1

ORGANISMOS GENTICAMENTE MODIFICADOS

. DESTERRANDO MITOS
Patricia Laura Marconi y J ulieta Lpez
Fundacin Pablo Cassar- Saladillo 2468 C1440FFX, Cdad. A de .-Bs As-Argentina
e-mail: pmarconi@fundacioncassara.org.ar
Agrobacterium tumefaciens es una bacteria presente en la rizsfera y agente
causal de la enfermedad conocida como agalla en corona. Esta bacteria, produce
el crecimiento de tumores en los tejidos de los vegetales atacados. Estos tumores
se deben a que el A. tumefaciens es uno de los pocos organismos capaces de
transformar genticamente una clula vegetal, utilizando un sistema para la
transferencia e integracin de genes heterlogos altamente evolucionado. Ante la
herida o dao producido en la zona del cuello de una planta susceptible esta
bacteria es atrada por quimiotaxis en respuesta a sustancia liberadas al medio
ambiente por las clulas de la planta daada. La formacin de la agalla depende de
la cepa de Agrobacterium y el plsmido que sta porte. As, las cepas con el
plsmido Ti (del ingls tumor-induction) codifican para la sntesis de reguladores de
crecimiento que mimetizan hormonas vegetales. La integracin y expresin de la
regin Ti del plsmido al genoma vegetal garantiza la sobreproduccin en esas
clulas transformadas de auxinas y citocininas (hormonas vegetales) en una
concentracin superior a la normal. La resultante es un crecimiento y aumento de la
divisin celular de las lneas modificadas genticamente (MG) o transgnicas
dando un fenotipo caracterstico de la enfermedad. Adems, estas clulas
transformadas sintetizan hidratos de carbono caractersticos de estas cepas de
Agrobacterium con el nico fin de proveerles de alimento. En sntesis, el parsito
transforma el genoma del husped, en este caso las clulas vegetales, para
convertirlas en fbricas de alimento.
El crecimiento tumoral es el resultado de la integracin estable (heredable)
en el genoma vegetal de un segmento de ADN proveniente del plsmido Ti de la
bacteria. El ADN transferido o ADN-Ti est delimitado por repeticiones directas de
25 pares de bases, y cualquier secuencia de ADN entre estos bordes ser
transferido al ADN de la clula vegetal (Figura 1, secuencia en amarillo). Este
segmento de ADN forneo puede integrarse en diferentes lugares de los
cromosomas del vegetal permitiendo la expresin de los transgenes.



2

CAMV35S
Ampi R
RR
Eco RI (1)
Eco R1 (1350)
Hind III (1750)
nos
ORI
RB
LB
generico
4308 bp




























Figura 1: etapas del proceso de transformacin vegetal utilizando como vector de infeccin
Agrobacterium tumefaciens recombinante.
CAMV35S Ampi R
RR
Eco RI (1)
Eco R1 (1350)
Hind III (1750) nos
ORI
RB
LB
generico
4308 bp
CAMV35S Ampi R
RR
Eco RI (1)
Eco R1 (1350)
Hind III (1750) nos
ORI
RB
LB
generico 4308 bp
CAMV35S Ampi R
RR
Eco RI (1)
Eco R1 (1350)
Hind III (1750) nos
ORI
RB
LB
generico 4308 bp
CAMV35S Ampi R
RR
Eco RI (1)
Eco R1 (1350)
Hind III (1750) nos
ORI
RB
LB
generico 4308 bp
Cromosoma
bacteriano
Co-transformacin Agrobacterium
Infeccin clulas vegetales
con Agrobacterium sp.
recombinante
Escherichia coli
CAMV35S Ampi R
RR
Eco RI (1)
Eco R1 (1350)
Hind III (1750) nos
ORI
RB
LB
generico
4308 bp
Eliminacin de la cepa de Agrobacterium sp.
recombinante de las lneas celulares
vegetales exitosamente transformadas
Cultivo de clulas vegetales
genticamente modificadas
CAMV35S Ampi R
RR
Eco RI (1)
Eco R1 (1350)
Hind III (1750) nos
ORI
RB
LB
generico 4308 bp
CAMV35S Ampi R
RR
Eco RI (1)
Eco R1 (1350)
Hind III (1750) nos
ORI
RB
LB
generico 4308 bp
CAMV35S Ampi R
RR
Eco RI (1)
Eco R1 (1350)
Hind III (1750) nos
ORI
RB
LB
generico 4308 bp
CAMV35S Ampi R
RR
Eco RI (1)
Eco R1 (1350)
Hind III (1750) nos
ORI
RB
LB
generico 4308 bp
+
Pl
s
mi
do
s-
si
st
bi
na
rio
Cromosoma
bacteriano
Agrobacterium sp.
Amplificacin E. coli
recombinante
+
Plsmidos-sist binario

