Gua: Observaci !

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DIRIGIDO A ALUMNOS DE: Tcnico de Laboratorio Clnico y Banco de Sangre Tcnico Superior de Enfermera Tcnico de Radiodiagnstico y Radioterapia Informtico Biomdico PRE-REQUISITO: o tiene REALIZADO POR Tecnlogo !dico" Bio#umico" $umico %armacutico o Bilogo& DURACION: '( minutos& )mero de alumnos por docente* +( ,utores* T! Soledad Caiman#ue E&-& Eliana Escudero .uoc-C

INTRODUCCI(N Los microorganismos son demasiado pe#ue/os para obser0arse a simple 0ista* 1roto2oos" algas" 3ongos" bacterias y 0irus& Estos microorganismos difieren en caractersticas tales como forma de nutricin" estructura" tama/o" composicin" entre otros aspectos4 es por ello #ue se emplea el estudio microscpico el #ue facilita notablemente la obser0acin4 principalmente de las bacterias al tratarlas con colorantes los cuales a la 0e2 facilitan la obser0acin de ciertas estructuras celulares& En este taller 0amos a distinguir la estructura celular de algunos microorganismos" como por E5&* Stap3ylococcus" Streptocococcus" bacilos etc&

O%)ETI*OS: ,l finali2ar el taller el alumno ser capa2 de* 6bser0ar al microscopio distintas tinciones .iferenciar las caractersticas generales de los microorganismos seg)n su tincin& Traba5ar en forma ordenada y limpia Traba5ar con un lengua5e cientfico" de uso muy 3abitual&

,utores* T! Soledad Caiman#ue E&-& Eliana Escudero .uoc-C

MARCO TE(RICO El termino gram positi0o y gram negati0o son parte de un lengua5e com)n en salud y muc3as 0eces solo se tendr esta identificacin de la bacteria antes de iniciar un tratamiento& Es tambin por esto 3abitual" #ue al tomar un culti0o de una muestra para su anlisis microbiolgico" se realice un e7tendido #ue se conoce como gram y est relacionado con estas tcnicas #ue sern para algunos alumnos moti0o de mayor estudio en sus ramos posteriores& Micr""r#a is$"s Gra$+ P"si,iv"s Las eubacterias 8ram& positi0as son clulas con una gruesa pared celular de peptidoglicano& Ests clulas poseen una membrana citoplasmtica con fosfolpidos y protenas& 1or fuera de la membrana citoplasmtica se encuentra la pared celular #ue est compuesta por una anc3a capa de peptidoglicano& , su 0e2" estas cadenas se encuentran unidas entre s mediante pptidos" #ue son pe#ue/as cadenas de aminocidos #ue se entrecru2an& Estos puentes peptdico son caractersticos de las distintas bacterias y presentan mayor rigide2 cuanto ms completo sea el entrecru2amiento& El peptidoglicano es una malla porosa #ue otorga forma y rigide2 a la clula" y e0ita #ue la clula estalle en medios 3ipotnicos& ,l ser porosa permite el paso de nutrientes desde el e7terior y el mo0imiento de en2imas catalticas y productos de secrecin 3acia el e7terior de la clula&

Esquema de las Envolturas de una Eubacteria Gram. Positiva

,utores* T! Soledad Caiman#ue E&-& Eliana Escudero .uoc-C

Micr""r#a is$"s Gra$ Ne#a,iv"s Las eubacterias 8ram& egati0as son clulas con una !e-#a!a ca.a !e .e.,i!"#-ica " y una segunda en0oltura denominada $e$bra a e/,er a& Las clulas se encuentran en0ueltas por una $e$bra a ci,".-as$0,ica formada por una bicapa fosfolipdica y protenas& 1or encima de esta membrana se encuentra una fina capa de peptidoglicano #ue se 3alla unida a unas -i.".r",e as !e a c-a1e #ue fi5an la $e$bra a e/,er a+

Esquema de las envolturas de una eubacteria Gram. Negativa

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%aci-"s 2ci!"-A-c"3"- Resis,e ,es Los microorganismos pertenecientes al gnero M4c"bac,eriu$ se caracteri2an por tener una pared celular completamente diferente a las restantes eubacterias& La pared de las !ycobacterias posee un alto contenido de lpidos #ue la 3ace impermeable a los agentes 3idroflicos" por lo tanto estos microorganismos no se ti/en adecuadamente con los reacti0os utili2ados en la coloracin de 8ram& y no pueden ser clasificados como 8ram positi0os o negati0os& Las !ycobacterias son te/idas adecuadamente por el mtodo de Zie3--Nee-se 5Ti ci 2ci!"-R0.i!a " Aci!-6as, S,ai 7 #ue utili2a como solucin decolorante una me2cla de etanol y cido clor3drico& Estos microorganismos una 0e2 coloreados son resistentes a la decoloracin cido9 alco3lica y por eso se denominan %aci-"s 2ci!" A-c"3"- Resis,e ,es 5%AAR7 &

