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Evaluacin de la transferencia de oxgeno en un biorreactor convencional con aireador externo Evaluation of oxygen transfer in a conventional bioreactor with external aerator Gustavo Buitrago H.*, ngela M. Otlvaro A.**, Paola G. Duarte B.***
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MSc. Ing. Instituto de Biotecnologa de la Universidad Nacional de Colombia, Ciudad Universitaria, Bogot. gbuitragoh@unal.edu.co ** Dr. MSc. Ing. Facultad de Ingeniera, Universidad de La Salle, Bogot. amotalvaro@unisalle.edu.co *** Ing. Candidata a MSc. Universidad Nacional de Colombia, Medelln. pgduarte@unal.edu.co

Resumen En el cultivo de microorganismos aerobios se ha observado que los biorreactores convencionales conducen a inconvenientes asociados a la limitacin de oxgeno. Para dar solucin a esta problemtica se dise, construy y evalu un prototipo de biorreactor con aireador externo. Este sistema permiti incrementar la velocidad de transferencia del oxgeno desde la fase gaseosa a la fase lquida, superando la limitacin de oxgeno. Sin embargo, esta nueva configuracin carece de modelos empricos o tericos para predecir la transferencia de oxgeno a travs del clculo del coeficiente global de transferencia de oxgeno (KLa). En ese sentido, en este trabajo se propuso el uso de anlisis dimensional (Teorema Pi de Buckingham), como herramienta para evaluar el efecto sobre el KLa de las diferentes variables involucradas en el proceso, como las de operacin, las propiedades de los fluidos y dimensiones geomtricas. Luego de desarrollar el anlisis propuesto, se encontr una correlacin de 0.89 entre los valores generados por el modelo y los datos experimentales disponibles. Se encontr que las variables con mayor incidencia sobre el coeficiente KLa son el flujo de medio de cultivo que circula por el aireador externo denominado flujo de recirculacin, la presin en el aireador externo y la velocidad de agitacin. Palabras clave: aireador externo, coeficiente volumtrico de transferencia de oxgeno (KLa), Teorema Pi de Buckingham. Abstract In aerobic microorganism culture, it has been observed that conventional bioreactors lead to disadvantages associated with oxygen limitation. To solve this problem it was designed, built and tested a bioreactor prototype with external aerator. This system allowed increasing the speed of oxygen transfer from gas phase to liquid phase, overcoming the limitation of oxygen. However, this new configuration doesnt have theoretical or empirical models to predict the oxygen transfer by calculating the global volumetric coefficient of transfer of oxygen (KLa).

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In that way, this paper proposed the use of dimensional analysis (Buckinghams Pi Theorem), as a tool to evaluate the effect of various operating variables, fluid properties and geometrical dimensions involved in the process over KLa. After developing the proposed analysis, we found a correlation of 0.89 between the values generated by the model and the available experimental data. It was found that the main variables which affect the coefficient KLa are: the medium flow flowing through the external aerator called recirculation flow, the pressure in the external aerator, and the stirring speed. Key words: external aerator, oxygen transfer coefficient (KLa), Buckinghams Pi Theorem. Recibido: febrero 15 de 2013 Aprobado: noviembre 9 de 2013

