FORMACIN CONTINUADA

PARA FARMACUTICOS DE HOSPITAL

3.4

ACTUALIZACIN TERAPUTICA: TERAPIA GNICA

Dr. Marcos Isamat
Director Cientfico Fundacin Echevarne

FUNDACION

PROMOCION MEDICA

SUMARIO
1 Introduccin 1.1 Secuencias de ADN 1.2 El genoma y la identificacin estructural y funcional de un gen 1.3 Conceptos bsicos de gentica celular Terapia gnica somtica y terapia gnica germinal Terapia gnica In vivo y Ex vivo Transferencia gnica o Gene delivery 4.1 Retrovirus 4.2 Adenovirus 4.3 Virus asociados a los adenovirus 4.4 Liposomas 4.5 DNA desnudo Ingenieria gentica en terapia gnica 5.1 Diseo general 5.2 Terapia gnica para la correcin de la deficiencia en una protena 5.3 Terapia gnica para la correcin del exceso de funcin de una protena Conclusin Bibliografa

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1. INTRODUCCIN La terapia gnica es la correccin de un defecto gentico causante de enfermedad. Este concepto mdico ya se plante a principios de los aos 70, cuando empezaban a identificarse los primeros genes en organismos como la bacteria Escherichia coli o en la Drosophila melanogaster, la mosca del vinagre. Ambos modelos de estudio han proporcionado las bases genticas de la medicina actual. Los estudios actuales sobre genes de organismos ms complejos, entre ellos el humano, no son ms que el resultado y la extensin de todos estos modelos establecidos hace ya ms de cuarenta aos.
gen X: exn 1 gen X: exn 2 gen X: exn 3 ADN

promotor

Los procesos genticos y bioqumicos bsicos de la clula, la replicacin del DNA (cido desoxirribonuclico), activacin de un gen, transcripcin y procesamiento del mRNA (cido ribonuclico mensajero), traduccin del mRNA en protena, degradacin del RNA, trfico intracelular de protenas, y programacin de la divisin y muerte de una clula, son prcticamente idnticos a travs de toda la escala evolutiva. Con las bases de la gentica bien asentadas, slo falta la adquisicin de los detalles propios de cada especie para poder abarcar la terapia gnica de un modo prctico. Estos detalles vienen en forma de secuencias de ADN de los genes especficos de cada especie, y de la identificacin estructural y funcional de estos genes. 1.1 SECUENCIAS DE ADN Desde hace ms de quince aos, las secuencias de los genes que se obtenan a travs de tcnicas manuales con el consiguiente esfuerzo econmico y tcnico se han ido gradualmente almacenando en unas bases de datos informticos internacionales accesibles a los investigadores. La identificacin de un gen en la mosca de la fruta o en cualquier otro organismo, suscitaba la bsqueda de ese mismo gen en el ser humano, y esto era posible dado los altos niveles de conservacin entre las
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especies, en otras palabras, la secuencia del gen era muy parecida entre ambas especies. Casi inevitablemente, estas bsquedas de secuencias de ADN anlogas entre por ejemplo, la Drosophila y el ser humano, resultaba en la identificacin de genes equivalentes o similares. El resultado era todava ms seguro si se parta de una secuencia de DNA de una especie ms cercana al hombre, por ejemplo, el ratn. Poniendo en evidencia lo que ya se ha dicho antes, que los enzimas o protenas involucrados en las funciones bsicas y vitales de una clula son compartidos por todas las especies, y de ah que las secuencias de los genes que codifican estas protenas sean tan parecidas. Con la ejecucin de los grandes programas de secuenpromotor exn 1 accgctggcc gcggagggag agcccaaagt actatggcag tcattggcat tgcctgctat tgaaggccaa actccaaagt tggtggccct ggtccatcct gtaagaacta caggaagcag ttcaccgtac acatactcaa ataacaggct ctggtgcctg actactcgct agatgaccaa cggccaaatc aagcctatgg ccaagccttc tattccttcc tgtccatttc cctggcaggg ggcaacttgt ccagggaaag cagcgccggg agaactgcat gaggagaggg ggacaagccg cgcgggctgc agagggcgtg ggagccaatc agtgggccag gtgctgcatg ccagcagcag cctcttgcct tgtccacgcc gacagagcgg gcggcaggaa gaagccggac caacacagat acgggacatg tagtttcctc gatgccacct accctgtgga aagaagacca tgcacacacg accagcgccc actgaaaatc ccgagcggcc gcgcacgagg gtccacctag atcgccctcc ctcacccttc cgggaggcta gtgtatgtgg ccctggaacc ggcctgcagg cgccaccagc accgtggtag ggacatgtcc ggggaggtgg ctgggacacg aacatgcact acggagcatg gacccgctca ggctttactg ccagaagatg tcagcctctg gtcaccccaa tgatctcaat tatacctcgg ttgcacatgg tggtgctcaa

ciacin automatizada de genomas, como el proyecto genoma humano completado en 2000, la velocidad de identificacin de secuencias funcionales o genes se ha disparado, y con ello la posibilidad de su utilizacin en beneficio la salud. 1.2 EL GENOMA Y LA IDENTIFICACIN ESTRUCTURAL Y FUNCIONAL DE UN GEN El genoma est compuesto por una larga molcula lineal de ADN, formada por cuatro bases nitrogenadas o nucletidos A, T, C, G (adenina, timina, citosina, guanina) unidas por un grupo fosfato. Esta larga sucesin de cuatro bases sobre un hilo de fosfatos se
cagagaccca ccagacgccc caagcctgaa agcagagggg ggccaaattt cgcctatgag cagtccgcac ggacctcacc agacttcggg ccccaaggtg ggctggagat ggaggctgtg agtagtaaaa cctggaagac cccctggtcc gctcaaaaat caccctggac taaaaggctg gcttctcgac cctctgaaga ctgagcaaca tgatgctcct tcacttctct atctgaaacc catggctggt ccgagcggcg gccttcgaca accatcttat ctgctgaacg gactactaca tttgtagaga ctgctggcca ccagacgagg gtcaaggccc gtggagctgt gagaccatcc aagagcggca gaggctgtgg caggcccttt agctacctca gaccaggcta actgattacc aacatcaatg ctgctctata cgccactcct tttttacatt gaaccctatg gattatgtgc ctccttctgt ggcatgc 61 121 181 241 301 361 421 481 541 601 661 721 781 841 901 961 1021 1081 1141 1201 1261 1321 1381 1441

intrn 1

TRANSCRIPCION DE DNS A ARN Splicing de ARN Corte/Empalme

exn 2 intrn 2 exn 3

Ribosoma Pptido naciente Protena mARN TRADUCCIN DE RNA A PROTEINA

intrn 3

accgagccgg gcaccatggc acggatccat cagctaacac cagacttcct tcaaaaggat aggtgcggta aggctgaagg agggggagcg ccaactggtc ccattgacct aggcctacca gctcggccga gctaccacac tcgagatctg cagtcattcg tcttcaagtc aagaggagtt aaaagaggga cagggcagaa ctctgtgggg agtcagttac catggccgcg gcatggttga taaagaagcc

