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Introduccin a los mtodos espectromtricos

PROPIEDADES ONDULATORIAS DE LA RADIACION ELECTROMAGNETICA


El modelo ondulatorio no toma en cuenta los fenmenos relacionados con la absorcin y emisin de energa
radiante.
El termino polarizada en el plano significa que las oscilaciones de los campos elctrico o magntico yacen en un
solo plano.
El componente magntico de la radiacin electromagntica es causante de la absorcin de las ondas de
radiofrecuencia en la resonancia magntica nuclear.
El espectro electromagntico
los mtodos espectroqumicos que emplean no solo radiacin visible, sino tambin ultravioleta se llaman
mtodos pticos a pesar de la incapacidad del ojo humano para detectar cualquiera de los dos tipos de radiacin.
Difraccin de radiacin
Todos los tipos de radiacin electromagntica manifiestan difraccin, un proceso en el cual un haz paralelo de
radiacin se curva cuando pasa por una barrera afilada o por una abertura reducida.
La difraccin es una consecuencia de la interferencia.
Radiacin coherente
Las condiciones de coherencia son que 1) las dos fuentes de radiacin deben tener frecuencias idnticas, o
conjuntos de frecuencias, y 2) las relaciones de fase entre los dos haces deben permanecer constantes en el
tiempo.
En el caso de las fuentes incoherentes, la luz es emitida por los tomos o las molculas, y el haz resultante es la
suma de incontables eventos individuales, cada uno de los cuales tiene una duracin de 10_8 s.
Hay fuentes que producen radiacin electromagntica en la forma de trenes con longitud infinita y frecuencia
constante. Entre los ejemplos estn los osciladores de radiofrecuencia, las fuentes de microondas y los rayos
laser pticos.
Los patrones de difraccin se pueden obtener de fuentes aleatorias, como los filamentos de tungsteno.
Transmisin de radiacin
Las observaciones experimentales demuestran que la rapidez a la que se propaga la radiacin a travs de una
sustancia transparente es menor que su velocidad en el vaco y depende de las clases y concentraciones de los
tomos, iones o molculas que haya en el medio.
El ndice de refraccin de un medio es una medida de su interaccin con la radiacin y se define como


donde ni es el ndice de refraccin a una frecuencia especificada i, vi es la velocidad de la radiacin en el medio
y c es su velocidad en el vaco.
La interaccin involucrada en la transmisin de radiacin se puede atribuir a la polarizacin peridica de las
especies atmicas y moleculares que constituyen el medio.
La variacin del ndice de refraccin en funcin de la longitud de onda o de la frecuencia se denomina
dispersin.
Las grficas de dispersin muestran dos tipos de regiones. En la regin de dispersin normal hay un incremento
gradual del ndice de refraccin acompaado del aumento de la frecuencia (o disminucin de la longitud de
onda). Las regiones de dispersin anmala son intervalos de frecuencia en los cuales ocurren cambios abruptos
en el ndice de refraccin.
La dispersin anmala siempre se presenta en frecuencias que corresponden a la frecuencia natural armnica
asociada con alguna parte de una molcula, tomo o ion de la sustancia. En dicha frecuencia se presenta la
transferencia permanente de energa desde la radiacin a la sustancia, y se observa la absorcin del haz.
Refraccin de la radiacin
Cuando la radiacin atraviesa con cierto ngulo la interfase entre dos medios transparentes de diferentes
densidades, se observa un cambio abrupto de direccin, es decir, de refraccin, del haz, como consecuencia de
una diferencia en la velocidad de la radiacin en los dos medios.
Cuando el haz pasa de un medio menos denso a otro ms denso el cambio de direccin es hacia la normal de la
interfase. El cambio de direccin se aleja de la normal cuando el haz pasa de un medio ms denso a uno menos
denso.
El grado de refraccin sigue la ley de Snell:


Reflexin de la radiacin
Cuando la radiacin cruza una interfase entre medios que difieren en el ndice de refraccin, tambin se presenta
la reflexin. La fraccin de radiacin reflejada se vuelve mayor al incrementarse la diferencia en el ndice de
refraccin. En el caso de un haz que atraviesa una interfase en ngulos rectos, la fraccin reflejada est dada por

donde I0 es la intensidad del haz incidente e Ir es la intensidad reflejada; n1 y n2 son los ndices de refraccin de
los dos medios.
Difusin de la radiacin
Una fraccin muy pequea de la radiacin se transmite en todos los ngulos a partir de la trayectoria original y
que la intensidad de esta radiacin difundida aumenta de acuerdo con el tamao de la partcula.
Difusin de Rayleigh
La difusin mediante molculas o acumulaciones de ellas con dimensiones notablemente ms pequeas que la
longitud de onda de la radiacin se denomina difusin de Rayleigh. Su intensidad es proporcional al inverso de la
cuarta potencia de la longitud de onda, a las dimensiones de las partculas de difusin y al cuadrado de la
capacidad de las partculas para polarizarse. Una manifestacin cotidiana de la difusin de Rayleigh es el color
azul del cielo, el cual es resultado de la mayor difusin de las longitudes de onda ms cortas del espectro visible.
Difusin de molculas grandes
En el caso de partculas grandes, la difusin puede ser distinta en diferentes direcciones (difusin de Mie).
Las mediciones de este tipo de radiacin difusa se usan para determinar el tamao y la forma de molculas
grandes y partculas coloidales. Efecto Tyndall.
Difusin de Raman
El efecto de este tipo de difusin es diferente al de la difusin ordinaria en que parte de la radiacin difundida
sufre cambios de frecuencia cuantizados. Dichos cambios son resultado de transiciones en el nivel energtico
vibracional que ocurren en las molculas como consecuencia del proceso de polarizacin.
Polarizacin de la radiacin
La radiacin ordinaria est constituida por un haz de ondas electromagnticas en las cuales las vibraciones estn
distribuidas de manera equitativa entre una gran cantidad de planos centrados a lo largo de la trayectoria del haz.
Visto de frente, un haz de radiacin monocromtica se puede imaginar como un conjunto infinito de vectores
elctricos que fluctan en longitud desde cero hasta una amplitud mxima A.
Ciertas fuentes de energa radiante producen radiacin electromagntica polarizada en un plano. Por ejemplo,
tanto las ondas de radio que parten de una antena como las microondas producidas por un tubo klystron estn
polarizadas en un plano.
La radiacin polarizada ultravioleta y la visible se producen por el paso de radiacin a travs de medios que
absorben, reflejan o refractan de manera selectiva radiacin que vibra solo en un plano.
PROPIEDADES MECANICOCUANTICAS DE LA RADIACION
Cuando la radiacin electromagntica es emitida o absorbida, se establece una transferencia permanente de
energa desde el objeto emisor o hacia el medio absorbente. Para poder explicar estos fenmenos se requiere
tratar la radiacin electromagntica no como un conjunto de ondas, sino como una corriente o flujo de partculas
discretas llamadas fotones o cuantos.
Efecto fotoelctrico
El voltaje negativo al cual la corriente fotoelctrica es cero se llama voltaje de detencin. Corresponde al
potencial al cual los electrones ms energticos procedentes del ctodo son repelidos por el nodo.
Cuando este experimento se repite a varias frecuencias de luz monocromtica, se obtienen los siguientes
resultados:
1. Cuando se enfoca una luz a frecuencia constante en el nodo a un bajo potencial negativo aplicado, la
corriente fotoelctrica es directamente proporcional a la intensidad de la radiacin incidente.
2. La magnitud del voltaje de detencin depende de la frecuencia de la radiacin que choca con el fotoctodo.
3. El voltaje de detencin depende de la composicin qumica del revestimiento del fotoctodo.
4. El voltaje de detencin es independiente de la intensidad de la radiacin incidente.

