REBIOL 2012; 32(2):56-61 (julio-diciembre 2012)

Revista Cientfica de la Facultad de Ciencias Biolgicas Universidad Nacional de Trujillo. Trujillo. Per

Aislamiento de hongos fitopatgenos en lesiones de hoja y tallo de cultivos de vid, Vitis vitcola, de Cascas, La Libertad (Per). 2012
Isolation of fungal pathogens in leaf and stem lesions of grapevine, Vitis viticola, crops from Cascas, La Libertad (Peru). 2012
Juan Wilson Krugg y Hugo Requejo Valdivieso
Laboratorio de Fitopatologa, Departamento de Microbiologa y Parasitologa. Universidad Nacional de Trujillo. Trujillo. Per

RESUMEN
Se aislaron u observaron hongos fitopatgenos en lesiones de hoja y tallo de Vitis vinifera vid procedentes del distrito de Cascas, La Libertad, en el 2012. Para esto, durante los meses de Enero a Agosto del 2012 se recolectaron muestras de hojas, tallos y fruto de plantas con sntomas o signos sospechosas de ser producidas por hongos, los que fueron observados macro y microscpicamente, para esto ltimo se realizaron cortes histolgicos los que fueron colocados en una solucin de KOH al 10%. Para realizar el aislamiento a partir de las muestras con sntomas se procedi a cortar del borde de las lesiones y que contengan parte enferma y parte sana del tejido, pequeas muestras en forma de cuadrado, las que fueron desinfectadas con hipoclorito de sodio al 2% durante 3 minutos y posteriormente lavados por tres veces con agua destilada estril para finalmente colocar los cortes en placas de petri conteniendo agar papa sacarosa, incubndose a temperatura ambiente hasta la aparicin de colonias, las que fueron resembradas en tubos de ensayo conteniendo agar papa sacarosa, Para la determinacin de los hongos aislados se realizaron microcultivos a partir de las colonias que crecieron. Se encontr a Alternaria sp, Botrytis cinrea y Plasmopara viticola en hojas y a Uncinula necator, en hojas y tallos. Palabras clave: Hongos fitopatgenos, Vitis vinifera, Cascas (Per)

ABSTRACT
Plant Pathogenic fungi in injuries of leaf and stem of Vitis vinifera grapevine were observed coming from the Cascas district, La Libertad, in the 2012. For this, during the months of January to August of the 2012 samples of leaves and stems of plants with symptoms were collected or suspicious signs of being produced by fungi, those that were observed macro and microscopically, for this We complete were made histological cuts those that were placed in a KOH solution to 10%. In order to make the isolation from the samples with symptoms it was come to cut off the edge of the injuries and that contains ill part and healthy part of the weave, small samples in form of square, those that they were disinfected with hypoclorhyte of sodium to 2% during 3 minutes and later washed by three times with distilled water sterile finally to place the cuts in plates of petri containing to agar potato saccharose, incubating themselves to room temperature until the appearance of colonies, those that they were reseeding in test tubes containing to agar potato saccharose, For the determination of the isolated fungi were made microcultures from the colonies that grew. It was found Alternaria sp, Botrytis cinerea, and Plasmopara viticola in stem, while, Uncinula necator in both: leaves and stems. Keywords: Pathogenic fungi, Vitis vinifera, Cascas (Peru)

