RESUMEN

Las clulas madre constituyen la unidad natural de generacin durante la embriognesis y regeneracin en la vida adulta, estas clulas juegan un papel importante en la regeneracin de diferentes estructuras del complejo bucofacial y tienen su mecanismo de accin en la diferenciacin de las clulas del complejo dentino-pulpar, el ligamento periodontal y en la regeneracin de deficiencias esquelticas crneofaciales.

Desde el descubrimiento de las clulas madre y de sus capacidades regenerativas, se han realizado diversas investigaciones en Odontologa para intentar regenerar tejidos a nivel oral.

Palabras clave: uso de clulas madre en odontologa, regeneration, dental pulp stem cells .

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INTRODUCCIN
Las clulas madre tienen la capacidad de dividirse indefinidamente y de diferenciarse en distintos tipos de clulas especializadas, no solo desde el punto de vista morfolgico sino tambin de forma funcional.

Estas clulas pueden clasificarse en embrionarias y adultas segn su estado evolutivo, y en relacin con su potencialidad celular en totipotentes, pluripotentes y multipotentes.1

En la actualidad, a partir de la ingeniera tisular y de la terapia con clulas madre (CM) es posible tener xito en el tratamiento de diversas enfermedades. Las clulas madre posnatales tienen el potencial de diferenciarse en clulas especficas de los tejidos ms all de su origen.

Las clulas madre de la pulpa (DPSC) han sido clasificadas como clulas madre multipotenciales, por lo tanto tienen el potencial de autorenovacin y diferenciacin en clulas como los adipocitos, las clulas neuronales y los odontoblastos.2

Las propiedades de las clulas DPSC las convierten en una interesante fuente de clulas madre adultas para la terapia celular y la medicina regenerativa.3

OBJETIVO
El objetivo de esta revisin bibliogrfica es conocer los distintos tipos de clulas madre presentes en la cavidad bucal y sus aplicaciones en la regeneracin de los tejidos intraorales y extraorales.

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MATERIAL Y MTODO
Se realiz una bsqueda bibliogrfica en: Pubmed BVS RODYB Dialnet Scielo Acta Odontolgica Venezolana Google acadmico

Se incluyeron artculos de los ltimos 5 aos (2009-2014). Los idiomas de los artculos incluidos en la revisin son ingls y espaol. Palabras clave: clulas madre, regeneration, dental pulp stem cells Stem cell regeneration of dental tissues .
N DE ARTICULOS ENCONTRADOS N DE ARTICULOS UTILIZADOS

BASE DE DATOS

TRMINOS DE BSQUEDA

Scielo Acta OdontolVenez Google acadmico Pubmed Dialnet Google acadmico Google acadmico Pubmed Pubmed Pubmed Pubmed RODYB

regeneracin AND clulas madre clulas madre de tejidos dentales clulas madre de los tejidos dentales Stem cell regeneration of dental tissues clulas madre tejidos dentales uso de clulas madre en odontologa aplicaciones de las clulas madre en odontologa Stem cells of the dental pulp Stem cell regeneration of dental tissues Pulp stem cells in teeth regeneration of teeth with dental stem cells clulas madre

31 42 16000 105 3 3480 1530 203 79 108 81 1

1 1 1 1 1 4 1 2 2 2 3 1

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Google acadmico Pubmed Pubmed Pubmed

clulas madre de la pulpa dental y regeneracin cardiaca pulp regeneration and dentin AND stem cells regeneration AND dental pulp stem cells dental pulp stem cells AND corneal

70 25 72 2

1 1 3 1

RESULTADOS
De todos los artculos obtenidos en la bsqueda bibliogrfica se han incluido 26 en el trabajo.

Qu es una clula madre?

Las clulas madre son poblaciones de clulas indiferenciadas, que se definen como clulas clonognicas. Tienen dos propiedades: la autorrenovacin, que es la capacidad de dividirse en ms clulas madre, y la capacidad de diferenciarse en uno o varios tipos de clulas especializadas bajo condiciones apropiadas.

En un principio, se pens que estas clulas estaban predeterminadas a diferenciarse en un tipo celular procedente de su mismo tejido de origen o de su misma capa embrionaria, sin embargo, se considera la posibilidad de que las clulas madre de tejidos adultos pueden generar tipos de clulas especializadas de otros tipos de tejido desde el cual ellas normalmente residen y son capaces de diferenciarse funcionalmente a clulas especializadas procedentes de la misma capa embrionaria o de capas embrionarias distintas a las de su origen. Esta capacidad se conoce como fenmeno de plasticidad.4

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Tipos de clulas madre

Existen dos tipos de clulas madre: Embrionarias: producidas a partir de la fecundacin del vulo, de 4 a 5 das despus de la fecundacin se forma el blastocito, que consiste en una esfera de aproximadamente 100 clulas, con una capa externa, el trofoblasto, el cual facilita la implantacin del embrin al endometrio; una cavidad llena de lquido, el blastocele, y un grupo de clulas en el interior, la masa celular interna. Postnatales (adultas): son clulas indiferenciadas que se encuentran entre clulas diferenciadas en un tejido u rgano y pueden renovarse y diferenciarse en tipos de clulas especializadas. Dichas clulas se diferencian segn la necesidad y juegan un papel importante en la homestasis y en la reparacin de tejidos.