Con esta ecuacin se expresa que la energa de un fotn que entra es igual a la energa cintica del fotoelectrn
expelido ms la energa necesaria para expulsar al fotoelectrn de la superficie que est siendo irradiada.
Estados energticos de las especies qumicas
Dos de los postulados ms importantes de la teora cuntica son:
1. Los tomos, iones y molculas tienen la capacidad de existir solo en ciertos estados discretos caracterizados
por cantidades definidas de energa. Cuando una especie cambia su estado, absorbe o emite una cantidad de
energa exactamente igual a la diferencia de energa entre los estados.
2. Cuando tomos, iones o molculas absorben o emiten radiacin al transitar de un estado energtico a otro, la
frecuencia n o la longitud de onda l de la radiacin se relaciona con la diferencia de energa entre los estados
mediante la ecuacin

donde E1 es la energa del estado ms alto y E0 es la energa del estado ms bajo. Los trminos c y h son la
velocidad de la luz y la constante de Planck, respectivamente.
En el caso de tomos o iones en estado elemental, la energa de cualquier estado surge por el movimiento de los
electrones alrededor de un ncleo con carga positiva. Como consecuencia, los diversos estados de energa se
llaman estados electrnicos. Adems de tener estados electrnicos, las molculas tambin poseen estados
vibracionales que estn vinculados con la energa de las vibraciones interatmicas y los estados rotacionales
cuantizados que surgen de la rotacin de las molculas alrededor de sus centros de masa.
Interacciones de la radiacin y la materia
Por lo regular, la espectroscopia de emisin requiere mtodos en los cuales el estmulo es calor o energa
elctrica, y la espectroscopia de quimioluminiscencia se refiere a la excitacin del analito mediante una reaccin
qumica.
En la espectroscopia de absorcin se mide la cantidad de luz absorbida en funcin de la longitud de onda. Esto
proporciona informacin tanto cualitativa como cuantitativa acerca de la muestra. En el caso de la
espectroscopia de fotoluminiscencia, la emisin de fotones se mide despus de la absorcin. Las formas ms
importantes de fotoluminiscencia para fines analticos son la fluorescencia y la espectroscopia de fosforescencia.
Absorcin de la radiacin
Cuando la radiacin atraviesa una capa de un slido, liquido o gas, es posible eliminar en forma selectiva ciertas
frecuencias mediante absorcin, un proceso en el cual la energa electromagntica se transfiere a los tomos,
iones o molculas que forman la muestra.
Para que haya absorcin de radiacin, la energa del fotn excitador debe corresponder exactamente con la
diferencia de energa entre el estado fundamental y uno de los estados excitados de la especie absorbente.
Absorcin atmica
El paso de radiacin policromtica ultravioleta o visible a travs de un medio que consta de partculas
monoatmicas, como mercurio o sodio gaseosos, origina la absorcin de solo unas frecuencias muy bien
determinadas. La sencillez relativa de dichos espectros se debe a la pequea cantidad de posibles estados de
energa de las partculas absorbentes. La excitacin ocurre solo mediante un proceso electrnico en el cual uno o
ms de los electrones del tomo son llevados a un nivel superior de energa.
Absorcin molecular
La energa E asociada con las bandas de una molcula est formada por tres componentes.

donde Eelectronica representa la energa electrnica de la molcula que surge de los estados energticos de sus
diversos electrones de enlace. El segundo trmino de la derecha se refiere a la energa total de la multitud de
vibraciones interatmicas que se presentan en la especie molecular. Por ltimo, Erotacional es la energa que
ocasionan los diferentes movimientos de rotacin dentro de una molcula.
Relajacin por fluorescencia y por fosforescencia
La fluorescencia ocurre con ms rapidez que la fosforescencia y se completa despus de 10_5 s a partir del tiempo
de excitacin. La emisin de fosforescencia tiene lugar en periodos mayores a 10_5 s y, de hecho, puede continuar
durante minutos y hasta horas despus de que la radiacin ha cesado. La fluorescencia y la fosforescencia se
observan con ms facilidad a un ngulo de 90 respecto al haz de excitacin.
La radiacin emitida tiene frecuencia ms baja o longitud de onda ms larga que la radiacin que origino la
fluorescencia. Este corrimiento en longitud de onda a unas frecuencias menores se llama a veces desplazamiento
de Stokes como se menciona en relacin con la difusin Raman.
La fosforescencia se presenta cuando una molcula excitada se relaja hasta llegar a un estado electrnico
excitado metaestable, que se denomina estado triple, el cual tiene un promedio de vida de ms de 10_5 s.
ASPECTOS CUANTITATIVOS DE LAS MEDICIONES ESPECTROQUIMICAS