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INTRODUCCION Las prdidas ocasionadas por las enfermedades causadas por hongos y virus son muy limitantes en el cultivo de la vid, porque disminuye hasta un 80% de cada cosecha, reducen la calidad, incrementan los costos de produccin y reducen el vigor y longevidad de los viedos, existiendo enfermedades causadas por hongos que son endmicas, esto es, son prevalentes y estn bien establecidas. Adems, las condiciones climticas son favorables para el desarrollo de epidemias causadas por las enfermedades de origen fungoso 17,19,21,22, Causado por Plasmopara vitcola, el llamado mildiu es una de las principales enfermedades que disminuyen la produccin de vid. Se considera que esta enfermedad es el principal problema de la produccin de vid, especialmente en las variedades que pertenecen a Vitis vinifera. Es el principal limitante de la produccin de uva para vino a nivel mundial, debido a que ataca todas las partes verdes de la planta, principalmente las hojas, donde se presentan manchas amarillentas de apariencia aceitosa. La produccin de las esporas del hongo ocurre en el envs de lo hoja, tejido que se torna de consistencia algodonosa y de color blanco. Las lesiones de las hojas son importantes como fuente de inculo para la infeccin de inflorescencias y racimos y como rgano donde se efecta la sobrevivencia del hongo entre los ciclos de produccin.17,19,21,22 El Oidium, conocido tambin como cenicilla, causado por el hongo Uncinula nector, es otra fungosis importante en los cultivos de vid. Ataca todos los tejidos verdes y penetra slo las clulas epidermales, pero afecta tambin las clulas vecinas, dando una apariencia polvosa de color gris blanquecino a los rganos atacados. El haz y el envs son igualmente susceptibles a la infeccin en cualquier edad de la hoja, las que se deforman y detienen su crecimiento. Los peciolos y el raquis del racimo son susceptibles a la infeccin durante todo el ciclo de crecimiento tornndose quebradizos.1,2,5,13,14. Causada por el hongo Botrytis cinrea, la llamada pudricin gris ocasiona una considerable prdida en la calidad y rendimiento de la cosecha. El hongo invade la inflorescencia antes de la cada de las cubiertas florales. Desde estos tejidos ataca el pedicelo y el raquis del racimo, formando pequeas lesiones de color caf, que luego se tornan oscuras, casi negras. Hacia la poca de cosecha estas lesiones rodean el pedicelo y el raquis y las porciones del racimo por debajo de la lesin se secan.4,9,15,16,19 La roya, causada por el hongo Phakopsora uva, tambin aparece entre las enfermedades ms comunes de la vid. Es muy destructiva cuando no se controla oportunamente. Los primeros sntomas aparecen en forma de pequeas manchas esparcidas o densamente distribuidas de color amarillo en el envs de las hojas y ocasionalmente aparece en los peciolos, brotes jvenes y raquis. Ms tarde, en el haz aparecen manchas de tejido muerto. Generalmente, las primeras lesiones aparecen sobre las hojas maduras, aproximadamente, unos 60-70 das despus de la poda. Las infecciones severas de roya causan una defoliacin prematura de la planta que ocasionan deficiencias en el llenado y madurez de los frutos. La defoliacin prematura, tambin ocasiona la brotacin de las yemas durante el periodo de descanso, que es muy detrimental para la cosecha siguiente, al utilizar la planta las reservas que utilizar para la brotacin y la formacin inicial de los racimos.12,15,16 Desde hace unos seis aos se detect en Colombia la presencia del dao causado por Phomopsis vitcola, agente causal de manchas en hojas y sarmientos de la vid. El hongo causa pequeas lesiones necrticas en hojas, brotes, raquis del racimo, racimos y sarmientos, el hongo reduce el nmero de racimos y el rendimiento. Los brotes afectados son muy dbiles, afectando el desarrollo de la siguiente cosecha. La infeccin de los racimos ocurre durante periodos de lluvia, que posteriormente ocasiona problemas de post cosecha. Los primeros sntomas aparecen en la lmina foliar y en las venas como pequeas manchas de color oscuro con borde amarillo. Estas manchas coalescen y destruyen porciones del rea foliar.4,6,9 El distrito de Cascas es una zona que presenta grandes extensiones de suelos cultivados con vid, los que son mayormente exportados; estas plantas son afectadas por diversas enfermedades biticas, principalmente de origen fngico, las que actan en detrimento del fruto, lo que conlleva a prdidas econmicas entre los agricultores. No existen antecedentes precisos que indiquen qu tipo de hongos son los que se encuentran afectando principalmente a estos cultivares, informacin que se hace necesaria para realizar un mejor control fitosanitario de dichas enfermedades y as disminuir las prdidas econmicas. Por tal razn el presente trabajo tiene como objetivo conocer a las especies de