3

Las singulares caractersticas de este patgeno natural atrajeron la atencin
de los cientficos por la posibilidad de utilizarlo como vector para introducir genes
extraos o heterlogos al genoma de una planta. Por lo cual, esta propiedad se la
utiliza hoy en da para lograr la obtencin de clulas, tejidos, rganos o plantas
genticamente modificadas.
El primer experimento se llev a cabo con clulas de tabaco transformadas
con Agrobacterium donde se observ que la expresin del fenotipo tumoroso
permita el crecimiento de estas clulas bajo cultivo in vitro sin la adicin de
fitohormonas. Esta propiedad conferida por la transformacin del genoma resultaba
conveniente para la seleccin de las clulas exitosamente transformadas de las
que no lo eran ya que estas ltimas moran.

Hoy en da se ha perfeccionado la metodologa utilizando cepas de
Agrobacterium que portan dos vectores (sistemas binarios), uno de ellos con
secuencias especficas para desarrollar el mecanismo de infeccin (sin la regin
codificante para los genes tumorognicos) y el otro vector, vector Ti, con la
secuencia de ADN a ser transferidas al genoma de la planta.

Etapas del proceso:

La transformacin y expresin de una protena heterloga o recombinante es
un proceso largo y multidisciplinario que puede ser dividi do en 4 grandes reas
para su mayor comprensin. La primera es la construccin de un vector con una
secuencia de ADN que codifique y exprese el transgn en un sistema vegetal
superior (eucariota); la segunda es la seleccin de lneas celulares vegetales
exitosamente transformadas y el cultivo en gran escala para obtener en forma
masiva la protena recombinante; la tercera es la recuperacin y purificacin de la
protena recombinante; y la cuarta y ltima es la caracterizacin del producto final.

Veamos en detalle algunas de las etapas involucradas:
El vector es ADN circular de simple cadena con secuencias especficas que
regulan la expresin del transgen y otras secuencias que sirven de herramientas
para seleccionar los organismos que han sido transformados exitosamente. Estas
secuencias de seleccin son otros trasngenes que le confieren resistencia al
organismo transformado a ciertos agentes letales. Por ejemplo, una secuencia que
suele agregarse al vector es la resistencia a antibiticos o herbicidas. As, luego del
evento de transformacin, se le agrega al medio de cultivo la toxina de seleccin
por el ejemplo: ampicilina. De esta manera, solo los organismos exitosamente
transformados sobrevivirn a la condicin de estrs impuesta (medio de cultivo con
el agregado de ampicilina) ya que expresan una enzima que impide el efecto txico
de la misma. Adems, el transgn debe ser acompaado por secuencias
flanqueantes que regulen su expresin. La ms importante de estas secuencias es

4

el promotor que acta como una seal de direccionamiento para la clula,
indicando cunto y dnde comienza la secuencia a transcribir. Otras secuencias
pueden ser agregadas al vector cuando la protena requiere modificaciones
postraduccionales. Estas secuencias dirigen el polipptido dentro de la clula y van
direccionando el camino a recorrer para que vaya sufriendo cada uno de las
modificaciones requeridas para ser funcional (clivaje de polipptidos, glicosilacin,
plegamiento de estructuras cuaternarias, formacin de puntes disulfuro, entre
otras).

Por ejemplo, la expresin de anticuerpos suele necesitar modificaciones
postraduccionales para lo cual se le agrega secuencias de direccionamiento en el
extremo C-terminal del polipptido. Estas seales son secuencias de
reconocimiento para dirigir el polipptido a organelas especficas dentro de la
clula. En esas organelas se producir la glicosilacin o el agregado de glucsidos
en el extremo C-terminal de la protena que codifica para el anticuerpo. Otras
seales, como KDEL, retienen el fragmento de anticuerpo recombinante en el
lumen del Retculo Endoplasmtico permitiendo, de esta manera, la formacin de
puentes disulfuro y el correcto plegamiento del anticuerpo entre otras funciones de
estabilizacin.
La figura 2 muestra en detalle una tpica construccin de un vector de
transformacin obtenido por tcnicas de biologa molecular. La ingeniera que lleva
a la construccin del vector es crucial y determinante para la obtencin de la
protena recombinante con un alto rendimiento de produccin, estabilidad y calidad.