Medicin de la transmitancia y la absorbancia
el esquema de un instrumento sencillo llamado fotmetro, con el cual se mide la transmitancia y la absorbancia
de soluciones acuosas mediante un haz filtrado de radiacin visible. Aqu, la radiacin de una lmpara de
tungsteno atraviesa un filtro de vidrio de color que restringe la radiacin a una banda limitada de longitudes de
onda contiguas. El rayo atraviesa un diafragma variable que permite ajustar la intensidad de la radiacin que
llega hasta la celda transparente que contiene la muestra. Se puede instalar un obturador frente al diafragma para
bloquear por completo al rayo. Con el obturador abierto la radiacin choca con un transductor fotoelctrico que
convierte la energa radiante del haz en una corriente directa que se mide con un microampermetro.

Para que este instrumento haga una lectura directa del porcentaje de transmitancia, se efectuan dos ajustes
preliminares: el ajuste de 0% de T o corriente residual y el ajuste 100% de T. El primer ajuste se hace con el
detector protegido de la fuente mediante el cierre del obturador mecanico. Cualquier corriente residual pequena
en el detector se anula electricamente hasta que la aguja marca cero.
DISENOS GENERALES DE INSTRUMENTOS OPTICOS

FUENTES DE RADIACION

Fuentes continuas
Este tipo de fuentes se usa ampliamente en la espectroscopia de absorcion y de fluorescencia. En el caso de la
region UV, la fuente mas comun es la lmpara de deuterio. Las lamparas de arco de alta presin llenas de gas,
que puede ser argon, xenon o mercurio, se usan cuando se requiere una fuente muy intensa. En el caso de la
region visible del espectro, la que casi todo el mundo usa es la lampara con filamento de tungsteno. Las fuentes
comunes infrarrojas son solidos inertes calientes a 1500 a 2000 K, una temperatura a la cual la salida maxima
radiante ocurre de 1.5 a 1.9 m.
Fuentes de lneas
Las fuentes que emiten unas cuantas lineas discretas tambien tienen gran aceptacion en la espectroscopia de
absorcion atomica, la espectroscopia de fluorescencia atomica y molecular y la espectroscopia Raman (en la
refractometria y la polarimetria tambien se usan fuentes de lineas). Las conocidas lamparas de mercurio y de
sodio proporcionan unas cuantas lineas ntidas en las regiones ultravioleta y visible, y se usan en varios
instrumentos espectroscopicos. Las lamparas de catodo hueco y las de descarga sin electrodo son las fuentes de
lineas mas importantes para los mtodos de absorcion atomica y de fluorescencia.
Fuentes de rayos lser
Los rayos laser son fuentes de uso muy extendido en los instrumentos analiticos debido a sus altas intensidades,
sus anchos de banda angostos y la naturaleza coherente de sus salidas.
las fuentes de rayos laser se han vuelto importantes en varios metodos analiticos de rutina, como espectroscopia
Raman, espectroscopia de absorcion molecular, espectroscopia de emision y como parte de los instrumentos para
la espectroscopia de IR de la transformada de Fourier.
Debido a sus caracteristicas amplificadoras de luz, los rayos laser producen haces de radiacion espacialmente
angostos, de solo unos cuantos centsimos de micrometro, pero en extremo intensos.
Una limitacion de los primeros rayos laser era que la radiacion proveniente de una fuente dada estaba restringida
a relativamente pocas y discretas longitudes de onda o lineas.
SELECTORES DE LONGITUD DE ONDA
La mayor parte de analisis espectroscopicos requiere radiacion que consiste de un grupo de longitudes de onda
limitadas, angostas y continuas llamadas banda.
Un ancho de banda angosto intensifica la sensibilidad de las medidas de absorbancia, puede proporcionar
electividad tanto a los metodos de emision como a los de absorcion y se le requiere a menudo para obtener una
relacion lineal entre la senal optica y la concentracin.
El ancho de banda efectivo, es una medida inversa de la calidad del dispositivo, un ancho de banda mas angosto
representa un mejor rendimiento. Hay dos tipos de selectores de longitud de onda: filtros y monocromadores.
Filtros
Se usan dos tipos de filtros para seleccionar la longitud de onda, a saber, filtros de interferencia, los cuales a
veces reciben el nombre de filtros de Fabry-Perot y los filtros de absorcion. Estos ultimos estan restringidos a la
region visible del espectro; en cambio, los primeros funcionan en la region UV, visible e infrarroja.
Filtros de interferencia
los filtros de interferencia dependen de la interferencia optica para proporcionar bandas angostas de radiacion.
Un filtro de interferencia consiste en un dielectrico transparente, a menudo fluoruro de calcio o fluoruro de
magnesio, que ocupa el espacio entre dos peliculas metalicas semitransparentes.
Filtros de absorcin
Estos filtros, que son casi siempre mas baratos que los de interferencia, se usan ampliamente para la seleccin de
bandas en la region visible. Su funcion es absorber porciones seleccionadas del espectro. El tipo mas comun
consta de un vidrio coloreado o de un colorante suspendido en gelatina y colocado entre dos laminas de vidrio.
Los filtros de vidrio coloreado tienen la ventaja de poseer una estabilidad termica mayor.
Monocromadores
En muchos metodos espectroscopicos se requiere variar en forma continua la longitud de onda de la radicacin
en un intervalo amplio. Este proceso se llama barrido del espectro; los monocromadores estan disenados para
ejecutarlo.
Componentes de los monocromadores

