Universidad autnoma de baja california Facultad de ingeniera

Bioingeniera

Biologa molecular

Ma. Fernando Sols Domnguez

Reporte de Prctica #1 Uso de Micropipetas

Liza Ma. Valdivia Cazares 1110320

21 de febrero de 2014

Introduccin.

Uno de los instrumentos ms utilizados en el laboratorio de biologa molecular son las micropipetas de uso bsico, las cuales permiten el manejo seguro y la medicin de pequeas cantidades de soluciones, existen de diferentes volmenes de 0.1L hasta 1mL, las micropipetas pueden ser utilizadas para contener o depositar volmenes. Esto es de suma importancia en los protocolos en los que se requiere exactitud en cuanto a cantidades muy pequeas de forma rpida y precisa. La micropipeta ms comnmente usada en los laboratorios fue introducida por la compaa Eppendorf y este nombre se adopt de forma genrica para estos dispositivos, aunque hoy en da existe una gran cantidad de compaas que ofrecen modelos similares que operan bajo un mismo principio de pistones. Existen 2 tipos de mecanismos: Pipetas de desplazamiento de aire o neumticas: es debido a que existe un

volumen de aire entre la cabeza del pistn y el lquido en el cilindro (este es el tipo ms corriente). Pipetas de desplazamiento positivo: porque el pistn se encuentra en

contacto directo con el lquido. Y tambin estn las de regulacin del volumen Pipetas de volumen fijo: Solamente pueden dispensar un volumen

determinado. Pipetas de volumen variable: Se puede ajustar el volumen a dispensar.

Por lo tanto, es aconsejable consultar las instrucciones del fabricante sobre el correcto uso de cada modelo. Todas las micropipetas utilizan puntas plsticas desechables que se ajustan al extremo inferior de la misma. En estas puntas de plstico es donde se deposita el lquido a medir.

Las compaas que producen micropipetas continuamente las ajustan, calibran y componen, sin embargo, una revisin cuidadosa de la exactitud y reproducibilidad de la toma y deposicin del volumen debe hacerse para asegurar su correcto funcionamiento.

Imagen 1: en la ilustracin se muestran las partes bsicas de una micropipeta. Objetivo.

Familiarice con el uso apropiado de las micropipetas debido a su uso rutinario dentro del laboratorio de Biologa Molecular. Uso adecuado de las micropipetas: Pasos: 1. Oprimir el botn pulsador con el dedo pulgar, hasta el primer tope y sin

soltarlo introducir verticalmente la pipeta, hasta que la punta se sumerja de 2 a 5 mm dentro del lquido.

2.

Liberar lentamente la presin sobre el botn. Despus de 23 segundos

retirar, siempre verticalmente, la pipeta del lquido deslizando la punta contra la pared del recipiente. 3. Apoyando la punta contra la pared del recipiente donde se quiere colocar el

lquido, presionar lentamente el botn pulsador hasta el primer tope. Despus de un segundo, y sin soltar el botn pulsador, terminar de vaciar la pipeta presionando hasta el segundo tope. 4. Retirar la pipeta deslizando la punta contra la pared del recipiente.

Imagen 2: se muestra el uso correcto de una micro pipeta.

Material, Reactivos y Equipo: Micropipetas de 1000 l, 200 l y 20 l Balanza analtica. Agua Tubos Eppendorf. Gradilla para tubos Eppendorf Charolilla plstica para pesar. Puntas para Micropipetas Marcadores indelebles. Guantes de ltex.

Metodologa:

1. Se marc con un plumn los micro tubos, 18 en total, se pesaron en la balanza analtica y registro su peso. 2. Se colocaron en una gradilla para micro tubos ya marcados y pesados, con la micropipeta indicada, segn el volumen deseado, aade sucesivamente en los tubos 5, 10, 20, 100, 500 y 1000 L de agua. 3. Para asegurarse que el volumen que se introdujo a cada tubo fue el adecuado, se pesaron los tubos conteniendo los diferentes volmenes de agua y se registr su peso. 4. Se realiz una tabla donde indica los pesos que obtenidos tanto de los tubos vacos como de los tubos con los diferentes volmenes de agua.

Imagen 3: se muestran los micro tubos con la numeracin correspondiente.

Imagen 4: los micro tubos ya con el lquido en su interior.

Imagen 5: la imagen muestra un micro tubo siendo pesado.

