Vectores Virales

Los vectores virales se disean con la idea de aprovechar la habilidad de los virus para entrar a las clulas eucarioticas. El delivery con vectores virales no es la nica forma de hacer llegar protenas a una celula que carece de ellas. Los plasmidos pueden tambin cumplir esa funcin pero no tienen la capacidad de entrar a la celula tan fcilmente como un virus. Una situacin ideal es que el vector solo lleve el gen que queremos introducir dentro de esa celula para lo cual se deben remover los propios genes virales. Esta eliminacin de genes virales significa conocer de antemano lo que se puede eliminar o no y a su vez, proveer lo que se saca para reconstituir la particula viral. El producto final es una particula viral que exteriormente semeja una particula comn pero en su interior solo posee un genoma modificado para llevar nuestro gen de inters o directamente solo ese gen en la forma de un amplicon. Mtodos para llegar a la clula -Vectores virales Adenovirus Retrovirus/Lentivirus Adeno-associated virus (AAV) Herpes simplex virus (HSV) -No virales Naked DNA (plasmid DNA): inyeccin o gen seg Liposomes (lpidoscationicos): mezclados con genes Factores a tener en cuenta para hacer delivery -Cmo hacer llegar los genes a las clulas que yo quiero? Algunas o muchas Diferenciadas o no -Por cunto tiempo necesito que ese gen se exprese? -El sitio y la dosis de la entrega. -Existe alguna reaccin inmune adversa por el vehculo (virus) o el gene en los animales? -Existe algn efecto txico? Tipos de vectores virales Existen varios niveles de vectores virales de acuerdo a ciertas caractersticas innatas de ese virus o producidas en el lab Naturales: crecen en una especie pero no en otra: poxvirus aviares en clulas de mamfero (canaripox). Recombinantes propiamente dichos: -Competentes para replicar (NO DEFECTIVOS): genes no esenciales del vector se reemplazan por el gen de inters. -No competentes para replicar (DEFECTIVOS): Genes esenciales del vector se eliminan (ciclo de replicacin abortado o muy disminuido llevando a los virus llamados gutless Para replicar necesitan temporariamente de lo que se les elimino. La versin extrema de estas construcciones es el amplicon que solo contiene el gen de inters con su promotor, regiones 5 y 3 del genoma viral original (para que la polimerasa viral haga copias) y una seal de empaquetamiento. Esta seal de empaquetamiento es esencial para discriminar entre lo que se empaqueta y no se empaqueta dentro de la particula viral. Amplicn -El amplicn no codifica para protenas virales y por ende no puede producir partculas virales.-Elementos necesarios para producir partculas virales conteniendo amplicones: amplicon: minigenoma con promotor, gen de inters, seal de empaquetamiento, regiones 5 y3 flanqueantes. Vector helper: provee las funciones enzimticas para producir copias del amplicon. Carecen de seal de empaquetamiento. Este vector puede producir todas las protenas necesarias para reconstituir la particula viral pero es preferible que estas funciones estn separadas a fin de evitar recombinaciones lnea de empaquetamiento: provee las protenas estructurales.

Vectores basados en distintos tipos de virus Peligros de la insercion de retrovirus La capacidad de los retro (y otros virus tambin) de insertase errticamente en el genoma despierta ciertos temores de producir mas dao que mejoras. Los trabajos que se citan a continuacin prueban que esto es asi y que adems, al menos para los retrovirus, existe una tendencia a insertarse en lugares especficos del genoma eucarite. Temas que deben mejorarse -Targeting especifico: receptores especficos/promotores especficos. -Insercin direccional. -Expresin controlada del gen de inters -Poder insertar el gen en su estructura original (con intrones y seales regulatorias: muy grandes)