Monocromadores de prisma
Los prismas se pueden utilizar para dispersar radiacin UV, visible e infrarroja.
Monocromadores de red
La dispersion de la radiacion ultravioleta, visible e infrarroja se puede lograr dirigiendo un haz policromatico a
traves de una red de transmision o sobre la superficie de una red de reflexion.
Rendijas del monocromador
La rendija de entrada de un monocromador funciona como una fuente de radiacion; su imagen se enfoca en
ultima instancia en el plano focal que contiene la rendija de salida
TRANSDUCTORES DE RADIACION
Transductores de fotones
Hay varios tipos de transductores de fotones; entre los cuales estan 1) las celdas fotovoltaicas, en las cuales la
energia radiante genera una corriente en la interfase de una capa de semiconductor y un metal; 2) fototubos, en
los cuales la radiacion ocasiona la emision de electrones de una superficie solida fotosensible; 3) tubos
fotomultiplicadores que cuentan con una superficie fotoemisiva asi como varias superficies adicionales que
emiten una cascada de electrones cuando son golpeadas por electrones provenientes del area fotosensible; 4)
transductores de fotoconductividad en los que la absorcion de radiacion por un semiconductor produce
electrones y huecos, lo cual causa una mejora de la conductividad; 5) fotodiodos de silicio, en los cuales los
fotones ocasionan la formacion de pares electronhueco y una corriente con polarizacion inversa en una union pn;
y 6) transductores de transferencia de carga, en los cuales se recolectan y se miden las cargas que se desarrollan
en un cristal de silicio como resultado de la absorcion de fotones.