ADN
(gen)

atggcaggaggagagggatcgccctcccagctaacacagcagaggggctgcccaggcctaccagga ggctgtgaagagcggcattcaccgtactgtccacgccggggaggtgggctcggccgaagtagtcac cctggacactgattaccagatgaccaaacgggacatgggctttactga

Figura 2. Clula transcripcin/traduccin

ARNm

Figura 1. Clula transcripcin/traduccin

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empaqueta enrollndose sobre si misma como un ovillo para generar los cromosomas, visibles microscpicamente en el ncleo de una clula en divisin. Los genes se distribuyen a lo largo del genoma de forma aparentemente indistinguible de las secuencias que los limitan. Algo parecido a la identificacin de una palabra en una sopa de letras lineal. En el caso del pasatiempo la identificacin es posible porque conocemos el lenguaje, en el caso gentico, todava falta acabar de establecer las reglas sintcticas del cdigo o lenguaje. La estructura del gen se compone de varias zonas. El gen per se, es la secuencia de DNA que codifica la protena (exn) y se ve interrumpida por secuencias no codificantes (intrn) que no contienen informacin sobre la protena y sirven de espaciadores. Adems, antes del gen existe una secuencia, especfica para cada gen, que se llama regin promotora o promotor. Esta secuencia regula la expresin del gen que le precede. Es decir, controla que la fabricacin de la protena que codifica ese gen se haga en la clula que la necesite y en el momento que la necesite. De ah, que la identificacin estructural de un gen no sea siempre evidente y se deban buscar motivos especficos de la secuencia para delimitar el inicio de la transcripcin y las fronteras entre exones e intrones.

La identificacin funcional de un gen tampoco es fcil. Muchas veces se ha identificado la secuencia (o estructura) de un gen, pero se desconoce la funcin o el papel fisiolgico que juega la protena que de l se fabrica. Esto es comn a muchas secuencias que se han identificado fruto del proyecto genoma humano, y cuyas funciones biolgicas se desconocen. Existen varias maneras de averiguar la funcin fisiolgica de un gen, y a menudo son necesarios varios enfoques. Se puede desactivar ese gen especifico del genoma de un organismo vivo, por ejemplo un ratn, generando un ratn knockout, y despus evaluar los sntomas que el animal knockout padece. No obstante, la mayora de las funciones de genes involucrados en enfermedades genticas hereditarias se han descubierto al comparar fragmentos del genoma de individuos afectos por la enfermedad y de individuos sanos, y su funcin se ha inferido por el defecto fisiolgico que los enfermos padecen. Sea como fuere, la identificacin de nuevos genes siempre lleva consigo la posibilidad de su uso teraputico. El planteamiento de esta modalidad teraputica es conceptualmente sencillo. Una vez se ha identificado el gen cuya alteracin provoca enfermedad, se corrige la alteracin por insercin del gen normal en las clulas que contengan la versin mutada y se restablece la funcin curando as la enfermedad. No obstante, la insercin de genes terapu112

ticos en clulas conlleva problemas tcnicos que todava estn siendo investigados: se vern a continuacin. Antes se expondrn los rudimentos sobre el funcionamiento de los genes a modo de recordatorio para los lectores no iniciados. 1.3 CONCEPTOS BSICOS DE GENTICA CELULAR Todas las clulas de un organismo tienen el mismo contenido gentico, todas tienen los mismos genes, y es tan importante tenerlos como activarlos en la clula que los necesite y en el preciso momento en el que surja la necesidad. No est de ms recordar en este punto, que los rganos estn formados, separados y comunicados por tejidos. As, cada rgano (pulmn, hgado, cerebro, etc.) y cada tejido (tejido muscular, vascular, nervioso, etc.) tiene una estructura diferente y una funcin propia. Un tejido variar de otro en funcin del tipo de clula que haya utilizado para formarse o tejerse. El tipo de clula (pulmonar, heptica, nerviosa, muscular, sangunea, etc.) se definir a partir de sus caractersticas especficas: sus componentes qumicos y sus propiedades fsicas. En definitiva, su estructura. Toda clula se separa de otra o de su entorno por una envoltura, la membrana celular. A travs de ella entran nutrientes y se reciben o envan seales qumicas que determinan la accin y funcin de esa misma clula o de cualquier otra de su entorno. En el interior de la clula, en un espacio conocido como citoplasma, se degradan los nutrientes recibidos para fabricar componentes estructurales de la clula o

seales de comunicacin, siguiendo la informacin que se encuentra en el ncleo celular. Esta informacin se encuentra codificada en genes dentro de los cromosomas del ncleo de la clula. Los genes son zonas delimitadas de los cromosomas, hechos de DNA y residen en el ncleo de todas las clulas de un organismo. Al conjunto de los genes de una clula (o de un organismo, ya que el conjunto de genes es el mismo en todas sus clulas) se le denomina genoma. La funcin de un gen es: 1) expresar o fabricar la protena para la cual encierran informacin y 2) perpetuar esa informacin durante la divisin celular. De ah que el trmino gentica haga referencia tanto a la produccin de protenas como a cuestiones de herencia. Siguiendo la informacin codificada en un gen, ste fabricar un nico tipo de protena, por ejemplo, un componente estructural de la membrana celular, una protena para comunicarse con otras clulas, un componente del metabolismo en el citoplasma, o un replicador de cromosomas del ncleo garantizando, despus de su divisin, el mismo nmero de genes de la clula madre en las dos clulas hijas. Todo gen tiene una funcin especfica en la vida de la clula y el conjunto de las protenas que fabrique le conferirn sus caractersticas especficas. Es decir, el conjunto de los genes expresados en una clula la definen como un tipo celular concreto con una estructura y funcin propias.
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Lo que hace que un linfocito sea tal y como debe ser es su contenido en protenas. Son stas las que le darn su forma esfrica caracterstica, las que le proporcionarn sus mecanismos de movilidad para que pueda salir de las venas y adentrarse en un tejido infectado, las que le permitirn dividirse si el organismo tiene necesidad de ms linfocitos en su sangre en cualquier momento, etc. En el caso de la neurona, tambin son las protenas las que hacen que la neurona obtenga su peculiar forma piramidal, que pueda transmitir seales elctricas a travs de sus dendritas y comunicarse con otra neurona, que no pueda reproducirse en el animal adulto y que pueda establecer conexiones nuevas cuando interese. A este nivel, lo que diferencia a un linfocito de una neurona, son las diferentes protenas que tiene cada una de ellas. Es lo mismo que decir, que las diferencias entre uno y otro tipo de clula vienen dadas por los diferentes genes que se expresan (fabrican protenas) en cada tipo celular. Para evitar confusiones de trminos, es importante reconocer la expresin de los genes (fabricacin de protenas especficas por una clula) como la diferencia principal entre dos o ms tipos de clulas, como lo son un linfocito y una neurona, ya que ambas tienen exactamente los mismos genes en sus cromosomas, los mismos que el resto de las clulas del organismo. Lo que las dife-