Esquema de las envolturas de una eubacteria cido-Alcohol Resistente

La obser0acin microscpica puede reali2arse a partir de una muestra :e7amen directo; o bien a partir de culti0os y seg)n como se 3aga la preparacin se pueden clasificar en* <&9 E7amen al %resco& :!icroorganismos 0i0os; Se utili2a normalmente para 0er mo0ilidad de las bacterias& En el caso de 3ongos y proto2oos" permite determinar adems caractersticas morfolgicas&

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+&9 %rotis %i5ado :microorganismos muertos; Este mtodo permite obser0ar con mayor precisin detalles morfolgicos y de agrupacin de los microorganismos& INSUMOS 8 EQUIPOS NECESARIOS PARA EL TALLER Laboratorio de ciencias bsicas :mec3eros y la0amanos; + !icroscopios pticos :mnimo < cada + alumnos; =ilol ,ceite de inmersin 1apel filtro 1apel tis)es o papel sua0e 1orta ob5etos :> por alumno; Cubre 6b5etos :+ por alumno; ,sas de punta :+( unidades; 1ipetas pasteur estriles y taponadas :> por alumno; 1in2as metlicas :una por alumno; Culti0os de microorganismos :1lacas de ,gar Sangre sembradas en Taller de ?Reali2acin de culti0os@; Set de tincin de 8ram& !uestras %i5adas con B,,R& 1ositi0os& : solo para demostracin; Aabn li#uido& Clinic Ca5as de bioseguridad 8uantes :un par por alumno;

DESCRIPCI(N DEL PROCEDIMIENTO Ac,ivi!a! &: El docente reali2a y e7plica los tres procedimientos& Ac,ivi!a! 9: Los alumnos los di0ide en grupo y 3ace repetir uno de los procedimientos Ac,ivi!a! :: Los alumnos rotan obser0ando cada acti0idad& Pr"ce!i$ie ," e/a$e a- ;resc": Reali2ar una preparacin 3)meda entre portaob5eto y cubre ob5eto Si es de una colonia :material slido; se debe suspender en pe#ue/as gotas de suero fisiolgico& Si es de un caldo de culti0o :material l#uido; se deposita directamente una gota sobre el portaob5eto y se cubre con un portaob5eto& ,utores* T! Soledad Caiman#ue E&-& Eliana Escudero .uoc-C

Se puede agregar una pe#ue/a cantidad de colorante 0ital como* ,2ul de !etileno" #ue facilita la obser0acin&

Pr"ce!i$ie ," 6r",is ;i1a!": Colocar una pe#ue/a gota de agua en el centro del portaob5eto limpio& %lamear el asa de siembra" tomar" en condiciones aspticas" una pe#ue/a cantidad del culti0o bacteriano en medio slido y transferirlo a la gota de agua& Remo0er la me2cla con el asa de siembra 3asta formar una suspensin 3omognea #ue #uede bastante e7tendida para facilitar el secado& Si la muestra se toma de un culti0o en medio l#uido" no es necesario reali2ar los dos primeros pasos ya #ue basta con colocar y e7tender una gota de la suspensin bacteriana" #ue se toma con el asa de siembra" directamente sobre el portaob5etos& Esperar 3asta #ue el l#uido se e0apore o acelerar su e0aporacin acercando el portaob5etos a la llama del mec3ero& En este caso 3ay #ue tener muc3a precaucin de no calentar demasiado el portaob5eto pues las clulas pueden deformarse o romperse&

,utores* T! Soledad Caiman#ue E&-& Eliana Escudero .uoc-C

Tincin del frotis bacteriano Ti ci !e Gra$:

1.- Cubrir la preparacin con cristal 0ioleta o 0ioleta de genciana durante

< minuto& +&9 .ecantar el colorante y la0ar sua0emente con agua >&9 Cubrir con Lugol por < minuto la0ar sua0emente con agua B&9 .ecolorar con alco3ol9acetona&Casta #ue la preparacin de5e de perder color :>( segundos;& D&9 Cubrir con fuccina o safranina por >( segundos& E&9 Remo0er sua0emente el e7ceso con agua corriente& F&9 .renar el frotis y secarlo al aire en posicin 0ertical o sub0ente con papel filtro& G&9 Limpiar el re0erso& '&9 E7aminar al microscopio

%I%LIOGRA6<A
1rocedimiento y tcnicas de laboratorio" instituto de salud publica& !icrobiologa mdica" Aos Hngel 8arca9Rodrgue2 Enciclopedia Encarta +((B

,utores* T! Soledad Caiman#ue E&-& Eliana Escudero .uoc-C