Las clulas madre tambin se diferencian segn el potencial para formar clulas especializadas en:

Totipotenciales: pueden dar lugar a todo un individuo, cada clula puede desarrollarse en una nueva clula a partir de clulas embrionarias. Pluripotenciales: pueden dar lugar a cualquier lnea celular de tejido endodrmico, mesodrmico o ectodrmico. Multipotenciales: son clulas diferenciadas que pueden formar varios tipos de tejido; a partir de tejido fetal, de sangre del cordn umbilical o de clulas madre postnatales.5

Clulas madre de la cavidad bucal

La mayora de los tejidos conectivos craneofaciales, incluyendo los de la pulpa dental y el ligamento periodontal, estn formados por un tipo especial de tejido mesenquimatoso, derivado de la cresta neural durante el desarrollo embrionario, denominado ectomesnquima.

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ste contribuye a la generacin de estructuras craneofaciales, tales como los msculos orales, los huesos, la lengua, los nervios craneofaciales y los dientes. Por tanto, las clulas madre dentales ectomesemquimales (EMSCs) comparten un origen comn con las clulas de la cresta neural.6

Adult tooth

Adipocytes s
Adult tooth

Muscle cells

Chondrocytes

Neurons

Dental EMSCs Imagen 1. Origen y potencial de diferenciacin de las clulas madre dentales ectomesenquimales (EMSCs). A) Origen de las clulas madre de la cresta neural (CTCN). Despus de la fusin del tubo neural, las clulas de la cresta neural se someten a una transicin epitelio mesenquima (EMT), donde se transforman en EMSCs. Las EMSCs migran para generar la mayora de los tejidos craneofaciales, incluyendo los tejidos de dientes, grasa, msculo, hueso, cartlago, as como los ganglios perifricos y los nervios craneales. B) EMSCs se retienen en la pulpa dental de adultos y tejidos periodontales. Estas clulas mantienen el potencial de diferenciarse en diversos linajes de clulas y por lo tanto regenerar diferentes tejidos dentales y conectivos. EMSCs dentales parecen tener un potencial neurognico particularmente alto y tambin se pueden usar para regenerar tejido nervioso. (Tomado de Ibarretxe G, 2012).

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Las clulas madre de la cavidad bucal son clulas que poseen un potencial de multidiferenciacin y por tanto pertenecen al grupo de clulas madre adultas con la capacidad de formar clulas con carcter osteo/odontognico, adipognico y neurognico.1

Principales grupos de clulas madre de la cavidad bucal: o Clulas madre de la pulpa de dientes temporales (SHED Cells). o Clulas madre de la pulpa de dientes permanentes (DPSCs). o Clulas madre presentes en los espacios periodontales (PDLSCs). o Clulas madre de la mucosa bucal.1

Clulas madre de la pulpa de dientes temporales (SHED Cells)

Las clulas madre presentes en la pulpa de los dientes temporales (SHED Cells) in vitro, pueden diferenciarse odontognicamente, osteognicamente, adipognicamente, condrognicamente o neurogenicamente, dependiendo de diferentes condiciones. In vivo, estas clulas madre multipotentes tienen el potencial de diferenciarse en neuronas, adipocitos, odontoblastos, y clulas osteoinductoras y endoteliales.7 Son capaces de estimular la nueva formacin de hueso, por lo que tienen una posible aplicacin en la regeneracin sea craneofacial.8

Imagen 2. SHED diferenciadas en clulas madre mesenquimales.

(Tomado de Rai S, 2013).

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Ventajas de los bancos de SHED 1) Proporcionan un trasplante autlogo de por vida. 2) Es un procedimiento simple y sin dolor. 3) Las clulas eliminadas son complementarias a las clulas madre de la sangre del cordn umbilical. 4) til para los parientes prximos del donante. 5) No estn sometidos a las mismas preocupaciones ticas como las clulas madre embrionarias.

Los mejores candidatos para el aislamiento dentro de los dientes deciduos son los caninos e incisivos con la presencia de una pulpa sana que se estn empezando a aflojar. Pasos:

1) Coleccin de dientes El primer paso es colocar el diente en una solucin salina estril, en leche o en un contenedor de almacenamiento junto con paquetes de gel congelados. El diente exfoliado debe tener una pulpa roja lo que indica que la pulpa ha recibido el flujo de sangre hasta el momento de la retirada, lo que es indicativo de viabilidad celular. El color gris de la pulpa indica que el flujo de sangre se ve comprometido, y por lo tanto las clulas madre son propensas a ser necrticas y ya no son viables para la recuperacin. El diente se transfiere a un vial que contiene solucin salina hipotnica tamponada con fosfato, lo que ayuda a evitar que el tejido se seque durante el transporte (hasta cuatro dientes en un vial).