Fototubos de vaco
Un segundo tipo de dispositivo fotoelectrico es el fototubo de vacio,22 el cual consiste en un catodo
semicilndrico y un anodo de alambre sellados dentro de un recipiente transparente al vacio. La superficie
concava del electrodo soporta una capa de material fotoemisor (seccion 6C.1) que tiende a emitir electrones
cuando es irradiado. Cuando se aplica un voltaje a los electrodos, los electrones emitidos fluyen hacia el anodo
de alambre generando una corriente fotoelectrica que, por lo general, es de casi un decimo de la asociada con
una celda fotovoltaica para una intensidad radiante dada. En cambio, la amplificacion se logra con facilidad
porque el fototubo tiene una alta resistencia electrica.
La cantidad de electrones que son expulsados de una superficie fotoemisora es directamente proporcional a la
potencia radiante del haz que golpea la superficie.
La corriente se vuelve independiente del voltaje y es directamente proporcional a la potencia radiante.
Tubos fotomultiplicadores
Por lo que toca a las mediciones de la potencia radiante baja, el tubo fotomultiplicador tiene ventajas en
comparacion con un fototubo ordinario.
La superficie del fotocatodo es similar en composicion a la de las superficies de los fototubos al vacio, y emite
electrones cuando se expone a la radiacion. El tubo tambien contiene electrodos adicionales llamados dinodos.
Los fotomultiplicadores son muy sensibles a las radiaciones ultravioleta y visible. Ademas, tienen tiempos de
respuesta en extremo rapidos.
Con frecuencia la sensibilidad de un instrumento con un fotomultiplicador esta limitada por su corriente residual.
Puesto que la emision termica es la principal fuente de electrones de corriente residual, el rendimiento de un
fotomultiplicador puede aumentar si se le enfria.
Los tubos fotomultiplicadores estan limitados a medir radiacion de baja potencia porque la luz intensa ocasiona
daos irreversibles en la superficie fotoelectrica.
Transductores de fotodiodos de silicio
Un transductor con fotodiodos de silicio se compone de una union pn de polarizacion inversa formada por un
circuito integrado de silicio.
La polarizacion inversa crea una capa de agotamiento que reduce la conductancia de la union a casi cero. Si la
radiacion choca con el circuito integrado, se forman huecos y electrones en la capa de agotamiento que son
barridos a traves del dispositivo para producir una corriente que es proporcional a la potencia radiante.
Requieren solo alimentacion de bajo voltaje o pueden funcionar en polarizacion cero
Los diodos de silicio son mas sensibles que los fototubos al vacio, pero menos sensibles que los tubos
fotomultiplicadores. Los fotodiodos tienen intervalos espectrales de alrededor de 190 a 1100 nm.
Transductores de fotones multicanales
La deteccion fotografica es relativamente sensible, algunas emulsiones responden a tan solo 10 a 100 fotones.
La principal limitacion de este tipo de detector es el tiempo que se requiere para revelar la imagen del espectro y
convertir el ennegrecimiento de la emulsion en intensidades radiantes.
Se usan tres tipos de dispositivos de varios canales en los instrumentos espectroscopicos comerciales: fotodiodos
en serie, dispositivos de inyeccion de carga, y dispositivos de acoplamiento de carga.
Los fotodiodos en serie son transductores de una dimension en los que los elementos fotosensibles se acomodan
en forma lineal en la cara del transductor.
Tanto los transductores de inyeccion de carga como los de acoplamiento de carga funcionan recolectando cargas
fotogeneradas en varias areas de la superficie del transductor y luego midiendo la cantidad de ellas que se ha
acumulado en un breve periodo. Los dos tipos de transductores a veces reciben el nombre de dispositivos de
transferencia de carga.
Fotodiodos en serie
En estos dispositivos, los elementos fotosensibles individuales son fotodiodos pequeos de silicio, cada uno de
los cuales consta de una union pn con polarizacin inversa. Los fotodiodos individuales forman parte de un
circuito integrado de gran escala formado sobre un solo chip de silicio.
Cada uno esta constituido por una barra tipo p difundida en un sustrato de silicio tipo n para dar origen a una
regin superficial que consta de una serie de elementos adyacentes cuyas dimensiones caracteristicas son 2.5 por
0.025 mm.
FIBRAS OPTICAS
Propiedades de las fibras pticas
Las fibras opticas son finos hilos de vidrio o de plstico que transmiten radiacion a distancias de algunos cientos
de metros o mas. El diametro de las fibras pticas varia de 0.05 m a 0.6 cm.
La transmision de luz por medio de fibra ptica tiene lugar mediante la reflexion interna total. Para que existan
reflexiones internas totales, se requiere que la fibra que transmite este cubierta con un material cuyo indice de
refraccion sea un poco menor que el indice de refraccin de la fibra.
Sensores de fibra ptica
Los sensores de fibra optica, que a veces reciben el nombre de optrodos, estan constituidos por una fase reactiva
inmovilizada en el extremo de una fibra optica. La interaccion del analito con el reactivo origina un cambio en la
absorbancia, la reflectancia, la fluorescencia o la luminiscencia, el cual se transmite luego aun detector por
medio de la fibra optica.
TIPOS DE INSTRUMENTOS OPTICOS
Un espectroscopio es un instrumento optico que se utiliza para la identificacion visual de lineas de emisin
atomica. Consiste en un monocromador, como uno de los que se muestran en la figura 7.18, en el que la rendija
de salida se reemplaza con un ocular que se puede mover a lo largo del plano focal. La longitud de onda de una
linea de emision puede ser determinada luego a partir del angulo entre los rayos incidente y disperso cuando la
linea esta centrada en el ocular.
Con el termino colorimetro se designa un instrumento para medir la absorcion; el ojo humano funciona como el
detector con ayuda de uno o mas patrones de comparacion de color. Un fotometro consta de una fuente, un filtro
y un transductor fotoelectrico asi como un procesador de senales y una pantalla donde se leen los resultados.
Los fotometros disenados para medir la fluorescencia tambien se denominan fluorometros.
Un espectrometro es un instrumento que proporciona informacion relacionada con la intensidad de radiacion en
funcion de la longitud de onda o de la frecuencia.
Un espectrofotometro es un espectrometro equipado con una o mas rendijas de salida y transductores
fotoelectricos que facilitan la determinacion de la relacin entre la potencia radiante de dos haces en funcin de
la longitud de onda como en la espectroscopia de absorcion. Un espectrofotometro para analisis de fluorescencia
se denomina a veces espectrofluorometro.
MEDICION DE LA TRANSMITANCIA Y LA ABSORBANCIA
la atenuacion del haz puede ocurrir como consecuencia de la dispersion causada por molculas grandes y, a
veces, porque lo absorben las paredes del recipiente. Para compensar todos estos efectos, la potencia del haz
transmitido por la solucion del analito se compara con la potencia del haz transmitido por una celda identica que
contiene solo solvente.