rencia es cuantos y cuales, del total de sus genes, se estn expresando en una y otra clula. 2. TERAPIA GNICA SOMTICA Y TERAPIA GNICA GERMINAL La terapia gnica hace referencia a dos tipos de enfoques conceptualmente diferentes. Todos los ensayos clnicos de terapias gnicas llevados a cabo en humanos, tienen como objetivo la correccin de un defecto gentico en clulas somticas, es decir, en las clulas que no son ni espermatozoides ni vulos. Esto es la terapia gnica som-

tica, donde la correccin del defecto gentico no se transmite a los descendientes, ya que la lnea germinal del paciente tratado no est manipulada. La insercin de un gen teraputico en vulos, espermatozoides o en un vulo fecundado, se conoce como terapia gnica germinal, y dado que sta no se ha realizado en humanos porque la legislacin actual lo prohibe, no se tratar este tipo de terapia gnica en este captulo. La terapia gnica somtica ha centrado sus actuaciones sobre enfermedades hereditarias bien definidas cuyo defecto gentico reside en un nico gen, las llamadas enfermedades monognicas. Estas podran ser del tipo de las hemofilias, fenilcetonuria, deficiencia de ADA (adenosina desaminasa), fibrosis qustica, distrofia muscular, hipercolesterolemia familiar, etc. Enfermedades hereditarias cuyo defecto gentico es fcilmente confirmable en los portadores, y altera el funcionamiento de un tipo celular concreto y ms o menos accesible a los genes teraputicos externos. Las enfermedades provocadas por la alteracin de ms de un gen, o por la falta de coordinacin de varios genes, las llamadas polignicas, son lgicamente ms complejas de abordar y de momento se desestima la terapia gnica para su posible tratamiento. El cncer es una excepcin, ya que aunque el cncer engloba ms de doscientas enfermedades diferentes, todas tienen en comn los mismos mecanismos de enfermedad: la divisin celular incontrolada y/o la ausencia de muerte celular programada. Ambos meca114

nismos son controlados genticamente y regulados por ms de un gen. El cncer responde a la acumulacin de errores o mutaciones durante la vida del individuo en ms de un gen de los que controlan la divisin y la muerte en una misma clula somtica y sta acaba generando el tumor. Por ello, el cncer es estrictamente una enfermedad polignica. No obstante, la terapia gnica se ha utilizado en ciertos modelos de tumores con el fin de activar el suicidio de las clulas cancerosas. Este tipo de terapia gnica se tratar ms adelante. Antes de poder evaluar los ensayos de terapia gnica en humanos, es importante entender cuales son las dificultades tcnicas de la introduccin de un gen teraputico en una clula. Para ello se debe primero distinguir los dos tipos bsicos de la terapia gnica somtica. La terapia gnica in vivo y la terapia gnica ex vivo.

3. TERAPIA GNICA IN VIVO Y EX VIVO Esta clasificacin de la terapia gnica responde al lugar donde se produce la manipulacin gentica de las clulas. La terapia gnica in vivo aborda la modificacin gentica de la clula en el interior del organismo, o sea, la introduccin del gen teraputico en el lugar normal de residencia de la clula en un organismo. Por ejemplo, la modificacin de clulas pulmonares o hepticas con una versin correcta del gen de la alfa-1 antitripsina en pacientes con enfisema pulmonar o cirrosis fruto de esta deficiencia, o en la intro115

Terapia gnica somtica

Terapia gnica germinal

Vectores con gen teraputico

Figura 3. Terapia somtica versus germinal.

duccin del gen de la distrofina en tejidos musculares en pacientes de distrofia muscular. En el caso de la terapia gnica ex vivo, la manipulacin gentica ocurre fuera del organismo, en un tubo de ensayo. En este caso, se extraen las clulas del paciente, se cultivan en el laboratorio, se les introduce el gen teraputico y se reinfunden en el paciente. Este proceso es ms fcil con clulas del sistema hematolgico. La obtencin de mdula sea, purificacin de clulas madre, su manipulacin en el laboratorio, y la introduccin de la clula madre con la versin funcional de un gen de vuelta en el paciente ha servido por

ejemplo para el tratamiento de la inmunodeficiencia combinada severa (SCID) por deficiencia de ADA. La introduccin del gen ADA funcional en las clulas progenitoras del sistema inmunolgico han curado ya a nios con SCID, los conocidos como nios burbuja, en unos ensayos clnicos. Lgicamente, el mtodo de introduccin de un gen teraputico depender del tejido diana de la terapia, y del objetivo de la terapia, pero todos los mtodos de transferencia conllevan unos problemas intrnsecos, actualmente en vas de resolucin.

4. TRANSFERENCIA GNICA o GENE DELIVERY El problema de cmo hacer llegar un gen teraputico a una clula diana deficitaria de esa funcin es el mayor obstculo de la transferencia gnica, ms conocida por la expresin inglesa gene delivery. Este proceso es particularmente difcil en la terapia gnica in vivo, ya que los tejidos u rganos diana, o los focos tumorales ocultos, no siempre son accesibles. Para cualquier tipo de gene delivery se necesita un vector de transferencia que transporte, proteja y transfiera el gen teraputico de forma segura y eficaz y que adems le confiera la especificidad de alcanzar nicamente a las clulas diana. El vector es la clave del xito de la terapia gnica. Un virus es algo ms que un grupo de genes que se autorreplican cubiertos de una cobertura con protenas que le dan entrada especfica a un tipo celular concreto. Por ello, tradicionalmente, se ha aprovechado el cromosoma de virus

humanos con especificidad natural para determinados tejidos, despus de haber reemplazado algn segmento gnico que le confiriera virulencia al virus, por el gen teraputico. Actualmente tambin se estn desarrollando otro tipo de vectores no basados en virus. Esto se debe al peligro que encierra el desconocimiento que tenemos sobre la posibilidad de recombinacin de los vectores vricos con virus endmicos latentes en el ser humano, y la posibilidad de generar nuevos virus con capacidad infecciosa desconocida, tanto para el paciente tratado como para el resto de la sociedad. Sobre todo con los retrovirus, cuya capacidad de insercin en el cromosoma celular ha sido vista en los ltimos aos como una gran ventaja para este tipo de terapias. Inicialmente se deseaba que el objetivo de insercin del gen teraputico en el cromosoma celular fuese el lugar preciso de su versin defectuosa. Esto es muy difcil de controlar y ahora sabemos que no es necesario, y que el gen teraputico se puede inte-

ex vivo

in vivo

Retrovirus Vector con gen teraputico Clula aislada y cultivada

Figura 4. In vivo /ex vivo 116 Figura 5. Vectores de terapia gnica.