Introduccin Al trabajar con biorreactores para el cultivo de microorganismos aerobios con altas demandas de oxgeno, una de las principales limitaciones est asociada a la transferencia de este sustrato al medio de cultivo. La transferencia de oxgeno constituye un factor muy importante en el crecimiento de los microorganismos y es variable fundamental para el escalado y la economa de los sistemas de biosntesis aerobia. La concentracin de oxgeno disuelto en un cultivo con microorganismos aerobios depende de la tasa de transferencia de oxgeno de la fase gas al lquido, de la velocidad de transporte del oxgeno hacia las clulas y de la tasa de consumo de oxgeno (OUR, oxygen up take rate) por los microorganismos para el crecimiento, mantenimiento y produccin de metabolitos y estructuras celulares (Galaction et al., 2004). En el biorreactor, la transferencia de oxgeno est afectada por diferentes factores que intervienen sobre la hidrodinmica de ste, como: las propiedades fsicas tanto del medio de cultivo como del gas utilizado para aportar el oxgeno, los parmetros geomtricos del biorreactor, las condiciones de operacin a las que se desarrolla el proceso y el tipo de microorganismo cultivado (Deckwer y Schumpe, 1993). Con el propsito de conocer el efecto de estos factores sobre la transferencia de oxgeno, se han desarrollado diferentes trabajos para evaluar la incidencia de cada factor buscando mejorar los procesos de transferencia de oxgeno, logrando en algunos casos superar las limitaciones a las que los microorganismos se encuentran expuestos en los diseos convencionales (Garca-Ochoa y Gmez, 2009). El oxgeno disuelto es un nutriente limitante en cultivos con alta demanda de oxgeno, lo cual puede deberse a la velocidad de crecimiento del microorganismo, a una alta produccin de biomasa o a que las propiedades reolgicas de los medios de cultivo ofrezcan resistencia a la transferencia de masa (Casas et al., 2000). Sin embargo, una de las razones principales por las que la disponibilidad del oxgeno en el medio de cultivo es limitada, est relacionada con su baja solubilidad en soluciones acuosas de nutrientes. Para superar este inconveniente y evitar que la transferencia de oxgeno sea el paso controlador

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para el crecimiento microbiano, vindose afectado el cultivo y el bioproceso (Garca-Ochoa et al., 2010), se emplean como alternativas convencionales cambios en la velocidad de agitacin o en el flujo de aireacin o en los sistemas de distribucin de aire (Akita y Yoshida, 1973; Nikakhtari y Hill, 2005; Flores- Cotera y Garca-Salas, 2005; Yazdian et al., 2009; Moraveji et al., 2012). En cuanto a los sistemas de distribucin del aire, se ha planteado el uso de microburbujeadores para los cultivos de microorganismos por varias razones. En primer lugar, estos sistemas suministran el oxgeno en burbujas de gas de menor dimetro, incrementando el rea de contacto entre ste y el medio lquido, favoreciendo as la velocidad de transferencia de oxgeno (Deckwer y Schumpe, 1993). En segundo lugar, los microburbujeadores en comparacin con otros sistemas de dispersin de gases, producen un menor estrs mecnico sobre las clulas generando condiciones adecuadas para su cultivo (Cockx et al., 1995; Flores-Cotera y Garca- Salas, 2005; Soler y Buitrago, 2010). Tomando como base estos elementos, se dise y construy un prototipo de biorreactor con aireador externo, en trabajo desarrollado por Soler y Buitrago (2010). En el diseo de este sistema se tom como la variable que mayor influencia tiene en la transferencia de oxgeno, la presin, dado que la solubilidad es directamente proporcional a sta. En otras palabras, se opt por incidir sobre la fuerza impulsora para la transferencia de masa, o sea, la diferencia entre la concentracin de equilibrio de oxgeno en el gas y en el lquido. Adicionalmente, se plante que para variar este parmetro era posible utilizar un aireador externo al tanque de fermentacin, que consista en un microburbujeador contenido en un tubo, en dnde se podra incrementar la presin por encima de la presin atmosfrica, lo que se reflejara en el aumento de la concentracin de equilibrio del oxgeno en el medio lquido. Asimismo, fue necesario considerar que el incremento de la presin estaba limitado por la resistencia de los microorganismos a sta. En la figura 1 se presenta un esquema del sistema construido.

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Figura 1. Biorreactor con aireador externo. Tomado de Soler y Buitrago (2010).

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Como se observa, el sistema diseado consta de dos unidades, una correspondiente al tanque de fermentacin y la otra es el aireador externo que incluye un microburbujeador (17 cm de largo y 1 cm de dimetro fabricado en acero sinterizado) y el tubo contenedor que obra como contactor gas-lquido. El trabajo de Soler y Buitrago (2010) evalu el sistema de fermentacin con aireador externo (SFAE) presentado en la figura 1 y compar su desempeo con el de un biorreactor convencional de tanque agitado con turbinas Rushton, encontrando que los coeficientes de transferencia de masa KLa en el prototipo se incrementaban sustancialmente en comparacin con el fermentador convencional, para esto se determinaron experimentalmente los valores de KLa en cultivos con Leuconostoc mesenteroides encontrndose valores de 40.68 h-1 para el fermentador convencional y un mximo de 63.18 h-1 para el SFAE. Este trabajo tiene como propsito proponer un modelo matemtico para determinar los valores de KLa a partir de las variables de operacin, propiedades de los fluidos y dimensiones geomtricas involucradas en la operacin del SFAE.