LEY DE BEER

Limitaciones de la ley de Beer
Limitaciones reales de la ley de Beer
La ley de Beer describe el comportamiento de absorcin de medios que contienen concentraciones de analito
relativamente bajas; en este sentido, es una ley restrictiva. A concentraciones altas (casi siempre >0.01 M), el
grado de las interacciones soluto-solvente, soluto-soluto, o los puentes hidrogeno pueden afectar el ambiente del
analito y su capacidad de absorcion.
Como la magnitud de la interaccion depende de la concentracion, surgen desviaciones respecto a la relacion
lineal entre la absorbancia y la concentracion.
Desviaciones qumicas aparentes
Se producen desviaciones aparentes de la ley de Beer cuando un analito se disocia, se asocia o reacciona con un
solvente para originar un producto con un espectro de absorcion diferente al del analito.
Desviaciones instrumentales debidas a la radiacin policromtica
La ley de Beer solo se cumple en forma rigurosa cuando las mediciones se efectuan con radiacion
monocromatica.
la relacion entre absorbancias y la concentracin deja de ser lineal cuando las absortividades molares difieren
entre si.
con el fin de evitar desviaciones se recomienda seleccionar una banda de longitud de onda cercana a la longitud
de onda de absorcion maxima, en la cual la absortividad del analito cambia poco con la longitud de onda.
Desviaciones instrumentales originadas por radiacin parsita
la radiacin que emerge del monocromador esta contaminada con pequenas cantidades de radiacion dispersa o
parasita llamada luz parasita, y se define como la que proviene de un instrumento que esta fuera de la banda de
longitud de onda seleccionada para la determinacion. Con frecuencia, esta radiacion parasita es resultado de la
dispersion y reflexion desde superficies de redes, lentes o espejos, filtros y ventanas.
Tipos de instrumentos