Adenovirus

Virus asociados a los adenovirus

Liposomas

DNA desnudo

Vectores de terapia gnica

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grar y producir la protena o ejercer su funcin curativa desde otras localizaciones, ya sean dentro del cromosoma o de forma extracromosomal, como es el caso de los episomas o minicromosomas autnomos. Los principales tipos de vectores son: Los Retrovirus, los Adenovirus, los virus asociados a los adenovirus, los liposomas y el DNA desnudo (o naked DNA). 4.1 RETROVIRUS Los Retrovirus introducen sus genes de forma permanente en el cromosoma de las clulas que invaden. Una vez el retrovirus se ha integrado en el cromosoma, sus genes se copian y se transfieren a todas las clulas descendientes de la clula invadida. Esta caracterstica ha hecho de los retrovirus un candidato de mucho inters cientfico y utilidad para la introduccin de genes teraputicos en clulas madre o stem cells. El problema de este tipo de virus, como ya se ha comentado, es que son altamente promiscuos e inseguros, depositan sus genes en muchos tipos celulares y son intiles para la insercin de genes en clulas que raramente se dividen, como las neuronas o las clulas del msculo esqueltico. Adems, la integracin del cromosoma viral se produce en lugares cromosmicos impredecibles, aumentando el riesgo de que la propia integracin altere lugares crticos donde

residan genes de control de la divisin celular, reparacin del DNA o programacin de la muerte celular, pudiendo ser potencialmente oncognicos. La falta de especificidad de diana de los retrovirus se ha estudiado con retrovirus quimricos derivados de virus humanos y virus de otras especies animales. Por ejemplo, la especificidad de infeccin reside en las protenas de la cubierta del virus, y stas son sustituibles en el cromosoma del virus. As, se ha conseguido sustituir una protena de la cubierta del virus de la leucemia del ratn (MLV) por la del virus de la estomatitis vesicular humana (HVSV) y cambiar la especificidad del MLV por clulas humanas. En la actualidad se estn probando vectores basados en estas quimeras vricas, sobre la base de que le MLV no produce enfermedades conocidas en el hombre y que los niveles de fabricacin de protena a partir de un gen teraputico insertado en su genoma pueden ser regulables y apropiados para su uso en terapias. Tambin se ha estudiado el virus de la inmunodeficiencia humana VIH, retrovirus causante del SIDA, como un posible vector de transferencia gnica en clulas que no se dividen, como por ejemplo en el cerebro, pero el peligro de que existan residuos patognicos del VIH u otros retroviruses est siendo evaluado con suma cautela por la comunidad cientfica. El potencial infeccioso de estos virus por mutagnesis, recombinacin y replicacin dentro del orga118

nismo debe ser cuidadosamente evaluado antes de llevarlo a la prctica como vector de terapia gnica. 4.2 ADENOVIRUS El adenovirus humano presenta un modelo de vector de transferencia de notable seguridad, con un riesgo de enfermedad asociada a la terapia de, a lo sumo, un resfriado. Estos virus infectan clulas humanas con mucha facilidad, y su potencial para su uso como vectores de genes es muy alto debido a ello. Adems el adenovirus puede infectar clulas independientemente de si estn en divisin o no y los niveles in vivo de fabricacin de protena a partir de un gen exgeno son muy elevados. Los adenovirus raramente se integran en el cromosoma de las clulas que invaden, aunque s introducen sus genes en el ncleo de sta. Esto quiere decir que el gen teraputico acaba desapareciendo y con l su funcin teraputica. Por otro lado, esta aparente desventaja puede ser utilizada para tratamientos que requieran transitoriedad, y repercute directamente en la seguridad del tratamiento. ste puede ser repetido con cierta periodicidad convirtiendo a la enfermedad en una condicin crnica sintomtica, y aunque se escape de lo que es estrictamente curativo, s puede ser una buena y segura solucin para muchas enfermedades. La mayor desventaja del uso de adenovirus en terapia gnica es que poseen una baja especificidad celular, lo que complica la infeccin selectiva de clulas en procedimientos in vivo, y la respuesta inmunolgica que sus-

citan puede llegar a ser lo suficientemente importante como para provocar la muerte de las clulas infectadas por el vector. Estos son dos de los campos en los que se est trabajando para evitar estos problemas: la necesidad de derivar nuevos vectores basados en adenovirus de donde se hayan desechado o alterado los genes que provocan la respuesta inmunolgica. 4.3 VIRUS ASOCIADOS A LOS ADENOVIRUS Los virus asociados al adenovirus no producen enfermedades conocidas en el humano y no pueden replicarse en ausencia de un virus coinfectante, por ejemplo un adenovirus. Son virus pequeos y con poca capacidad de albergar grandes genes teraputicos en su interior, no obstante, pueden integrar sus genomas en el cromosoma de la clula husped y no inducen una respuesta inmunitaria. Tambin poseen la capacidad de infectar neuronas, ya que su pequeo tamao le permite cruzar la barrera hematoenceflica. Otros virus como el herpesvirus, el alfavirus o el poxvirus son candidatos a vectores de transferencia. Por ejemplo, el virus herpes simple ha demostrado ser til en el transporte de genes hasta el interior de las neuronas, y aunque no integre su ADN en el cromosoma de la clula husped, s puede hacerlo permanecer en forma de episoma en la neurona durante toda la vida de la clula. Como los adenovirus, los herpesvirus que no han sido modificados pueden ocasionar lesiones celulares e inducir respuestas inmunolgicas.
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Si bien estos virus son en general muy prometedores para proporcionar un vehculo de transferencia para genes exgenos no se puede desestimar su capacidad de cambiar a formas nuevas que induzcan enfermedades. La ingeniera gentica dedicada a la derivacin de vectores para terapia gnica a partir de estos virus debe hacerlo con suma precaucin para evitar este tipo de cambios genticos a priori imprevisibles. Para evitar este tipo de problemas, se han empezado a desarrollar vectores de gene delivery no derivados de virus. Estos son los liposomas y el ADN desnudo. 4.4 LIPOSOMAS Para evitar los problemas inherentes a la toxicidad potencial de virus humanos se han diseado mltiples agentes sintticos que empaquetan el ADN de forma que ste pueda ser introducido en la clula a la vez que lo protegen de su degradacin tanto fuera como en el interior de la clula. Los liposomas son perlas de lpidos que contienen un ADN plasmdico en el que se encuentra el gen teraputico con todas las seales de secuencia necesarias para su expresin en el destino celular de eleccin. La transferencia a la clula se realiza por medio de la fusin entre los lpidos del liposoma y los de la membrana celular. El mayor problema de esta estrategia es la especificidad de las clulas diana en

terapias in vivo y la baja eficacia de la transferencia. La falta de especificidad est siendo corregida por la incorporacin de eptopos o pequeos polipptidos en el revestimiento de estas perlas lipdicas, para fusionarlas slo en las clulas diana que presenten molculas receptoras especficas para estos polipptidos. 4.5 ADN DESNUDO Esta estrategia supone la inyeccin directa de ADN sin ningn revestimiento lipdico o proteico en el interior de la clula. La especificidad en protocolos in vivo sigue resultando un problema aunque esta variante teraputica ha sido utilizada con cierto xito en la inmunizacin contra enfermedades o contra ciertos tipos de cncer. El ADN desnudo posee la cantidad mnima de ADN para evitar su degradacin y prdida durante la divisin celular, quedando protegido en el interior de la clula por elementos que permiten su replicacin en cada divisin celular como si fuese un minicromosoma artificial.

