "rnitina decarbo2ilasa7 >olor amarillo. / veces se 'uede desarrollar un color viol,ceo en la su'er(cie del medio. Prueba del indol7 el color del reactivo revelador 'ermanece incoloro&amarillento. reactivo de !ovacs 5'& dimetilamino ben*aldehdo6 P:r'ura de bromocreso l Permite identi(car bacterias de acuerdo a su movilidad, a la reaccin de Gndol y a la descarbo2ilacin de la ornitina. Medio urea de Cn cambio de color 8o0o ucsia indica que la urea /usencia de cambio de color indica reacciona 8o0o de enol Medio utili*ado 'ara dierenciar microorganismos en base a la actividad Pruebas Bioqumicas Lab. Bacteriologa Mdica C"ristensen ue hidroli*ada 'or la ureasa del microorganismo. negativa ure,sica. /lgunas bacterias hidroli*an la urea 'or medio de la en*ima ureasa liberando amonaco y di2ido de carbono. 9stos 'roductos alcalini*an el medio haciendo virar el ro0o de enol del amarillo al ro0o. Hidr8lisis de gelatina )tubo/ Si des'us del enriamiento el contenido del tubo es liquido. Si con el enriamiento se solidi(ca el contenido. &&&& &&&& Se basa en la ca'acidad del microorganismo 'ara 'oder hidroli*as las 'rotenas a ''tidos y a amino,cidos 'or medio de las en*imas gelatinasas. Reducci8n de nitratos a nitritos con cam,ana de 7ur"am 4oma una coloracin ro0o& ladrillo Burbu0a de gas ne la cam'ana de -urham .o hay cambios ?.ota7 Si no a'arece coloracin ro0a 5ausencia de nitritos6 se aJade un 'oco de *inc5'ara reducir nitratos6 y se observa si a'arece color 5quedaban nitratos6 o 'ermanece incoloro 5no quedaban nitratos en el cultiuvo6. @ natil amina y acido sulanilico. )ranalla de Kn 5 &&&&&&&& 9n esta 'rueba se detecta una res'iracin anaerobia7 la que utili*a nitrato como ace'tor (nal de electrones. Los nitratos se reducen a nitritos y algunas bacterias reducen los nitritos a 'roductos gaseosos 5.= y .="6. Las en*imas res'onsables de ambas reducciones se denominan nitrato y nitrito reductasa, res'ectivamente. *rginina de"idrolasa )*7H/ 4ubo color 'ur'ura o gris,ceo 4ubo color amarillo P:r'ura de bromocreso l y el ro0o de cresol son indicadores del '#. La L&arginina, a la ve* que es cataboli*ada 'or una decarbo2ilasa, 'uede serlo tambin 'or una hidrolasa con el mismo (nal anterior, que es la 'roduccin de alcalinidad, aunque los com'uestos intermedios sean distintos. /s, la L&arginina, 'or accin de arginina dehidrolasa, 'roduce L&citrulina y amoniaco. 2ligler Fermentacin de la glucosa7 amarillo en el ondo. Fermentacin de la lactosa7 amarillo en el 'ico de Lauta. Sin cambios &&&&&& 8o0o enol Se basa en la ca'acidad del microorganismo 'ara utili*ar la lactosa como uente de carbono as como a la glucosa, obteniendo como 'roductos de la ermentacin ,cidos, los cuales hacen que el medio vire. 9l tiosulato de sodio es el sustrato necesario Pruebas Bioqumicas Lab. Bacteriologa Mdica Produccin de gas. /lcalini*acin7 vire de ro0o a ':r'ura. Produccin de #=S 7 '.' negro 'ara la 'roduccin de #=S. Producci8n de acido a ,artir de C&* con diferentes a-ucares La 'resencia de un color amarillo indica la una reaccin 'ositiva 'ara la ermentacin de la glucosa. Produccin de gas7 burbu0a en la cam'ana de -urham. Sin cambios en el medio, conserva su color original 5ro0o6. 8o0o de enol Medio nutritivo que 'ermite el desarrollo de microorganismos e2igentes. 9n el medio de cultivo, la tri'teina es la uente de nitrogeno, amino,cidos y vitaminas. La cistina y el sul(to de sodio avorecen el desarrollo bacteriano, el cloruro de sodio mantiene el balance osmtico. 9l ro0o enol es el indicador de '#, y el agar se encuentra en una concentracin 'tima 'ara lograr un medio semislido, :til 'ara evidenciar motilidad bacteriana y 'ara mantener el 'otencial de o2ido&reduccin que acilita el desarrollo de microorganismos anaerobios 5es'ecialmente cuando se em'lea con su(ciente 'roundidad6. Prueba de Por+rina -esarrollo de Lorescencia de color ro0o ladrillo a naran0a ba0o lu* ultravioleta. Sin cambios de color en la ca'a de reactivo ni en el disco. Solucin de /L/ como sustrato de la en*ima. -iscos /L/. -etecta la ca'acidad de las ce'as de Haemophilus 'ara sinteti*ar intermediarios de 'roto'or(rina en la va metablica biosinttica 'ara la hemina a 'artir del 'recursor /L/.