2) Aislamiento de las clulas madre Cuando el banco recibe el vial, todas las clulas se aslan y se sigue un estricto protocolo para la limpieza de la superficie del diente con varios desinfectantes. El tejido pulpar se aisla de la cmara y las clulas se cultivan en un medio de MSC en condiciones apropiadas. El tiempo transcurrido desde la recogida a la llegada a la instalacin de procesamiento no debe superar las 40 horas.
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3) Almacenamiento de las clulas madre Crioconservacin: las clulas se conservan en vapor de nitrgeno lquido a -150 manteniendo as su latencia y potencia, de manera que las clulas se pueden almacenar durante un largo tiempo y todava permanecer viables para su uso.

Congelacin magntica o Sistema Alive celular (CAS): utiliza un campo magntico, donde se enfra el objeto por debajo del punto de congelacin, lo que garantiza la distribucin de la temperatura baja sin daar la pared celular.9

El uso de las SHED ofrece ventajas para la ingeniera tisular sobre el uso de las DPSC, ya que la tasa de proliferacin es mayor. La principal ventaja de utilizar SHED es que se pueden obtener de forma no invasiva de dientes deciduos que se extraen de forma rutinaria en la infancia y, en general son desechados.2

Clulas madre de la pulpa de dientes permanentes (DPSCs)

Las clulas madre que se encuentran en la pulpa de los dientes permanentes (DPSCs) fueron identificadas basndose en sus rasgos de formar colonias nicas en cultivos, con autorenovacin in vivo, y multidiferenciacin in vitro. Pueden formar tejidos osteognicos, condrognicos, adipognicos y miognicos.10

Se caracterizan por su capacidad de regenerar el complejo dentino-pulpar adems de expresar marcadores seos como las sialoprotenas seas y fosfatasas alcalinas, entre otros.1 Adems las DPSC pueden expresar marcadores neuronales y diferenciarse en neuronas funcionalmente activas, lo que sugiere su potencial como terapia celular para trastornos neuronales.11

Se ha estudiado la diferencia de capacidad osteognica entre las clulas madre DPSC y las clulas de la mdula sea y se ha encontrado que no existe diferencia entre ellas, incluso se ha visto que las clulas madre DPSC pueden ser mejores.10
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La principal fuente de clulas madre de dientes permanentes son los terceros molares.1 Estas clulas son fciles de criopreservar y se pueden guardar por largos perodos de tiempo, ya que retienen su multipotencialidad y capacidad de producir hueso.10 Recientemente, se ha aislado y caracterizado una nueva poblacin de clulas madre de la pulpa dental humana de los terceros molares. Estas clulas , denominadas clulas madre pluripotentes de la pulpa dental (DPPSCs), expresan marcadores de pluripotencia tales como Oct- 4 , Lin - 28 , Sox - 2 y Nanog, que son cuatro factores cuya expresin inducida por s sola es suficiente para revertir las clulas humanas diferenciadas a un fenotipo pluripotencial.

Se ha demostrado que las clulas madre pluripotentes de la pulpa se pueden diferenciar en clulas de las tres capas embrionarias: endodermo, mesodermo y ectodermo, mostrando de este modo una potencia que se pensaba exclusiva de las clulas embrionarias (ES) y de las clulas madre pluripotentes inducidas (IPS).6

Clulas madre del espacio periodontal (PDLSCs)

Las clulas madre que se encuentran en los espacios periodontales se caracterizan por presentarse en la vecindad de los vasos sanguneos. Varios estudios afirman que el ligamento periodontal tiene poblaciones de clulas que pueden diferenciarse en cementoblastos u osteoblastos. Tambin contiene clulas madre que pueden diferenciarse en adipocitos y clulas formadoras de colgeno.1

Clulas madre de la mucosa bucal

Los queratocitos CM de la mucosa bucal tambin se han aislado y cultivado, expresan totipotencialidad y son capaces de reparar defectos de lesiones cutneas de baja inmunogenicidad.1

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Segn las investigaciones llevadas a cabo existen dos nuevos grupos de clulas madre en la cavidad bucal:

Clulas madre de la papila apical (SCAP)

La papila apical hace referencia al tejido blando situado en los pices de los dientes permanentes las SCAP son las precursoras de los odontoblastos primarios, responsables de la formacin de la dentina radicular, mientras que las clulas madre de la pulpa son probablemente las precursoras de los odontoblastos encargados de formar dentina reparativa.1