5. INGENIERIA GENTICA EN TERAPIA GNICA 5.1 DISEO GENERAL Para poder remplazar la funcin de un gen, o sea, volver a fabricar la protena
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que ste codifica en su contexto celular adecuado, normalmente se utiliza una copia en ADN del mARN (llamada cADN) de esta protena clonado en el contexto de un vector de expresin. Este es un minicromosoma circular cuyas caractersticas ms importantes son que es capaz de reconducir la fabricacin de la protena que nos interesa dentro de un contexto celular correcto y que se puede cultivar fcilmente en el laboratorio para producir cantidades suficientes para su utilizacin en ensayos o terapias especficas. Los vectores de expresin por lo general incluyen material gentico procedente de plsmidos (molculas de ADN extracromosomales de ciertas bacterias) y material gentico procedente de virus eucariotas como el virus vaccinia, el citomegalovirus, o ms recientemente algn retrovirus. El minigen de inters se posiciona tras un promotor activo en la clula diana y a partir de la cual se comienza la transcripcin a RNA y posteriormente a protena. Los promotores funcionan (empiezan a transcribir) por la accin de los factores de transcripcin propios de la clula sin los cuales el minigen no podra expresarse. As podemos hablar de la utilizacin casi secuestrada de los mecanismos naturales de una clula para producir la protena deseada, algo que se debe tener en cuenta para disear vectores de expresin que fabriquen la protena codificada por el minigen en el tipo celular diana, y no en otros tejidos celulares donde la expresin de la misma protena pudiese causar problemas. Para ello es importante delimitar la especificidad tisular de la regin promotora que se incluye en el vector de expresin, es decir, comprobar que

responda a los factores de transcripcin especficos del tejido diana en el cual se debe expresar la protena. La medicina clsica ha abordado las enfermedades hereditarias tratando las consecuencias biolgicas de una mutacin; el objetivo de la terapia gnica es corregir esa mutacin y prevenir as sus consecuencias biolgicas. La mutacin de un gen puede tener varios desenlaces: 1) la protena deja de fabricarse, 2) la protena se fabrica pero su funcin es nula o escasa, 3) la protena se fabrica pero su funcin es excesiva. Cualquiera de estas alteraciones puede resultar en un mal funcionamiento de una clula y consecuentemente del tejido que utilizan el producto gnico normal, causando enfermedad. El mtodo de transferencia del gen teraputico depender de los objetivos teraputicos. El enfoque teraputico de los casos 1) y 2) citados, cuando la protena en un tejido especfico deja de fabricarse, o se fabrica pero su funcin es deficiente, comparten en cierto modo el diseo bsico de reinsercin de un gen para el aporte continuo de su protena en un tejido especfico, o correccin de la deficiencia de la protena correspondiente. Esta es la estrategia preferida para la terapia gnica de enfermedades hereditarias monognicas del tipo de la hemofilia, fenilcetonuria o la deficiencia de ADA (adenosin-desaminasa),
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todas ella provocadas por la falta de una protena debida a la mutacin heredada de su gen correspondiente. En el caso 3), cuando la funcin de la protena es excesiva, el enfoque teraputico cambia, y el inters se centra en el silenciamiento de una protena fabricada desde un gen endgeno de la clula. En este caso la estrategia se dirigir a evitar la produccin de una protena celular, o a provocar la muerte celular especfica de la clula que contenga el gen mutado. Esta categora se puede ilustrar con las terapias gnicas experimentales para el tratamiento de enfermedades polignicas, no hereditarias, como algunos tipos de cncer o enfermedades infecciosas como el SIDA. 5.2 TERAPIA GNICA PARA LA CORRECCIN DE LA DEFICIENCIA EN UNA PROTENA

En el tipo de enfermedades causadas por la herencia de un nico defecto gentico, las conocidas como enfermedades monognicas, se necesitar la introduccin de un gen teraputico normal que provea al tejido afectado de un aporte continuo del producto de este gen. Para ello, los vectores ms indicados son los que integran su DNA, que incluye el promotor y el gen teraputico, en el cromosoma de la clula. Estos vectores son los derivados de retrovirus o de virus asociados a adenovirus. No obstante se han realizado ensayos con vectores cuya aportacin del producto gnico en la clula afectada es transitoria, y basta con repetir la administracin del gen teraputico de forma regular para obtener un efecto paliativo a largo plazo. La inmunodeficiencia severa combinada (SCID) se debe a la falta de la enzima

adenosina-desaminasa por la mutacin en su gen. Esta condicin afecta la funcin de los linfocitos B y T provocando un descenso en la produccin de anticuerpos y una deficiencia inmunolgica. La SCID puede debutar a partir de los dos primeros aos de vida, condicin que se conoce como nios burbuja incapaces de desarrollar una respuesta inmunitaria adecuada. Los ensayos de terapia gnica con ADA comenzaron en 1993 y han resultado tener bastante xito. La estrategia incluye la insercin ex vivo del gen ADA en mdula sea y la reimplantacin de la mdula sea en estos pacientes. El tratamiento de trastornos hematolgicos es conceptualmente ms fcil ya que el gen teraputico se puede insertar en linfocitos o mdula sea de forma relativamente sencilla, y el tejido diana se puede cultivar y seleccionar en el laboratorio antes de su reimplantacin. La insercin del gen del Factor VIII en clulas sanguneas de pacientes con hemofilia tambin se ha llevado a cabo con cierto xito por la misma razn de facilidad de manipulacin del rgano diana. Esto no es as en el caso de otros tejidos, que no pueden tratarse ex vivo, y por ello el gene delivery supone uno de los mayores obstculos para la terapia gnica. Se han realizado varios ensayos para la reinsercin del gen de la distrofina en clulas musculares. La ausencia o el mal funcionamiento de la distrofina provoca la distrofia muscular progresiva pseudohipertrfica de los tipos Duchenne y Becker. En este caso, se ha demostrado que el gen teraputico de la distrofina se puede insertar en el msculo
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cardiaco y esqueltico de ratones knock-out, a los que se les haba mutado previamente su gen endgeno de la distrofina. Estos estudios en animales se realizaron mediante la inyeccin intravenosa de adenovirus recombinantes que contenan una versin corregida del gen de la distrofina, sugiriendo que este tipo de protocolo puede llegar a ser aplicable en humanos. 5.3 TERAPIA GNICA PARA LA CORRECCIN DEL EXCESO DE FUNCIN DE UNA PROTENA La mayora de las patologas que nos afectan estn debidas a la accin de ms de un gen, empezando por las enfermedades infecciosas y acabando por las enfermedades neoplsicas. En particular estas ltimas, el cncer, es un modelo de enfermedad polignica de gran inters y que est siendo ampliamente investigado desde el punto de vista molecular desde hace ms de una dcada. El cncer es consecuencia de daos genticos acumulados desde el nacimiento que provoca el crecimiento descontrolado de una clula. Este crecimiento o divisin incontrolada puede ser debida al fallo de tres mecanismos bsicos. Un fallo en la divisin celular, un fallo en la regulacin de la muerte celular programada o apoptosis, y un fallo en los sistemas propios de la reparacin de errores o mutaciones de la clula. El primer caso lleva a una clula a perder el control de su divisin, regulada por un centenar de genes y da lugar a un foco tumoral en cualquiera de los tejidos donde se produjo la
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Situacin fisiolgica normal

Figura 6. Correccin de dficit de protena.