Resultados:

Tubos Eppendorf volumen numero de tubo vacos (gr) con agua (gr) 1.0212 1.0186 0.9945 con agua (gr) 1.0197 0.9999 0.9437 liquido (gr) promedio desviacin estndar

5L

1 2 3

1.0206 1.0179 0.9939 vacos (gr) 1.0185 0.9985 0.9425

0.0006 0.0007 0.0006 liquido (gr) 0.0012 0.0014 0.0012

0.000633

4.72x10-9

volumen

numero de tubo 4 5 6

promedio

desviacin estndar

10

0.001266

9.43x10-5

volumen

numero de tubo 7 8 9

vacos (gr) 0.991 0.951 0.9465 vacos (gr) 0.9995 1.0206 0.9555

con agua (gr) 0.993 0.9535 0.9488 con agua (gr) 1.1002 1.1206 1.0585

liquido (gr) 0.002 0.0025 0.0023 liquido (gr) 0.1007 0.1

promedio

desviacin estndar

20L

0.002266

2.06x10-4

volumen

numero de tubo 10 11 12

promedio

desviacin estndar

100L

0.101233

1.28x10-3

0.103 volumen numero de tubo vacos (gr) con agua (gr) liquido (gr) promedio desviacin estndar

500L

13 14 15

0.9903 0.9426 0.9524

1.4925 1.4679 1.4797

0.5022 0.5253 0.5273 0.518266 1.14x10-2

volumen

numero de tubo 16 17 18

vacos (gr) 0.9464 0.9484 0.9373

con agua (gr) 1.9664 1.9471 1.9336

liquido (gr) 1.02 0.9987 0.9963

promedio

desviacin estndar

1000L

1.005

1.07x10-2

Tabla 1: en la siguiente tabla se muestra el orden de cmo se fueron midiendo los tubos, adems de los pesos solicitados en la prctica, como peso de los tubos vacos, con agua y la resta entre ambos, que es el peso del lquido. Tambin se muestra el promedio de las muestras y la desviacin estndar.

Discusin: Por los resultados obtenidos, se puede examinar la exactitud y precisin de las micro pipetas, adems que depende mucho del manejo del operador, ya que si no se usan adecuadamente el volumen introducido en los micro tubos, no ser el correcto por lo cual se obtendrn malos resultados. A dems entre mis compaeros existieron ciertas dudas en cuento a las medidas para obtener el volumen correcto que se solicitaba en la prctica, adems observe que una de las balanzas analticas utilizadas no estaba correctamente balanceada, por lo que se pudo tener errores en los resultados debido a eso.

Conclusin. El uso de una micropipeta es prcticamente sencillo, teniendo en cuenta l manera adecuada de su funcionamiento y uso, adems de que se debe de tener en cuenta el volumen requerido para utilizar la micropipeta correcta, adems de ser instrumentos delicados ya que no se debe de sobrepasar su volumen ya que se puede daar el mecanismo de pistones de las micropipetas, en cuanto a los volmenes muy pequeos existieron en su momento dudas, ya que prcticamente es una pequea gota de agua, pero al pesarlo se not que era el volumen correcto o en cuento a precisin era bastante cercano, ya que cuando se buscaba un volumen de 5L se obtuvieron valores bastante cercanos.

Cuestionario. a) Qu es una micropipeta? Es un instrumento bsico de laboratorio de biologa molecular, las cuales permiten el manejo seguro y la medicin de pequeas cantidades de soluciones, existen de diferentes volmenes de 0.1L hasta 1mL. b) Para que se utilizan las micropipetas en el laboratorio? Por su manejo sencillo y rpido, adems de que permite manipular volmenes muy pequeos con una precisin elevada. c) Realiza un esquema de una micropipeta e indica las partes que la componen

d) Si tuvieras que pipetear un cido. Cul es el procedimiento para hacer esta operacin?

El siguiente esquema muestra la forma correcta de pipetear, y en caso de los cidos se lleva acabo el mimo procedimiento, solo se debe de tener en cuenta que al momento de terminar el procedimiento, de debe desmontar la punta de silicona de la micropipeta y enjuagarla con agua destilada, dejar secar, armar y comprobar su funcionamiento.

e) Afecta el volumen a pipetear el que la muestra este a baja o alta temperatura? Y por qu? Los lquidos a diferentes temperaturas, sus densidades cambien por lo que si afecta la temperatura al momento de pipetear. f) Consideras sabias usar adecuadamente las micropipetas antes de esta prctica de laboratorio? Pensaba que las manejaba de manera adecuada, pero al momento de ir investigando ms, y al realizar la practica me di cuenta de que se necesita de mucha tcnica para su uso correcto y para obtener el volumen deseado. Referencias. -J. M. Becker, G. A. Caldwell, E. A. Zachgo. Biotechnology. A Laboratory Course. Academic Press, Inc. USA., 1990. -Facultad de Medicina UNAM, Departamento de Bioqumica. Bioqumica y Biologa Molecular. Objetivos del curso y manual de prcticas de laboratorio. Mc Graw-Hill Interamericana Editores, Mxico, 2000. http://www4.ujaen.es/~pedrajas/Micropipetas.swf http://www.cultek.com/aplicaciones.asp?p=Aplicacion_Manejo_Liquidos&op c=tecnicas&idap=53 http://ocw.uv.es/ocw-formacio-permanent/11.Pipetasautomaticas.pdf