Materiales y Mtodos El desarrollo de este trabajo comprendi tres fases, en la primera se aplic el teorema Pi de Buckingham para la generacin de una ecuacin por medio del anlisis dimensional de las variables. En una segunda fase, se realizaron algunas corridas empleando el SFAE para generar datos experimentales. Y en la tercera fase, se realiz el ajuste numrico de la ecuacin para obtener los coeficientes desconocidos, utilizando los valores experimentales. Para establecer un modelo general, en este anlisis se trabaj nicamente el sistema aireagua. Anlisis dimensional de las variables y teorema Pi de Buckingham. Para aplicar el teorema Pi de Buckingham y desarrollar una primera aproximacin al funcionamiento del aireador externo, fue necesario utilizar 3 tipos de factores: variables operacionales, propiedades de los fluidos y dimensiones geomtricas (Akita y Yoshida, 1973; White, 1979; Deckwer y Schumpe, 1993; Munson, 2003). Variables operacionales Dentro de stas se encuentran la presin en el contactor (P), el flujo de recirculacin de lquido (FR), flujo de aireacin (FA) y la potencia suministrada por el agitador (W). Propiedades de los fluidos Para el anlisis del sistema empleando como fluidos de trabajo agua y aire, las propiedades consideradas fueron: densidad del aire (G), densidad del agua (L), viscosidad del agua (L) (tomadas a la presin y temperatura de cada ensayo) y difusividad del oxgeno en el agua (DL). La viscosidad del aire no se tuvo en cuenta puesto que la fase limitante para la transferencia es la fase lquida y adems su valor es bajo comparado con la viscosidad del agua.

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Para disminuir el nmero de variables atribuidas a las propiedades de los fluidos involucradas en el anlisis, se us como variable la viscosidad cinemtica del agua (L) correspondiente a la relacin entre la viscosidad y la densidad de la misma. Dimensiones geomtricas En cuanto a los parmetros geomtricos ms importantes dentro del sistema propuesto, se consideraron las variables asociadas al contactor, stas son el dimetro externo del difusor (DI) y el dimetro interno del contactor (DE), como se presenta en la figura 2.

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Figura 2. Geometra del aireador prototipo. Con el fin de reducir variables se estableci el factor Nc, que corresponde a un mdulo adimensional calculado de acuerdo con la ecuacin 1, siendo LP la longitud del contactor.

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En cuanto al tanque agitado en donde se desarrolla el cultivo, se propone una ecuacin similar, en la cual se reducen dos variables geomtricas a una sola, por medio de una relacin adimensional que rene la influencia del dimetro del tanque (DT) y la distancia del fondo de ste al primer impulsor del agitador (z), ecuacin 2.

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Adicionalmente, se tiene como variable para el tanque la altura de la columna de lquido (hL) que condiciona la presin en el punto de descarga de la mezcla enriquecida proveniente del difusor. En la figura 3, se presenta un esquema del tanque agitado para identificar cada una de las variables geomtricas involucradas.

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Figura 3. Geometra del tanque. Anlisis del SFAE por el teorema Pi (i) de Buckingham. El nmero de variables que afectan el coeficiente de transferencia de oxgeno en este sistema es elevado. Dada la dificultad de poder medir todas las variables que afectan el KLa en el SFAE, se realiz el anlisis a todo el sistema como conjunto. En este sentido la variable KLa presenta las siguientes dependencias: [ ][ ][ ][ ][ ]