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hongos fitopatgenos que se encuentran en lesiones en hoja, tallo y fruto de cultivos de vid, Vitis vitcola, procedentes del distrito de Cascas, La Libertad, en el 2012 MATERIAL Y METODOS Material de estudio: Hojas, tallos y frutos de diversos vegetales de Vitis vinifera vid, con signos o lesiones sospechosas de ser causadas por hongos fitopatgenos. La Zona de muestreo, estuvo constituida por todos los cultivares de V. vinfera del distrito de Cascas, provincia de Gran Chim, Regin La Libertad y la recoleccin de muestras se llevo a cabo durante los meses de Enero a Setiembre del 2012 y estuvo dirigida hacia aquellas plantas que presentaban sntomas o signos. No fue necesario que la muestra fuera representativa y adecuada, por lo dependiendo del tamao del campo a muestrear se colectaron entre 4 a 8 muestras por campo de muestreo. A cada una de las muestras colectadas se les etiqueto y coloc en bolsas de papel de primer uso para ser transportadas al laboratorio de Fitopatologa de la Universidad Nacional de Trujillo. Procesamiento de hoja y flor1, 27-30 De las lesiones presentes en hoja se realizaron observaciones macroscpicas y microscpicas para determinar las manifestaciones externas y presencia de hifas y/o esporas del posible patgeno, para esto ltimo los cortes histolgicos realizados fueron colocados en una solucin de KOH al 10% previamente a la observacin microscpica. Para realizar el aislamiento del posible patgeno se procedi a hacer cortes en cuadrados de aproximadamente 0.5cm. de lado a partir del borde de la lesin que contengan tanto tejido sano como enfermo. Estos cortes fueron tratados durante aproximadamente 3 minutos en una solucin de hipoclorito de sodio al 2%, para luego ser lavados en agua destilada estril por tres veces y finalmente ser colocados en placas de petri conteniendo agar papa sacarosa (APS) con estreptomicina, e incubadas a temperatura ambiente por 3 a 5 das. De cada una de las colonias que desarrollaron en las placas con APS se realizaron observaciones microscpicas con azul de lactofenol y paralelamente se sembraron en tubos conteniendo APS con estreptomicina a fin de obtener cultivos puros a partir de los que se realizo el microcultivo correspondiente. Procesamiento de tallo1, 27-30, Las muestras de tallo fueron lavadas en agua de cao primero y en agua destilada estril despus para eliminar residuos de tierra. Previa observacin macroscpicas de las lesiones presentes y trabajando en condiciones de asepsia, el lugar donde se localizaban estas lesiones fueron desinfectadas externamente con alcohol y luego se flamearon ligeramente al mechero, para despus hace un corte longitudinal a este nivel. De la zona de la lesin expuesta, se tomaron muestras para observacin microscpicas con KOH al 10% y para ser sembradas en placas de Petri con APS ms estreptomicina, dejando en incubacin a temperatura ambiente por un periodo de 3 a 5 das. Las colonias que desarrollaron en las placas de petri con APS fueron resembradas en tubos conteniendo APS con estreptomicina para obtener los cultivos puros y a partir de estos realizar el microcultivo correspondiente Determinacin30-32 Se realizaran en base a las caractersticas macroscpicas de las colonias, a las caractersticas morfolgicas microscpicas de los microcultivos y, haciendo uso de las claves de identificacin correspondientes. RESULTADOS En la Tabla 1 se observa que el rgano vegetal ms afectado en las plantas analizadas fue la hoja, donde se aisl a Alternaria sp, Botrytis cinerea, Plasmopara vitcola y Uncinula nector. DISCUSIN En relacin a los hongos fitopatgenos aislados en cultivos de vid procedentes del distrito de Cascas, en la Tabla 1 se observa que en hoja se aisl a Alternaria sp. . Este hongo es considerado principalmente un oportunista y se le reporta como causante de enfermedades foliares en plantas que

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estn en estado de senescencia o son jvenes. Alternaria est clasificado como perteneciente a la familia dematiaceae, y se caracteriza por presentar hifas y conidias de color oscuro, siendo esta la caracterstica de la colonia1,2,3,7,15,25,33, como se observa en la tabla 1.
Tabla 1: Gnero y/o especies de hongos encontrados en hoja y tallo de Vitis viticola vid procedentes del distrito de Cascas, La Libertad, en el 2012.
Especie signo Mancha foliar Micelio gris Micelio blancogris Micelio blanco Caractersticas de la colonia Algodonosas, de color gris en el anverso y oscuro en el reverso Algodonosa, gris oscuro en el anverso No crece en medio de cultivo No crece en medio de cultivo Caractersticas microscpicas* Macroconidias claviformes, pluricelulares Macroconidias piriformes, unicelulares Esporangios globosos, esporangiforo ramificado en ngulo de 90, hifas cenocticas Esporangios piriformes, esporangiforo simple y alargado, hifas cinocticas Organo afectado hoja hoja hoja Hoja y tallo