Las clulas madre de la papila apical tienen una mayor capacidad para la regeneracin de la dentina que las DPSCs porque la papila dental contiene un mayor nmero de clulas madre adultas en comparacin con la pulpa dental madura.12 El mayor potencial proliferativo de las clulas SCAP hace que esta poblacin de clulas sea adecuada para la regeneracin basada en clulas y preferentemente para formar races.11

Clulas madre del folculo dental (DFPCs)

El folculo dental es un tejido ectomesenquimal que rodea al rgano del esmalte y la papila dental del germen del diente permanente en formacin. Las DFPCs han sido aisladas de folculos dentales de terceros molares que muestran una morfologa tpica de fibroblasto in vitro, se ha desmostrado que despus de la induccin su diferenciacin es osteognica.1

Estas clulas se pueden mantener en cultivo durante al menos 15 pasajes. Se pueden diferenciar en cementoblastos in vitro y son capaces de formar cemento in vivo. Las clulas del folculo dental inmortalizadas son capaces de volver a crear un nuevo ligamento periodontal despus de la implantacin in vivo.13

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Clulas madre epiteliales dentales

El principal problema de las clulas epiteliales dentales, como los ameloblastos y los ameloblastos precursores, es su pronta eliminacin despus de la erupcin de los dientes. Por lo tanto, las clulas epiteliales que pueden ser estimuladas in vivo para formar el esmalte no estn presentes en los dientes adultos humanos. La tecnologa de clulas madre parece ser la nica posibilidad de volver a crear una superficie de esmalte.13

Clulas madre presentes en los plipos pulpares

Se han realizado algunos estudios sobre la evaluacin de la presencia de clulas madre en los tejidos dentales afectadas por un proceso patolgico. Han evaluado la presencia de clulas madre en los tejidos afectados por la inflamacin. Ms concretamente la presencia de clulas madre en los plipos pulpares. El plipo pulpar, tambin conocido como pulpitis hiperplsica crnica o pulpitis proliferativa, es un tipo de hiperplasia inflamatoria. Se produce en un diente vital con un buen suministro de sangre cuando la pulpa se ha expuesto a caries o traumatismos.

Las clulas aisladas a partir de plipos pulpares se diferencian en adipocitos y osteoblastos. Estas clulas cumplen los criterios mnimos necesarios para la definicin de clulas madre mesenquimales; por lo tanto, se puede concluir que los plipos pulpares contienen clulas madre. Aunque los plipos pulpares son tejidos raros en la prctica diaria, cuando estn presentes, pueden servir como un posible recurso no invasivo para adquirir clulas madre.14

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REGENERACIN
El concepto de ingeniera de tejidos fue concebido por Langer y Vacanti en la dcada de 1990 para describir la tcnica para la regeneracin de tejidos biolgicos.15 En la actualidad hay dos enfoques en la regeneracin de dientes, uno se basa en el uso de andamios sembrados con clulas madre (regeneracin de dientes a base de andamio), mientras que el otro se basa en el uso de clulas madre sin andamios (regeneracin diente - andamio libre).16

La siembra de clulas en los andamios de la ingeniera de tejidos se conoce como la creacin de una construccin de tejido. Requisitos de un andamio: Eficaz para el transporte de nutrientes, oxgeno y residuos. Biocompatible y no txico. Fsica y mecnicamente resistente. Poroso para permitir la colocacin, la distribucin y la proliferacin de clulas. Permeabilidad en el medio de cultivo. Capacidad de vascularizacin en vivo. Mantener el fenotipo celular osteoblstico. Facilidad de fabricacin. Poco a poco degradado y sustituido por tejido de regeneracin, conservando las caractersticas de la estructura del tejido final.

Los andamios pueden ser clasificados como naturales o sintticos. Los andamios naturales son ms biocompatibles, pero los andamios sintticos ofrecen un mejor control sobre las caractersticas fisicoqumicas del medio.17

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Actualmente las clulas madre se usan para reparar los tejidos daados de los dientes, tales como la dentina, el ligamento periodontal y la pulpa dental. Tambin para facilitar la reparacin de tejidos adicionales como hueso y nervios. 11 Regeneracin de la pulpa y la dentina La pulpa dental tiene la capacidad de generar dentina en respuesta a estmulos nocivos, como la caries. Contiene clulas madre progenitoras que pueden proliferar y diferenciarse en odontoblastos formadores de dentina. Los odontoblastos daados pueden ser reemplazados por nuevas poblaciones de odontoblastos derivados de las clulas madre de la pulpa.

Los tres ingredientes clave de la ingeniera tisular son las seales para la morfognesis, las clulas madre para responder a los morfgenos y el soporte (andamio) o matriz extracelular. En estudios preclnicos se ha desarrollado un mtodo que consiste en liberar factores de crecimiento, citocinas o morfgenos con clulas madre / progenitoras en un soporte en las zonas de lesin tisular para acelerar y/o inducir una regeneracin biolgica natural.