Figura 2: detalle de un vector de transformacin obtenido por ingeniera que porta sitios de
reconocimiento para el corte con enzimas de restriccin (EcoR1, y HIND III), promotor CAM
V35S), resistencia a ampicilina, la protena recombinante (en rojo) y una secuencia de
terminacin (nos).
CAM V35S
Ampi R
RR
Eco RI (1)
Eco R1 (1350)
Hind III (1750)
nos
ORI
RB
LB
generico
4308 bp

5

La transferencia del vector construido a las clulas vegetales se puede llevar
a cabo por numerosas tcnicas. La figura 1 sintetiza la metodologa de
transformacin utilizando A. tumefaciens, como sistema para introducir transgenes
en clulas vegetales. El resultado es la incorporacin de la secuencia de ADN
diseada especialmente y que dirige el vector al genoma del vegetal. As, cuando
las clulas vegetales recombinantes expuestas al agente de seleccin, sobrevivan
y comiencen a dividirse transmitirn la secuencia transgnica a su progenie. De
esta manera solo las lneas celulares exitosamente transformadas sern capaces
de sobrevivir.
Por ltimo, se espera que la produccin de protenas en el vegetal
recombinante sea mxima para llevar a cabo la cosecha. Las plantas
transformadas podrn ser cultivadas en forma tradicional a campo, o bajo distintos
sistemas de confinamiento o de contencin como ser invernculos o biorreactores.
La liberacin de material transgnico a campo conlleva una serie de requisitos
legales que se deben cumplimentar para asegurar la inocuidad del cultivo y el
impacto sobre el ecosistema.

El material vegetal recombinante recolectado con el compuesto de inters
puede ser purificado y sometido a los controles de calidad de la protena
recombinante producida. Tambin se est estudiando la posibilidad de producir
alimentos que porten protenas heterlogas de inters farmacutico. Tal es el caso
de las vacunas comestibles (ver ms adelante).

Qu se produce por esta metodologa.

1- Cultivos intensivos a campo -Soja transgnica

Los cultivos agronmicos surgieron hace unos 10.000 aos cuando los primeros
hombres civilizados comenzaron a ser sedentarios e iniciaron la domesticacin de
ciertas especies. Estos cultivos fueron manipulados genticamente a travs de
entrecruzamientos sexuales (Mejoramiento tradicional). Con el correr de los siglos
se comenz a tener mayor conocimiento de la biologa de las especies
domesticadas y la existencia de una gran variabilidad genmica til que el
productor manipul para mejorar las variedades y obtener mayores rindes. As, las
tierras cultivables han ido en aumento siglo tras siglo. Y este aumento de
rendimientos y variedades cultivables han permitido el desarrollo de la humanidad.
Esto, sin duda, ha generado la modificacin de los ecosistemas de las zonas
agrcolas desplazando las especies salvajes hacia zonas marginales. Hoy en da es
difcil imaginar cul era el aspecto de la pampa hmeda previa a la colonizacin
europea.


6

A partir de la dcada del 90 se inici una nueva tecnologa capaz de introducir
mejoras genticas pero sin intervencin de entrecruzamientos sexuales: la
manipulacin directa de los genes o Biotecnologa. El mejoramiento tradicional o
clsico permite la obtencin de plantas elite con caracteres agronmicos deseables
para una regin, en un perodo de cultivo determinado o para la resistencia a
condiciones biticas desfavorables, entre otras. En cambio, la biotecnologa
posibilita el cambio de un caracter determinado siendo esta una alternativa nueva
que posibilita dirigir el producto a un solo carcter agronmico deseable. Por
ejemplo, se obtiene una variedad resistente al ataque de una determinada
enfermedad como las variedades trasngnicas RR. Esta nueva variabilidad se
introduce en variedades comerciales sujetas al mejoramiento clsico. Las
metodologas combinadas: variedades elite por mejoramiento tradicional ms
transformacin gentica produce plantas que posibilitan batir records de cosechas.

Para el caso variedad soja Asgrow 5403RR se inici el programa de
mejoramiento en varias etapas en la dcada del 90. La primera fue la obtencin de
la variedad sojera Asgrow 5403 por mejoramiento tradicional. La introduccin de
esta variedad permiti alcanzar records de cosechas en la zona central-sur de la
Pampa Hmeda. Esta variedad fue obtenida a partir del cruzamiento de dos
variedades americanas de elite: Essex, del grupo V y Williams del grupo III. La
variedad comercializada tena un alto potencial de rendimiento con resistencia
marcada a nemtodes de agalla.