Instrumentos de haz sencillo
Consta de una lampara de tungsteno o de deuterio, un filtro o un monocromador para seleccionar la longitud de
onda, cubetas ajustadas que pueden interponerse de manera alternada en el haz de radiacion, uno de los
transductores, un amplificador y un dispositivo de lectura.
Estos espectrofotometros utilizan como fuentes intercambiables lamparas de tungsteno o de deuterio, celdas de
silice rectangulares y estan equipados con un monocromador de red de alta resolucion y rendijas variables.
Como transductores se emplean tubos fotomultiplicadores y la senal de salida, a menudo, se digitaliza, se
procesa y se almacena en una computadora para que pueda imprimirse o registrarse de diversas formas.
Instrumentos de doble haz
En la figura 13.13b se ilustra un instrumento de doble haz en el espacio en el cual se forman dos haces mediante
un espejo en forma de V llamado divisor de haz. Un haz pasa a travs de la solucion de referencia y continua
hasta un fotodetector. En forma simultanea, el segundo rayo atraviesa la muestra hasta un segundo detector
ajustado.
En el caso de los instrumentos manuales, la medida consta de dos etapas, a saber, primero el ajuste del cero
mediante un obturador entre el selector y el divisor de haz, en segundo lugar ocurre la apertura del obturador y la
lectura directa de la transmitancia o absorbancia en el sistema de medicion.
En la figura 13.13c se ilustra el segundo tipo de instrumentos de doble haz. En este caso, los haces se separan en
el tiempo mediante un espejo giratorio en sectores que dirige primero todo el haz que emerge del monocromador
a traves de la celda de referencia y luego a traves de la celda de la muestra.
Los instrumentos de doble haz ofrecen la ventaja de que compensan todo menos la mayoria de las fluctuaciones
cortas en la salida radiante de la fuente, asi como la deriva en el transductor y el amplificador. Tambien
compensan las grandes variaciones de intensidad de la fuente con la longitud de onda. Ademas, el diseno de
doble haz permite el registro continuo de espectros de transmitancia o absorbancia.
Algunos instrumentos tpicos
Fotmetros
Los fotometros de filtros son a menudo mas convenientes, sencillos y faciles de mantener y de utilizar que los
espectrofotmetros mas complejos.
Ademas, es caracterstico de los fotometros su elevado rendimiento energetico, y por tanto, la buena relacion
senal-ruido, incluso con transductores y circuitos relativamente sencillos y baratos.
Los fotometros de filtro son muy utiles, en particular en los instrumentos portatiles disenados para uso de campo
o para medir las absorbancias de corrientes que fluyen.
Fotometros para la region visible.
La figura superior ilustra un instrumento de haz sencillo y lectura directa formado por una lampara de filamento
de tungsteno o un diodo emisor de luz como fuente, una lente para proporcionar un haz de luz paralelo, un filtro
y un transductor de fotodiodos. La corriente que produce el fotodiodo se procesa con equipo electronico o
mediante una computadora para que de una lectura directa de la absorbancia o bien, en algunos casos, la
transmitancia.

La figura inferior es el esquema de un fotometro de doble haz que se usa para medir la absorbancia de una
muestra en una corriente que fluye. En este caso, el haz de luz se divide mediante fibra optica de dos ramas, es
decir, esta bifurcada. Esta fibra optica transmite casi 50% de la radiacion que choca contra ella en la rama
superior y casi 50% de la de la rama inferior.
Fotometros tipo sonda.
fotometro de puntas sumergibles, que ya se puede conseguir en el comercio y que utiliza fibra optica para
transmitir la luz desde la fuente hasta una capa de solucin que se encuentra entre el vidrio sellado en el extremo
de la fibra y un espejo.
La absorbancia se mide sumergiendo la sonda primero en el solvente y luego en la solucion que se desea valorar.
El dispositivo es particularmente util para las titulaciones fotometricas

Instrumentos de doble haz.
En la figura 13.21 se muestran los detalles de construccin de un espectrofotometro manual tipico de doble haz
para la region UV-visible, relativamente barato. En este instrumento la radiacion se dispersa por medio de una
red concava, que enfoca tambien el haz sobre un espejo en sectores giratorio.


Los valores de absorbancia van de 0 a 3.7 unidades de absorbancia. Su funcionamiento es mucho mejor que el
del instrumento de doble haz de la figura 13.21.
Instrumentos de doble dispersion.
Con el fin de mejorar la resolucion espectral y conseguir una notable reduccion de la radiacion dispersada se ha
diseado una diversidad de instrumentos con dos redes colocadas en serie con una rendija entre ellos. Entonces,
en realidad estos instrumentos constan de dos monocromadores configurados en serie.

Instrumentos multicanal.
El concepto de los instrumentos multicanal es atractivo por la velocidad potencial a la que se pueden obtener los
espectros, asi como por la posibilidad de utilizarlos en las determinaciones simultaneas de varios componentes.
Este instrumento cuenta con una fuente de deuterio para la regin UV-visible (190 a 800 nm) y con una lampara
de tungsteno para la region del infrarrojo cercano visible (370 a 1100 nm). Un dispositivo oclusivo bloquea la
radiacin de la fuente colimada o deja que atraviese hasta la celda de la muestra. Se puede instalar un filtro para
conseguir la correccion por luz parasita.