El tejido pulpar contiene clulas madre / progenitoras que tienen el potencial de diferenciarse en odontoblastos en respuesta a protenas morfogenticas seas (BMPs). Hay dos estrategias para regenerar la dentina: La primera es el tratamiento in vivo: las protenas BPM o los genes BMP se aplican directamente a la pulpa expuesta o amputada. La segunda es el tratamiento ex vivo: consiste en el aislamiento de clulas madre / progenitoras del tejido pulpar, la diferenciacin en odontoblastos con genes BMP recombinantes o BMP y finalmente el trasplante autlogo para regenerar la dentina.18

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La endodoncia regenerativa representa una nueva modalidad de tratamiento que se centra en el restablecimiento de la vitalidad de la pulpa y el continuo desarrollo de la raz. Este procedimiento clnico se basa en la dosificacin intracanal de un cogulo de sangre (andamio), factores de crecimiento (posiblemente de plaquetas y dentina) y clulas madre.

Como las clulas DPSC tienen una capacidad dentinognica potente, podran ser utilizadas para la terapia pulpar vital. Cuando las DPSC se trasplantan solas o en combinacin con BMP2 en la cavidad de la pulpa, estas clulas madre pueden promover significativamente la reparacin y la reconstruccin del complejo dentinopulpar. Estudios realizados por varios autores han informado de que el complejo dentino-pulpar con vascularizacin bien establecida se puede regenerar de novo en el espacio vaciado del conducto radicular por clulas DPSC o SHED.11

Regeneracin del esmalte

El esmalte es el tejido mineralizado ms duro del cuerpo humano. Se compone de cristales de hidroxiapatita dispuestos en una microarquitectura altamente organizada llamada prisma. Los ameloblastos junto con la amelogenina y la protena ameloblastina, estn involucrados en el proceso de produccin del esmalte.

Los intentos anteriores para disear esmalte se centran en la sntesis qumica. Algunos investigadores han sintetizado y modificado la superficie de los nanopilares de hidroxiapatita con monocapas de tensioactivos para crear caractersticas superficiales especficas que les permitieran ensamblarse en un prisma de esmalte. Las clulas madre de la pulpa de dientes permanentes mostraron biocompatibilidad cuando se cultivaron en los cristales producidos.16

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Regeneracin del ligamento periodontal

El objetivo de la regeneracin del complejo radicular y periodontal es reemplazar los implantes dentales que se utilizan para tratar la prdida dental. Se ha empleado la recombinacin de clulas del germen dental y clulas progenitoras de la mdula sea mediante el uso de una matriz para generar una raz dental y hueso alveolar respectivamente.

La forma ms cercana de reconstruccin del complejo raz-periodonto es la ingeniera tisular hibrida, donde se integran la regeneracin dental a base de clulas troncales, la utilizacin de biomateriales y la restauracin con corona. Cuando las clulas troncales de la papila apical y de los tejidos periodontales se combinan con una matriz de hidroxiapatita/fosfato triclcico, se forma un complejo raz-periodonto que puede soportar una corona de porcelana y dar as una funcionalidad masticatoria y esttica.19

Se han implantado clulas madre humanas del ligamento periodontal cultivadas, en el interior de defectos periodontales quirrgicamente creados en ratas atmicas. Los resultados indicaron que haba clulas madre del ligamento periodontal adheridas a las superficies del hueso alveolar y el cemento, y haba evidencia de formacin de una estructura parecida al ligamento periodontal.

Estos hallazgos sugieren que el ligamento periodontal contiene clulas con el potencial de generar cemento y tejido similar al ligamento periodontal in vivo, lo cual abre nuevas posibilidades teraputicas para la regeneracin del tejido destruido por enfermedad periodontal.20

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Regeneracin de dientes En estudios realizados a nivel experimental se ha podido observar que las clulas madre adultas adecuadamente estimuladas podan dar origen a un diente con su tejido seo circundante, esta induccin se ha realizado mediante estmulos de genes como MSX y PAX-9 sumado a factores de crecimiento; del mismo modo qued demostrado que los tejidos presentes en el diente en estadio de brote, pueden ser usados en la bioingeniera para crear la totalidad de la corona dental.1 Las estrategias que refieren los autores son el uso del mtodo de agregacin celular o desarrollo biolgico, que consiste en la unin de clulas mesenquimales y clulas epiteliales para forma una pieza dentaria; y la ingeniera tisular (bioingeniera), que consiste en cultivar en depsitos de colgeno (scaffold) clulas de odontoblastos, ameloblastos y del ligamento periodontal para la creacin de una nueva pieza dentaria.21

Regeneracin de las glndulas salivales

El tratamiento de la patologa hipofuncional de las glndulas salivales es otro de los campos donde las clulas DPSC estn siendo investigadas con buenos resultados, considerndolas una buena alternativa teraputica.