En una segunda etapa se procedi a introducir genes para la obtencin de la
variedad RR. Los genes fueron:
CP4, codifica para una enzima que permite la tolerancia al herbicida
Roundup
CTP, gen que induce y direcciona la sntesis de CP4 dentro de la planta.
La empresa, o el mercado, obtienen una variedad que vuelve a batir records
de cosecha. Pero lo ms interesante es que esta lnea transgnica vuelve a ser
usada para aplicar un plan de mejoramiento tradicional. De esta manera, ao a ao
se van obteniendo nuevas variedades que satisfacen la demanda del campo,
permiten expandir fronteras agrcolas y que portan eventos transgnicos.

2- Molecular farming

Los avances logrados durante la ltima dcada en el campo de la medicina
han llevado a la industria farmacutica a descubrir y producir nuevas drogas por
biotecnologa. Estos nuevos agentes teraputicos recombinantes obtenidos por
ingeniera gentica conllevan una ingeniera de produccin costosa que requiere
una inversin econmica y de tiempo considerables ya que el desafo consiste en
introducir el ADN recombinante en el interior de clulas que van a pasar a ser

7

biofbricas. Adems, la expresin de estos transgenes debe dar un producto
exactamente igual al que se obtendra en el sistema de produccin natural ya que
los requerimientos de la industria farmacutica son extremadamente estrictos.

Hoy en da los agentes teraputicos recombinantes son producidos en su
mayora por cultivo in vitro de lneas celulares animales (hibridomas), animales
recombinantes o microorganismos. Estas lneas celulares son obtenidas a partir de
la introduccin de una o ms secuencias de ADN (transgenes) que codifican para
uno o varios polipptidos recombinantes. As, el acervo gentico de estas lneas
celulares es modificado y, en consecuencia, puede producir la o las protenas de
inters.

Dentro de las numerosas tecnologas disponibles ha resultado atractivo para
la industria farmacutica la produccin de protenas recombinantes en cultivos
vegetales denominada molecular farming. Esta estrategia de produccin de
agentes teraputicos recombinantes se basa en la capacidad de las plantas de
integrar y expresar genes forneos y de producir protenas recombinantes en
cantidades masivas y a un costo relativamente bajo respecto a los cultivos
tradicionales como clulas animales. Esto se debe a que, virtualmente, todas las
clulas vegetales son eucariotas (con un sistema de endomembranas) y poseen la
maquinaria necesaria para llevar a cabo la sntesis de protenas igual de eficiente a
la de un mamfero con las modificaciones postraduccionales, traslacionales,
postraslacionales, y secretorias necesarias. Los sistemas vegetales funcionan
como biorreactores o biofrbricas vivientes para la produccin de frmacos a un
costo menor al de los sistemas de cultivo de clulas animales debido a que utilizan
simples medios de cultivo salinos con una concentracin proteica muy baja.

Otra ventaja es la seguridad que representa la produccin de protenas
recombinantes con fines farmacuticos para humanos en sistemas vegetales. Esto
se debe a que no existe interaccin entre los patgenos virales y bacterianos de los
vegetales con los animales.

3- Vacunas orales
Otra rea de investigacin intensa dentro del molecular farming es el de las
vacunas orales, anticuerpos y fragmentos de anticuerpos. Actualmente, estn en
desarrollo vacunas producidas en plantas comestibles (papa, banana, maz, entre
otras) para numerosas enfermedades humanas y de aplicacin veterinaria que
brindan proteccin frente a agentes infecciosos como clera y E. coli
enterotoxignica (ETEC), diarrea viral bovina, hepatitis B, cncer, entre otros.

La idea central de estos procesos es que los vegetales tienen la capacidad de
almacenar protenas en forma natural a temperatura ambiente ya que el tejido de

8

almacenaje es el propio tejido vegetal protector de la protena recombinante.
Adems, utilizar plantas, semillas o tejidos comestibles que puedan ser consumidos
crudos o con un mnimo de procesamiento conlleva una ventaja extra. Esto
implicara reducir los costos de almacenamiento con la eliminacin de las cadenas
de fro necesarias para mantener hoy en da las vacunas en forma estable y,
asimismo, eliminar la etapa de purificacin de la protena recombinante. Estas
ventajas no solo son econmicas sino que implicara poder acercar las vacunas a
poblaciones subdesarrolladas en forma segura y sin infraestructura Tambin
facilitara la administracin en nios evitando los molestos pinchazos que implican
los inyectables. Para el rea veterinaria significa una reduccin de costos por
consumibles y equipo especializado para aplicar vacunas.