Alternaria sp Botrytis cinerea Plasmopara viticola Uncinula necator

Alternaria sp tiene un micelio oscuro y en los tejidos viejos infectados as como cuando se desarrolla como saprfito, produce conidiforos cortos con conidios con forma de mazo o claviformes, grandes, oscuros y pluricelulares. Estos conidios se desprenden con facilidad y son diseminados por las corrientes de aire. Debido a que son polfagos tienen la capacidad de infectar a un amplio rango de vegetales en todo el mundo. Muchas de las especies de Alternaria son principalmente saprfitas, es decir, no pueden infectar a los tejidos vivos de las plantas y solo se desarrollan sobre tejidos vegetales muertos o en proceso de descomposicin y, a lo ms, sobre tejidos viejos o senescentes como hojas, radicando all la dificultad en decidir si al aislarse un hongo del gnero Alternaria sobre un tejido vegetal enfermo, est en calidad de agente causal primaria de la misma o de un hongo oportunista; por esta razn es probable que su presencia en las hojas de vid ocurra porque las plantas muestreadas estn dbiles por otros factores biticos o abiticos que las estaban afectando en el momento del muestreo1,2,3,7,15,25,33. En la misma Tabla tambin observamos la presencia de Botrytis cinerea, hongo que es reportado como causante de la enfermedad conocida como podredumbre gris y que ha sido aislado en todas las zona vieras del mundo, Los climas hmedos y templados existentes en la localidad de Cascas favorecen la presencia de este patgeno, que reduce seriamente la calidad y calidad de la cosecha; sin embargo su principal dao no es en hoja sino en fruto, en el cul ocasiona cada prematura de racimos de los pmpanos o prdida de jugo de las bayas o frutos. Sin embargo en algunos cultivares y especialmente en determinadas condiciones climticas en el perodo de sobremaduracin, la infeccin de Botrytis en los racimos toma el nombre particular de podredumbre noble, ya que se considera beneficiosa al contribuir a la produccin de un vino blanco dulce excepcional, al desecar en forma deseada a la baya durante su infeccin1,2,3,7,15,25,33. B. cinerea se caracteriza por ser un Monilial con hifas tabicadas y ligeramente pigmentadas. Sus macroconidias son piriformes, unicelulares y se disponen a manera de racimo sobre un conidiforo simple dilatado en su extremo anterior. Su colonia es gris, ligeramente levantada y al igual que Alternaria sp es un hongo saprfito y polfago, aunque es un patgeno no solo secundario, sino principalmente primario, siendo el principal causante de enfermedades relacionadas con pudricin en diversos frutales,y hortalizas, as como en plantas silvestres; siendo sus conidias diseminadas principalmente por el viento y la lluvia1,2,3,7,15,25,33. Plasmopara vitcola es un hongo parsito obligado o biotrofo, razn por la cul no fue posible aislarlo en medio de cultivo. Produce la enfermedad conocida como mildiu de la vid y se encuentra presente en regiones con clima clido a templado, que es el clima que predomina en Cascas. Este hongo se caracteriza por presentar hifas cenocticas, con esporangiforos que se ramifican en ngulo de 90 y en cuyo extremo se disponen en forma individual esporangios globosos que fcilmente se desprenden y son arrastrados por el viendo hacia otras plantas sanas1,2,3,7,15,25,33.

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P. vitcola es capaz de afectar a cualquier rgano verde de la vid, pero en particular a las hojas. En funcin del perodo de incubacin y de la edad de la hoja, las lesiones son de color amarillento y aceitoso, a pardo rojizo y limitadas a por las nervaduras, Este es un hongo biotrofo que forma la mayor parte de su micelio sobre la superficie de su hospedante, razn por la cul se observa como un signo. Sus ataques ms graves se producen cuando a un invierno hmedo le siguen una primavera hmeda y un verano caliente con temporales intermitentes de lluvia cada 8 a 15 das, ya que el desarrollo de la enfermedad se ve favorecido por todos aquellos factores que aumenten el contenido de humedad del suelo, aire y de la planta husped1,2,3,7,15,25,33. Uncinula nector, al igual que P. vitcola, tambin es un parsito obligado y, ocasiona la enfermedad conocida como oidium de la vid. A diferencia de los mildius presenta hifas tabicadas y su conidiforo es simple en cuyo extremo se ubican en forma individual conidios hialinos de piriformes. Asimismo es capaz de producir cuerpos fructiferos sexuales llamados cleistotecios que se encuentran entre mezclados con las hifas. Actualmente a este hongo puede encontrrsele en la mayora de las reas vitcolas del mundo, incluso en los trpicos, pudiendo reducir notoriamente el crecimiento y la cosecha de la vid, afectando a la calidad y a la resistencia al fro inverna1,2,3,7,15,25,33l. U. nector puede afectar a todos los tejidos verdes de la vid, siendo su rganos de preferencia la hoja. Penetra solo en los tejidos epidrmicos del rgano que afecta, introduciendo a sus haustorios dentro de ellos a fin de poder obtener los nutrientes de estas clulas, lo que ocasiona necrosamiento de las hojas o del rgano penetrado. Posteriormente produce el resto de sus estructuras vegetativas sobre la superficie de la hoja, lo que hace que se manifieste como un signo, observndose su micelio desde un color blanco a gris conforme va envejeciendo1,2,3,7,15,25,33.
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