Situacin patolgica Defecto de una protena

Correccin del defecto por introduccin de un gen teraputico

ADN celular PROMOTOR agtcagtgatacgataacgetcattccctgcgccaccgtttgtactcgtagcacgtgacgttccgcctatt

cacgtgatacgataacgctcattccctgcgccacgtttgtactcgtagcacg ........................................................... atgctattgcgagtaagggacgcggtgcaaacatgag

NO PROTENA

PROMOTOR

atgctattgcgagtaagggacgcggtgcaaacatgag

VECTOR DE EXPRESIN EN TERAPIA ANTISENTIDO

Bloqueo de la sntesis de protena Situacin fisiolgica normal Situacin patolgica Exceso de funcin de una protena Correccin del defecto por introduccin de un gen teraputico (terapia gnica antisentido)

Figura 8. Terapia antisentido

Figura 7. Correccin del exceso de funcin de una protena

primera mutacin y a partir de la cual se genera la neoplasia. En el segundo caso, lo que falla es la muerte de la clula. Toda clula tiene un programa de vida, y es tan malo dividirse en exceso como no morirse. El resultado es la produccin de una estirpe celular inmortal. La muerte celular programada, conocida como apoptosis est tambin controlada por un centenar de genes; un fallo en uno de ellos puede dar lugar a la formacin de un tumor. Por ltimo, cualquier mutacin que afecte a los sistemas de reparacin del ADN, har que se incorporen ms errores en el cromosoma de la clula, y a la larga afectar a las vas de transforma-

cin neoplsica citadas anteriormente. El fallo en los mecanismos de reparacin del ADN genera unas clulas con alta capacidad de mutacin que con el tiempo repercute en la distorsin del control de la divisin celular y de la apoptosis. En el caso de la mutacin que afecta la divisin celular, se puede poner por ejemplo la mutacin en tres posiciones concretas de la molcula ras. El ras es un transmisor de seal que dice al ncleo celular cuando debe comenzar la divisin. La mutacin del gen ras produce una seal errnea que indica al ncleo celular que se divida, independientemente de la necesidad de la clu124

la de dividirse. Es como si un interruptor se quedara atascado en la posicin de encendido y siempre enviara la seal de divisin al ncleo (ver esquema en la figura 7). En estos casos, la terapia gnica consiste en interrumpir esa seal, y para ello, una diana de actuacin clara es la de evitar que el mensaje del gen mutado llegue a traducirse a protena. Para ello, el gen teraputico ser una copia complementaria del mensaje mutado que produce el gen endgeno de la clula, y que hibridar con ste para neutralizarlo, o desnaturalizarlo si se utilizan ribozimas, lo que se conoce como estrategia antisentido (antisense). Desgraciadamente, estos ensayos de terapia gnica slo son efectivos con clulas en cultivo. En terapias in vivo, parece ms econmico hacer llegar un gen letal a unas clulas especficas, en este caso un grupo de clulas neoplsicas, para solucionar el problema. Se estn actualmente evaluando varias propuestas de terapias gnicas en las

que la clula cancerosa produzca sustancias txicas para ella misma, un aumento de la respuesta inmunolgica, o inhiban el suministro de sangre a los tumores (ver Carreras y cols. Vol. 1 de esta publicacin). La fabricacin de anticuerpos intracelulares que bloquean la protena anmala o protenas antagnicas que inhiban especficamente la interaccin de una protena mutada son tambin estrategias interesantes para la inhibicin de un exceso de funcin de una protena endgena tal y como se ilustra en la figura 9. Los obstculos que supone la terapia gnica en estos casos son los propios de la regulacin precisa de la expresin en la clula de un gen forneo. El gen endgeno tiene un control muy preciso de su expresin. Las clulas deben producir la protena en cantidad justa en el momento adecuado, lo cual

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7. BIBLIOGRAFA
Caplen NJ. Cystic fibrosis gene therapy trials and tribulations. Trends Mol. Med. 2001, 7(11):488. Carreras MJ, Bernal C, Monterde J. Nuevas estrategias teraputicas en el tratamiento del cncer. 2001. Formacin Continuada para farmacuticos de hospital. Vol. 1: 85- 115. Cavazzana-Calvo M, Haccein-Bey-Abina S. Correction of genetic blood defects by gene transfer. Curr Opin Hematol 2001; 8(6):360-7. Chmura SJ, Gupta N, Advani SJ, Kufe DW, Weichselbaum RR. Prospects for viral-dased strategies enhancing the antitumor effects of ionizing radiation. Semin Radiat Oncol. 2001; 11(4):338-45. Chen ST, Iida A, Guo L, Friedmann T, Yee JK. Generation of packaging cell lines for pseudotyped retroviral vectors of the G protein of vesicular stomatitis virus by using a modified tetracycline inducible system. Proc Natl Acad Sci U S A. 1996; Sep 17;93(19):10057-62 Friedman and Roblin. Gene therapy for human genetic disease. Science, 1972; 175: 949-955. Hoogerbrugge et al. Bone marrow gene transfer in three patients with adenosine deaminase deficiency. Gene Therapy, 1996; 3(2): 179-183. EMBO J 1985; Feb 4(2):437-43. Roth JA, et al. Gene therapy approaches for the management of non-small cell lung cancer. Semin Oncol 2001; 28 (4 suppl 14):50-6. Schilz AJ, Kuhlcke K, Fauser AA, Eckert HG. Optimization of retroviral vector generation for clinical application. J Gene Med 2001; 3(5):427-36. Yokoyama T, Chancellor MB, Yoshimura N, Huard J, Kumon H. Gene therapy and tissue engineering for urologic dysfunction: status and prospects. Mol Urol 2001; 5(2).67-70.

Bloqueo de la respuesta biolgica por sntesis de antagonista libre, por ejemplo Anticuerpo especfico Situacin fisiolgica normal Situacin patolgica Exceso de funcin de expresin/funcin de una protena Correccin del exceso por introduccin de un gen teraputico (terapia gnica inhibidora de unin especfica)

Figura 9. Terapia inhibicin especfica de unin ligando receptor

no es siempre fcil. Bien los genes no llegan en los pacientes a un numero suficiente de clulas adecuadas, o funcionan mal, y a veces se opta por la actividad gnica transitoria, la estimulacin de sistema inmune contra clulas cancerosas o agentes infecciosos. Para ello, los vehculos no integrativos del tipo adenovirus, liposomas o ADN desnudo pueden ser de gran utilidad. 6. CONCLUSIN La terapia gnica debe considerar cada estrategia y adaptarla al tipo celular que debe ser modificado. No existe una estrategia universal para todos los tipos celulares y todas las condiciones. Es

muy importante regular la actividad precisa del gen en el contexto tisular y momento necesario. En el caso de producir molculas nuevas desde un vector de expresin, ya sean stas las protenas teraputicas o cualquier otra fabricada a partir del mismo vector, es importante evitar las defensas celulares de inactivacion de protenas extraas y finalmente, cuando ya se entra en protocolos de terapia gnica de condiciones que afectan a la especie humana, mantener siempre y estrictamente el rigor y protocolo de los ensayos clnicos.