La xerostoma o boca seca se debe a una reduccin funcional de las glndulas salivales, bien por Sndrome de Sjgren, por radioterapia para el tratamiento del cncer de cabeza y cuello, por frmacos o por la edad, haciendo que los pacientes tengan dificultades al tragar y al hablar, a la vez que puede causar enfermedades dentales como la caries.

En la Universidad de Washington se ha investigado en ratas los efectos de aadir o no DPSC a clulas madre de las glndulas salivales (HSG) en un hidrogel de cido hialurnico.

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En el grupo tratado con DPSC + HSG hallaron una mayor expresin de marcadores mesenquimales, endoteliales, neuronales, angiognicos y de diferenciacin a glndula salival madura. Asimismo encontraron estructuras hacinares y ductales con abundante vascularizacin y ms maduras.

Imagen 3. Clulas madre de la glndula salivar (HSG) vs HSG co-trasplantadas con DPSC. En tincin con H&E las HSG (A-C) mostraban clulas inmaduras compatibles con clulas cancerosas, mientras que las HSG+DPSC (D-F) mostraron estructuras glandulares con estructuras acinares y ductales. En tincin PAS se hallaron algunas clulas aisladas positivas (en rosa) en los casos trasplantados con HSG (G-I), mientras que en los casos trasplantados con HSG+DPSC (J-L) se encontraron grupos PAS-positivas compatibles con estructuras acinares y PAS-negativas compatibles con estructuras ductales. (Tomado de Iglesia MA, 2014).

Todos estos resultados indican que las DPSC apoyan y refuerzan la diferenciacin de las HSG a tejido de glndula salivar funcional. Los autores concluyen que las DPSC tienen potencial en terapia celular como inductoras mesenquimales en regeneracin, reparacin e ingeniera tisular glandular.3

Aplicaciones extraorales de las DPSC para posibles aplicaciones en medicina regenerativa:

Regeneracin de la piel Recientemente las clulas madre de la pulpa de los dientes caducos (SHED) han recibido atencin por ser un recurso novedoso en el campo de las clulas madre mesenquimales, con caractersticas de multipotencialidad.

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En los estudios realizados se han empleado estas clulas para ver la velocidad de regeneracin y reparacin de una herida. Los resultados muestran que las SHED aceleran la reparacin de la herida.10

Endocrinologa (Diabetes) La diabetes es una enfermedad compleja, con alta incidencia a nivel mundial y con posibilidad de tratamientos avanzados, pero con pocas posibilidades de curacin. Para cambiar esta realidad, desde hace aos se est investigando el uso de clulas madre adultas como fuente potencial de clulas pancreticas.3

Varios investigadores han incursionado en explorar el potencial de las clulas madre de la pulpa de dientes permanentes en diferenciarse en linajes pancreticos con agregados celulares parecidos a los islotes del pncreas (ICA). Los investigadores aislaron, propagaron y caracterizaron a las DPSC, demostrando que estas pueden diferenciarse ante la exposicin apropiada de una mezcla de agentes diferenciantes en linajes adiposos, cartilaginosos y seos.

Adems promueven que utilizando un protocolo de tres pasos logran la obtencin de ICA a partir de las clulas DPSC. Demostrando por primera vez que las clulas madre dentales pueden ser diferenciadas en clulas pancreticas productoras de insulina, lo que abre la posibilidad de tratar en un futuro la diabetes tipo I y II con clulas madre de los dientes.10

Los estudios tambin revelan resultados prometedores y por vez primera, han demostrado que las clulas madre de pulpa dental de dientes de leche son capaces de revertir la diabetes in vivo en ratones. Los autores concluyen que las clulas madre de pulpa dental son una fuente celular autloga accesible, libre de debates ticos, no invasiva y sencilla de obtener, para poderlas utilizar en terapia celular en el tratamiento de diabetes.3

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Regeneracin heptica Algunos investigadores han demostrado que las clulas progenitoras del germen dental (TGPC) de los terceros molares, pueden caracterizarse en clulas con la misma funcin y morfologa que las clulas hepticas, mediante factores de crecimiento heptico, dexametasona, Insulina-Transferrin-Selenium-X y oncostatin, adems de tener una alta actividad de proliferacin y capacidad de diferenciarse in vitro en clulas de tres diferentes capas germinativas incluyendo osteoblastos, clulas neurales y hepatocitos.