Cada grupo de variables mencionado se rene entre corchetes, stas son de izquierda a derecha: la variable dependiente, variables de operacin del sistema, propiedades del lquido, propiedades del gas, geometra del prototipo y geometra del tanque. Con el nimo de reducir el nmero de variables, se tuvo en cuenta lo siguiente: la temperatura solo se toma en consideracin para determinar las propiedades fsicas de los dos fluidos, puesto que durante un cultivo esta variable toma un valor fijo, la potencia suministrada por el agitador W se determin por el modelo generalizado basado en el nmero de potencia (McCabe et al., 1995). Tomando las simplificaciones de las ecuaciones (1) y (2), las variables geomtricas son tres. De esta manera, el nmero de variables se reduce de 16 a 11, as: [ Diseo de experimentos El mtodo de determinacin del KLa empleado fue el mtodo fsico-dinmico (Gaddis, 1999; Fadavi, 2005). En ste se registra continuamente la concentracin de oxgeno disuelto y por medio de una regresin lineal, empleando la ecuacin 5, se encuentra el valor de KLa que corresponde a la pendiente de la recta (Garca-Ochoa y Gmez, 2009): ][ ][ ][ ][ ]

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Para ello, se midi la concentracin de oxgeno en el agua, empleando un sensor de oxgeno Mettler-Toledo, modelo InPro 6820DO, sumergido al nivel del primer impulsor en el tanque de fermentacin (volumen de agua 1.2 L). Para cada ensayo fue definida una presin de operacin en el aireador. En cada corrida se midi la presin dentro del dispositivo con un manmetro Millipore, escala de 0 a 100 psi, previamente calibrado. Los flujos de lquido recirculado y gas a la entrada se midieron con rotmetros. En total se realizaron 15 ensayos con las condiciones que se presentan en la tabla 1. Tabla1. Condiciones de los ensayos desarrollados. Ensayo 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 FR (kg/s) 0.029 0.022 0.015 0.008 0.029 0.022 0.015 0.008 0.008 0.015 0.008 0.008 0.008 0.008 0.008 FA (kg/s) 0.000014 0.000014 0.000014 0.000014 0.000021 0.000021 0.000021 0.000021 0.000021 0.000021 0.000014 0.000014 0.000014 0.000014 0.000014 P (Pa) 122037 115142 101353 101353 128932 122037 101353 101353 101353 101353 170301 204774 239248 101353 170301 W (Vatios) 0.039 0.039 0.039 0.039 0.039 0.039 0.039 0.039 0.246 0.246 0.039 0.039 0.039 0.039 0.039

238 239 240 241 242 243 244

Para estos ensayos se fijaron los siguientes parmetros, Parmetros geomtricos del prototipo construido en el laboratorio: NC= (DE DI)/LP = 5.54 E-02 NT = DT /z = 6.58

245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258 259 260 261 262 263 264

Viscosidad cinemtica del agua: 8.04E-07 m2/s (Mott, 2006) Densidad del aire: 1.164 kg/m3 (Mott, 2006) Difusividad del oxgeno en agua: 0.258 cm2/s (Geankoplis, 1998) Altura del lquido: 0.3 m Tratamiento de los datos P A y q b iene al aplicar el teorema Pi de Buckingham, se emplearon los datos experimentales disponibles y se aplic un mtodo de regresin no lineal, utilizando la herramienta de software para el ajuste de datos experimentales DataFit. Dada la naturaleza de la ecuacin, la regresin no lineal aplicada utiliz el algoritmo de solucin iterativa denominado Levenberg-Marquardt, para optimizar la bsqueda del valor mnimo de la denominada funcin objetivo de la solucin, de manera similar a una regresin lineal. Resultados y discusin De la aplicacin del teorema Pi de Buckingham se lleg a la ecuacin 6 que permite establecer el valor del KLa en funcin de nmeros adimensionales elevados a exponentes desconocidos y afectados por un coeficiente A.

(
265 266 267 268 269 270 271 272 273 274 275 276 277 278 279 280 281 282 283

) (

) (

) (

) (

En el trabajo experimental desarrollado, como se presenta en la tabla 1, las variables que afectan el tiempo de residencia y que por tanto se modificaron para observar la respuesta del SFAE fueron: Flujo de gas (FA) medido en kg/s. Flujo de lquido recirculado (FR) en kg/s.

Las co-variables seleccionadas fueron: Potencia de agitacin (W) en Vatios. Presin en el aireador externo (P) en Pa.