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CUESTIONARIO: Slo una respuesta es vlida PREGUNTAS:

1- De todas estas caractersticas, cual es la ms importante que debe tener un prospecto? a) Que sea muy extenso. b) Que sea muy complejo. c) Que sea legible. d) Que tenga preguntas y respuestas. e) Que tenga un carcter muy cientfico. 2- Dentro de la estructura de un prospecto, cual es el epgrafe que no va dirigido al paciente? a) El apartado de reacciones adversas. b) Ninguno. c) El apartado de posologia. d) El apartado de instrucciones para el profesional sanitario. e) El apartado de conservacin. 3- El prospecto de una especialidad farmacutica: a) Es slo obligatorio para especialidades muy conocidas. b) Acompaa siempre de forma obligatoria a todas las especialidades. c) El laboratorio es quien determina qu especialidades deben tener prospecto y cules no. d) Es de tipo obligatorio slo para especialidades que se dispensen en Oficinas de farmacia. e) La Administracin determina qu especialidades tienen que llevar prospecto y cules no. 4- Desde cuando se incluye en Espaa un prospecto en el embalaje de las especialidades farmacuticas? a) 1982. b) 1989. c) 1990. d) 1992. e) Otra fecha. 5- Cada especialidad farmacutica debe estar identificada obligatoriamente por un nmero o nmeros. Qu tipo de registro exige que en el embalaje exterior figuren dos nmeros de identificacin? a) El procedimiento Centralizado. b) El procedimiento nacional en especialidades con receta mdica. c) El procedimiento nacional en especialidades publicitarias. d) El procedimiento nacional en especialidades genricas. e) El procedimiento nacional en los envases clnicos. 6- El embalaje exterior presente actualmente en las especialidadesfarmacuticas en Espaa, sigue la normativa comunitaria?, en qu casos? a) En todos. b) En los nuevos registros. c) En las especialidades genricas. d) En las especialidades de uso hospitalario. e) En las especialidades publicitarias. 7- Qu siglas tienen que llevar las especialidades farmacuticas publicitarias en el embalaje exterior?: a) EFG. b) ECM. c) EFP. d) TLD. e) Ninguna. 8- Los excipientes podrn expresarse solamente con el nmero E ?: a) En la Ficha tcnica b) En el Prospecto. c) En el embalaje exterior. d) En el acondicionamiento primario. e) La c) y d) son correctas. 9- La indicacin de uso tiene que aparecer en el embalaje exterior de: a) Todos los medicamentos. b) Las especialidades de especial control mdico. c) Las especialidades genricas. d) Las especialidades farmacuticas publicitarias. e) Ninguna. 10. Qu tipo de liberacin puede considerarse idntica a la retardada? a) Activada. b) Repetida. c) Prolongada. d) Diferida. e) Sostenida. 11. Para cules comprimdos matriciales se utilizan principalmente los derivados de celulosa? a) Inertes. b) De hinchamiento controlado. c) De hinchamiento ilimitado. d) Lipdicos. e) Multicapa. 12. El recubrimiento de una forma farmacutica no permite uno de los siguientes objetivos. Cul? a) Enmascarar un olor o sabor desagradable. b) Mejorar la estabilidad del frmaco. c) Proteger el organismo de la accin del frmaco. d) Disminuir la inestabilidad del frmaco. e) Incrementar la eficacia del frmaco. 13. Cul es el mecanismo de liberacin de principio activo en un comprimido Oros a) Diferencia de pH. b) Gradiente osmtico. c) Solubilidad. d) Concentracin. e) Carga inica. 14. Cul de los siguientes factores de formulacin no afecta a la liberacin de principio activo en un sistema basado en resinas intercambiadoras de iones? a) Tamao de partcula. b) pKa del grupo funcional implicado en el intercambio inico. c) Grado de reticulacin elevado. d) Concentracin de principio activo. e) Grado de reticulacin bajo. 15. Cul de las siguientes ventajas, de un sistema transdrmico no es verdadera? a) Reducir el efecto de primer paso. b) Disminuir la toxicidad del frmaco. c) Mejorar el cumplimiento de la posologa d) Cmoda administracin. e) Utilizable para frmacos de vida media muy corta. 16. Cul de las siguientes matrices no corresponde a un parche transdrmico matricial? a) Hidrogel. b) Membrana polimrica impregnada. c) Lipdica. d) Adhesiva. e) Elastomrica. 17. Cul de las siguientes caractersticas no corresponde a un polmero utilizable en un implante slido subcutneo? a) Compatible con las mucosas. b) Posible liberacin del frmaco acorde con las exigencias farmacocinticas del mismo. c) Incremento de la accin del frmaco. d) Compatibilidad con los tejidos receptores. e) Resistencia mecnica adecuada. 18. Cul de las siguientes especificaciones de tamao es correcta?
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a) Cpsulas de 1 a 5 mm. b) Microcpsulas de 1 a 5 micrometros. c) Microesferas de 10 micrometros a 10 mm. d) Nanocpsulas de 10 a 1000 nanometros. e) Grnulos de 10 a 20 mm. 19. Cul es la prioridad, segn los usuarios de Internet sanitario, a la hora de consultar informacin biomdica? a) Sitios mdicos profesionales. b) Bibliotecas mdicas. c) Publicaciones peridicas. d) Bases de datos de medicina como Medline. e) Catlogos de bibliotecas. 20. Qu recursos de inters son los ms consultados? a) Grupos de soporte. b) Descripcin de enfermedades. c) Ensayos clnicos. d) Literatura biomdica. e) Frums profesionales. 21. Qu requisito es imprescindible para llevar a cabo un proceso de obtencin de informacin? a) Conocer en profundidad las necesidades informativas y requisitos respecto a nuestra demanda. b) Disponer de una gran cantidad de fuentes de informacin de calidad. c) Conocer las fuentes de informacin en profundidad. d) Tener una estrategia de interrogacin preparada para hacer la bsqueda. e) Disponer de acceso a Internet. 22. Qu es una estrategia de bsqueda? a) El nmero de documentos recuperados tras consultar una fuente de Informacin en Internet. b) El nmero de pasos que se deben llevar a cabo para obtener un resultado ptimo en una sesin de bsqueda. c) Conjunto de interrogaciones que se Introducen en una base de datos para obtener un resultado relevante. d) Conjunto de acciones encaminadas a concebir la obtencin de un conjunto de informacin de calidad de acuerdo a unos requerimientos especficos. e) Conjunto de pasos que deben seguirse en la consulta de una base de datos. 23. Qu es una base de datos? a) Recurso de Internet que tienen como misin agrupar en un solo sitio todos lo servicios y recursos interesantes de cara a un colectivo de usuarios.
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b) Conjunto de informacin organizada en registros que definen una realidad con atributos y valores. c) Servicio de Informacin o parametrizable por el usuario que permite la bsqueda de contenidos. d) Conjunto de reglas que tiene como objetivo hacer ms respetuoso el intercambio de informacin por Internet. e) Conjunto de informacin ligeramente estructurada que permite el acceso a documentos de una temtica concreta. 24. Si se quisiera evaluar la calidad en la provisin de servicios mdicos y atencin al paciente, qu instrumento de evaluacin se utilizara? a) Hon Code. b) Mitretek. c) Discern. d) Sello Activo. e) Ninguno de los anteriores. 25. La relacin correcta entre DNA, gen y cromosoma es: a) Los cromosomas de la clula residen en los genes formados por DNA. b) Los genes de la clula residen en el DNA formado por cromosomas. c) El DNA de la clula reside en los genes formados por cromosomas. d) Los genes de la clula residen en los cromosomas formados por DNA. e) El DNA de la clula reside en los cromosomas formados por genes. 26. La diferencia entre la terapia gnica in vivo y ex vivo es: a) La terapia gnica in vivo contempla la manipulacin gentica de clulas vivas y la terapia gnica ex vivo lo hace en clulas apoptticas. b) La terapia gnica in vivo contempla la manipulacin gentica de clulas en divisin y la terapia gnica ex vivo lo hace en clulas quiescentes. c) La terapia gnica in vivo contempla la manipulacin gentica de clulas dentro del organismo y la terapia gnica ex vivo lo hace en clulas aisladas del organismo. d) La terapia gnica in vivo contempla la manipulacin gentica de organismos y la terapia gnica ex vivo lo hace slo en clulas. e) La terapia gnica in vivo contempla la manipulacin gentica de clulas somticas y la