Estas clulas han mostrado un xito al ser trasplantadas en el hgado de rata previniendo la progresin de fibrosis y restaurando la funcin heptica. Las mediciones realizadas en marcadores sricos as como en las funciones del hgado, muestran niveles sricos de bilirrubina y albumina adecuados. Estas investigaciones sugieren que las TGPC son un buen candidato en la terapia celular para el tratamiento de enfermedades hepticas y que estas ofrecen oportunidades sin precedentes para el desarrollo de terapias en el tratamiento de reparacin y regeneracin de tejidos.10

Ciruga plstica Se ha encontrado que el transplante subcutneo de clulas madre del ligamento periodontal (PDLSC) junto con una gran cantidad de fibras colgenas puede mejorar de manera sustancial las arrugas faciales en los ratones. A diferencia de las MSC que no sobreviven despus de ser trasplantadas en las mismas condiciones. Las clulas PDLSC pueden ser utilizadas en cirugas reconstructivas y cirugas plsticas para reparar y regenerar el tejido daado.10

Regeneracin de la crnea Tambin pueden verse avances importantes en el rea de la Oftalmologa donde la utilizacin de DPSC para la reconstruccin de la crnea es algo que veremos en un futuro cercano en la clnica.

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Estudios realizados en un modelo animal con conejos a los que se les induce un dao ex profeso a la crnea de sus ojos, nos ensean que aquellos conejos con una crnea translcida a la que se le aplic clulas madre inmaduras de la pulpa dental (hIDPSC) mejoraron a travs del tiempo, mientras que los controles desarrollaron corneas con total conjuntivitis y opacidad.10

Imagen 4. Los ojos de los conejos un mes despus de sufrir el dao en la superficie ocular y tres meses despus del trasplante de las clulas hIDPSC. (Tomado de Pereira JA, 2010).

Imagen 5. Anlisis histolgico del epitelio corneal obtenido despus del trasplante de las clulas hIDPSC. (Tomado de Pereira JA, 2010).

Esto nos seala que las clulas dentales humanas son capaces de regenerar crneas en un modelo animal y posiblemente en el hombre.

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Otros cientficos tienen como objetivo de su investigacin transformar las clulas madre dentales humanas en clulas lmbicas, encontrando que las clulas lmbicas madre son clulas autorrenovables y con una alta proliferacin in vitro, adems de compartir caractersticas nicas con las (hIDPSC) expresando una serie de marcadores especficos in vivo que les da la capacidad de reconstruir completamente el epitelio de la crnea en caso de algn dao en la superficie del ojo.10

Regeneracin de huesos y estructuras crneo-faciales Las clulas SHED y DPSC pueden ser criopreservadas y utilizadas con bioestructuras, donde en conjunto con una proliferacin extensiva son capaces de construir in vivo hueso con canales haverianos. Algunos investigadores han utilizado las clulas DPSC, donde despus de seleccionarlas, se extendieron y cultivaron para diferenciarse en clulas precursoras osteoblsticas. Adems han sido capaces de formar hueso lamelar con osteocitos LAB (Living Autologous Fibrous Bone Tissue).10

Las clulas DPSCs contienen marcadores osteognicos que responden a los inductores de diferenciacin osteognica y odontognica . Tales clulas madre mesenquimatosas se utilizan ampliamente en la reparacin / regeneracin quirrgica, ya que instigan de la cresta neural, migran, se diferencian y participan en la morfognesis para dar lugar a estructuras de la regin craneofacial, incluyendo el msculo, ligamento, cartlago, hueso, membrana periodontal y dientes. Varios autores han estudiado la diferenciacin osteognica de las clulas madre derivadas del ligamento periodontal humano y de la pulpa de los dientes deciduos humanos y sugieren que las clulas PDLSC son mejor recurso osteognico de clulas madre.23

Las clulas DPSCs trasplantadas con una variedad de andamio, incluyendo HA /TCP, PLGA , colgeno , hidrogel de nanofibras , HA- nano hidroxiapatita / colgeno / poli (L - lactida ) ( Nhac / PLA ), fibrona y el plasma rico en plaquetas (PRP) exponen una estructura similar al hueso. El tratamiento previo de las clulas DPSCs con BMP2 promueve la osteognesis.24
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Regeneracin neuronal Las DPSC tienen un origen embriolgico comn con las clulas del sistema nervioso en la cresta neural, por lo que algunos autores las califican como las candidatas ideales para la regeneracin neuronal, constituyendo mejor opcin que otros tipos de clulas madre para este tipo de aplicaciones.3

Las clulas dentales derivadas de la pulpa promueven la supervivencia de las neuronas sensoriales del ganglio trigmino y de las motoneuronas de la mdula espinal, proporcionando apoyo neurotrfico.25

En estas patologas hacen falta grandes cantidades de clulas madre para su tratamiento, y las DPSC poseen altas tasas de proliferacin, conservando su estado indiferenciado, que son mayores que las de las clulas madre de mdula sea, pudindose expandir in vitro en pocas semanas. Otra ventaja aadida frente a las de la mdula sea es que las DPSC se pueden obtener de forma mucho ms atraumtica y sencilla. Al ser para uso autlogo (empleando las clulas del propio paciente) no existe rechazo inmune, factor aadido a la buena regulacin inmunitaria de las DPSC en este mbito, comparable o incluso mejor que las de la mdula sea.