Sin embargo, hoy en da todava se est an lejos de producir vacunas por esta
metodologa aunque se encuentran avanzados los estudios en este campo de
investigacin. Entre los problemas a superar se puede citar la forma de dosificar las
vacunas y evitar que pasen las protenas recombinantes a las cadenas alimentarias
dentro del ecosistema. Adems, la ingestin y exposicin a los jugos gstricos de
las protenas recombinantes implica una ingeniera adicional para aumentar la
estabilidad de los pptidos y resistencia contra la degradacin que puedan sufrir al
ingresar al organismo.

Bioseguridad y tica
La Argentina es pionera en el cultivo de OGM (organismos genticamente
modificados), a partir de 1991 comienza a generarse inters por parte del sector
privado y de grupos de investigacin nacionales para la realizacin los primeros
ensayos con OGMs. La Comisin Nacional Asesora de Biotecnologa Agropecuaria
(CONABIA) se crea como una primera instancia de consulta y apoyo tcnico para
asesorar al Secretario de Agricultura, Ganadera, Pesca y Alimentacin en la
formulacin e implementacin de la regulacin para la introduccin y liberacin al
ambiente de materiales genticamente modificados. Actualmente, la CONABIA est
constituida por representantes de los sectores pblico y privado involucrados en la
Biotecnologa Agropecuaria, siendo este Cuerpo un grupo interdisciplinario e
interinstitucional que regula los permisos para liberar al medio ambiente organismo
genticamente modificados.

El monitoreo posterior de los ensayos, a cargo del ex -Instituto Nacional de
Semillas (INASE) y el Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria
(SENASA) tiene por objeto evaluar en el sitio el real cumplimiento de lo presentado
en las solicitudes y tambin estar preparado para aplicar medidas que eviten
efectos adversos sobre el ambiente (tales como diseminacin de malezas).
Adems, se efectan controles de los lotes, posteriores al momento de cosecha;

9

ello tiene la finalidad de limitar la posible transferencia de la informacin gentica
contenida en los materiales genticamente modificados a otros organismos.

Actualmente, el riesgo de liberar OGM a campo no es mayor que la
implicancia de tener un rea destinada a cultivos intensivos. Los agentes agresivos
para el medio ambiente como los agroqumicos, herbicidas, el desplazamiento de la
flora y fauna nativa son realidades para la agroindustria. La responsabilidad del
Gobierno es fiscalizar que el impacto producido sea el menor posible y que
garantice la conservacin del acervo gentico del pas.
Conclusiones
La tecnologa y los recursos humanos capacitados para obtener OGM son
accesibles para llevar a cabo esta tecnologa segura, eficiente y econmica que
permite obtener subproductos de alto valor agregado a precios accesibles y
ecolgicamente seguros. Los estudios realizados hasta el momento indican que es
posible acceder a sistemas de produccin ms complejos tendientes a aumentar el
valor agregado de los productos agrcolas. El desarrollo de plantas, rganos,
tejidos, o clulas vegetales genticamente modificados en sistemas confinados
como ser birreactores o invernculos es una tecnologa limpia muy segura para el
medio ambiente. En la actualidad, se estn llevando a cabo numerosos estudios
sobre la produccin de protenas recombinantes, en general con fines farmacutico
o veterinario, utilizando plataformas de produccin vegetal en varios centros de
investigacin del pas.

La Argentina ha sido pionero en el mundo en la produccin intensiva de
plantas transgnicas y actualmente es una de sus principales fuentes de ingresos.
El maz y la soja son los principales cultivos para la agroindustria del pas. Segn
los ltimos datos, el aumento de los precios de estos cultivos supera el 60%, siendo
la cosecha de maz de 22 millones TN en la ltima campaa (7 TN ms que la
campaa anterior). Para la campaa venidera se calcula una siembra de 4 millones
de hectreas (30% ms que la campaa actual) debido principalmente al anuncio
del nuevo plan de biocombustibles de EEUU.

Sin embargo, la sociedad debe entrar en el gran debate centrando en el
dilema entre alimentar con los excedentes de las cosechas records a ms
habitantes o utilizarlo en la generacin de biodisel. Otro debate an pendiente es la
distribucin desigual de las ganancias que generan los OGM. Ya que estos cultivos
tienen un menor costo de produccin asociado a un mayor costo de producto final
debido al valor agregado de la biotecnologa. La sociedad en su conjunto debe
instruirse y participar de estos debates.

Lecturas recomendadas:
Ciencia Hoy, 11 (62), 2001; Ciencia Hoy, Vol. 15 (87), 2005)