Las variables de respuesta fueron: Oxgeno disuelto en % de saturacin. Coeficiente volumtrico de transferencia de oxgeno KLa en s-1.

284 285 286 287 288 289 290 291

El volumen de medio se mantuvo constante durante los ensayos y la variable independiente fue el tiempo. Con la matriz de experimentacin propuesta, se obtuvieron los valores de KLa evaluado por el mtodo dinmico, que se presentan en la tabla 2. Tabla 2. Valores de KLa calculados por el mtodo dinmico. Ensayo 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 K La (s-1) 0.0193 0.0131 0.0108 0.0052 0.0251 0.0141 0.0111 0.0066 0.0115 0.0170 0.0093 0.0100 0.0050 0.0052 0.0097

292 293 294 295 296 297 298 299 300

Utilizando los datos experimentales, se determin el valor de cada uno de los nmeros adimensionales involucrados en la ecuacin 6 y a partir de stos y con ayuda de Datafit, se hizo el ajuste al modelo propuesto, encontrando el valor de los exponentes de los nmeros adimensionales y del coeficiente A (ver tablas 3 y 4). Tabla 3. Nmeros adimensionales involucrados en la ecuacin 6 calculados a partir de los datos experimentales. 1 1 Calculado Calculado con el KLa por el de la modelo con tabla 2 Datafit
2,28E+13 8,74E+12 3,23E+12 4,16E+11 2,97E+13 2,2877E+13 8,80359E+12 2,20049E+12 2,78557E+11 2,91434E+13

2
1,54E+26 8,21E+25 3,24E+25 8,66E+24 1,63E+26

3
0,0858 0,0858 0,0858 0,0858 0,2

4
5,31E-12 3,99E-12 2,67E-12 1,38E-12 5,31E-12

5
0,00000973 0,000013 0,0000194 0,0000374 0,00000973

6
3210000000 3210000000 3210000000 3210000000 3210000000

7
0,0554 0,0554 0,0554 0,0554 0,0554

8
6,58 6,58 6,58 6,58 6,58

8,71E+25 3,24E+25 8,66E+24 8,66E+24 3,24E+25 1,46E+25 1,75E+25 2,05E+25 8,66E+24 1,46E+25

0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,0858 0,0858 0,0858 0,0858 0,0858

3,99E-12 2,67E-12 1,38E-12 2,19E-13 4,23E-13 1,38E-12 1,38E-12 1,38E-12 1,38E-12 1,38E-12

0,000013 0,0000194 0,0000374 0,0000374 0,0000194 0,0000374 0,0000374 0,0000374 0,0000374 0,0000374

3210000000 3210000000 3210000000 3210000000 3210000000 3210000000 3210000000 3210000000 3210000000 3210000000

0,0554 0,0554 0,0554 0,0554 0,0554 0,0554 0,0554 0,0554 0,0554 0,0554

6,58 6,58 6,58 6,58 6,58 6,58 6,58 6,58 6,58 6,58

9,41E+12 3,32E+12 5,28E+11 9,2E+11 5,08E+12 7,44E+11 8E+11 4E+11 4,16E+11 7,76E+11

1,12414E+13 2,64659E+12 3,35028E+11 74537920855 5,88005E+11 4,72681E+11 5,67847E+11 6,66501E+11 2,78557E+11 4,72681E+11

301 302 303 304 305

Tabla 4. Exponentes de los nmeros adimensionales y coeficiente A del modelo desarrollado (ecuacin 6). Coeficientes A B C D E F G H Valor Estimado 3.51E-06 1.01 0.22 0.82 -0.29 0.69 3.33 -2.58

306 307 308 309 310 311 312 313 314 315 316 317 318 319 320

Por lo tanto la ecuacin 6 se transforma en:


( ) ( ) ( ) ( ) ( )

(8)

Con esta ecuacin queda demostrado que KLa es directamente proporcional a la presin en el aireador externo y a los flujos FR y FA. Luego utilizando los resultados presentados en la tabla 3 para los valores del nmero adimensional 1 calculado por medio del modelo, se puede despejar de ste, el valor de KLa, para cada ensayo como se presenta a continuacin: Ensayo 1: (9)