En experimentacin animal se ha observado que se integran y sobreviven en el tejido neural del husped, adoptando un fenotipo neural y promoviendo neurognesis de novo.

Sus posibles aplicaciones teraputicas en este mbito estaran en patologas tales como el accidente cerebrovascular isqumico, el traumatismo y seccin de mdula espinal y las enfermedades neurodegenerativas.

Las primeras publicaciones empleando DPSC en regeneracin neural son para el tratamiento de secciones del nervio facial en ratas.

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Los resultados obtenidos indican que las DPSC pueden proporcionar beneficios teraputicos en el tratamiento de la seccin de la mdula espinal. Tambin se han estudiado las DPSC en el tratamiento de infartos cerebrales en modelo animal, demostrando que ayudan de forma significativa a la mejora funcional en estas patologas.3

Regeneracin cardiaca Las DPSC tambin tienen su rea de aplicacin en regeneracin cardiaca. El equipo de investigacin de la Unidad de Cardio-regeneracin del Centro de Investigacin Prncipe Felipe de Valencia public un estudio en el que evaluaban la eficacia de las DPSC en la terapia celular del infarto agudo de miocardio en modelo animal.

Seleccionaron las DPSC frente a las clulas madre de la mdula sea por su mayor capacidad de auto-renovacin, de proliferacin in vitro, as como por su capacidad inmunomodulatoria. Tambin es importante su capacidad de segregar factores de crecimiento que realizan acciones proangiognicas, antiapoptticas y cardioprotectoras.3

Papel teraputico de las DPSCs en la isquemia Varios autores han aislado con xito unas clulas DPSCs altamente vasculognicas similares a las clulas endoteliales progenitoras de la pulpa dental. El aumento de las actividades de proliferacin y migracin incluyendo la diferenciacin en mltiples linajes y el potencial vasculognico (capacidad innata de diferenciarse en los vasos sanguneos y en las estructuras asociadas) tambin se han mostrado en estas clulas. El injerto de las DPSCs produjo alta densidad en la formacin de capilares en un modelo de rata con isquemia de las extremidades posteriores.23

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La hipoxia-isquemia (HI) perinatal tiene altas tasas de carencias neurolgicas y de mortalidad. Se han investigado los efectos teraputicos de las clulas madre de los dientes deciduos humanos (SHED) para el tratamiento de la lesin cerebral neonatal HI.

El transplante de clulas SHED en el cerebro lesionado-HI dio lugar a una notable recuperacin neurolgica y fisiopatolgica. Los hallazgos indican que los factores paracrinos derivados de las clulas SHED apoyan un microambiente neuroprotector en el cerebro HI. El injerto de clulas SHED y un medio acondicionado pueden proporcionar una nueva terapia neuroprotectora para la HI.26

Segregacin de clulas DPSCs en el tejido muscular La literatura ha evidenciado tambin diversos estudios que evalan el potencial miognico de las clulas DPSCs. Varios investigadores han utilizado las clulas DPSCs humanas para el tratamiento de la distrofia muscular en perros golden retriever, trasplantadas por inyecciones arteriales o musculares.

El potencial teraputico de las clulas DPSC de diferenciarse en la distrofia produciendo clulas musculares multinucleadas puede ser utilizado con xito en enfermedades como la distrofia muscular, donde el cuerpo es incapaz de producir distrofina.23

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DISCUSIN
Las clulas madre provenientes de los tejidos dentales son una alternativa til para la regeneracin de los tejidos, ya que se pueden expandir y cultivar. Estas clulas muestran un potencial multifactorial: alta tasa de proliferacin, capacidad de mltiple diferenciacin, fcil accesibilidad, una alta viabilidad y se inducen fcilmente a distintos linajes celulares.

En los estudios realizados con las clulas DPSC transplantadas en modelos animales se han obtenido buenos resultados, pero son necesarios estudios con mayor nmero de muestras, investigando en profundidad los mecanismos de actuacin, las dosis teraputicas, las matrices para vehiculizar estas clulas y todas las variables que puedan influir en los resultados.

Si de estos estudios en animales se siguen obteniendo resultados favorables, el siguiente paso sera la investigacin en humanos para verificar si los resultados obtenidos en el modelo animal son reproducibles y seguros en las personas.

Conclusiones El mayor reto en las tcnicas de regeneracin de tejidos es encontrar un buen andamiaje: con ptimas propiedades mecnicas y bilogicas, capaces de recibir un gran nmero de clulas y permitir la proliferacin de stas. En la regeneracin de tejidos dentarios, el tamao de los dientes es proporcional al andamiaje utilizado, ya que las piezas dentarias regeneradas son de las mismas dimensiones del andamiaje. El uso de BMP, PRP, PRGF, fibrina, andamios de colgeno y laminina potencian la regeneracin sea, aunque demuestran mejores resultados si son asociados a clulas madre.

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