terapia gnica ex vivo lo hace slo en clulas germinales 27. Un gen consste en una regin promotora y un nmero variable de exones e intrones. La funcin del promotor es: a) Controlar que el gen se exprese slo en los tejidos donde sea necesaria la protena codificada por el gen. b) Limitar el inicio de la secuencia de un gen. c) Controlar que el gen se exprese slo en el momento preciso cuando sea necesaria la protena codificada por el gen. d) Regular la frecuencia de posibles mutaciones en un mismo gen. e) Controlar que el gen se exprese slo en el momento preciso y slo en los tejidos donde sea necesaria la protena codificada por el gen. 28. Un gen consiste en una regin promotora y un nmero variable de exones e intrones. Cuando el gen se transcribe a mRNA sucede que: a) Las regiones codificantes (exones) se unen entre s, en el orden establecido en el gen, para generar el mRNA y traducirlo por accin de los ribosomas en protena. b) Las regiones no codificantes (intrones) se unen entre s, en el orden establecido en el gen, para generar el mRNA y traducirlo por accin de los ribosomas en protena. c) Las regiones codificantes (exones) se unen entre s, aleatoriamente, para generar el mRNA y traducirlo por accin de los ribosomas en protena. d) Las regiones no codificantes (intrones) se unen entre s, aleatoriamente, para generar el mRNA y traducirlo por accin de los ribosomas en protena. e) Las regiones codificantes (exones) se unen con las regiones no codificantes (intrones) para generar el mRNA y traducirlo por accin de los ribosomas en protena. 29. Una mutacin en la regin codificante (exn) de un gen puede tener los siguientes efectos: a) El gen desaparece. b) La proteina se sintetiza pero su funcin es nula, escasa, normal o excesiva. c) El mRNA deja de transcribirse. d) El mRNA se transcribe otra vez en DNA. e) La protena siempre deja de sintetizarse.

30. Una mutacin en la regin promotora de un gen puede tener los siguientes efectos: a) Se altera la disyuncin de los cromosomas durante la divisin celular. b) Se altera la regulacin temporal y tisular de la expresin del gen. c) Se transcriben todos los genes de la clula a la vez. d) Se inhibe la transcripcin de todos los genes de la clula. e) Se sintetiza la protena en ausencia del mRNA. 31. Para generar un vector de transferencia con utilidad en terapia gnica, ste deber incluir los siguientes elementos bsicos de secuencia. a) Regin promotora, gen teraputico, secuencias de retrovirus infecciosos. b) Regin promotora, gen teraputico, secuencias de adenovirus y virus derivados de adenovirus. c) Regin promotora, gen teraputico, secuencias derivadas de plsmidos. d) Regin promotora, gen teraputico, partculas liposomales. e) Regin promotora, gen teraputico, secuencias reguladoras de la replicacin y seleccin del vector en el laboratorio. 32. Las enfermedades cuyo tratamiento es abordable con estrategias de terapia gnica incluyen: a) Slo enfermedades monognicas de carcter hereditario. b) Slo enfermedades cuya causa reside en un defecto gentico descrito o en las que se puede activar la muerte selectiva de las clulas afectadas. c) Slo enfermedades cuya causa gentica es con-

firmable en sujetos portadores asintomticos d) Slo enfermedades polignicas causadas por virus. e) Slo enfermedades no tratables con terapias convencionales. 33. La terapia gnica antisentido consiste en: a) Cambiar el sentido de la transcripcin de un gen. b) Bloquear la transcripcin de un gen mutado. c) Prevenir la interaccin especfica entre dos protenas celulares. d) Insertar el vector de transferencia en el cromosoma celular, y activar constitutivamente la expresin del gen teraputico. e) Dirigir la sntesis de RNA complementario a un mRNA celular mutado para impedir su traduccin a protena. 34. Para lograr la expresin de un gen teraputico en el tejido diana se debern considerar muy cuidadosamente los siguiente aspectos. a) Que el vector pueda acceder e introducirse en las clulas diana y que el promotor del gen teraputico sea reconocible por los factores de transcripcin especficos de esas clulas b) Que el vector se cultive con facilidad en lneas celulares en el laboratorio y los costes de su produccin sean viables. c) Que el vector pueda acceder e introducirse en las clulas diana y que el gen teraputico se pueda insertar en el cromosoma y sustituir al gen mutado. d) Que el vector no sea demasiado grande. e) Que el vector se pueda replicar en el interior de la clula.

Hoja de respuestas del Mdulo 3

Nombre y apellidos: N D.N.I.: Domicilio completo:

C.P.: Provincia: Puntuacin obtenida respecto al grupo

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Poblacin: Telfono/Fax contacto Puntuacin general

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NOTA MUY IMPORTANTE: No sern tenidas en cuenta aquellas hojas respuesta que no estn cumplimentadas de forma legible (letra de imprenta o mecanografiada) y con todos los datos solicitados.

35. Los problemas en el diseo de estrategias en terapia gnica incluyen: a) La accesibilidad del tejido u rgano defectuoso en el paciente. b) Especificidad de infeccin de las clulas dianas. c) Obtencin de los niveles deseados del producto del gen teraputico en el interior de la clula. d) Posibilidad de recombinacin del vector con virus endgenos latentes en las clulas del husped. e) Todos los anteriores.

36. La mayora de la investigacin y ensayos clnicos de terapia gnica se han centrado en: a) Gripe y otras enfermedades infecciosas de importancia sociosanitaria. b) Enfermedades raras intratables por otros mtodos. c) Enfermedades monognicas hereditarias y polignicas como cncer y SIDA. d) Reproduccin asistida. e) Medicina preventiva.

Preguntas del Mdulo 3

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