(
321 322 323 324 325 326 327 328

( (

( )

En la tabla 5, se presentan los valores de KLa obtenidos por medio del modelo desarrollado para cada uno de los ensayos, y su % de diferencia respecto a los valores obtenidos experimentalmente por el mtodo dinmico. Tabla 5. Valores de KLa obtenidos por medio de la ecuacin 7, utilizando el coeficiente y los exponentes encontrados. K La (modelo ecuacin 7) (s-1)
0,0194 0,0132 0,0074 0,0035 0,0247 0,0169 0,0089 0,0042 0,0009 0,0020 0,0059 0,0071

Ensayo 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
329 330 331 332 333 334 335 336 337 338 339 340 341

K La (Calculado por el mtodo dinmico ) (s-1)


0,0193 0,0131 0,0108 0,0052 0,0251 0,0141 0,0111 0,0066 0,0115 0,017 0,0093 0,01

% diferencia
0,4 0,8 -31,8 -32,9 -1,7 19,6 -20,1 -36,5 -91,9 -88,4 -36,4 -28,9

0,0083
0,0035 0,0059

0,005
0,0052 0,0097

66,9
-32,9 -39,0

Este comportamiento indicara que el modelo representa adecuadamente los datos cuando la potencia de la agitacin (W) se mantiene constante en un valor de 0.039 Vatios, mientras que cuando esta potencia se lleva a un valor de 0.246 Vatios (Ensayos 9 -10), el modelo deja de ser til para el clculo del KLa. Sugiriendo que es necesario realizar nueva experimentacin variando la potencia aplicada al agitador, para determinar su influencia sobre el KLa. Tomando slo los datos correspondientes a los ensayos realizados con una potencia de agitacin de 0.039 Vatios, se logra una correlacin de 0.89 entre los valores de KLa determinados por el mtodo dinmico y los obtenidos por el modelo, como se aprecia en la figura 4.

342
0.030 0.025 0.020 0.015 0.010 0.005 0.000 0 0.005 0.01 0.015 0.02 0.025 0.03 Valores de KLa (s-1) obtenidos por el mtodo donmico y = 1.07x - 0.00 R = 0.89

343 344 345 346 347 348 349 350 351 352 353 354 355 356 357 358 359 360 361 362 363 364 365 366 367 368 369

Figura 4. Comparacin KLa obtenidos por el modelo y KLa experimentales. La aproximacin obtenida, establece una base para generar un conjunto de ecuaciones que permitan disear el sistema de fermentacin con aireador externo. De este modo, conociendo la demanda de oxgeno de un cultivo especfico ser posible dimensionar el SFAE de modo que en su funcionamiento no se presente limitacin de ste. Conclusiones Por medio del teorema Pi de Buckingham se propuso un modelo matemtico que permiti estimar el valor del KLa a partir de variables asociadas a las propiedades del aire y el agua, a parmetros geomtricos del prototipo de sistema de aireacin externa y a variables de operacin que incluyen la presin, las velocidades de flujo de los dos fluidos y la potencia de agitacin en el recipiente de fermentacin. Este modelo plantea que KLa es directamente proporcional a los flujos FR y FA y a la presin en el aireador externo. Al comparar los valores de KLa obtenidos mediante el modelo con los valores calculados a partir del mtodo dinmico, se observ que estos valores se ajustaban mejor cuando la potencia de agitacin se mantena en un valor constante de 0.039 Vatios. Sugiriendo que se requiere mayor trabajo experimental para elucidar el efecto de esta variable sobre el coeficiente volumtrico de transferencia de oxgeno. El modelo propuesto es til para la comprensin del funcionamiento del SFAE y para proponer las ecuaciones de diseo que permitan calcular sus dimensiones a partir de las demandas de oxgeno en un cultivo.

Valores de KLa (s-1) obtenidos por medio del modelo

370 371 372 373 374 375 376 377 378 379 380 381 382 383 384 385 386 387 388 389 390 391 392 393 394 395 396 397 398 399 400 401 402 403 404 405 406 407 408 409 410 411 412 413 414

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415 416 417 418 419 420 421 422 423 424 425 426 427 428 429 430 431 432 433

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